Kolorektal Kanser Ortotopik Fare Modeli

Özet

Çekum üzerine bir kanser hücre süspansiyonu çekal duvar subkutan tümörün bir parçasının veya transplantasyon içine enjeksiyon: İki teknikleri bu modeli kurmak için kullanılan olabilir. Bu model, kolorektal kanseri doğal bir ilerleme eğitim ve kolorektal kansere karşı yeni tedavi ajanları test için yararlıdır.

Özet

Geleneksel subkutan bir tümör modeli kolorektal kanser eğitimi için ideal daha az. Kolorektal kanser özelliği, doğal bir yerde çoğalan kanser hücrelerini, Ortotopik fare modelleri, yüksek sadakat, insan hastalık yineler. Bu modeli kurmak için iki teknik kullanılabilir. Her iki teknikte de benzer ve çekum maruz kalma fare anestezi ve laparotomi gerektirir. Bir teknik çekal duvar içine kolorektal kanser hücre süspansiyonu enjeksiyon içerir. Kanser hücreleri kültürde yetişen zaman akışkan hasat ve tek bir hücre süspansiyonu olarak hazırlanmıştır. Hücrelerin küçük bir ses sızıntısını önlemek için yavaş yavaş enjekte edilir. Diğer teknik çekum üzerine subkutan bir tümör bir parça nakli içerir. Önceden belirlenmiş subkutan kolorektal tümör ile bir fare ötenazi ve steril tekniği kullanarak tümör kaldırılır. Tümör parçasının başka bir fare nakli için küçük parçalara ayrılır. Nakli için, önce çekal duvara hafifçe tümör hücre infiltrasyonu kolaylaştırmak için zarar görmüştür. Birincil tümörleri ve karaciğer metastazlarının geliştirmek için zaman, tekniği, hücre hattı ve kullanılan fare türlerinin bağlı olarak değişecektir. Bu ortotopik fare modelinde, kolorektal kanseri doğal bir ilerleme eğitim ve kolorektal kansere karşı yeni tedavi ajanları test için yararlıdır.

Protokol

I. Hücre Hazırlık

1. Kolorektal kanser hücrelerinin kültür ortamında yetişen ve akışkan hasat.
2. Bir tek hücre süspansiyonu fosfat hazırlanan tamponlu tuz ve buz üzerinde tutulmalıdır.

II. Tümör Hazırlık

1. Önceden belirlenmiş subkutan kolorektal tümör ile bir fare ötenazi.
2. Subkutan bir tümör 2-3 mm'lik parçalar steril tekniği kullanarak kaldırıldı ve bölünmüş
3. Tümör adet fosfat tutulur buz üzerinde tamponlu salin.

III. Fare Hazırlık

Not: Laboratuarımızda fare uyutmak için izofluran inhale kullanır; alternatif olarak, aynı etkiyi elde etmek için enjektabl anestezikler kullanabilirsiniz

1. Anestezi derinliği ayak tutam kullanılarak değerlendirilir. Ayak tutam refleks çekilme yoktur olmalıdır.
2. Antibiyotikler bu noktada verilebilir.
3. Daha önce traş anestezi fare, düzgün bir şekilde konumlandırılmış.
4. Karın betadin çözümü ile prepped.
5. Karın ve cerrahi alan steril bir moda dökümlü.

IV. Laparotomi

1. Küçük bir nick cilt yapılır
2. Karın duvarı kas kavradı ve kaldırdı
3. Karın boşluğuna girilir ve makas, tek bir bıçak uzak intraabdominal içeriğini itmek için kullanılır.
4. Kesi 2-3 cm uzatıldı

Çekum V. Pozlama

1. Kör biten çantası ile birlikte çekum tespit ve exteriorized
2. Çekum önceden kesilmiş, steril gazlı bez kullanarak fare geri kalanından izole
3. Ilık tuzlu su çekum nemli tutmak için kullanılır.

VI. Hücreler Çekal Duvar içine enjeksiyon

1. A 27 G veya ince iğne çekal duvarın içine 50 mcL hacmi bir hücre enjekte etmek için kullanılır.
2. Iğne kaldırıldı.
3. Enjeksiyon yerinde, herhangi bir kaçak olmak üzere kontrol
4. Çekum karın boşluğuna geri döndü

VII. Çekum üzerine Tümör Nakli

Not: çekal duvar içine hücreleri enjekte ek olarak, alternatif bir yaklaşım çekum üzerine tümör nakli için

1. 8 dikiş bir rakam, 6-0 veya 7-0 ölçekli sütür kullanarak çekum üzerine yerleştirilir.
2. Çekal duvara hafifçe hasar görmüş
3. Ardından, tümörün parça konumlandırılmış
4. Dikiş bağlı
5. Çekum karın boşluğuna geri döndü

VIII. Fare Karın Duvarı Kapatma ve Kurtarma

1. Fare karın duvarı, 3-0 veya 4-0 ölçekli sütür kullanarak üç kesintiye dikiş kullanılarak kapalı
2. Alternatif olarak, bir çalışan basit bir dikiş kullanabilirsiniz
3. Post-operatif ağrı kesiciler ve bu noktada bir sıvı bolus verilebilir
4. Fare anestezi kurtarmak için izin verilir.

Not: inhale anestezikler bu genellikle 30 saniye sürer

IX. Sonuçlar - İlköğretim Tümör ve Karaciğer Metastaz

Primer Tümör - yerinde gösterilir (A) ve (B) neovaskülarizasyon kanıt, H & E boyama, tümörler, lokal olarak invaziv (C)

Karaciğer Metastaz gösterilen ex vivo (D)

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

Fare subkutan bir tümör modelleri oluşturmak ve izlemek için kolay olmasına rağmen, bu model, kolorektal kanser orijinal anatomik site çoğaltmak olamayacağını açıktır. Mikroçevresinin farkı nedeniyle, deri altında büyüyen kolorektal kanser hücrelerinin fenotipi değiştirmek ve hemen hemen her zaman ilerleme ve metastaz ^1,2 başarısız gösterilmiştir. Aslında, tedaviye tümör yanıtı, kanser hücrelerinin ektopik (subkutan) karşı ortotopik ^konumu 3 implante olup olmadığına bağlı olarak ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Cell culture media and components			will vary depending on cell line used
Phosphate Buffered Saline	BioWhittaker	17-512F	also sold by a number of other vendors
15 mL centrifuge tubes, polypropylene	Corning	430790
6 well plates with lid	BD Biosciences	353046
Iris forceps, straight, serrated tips	World Precision Instruments, Inc.	15914	best to have a pair of these instruments
Iris dissecting scissors, straight, sharp	World Precision Instruments, Inc.	14393
Needle Holder (regular)	World Precision Instruments, Inc.	14109
Needle Holder (Castroviejo)	World Precision Instruments, Inc.	14137
Cidex Plus	World Precision Instruments, Inc.	7364	instruments should be autoclaved periodically, but may also be sterilized by soaking in Cidex
6-0 or 7-0 suture			for cecum; courtesy of Department of Surgery, UCSF
3-0 or 4-0 suture			for abd wall; courtesy of Department of Surgery, UCSF
Anesthetic machine / Isoflurane	J.A. Baulch and Associates	3206	also sold by a number of other vendors
Heating Pad, disposable, 6" x 6"	Prism Technologies	20419
Tape, orange, 13 mm x 13 m	Fisher Scientific	15901F	for restraining anesthetized mouse
Pro-Cord/Cordless Trimmer	Oster Professional Products	78997-010	for shaving mouse fur
Betadine	Fisher Scientific	19-027132	may also be purchased at any medical supply store
2 x 2 gauze, 3-ply	Johnson & Johnson	7635	may also be purchased at any medical supply store
Sterile Field, Barrier, 16" x 29"	Johnson & Johnson	0905	may also be purchased at any medical supply store
Cotton tipped applicators, 6"	Fisher Scientific	14-960-3Q	may also be purchased at any medical supply store
Syringe, 10 cc, Luer lock tip	BD Biosciences	309604
Syringe, 1 cc, tuberculin, slip tip	BD Biosciences	309602
27 1/2 G needle	BD Biosciences	305109
30 G needle	BD Biosciences	305106