İnsülin Enjeksiyon ve Yetişkin İnsülin Hassasiyet Tedbir hemolimf Ekstraksiyon Drosophila melanogaster</em

Özet

Korunmuş insülin sinyalizasyonu meyve sineği bulundu yolaklar Drosophila melanogaster Bu organizmanın, tip II diyabet gibi metabolik bozukluklar modelleme için potansiyel bir araç yapmak. Bu amaçla, erişkin sinek periferik glukoz bertaraf edilmesinde etkili sistemik insülin etkisini ölçmek için fizyolojik testleri kurmak için kritik öneme sahiptir.

Özet

Korunmuş besin algılama mekanizmaları, memeli ve peptidler gelişimsel larva ^aşamaları 1,2 sırasında glikoz dengesini korumak için sırasıyla memeli insülin ve glukagon, fonksiyon benzeyen meyve sineği arasındaki mevcut . Büyük ölçüde post-mitotik yetişkin sinekleri üzerinde yapılan çalışmalar, insülin-benzeri hücreler ^(IPC) 3 üreten peptid (ILP) genetik ablasyonu sonucu glikoz dengesini pertürbasyon ortaya koymuştur. Böylece, yetişkin meyve sinekleri, tip II diyabet gibi metabolik bozukluklar için uygun bir genetik model sistem olarak büyük umut tutun. Meyve sineği sistemi daha da geliştirmek için, memelilerde glukoz toleransı ve insülin duyarlılığını ölçmek için kullanılan karşılaştırılabilir fizyolojik testlerin oluşturulması gerekir. Bu amaçla, son zamanlarda erişkin sinek oral glukoz tolerans tepki ölçmek için bir roman prosedürü tarif var ve glikoz dengesini ^4,5 korunmasında yetişkin IPCs önemini göstermiştir. Burada insülin enjeksiyonu ⁶ için daha önce açıklanan prosedür değiştirilmiş ve erişkin sinek periferik insülin duyarlılığını ölçmek için yeni bir hemolimf ekstraksiyon yöntemi ile kombine var. Benzersiz, protokol erişkin sinek insülin enjeksiyonu, insülin sinyal mutantlar ve erişkin sinek glukoz toleransı ve insülin duyarlılığını etkileyen olası müdahaleler karakterize etmek mümkün kılan bir metodoloji üzerine periferik glukoz yükü elden çıkarma yeteneği doğrudan fizyolojik ölçümler sağlar.

Protokol

1. İnsülin Çözüm Hazırlığı

1. 0.01 mg / ml konsantrasyonu elde etmek için PBS içinde insülin eriterek taze sığır insülin çözüm hazırlayın. Insülin / PBS ve kontrol PBS iki çözüm de enjeksiyon prosedürü boyunca buz üzerinde tutulmalıdır. Bu çözümler,% 0.5 (v / v) FD & C mavi no ile hazırlanmalıdır. 1 gıda renklendirme.

2. İğne hazırlanması ve Enjeksiyon Set-up

1. Kapiller cam iğneler, çekin, 210; Hız, 100; Zaman, 200 (100ms) Isı, 345: çektirmenin ayarları enjeksiyon için yeterli kalitede iğne üreten aşağıdaki mikropipet puller.The kullanarak hazırlayın. Taze çekilmiş iğne ucu Kimwipe doku üzerinden basarak köreldiğini....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

Bu raporda açıklanan teknik Drosophila hemolimf kompozisyon saptanabilir değişiklikler sonucu fizyolojik süreçleri araştıran bir çalışmada, potansiyel olarak yararlı olur. Bu şekilde enjeksiyon ve hemolimf toplama birleştirerek, belirli bir deneysel tedavi veya manipülasyon anında önemli fizyolojik etkilerini tespit etmek mümkündür. Dekapitasyon ² içeren önceki teknikleri üzerine hemolimf koleksiyonunda bu "katliam" tekniğinin en önemli avantajı, bağırsak content.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Reaktif / ekipman Adı	Şirket	Katalog numarası
Sığır insülin	Sigma	I5500
Infinity Glikoz Reaktif	Thermo Electron Corporation	TR1541
Manuel mikroenjektör	Sutter Enstrüman
P-87 Flamming / Brown mikropipet çektirmesi	Sutter Enstrüman
Tek varil borosilikat kılcal cam	AM Sistemleri	626000
FD & C Blue No: 1	McCormick & Company
1 ul microcapillary tüpler	Drummond
Üç eksenli manuel mikromanipülatör ve baz	Dünya Hassas Aletler