A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Здесь представлен метод скрининга липидных структур с помощью мечения стабильными изотопами с использованием времени их удержания, подвижности и фрагментации.
Липиды очень разнообразны, и небольшие изменения в структуре и составе липидов могут оказывать глубокое влияние на важнейшие биологические функции. Мечение стабильными изотопами (SIL) дает ряд преимуществ для изучения распределения, мобилизации и метаболизма липидов, а также синтеза липидов de novo . Для успешной реализации методики SIL необходимо устранить интерференции от эндогенных молекул. В настоящей работе мы описываем высокопроизводительный аналитический протокол для скрининга липидов SIL из биологических образцов; Будут показаны примеры идентификации липидов de novo во время развития яичников комаров. Использование комплементарной жидкостной хроматографии, спектрометрии подвижности захваченных ионов и масс-спектрометрии позволяет отделить и распределить липиды из одного образца за одно сканирование (<1 ч). Описанный подход использует преимущества последних разработок в области сбора, зависящего от данных, и сбора, независимого от данных, с использованием параллельного накопления в ловушке мобильности с последующей последовательной фрагментацией и диссоциацией, вызванной столкновением. Измерение SIL на уровне цепи жирных кислот выявляет изменения в динамике липидов во время развития яичников комаров. Структуры липидов de novo надежно присваиваются на основе времени их удержания, подвижности и характера фрагментации.
При анализе липидных данных мечение стабильными изотопами (SIL) является эффективным методом оценки метаболических путей в живых организмах. В этом методе атомы внутри анализируемого вещества заменяются стабильными изотопами, содержащими 13C или 2H. Эти изотопы в дальнейшем включаются в предшественники, которые позже встраиваются в жирные кислоты, обозначая области, в которых они находятся. С помощью этих изотопов можно идентифицировать распределение и метаболизм липидов, так как они будут контрастировать на немаркированном фоне1. Обычные масс-спектрометрические платформы не способны различать сигнал, поступающий от эндоге....
1. Подготовка образцов
Мечение стабильных изотопов облегчает визуализацию триглицеридов в исследованиях динамики липидов самок яичников комаров. В области 2D-подвижности триглицерид 48:1 отображается в области с определенным временем удержания по отношению к подвижности 1/K0. Интенсивность триглицерид?.......
При оценке использования этого протокола важно убедиться, что параметры DIA-PASEF и MS/MS применимы к рассматриваемым триглицеридам. В частности, окна мобильности и ширина окон должны соответствовать схеме триглицеридов. Это можно определить с помощью предыдущего прогона с помощью метода DDA.......
Авторы хотели бы выразить признательность доктору Сезару Рамиресу за его вклад в разработку метода. Это исследование финансировалось грантами NIAID R21AI167849 FGN, проект 22-21244S от Чешского научного фонда, Чешская Республика до Миннесоты.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
Accucore C30 colum | Thermo Fisher Scientific | 27826-252130 | |
Bruker Compass Data Analysis | Bruker Daltonics Inc | 2363525870 | Version 5.2 |
d-Glucose-13C6 | Sigma-Aldrich | 389374 | |
eppendorf tubes | Fisher Scientific | 14-282-300 | |
EquiSplash Lipidomix | Avanti Polar Lipids | 330731-1EA | |
glass vials | Thermo Fisher Scientific | 11-417-236 | |
heavy water (2H2O) | Sigma-Aldrich | 1.13366 | |
polypropylene pestles | Fisher Scientific | BAF199230001 | |
Prominence LC-20 CE ultrafast liquid chromatograph | Shimadzu | L20234651907 | |
silanized glass inserts | Thermo Fisher Scientific | 03-251-826 | |
Sucrose-13C12 | Sigma-Aldrich | 605417 | |
timsTOF | Bruker Daltonics Inc | 1.84443E+11 | |
Tuning Mix Calibration Standard | Agilent Technologies | 36 |
Explore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved