Yüksek Tuz Diyet ve Lewis Rat Kronik Böbrek Hastalığı tetikleyebilecek Nitrik Oksit Sentaz inhibisyonu ile bağlantılı 5/6th nefrektomi

Özet

Cerrahi renal kitle 5/6th kaldırarak Lewis sıçan kronik böbrek hastalığı (KBH) kurmak için bir iki aşamalı yöntemi açıklanmıştır. Cerrahi işlem kombinasyonu, NOS-inhibisyonu ve yüksek tuz diyeti nedensel mekanizmaları ve yeni tedavi yaklaşımları gelişimi çalışma izin, insan CKD benzeyen bir model yol açar.

Özet

Kronik böbrek hastalığı (KBH) küresel bir sorundur. CKD ilerleme Yavaşlama önemli bir sağlık önceliktir. CKD dengesinin karmaşık bozukluklar ile karakterize olduğundan, bütünleştirici hayvan modellerinde CKD gelişimi ve ilerlemesi çalışma için gereklidir. CKD CKD ve yeni terapötik girişimlerin gelişimini incelemek için, insan CKD çeşitli yönleri benzeyen, 5/6th nefrektomi ablasyon modeli, ilerleyen böbrek hastalığının bilinen bir deneysel model kullanın. Renal kitle brüt azalma ilerici glomerüler ve tübülo-interstisyel yaralanma, kalan nefron kaybı ve sistemik ve glomerüler hipertansiyon gelişimine neden olur. Ayrıca, ilerleyen böbrek içi kılcal kaybı, enflamasyon ve glomerüloskleroz ile ilişkilidir. Için risk faktörleri her zaman endotel fonksiyonu üzerindeki etkisi CKD. Bu taklit için, nitrik oksit (NO) azalması ve yüksek tuz diyeti ile renal kitle 5/6th çıkarılması birleştirir. Varış ve iklimlendirme sonra, hayvanlar yenidenSağ taraflı uninephrectomy takiben 4 haftalık bir süre için içme suyu (20 mg / L) ile desteklenmiş bir NO sintaz inhibitörü (NG-nitro-L-arginin) (L-NNA), alma işlemine. Bir hafta sonra, bir alt toplam nefrektomi (SNX) sol tarafta gerçekleştirilir. SNX sonra, hayvanlar, 4 haftalık bir süre için daha içme suyu (20 mg / L) LNNA takiben iki gün süre ile iyileşmeye bırakıldı edilir. Zemin chow (zaman çizgisi bkz. Şekil 1) de ilave bir yüksek tuz diyeti (% 6), deney boyunca devam edilir. Böbrek yetmezliğinin ilerlemesi plazma üre, sistolik kan basıncı ve proteinüri ölçerek zaman içinde takip eder. SNX sonra altı hafta, böbrek yetmezliği geliştirdi. Böbrek fonksiyonu 'altın standart' inulin ve para-amino hippurik asit (PAH) temizlik teknolojisi kullanılarak ölçülür. CKD Bu model bir glomerüler filtrasyon hızı (GFH) azalma ve etkin renal plazma akışı (ERPF), hipertansiyon (sistolik kan basıncı> 150 mmHg), proteinüri (> 50 mg/24 saat ile karakterizedir) Ve hafif üremi (> 10 mM). Histolojik özellikleri inflamasyon, tübüler atrofi ve fibrozis ve kalan nüfus (<% 10) içinde sağlıklı glomerül büyük azalmaya yol açan fokal glomerüloskleroz yansıyan tübülo-interstisyel zarar içerir. Takip SNX CKD daha fazla ilerleme gösteren 12 hafta sonrasına kadar.

Giriş

Ilerici doğa, takip eden son dönem böbrek hastalığı ve ilişkili kardiyovasküler morbidite ve mortalite nedeniyle, CKD giderek büyüyen bir halk sağlığı sorunu ^1'dir. CKD ilerleme Yavaşlama bu nedenle önemli bir sağlık önceliktir. CKD dengesinin karmaşık bozukluklar ile karakterize olduğundan, bütünleştirici hayvan modellerinde CKD gelişimi ve ilerlemesi çalışma için gereklidir. Böbrek birbirleri ile etkileşim farklı hücre tipleri arasında, geniş bir aralık oluşur. Bu karmaşıklık in vitro taklit edilemez.

CKD yeni tedavi girişimleri incelemek, insan CKD ^2,3 çeşitli yönleri benzeyen 5/6th nefrektomi ablasyon modeli, ilerleyen böbrek hastalığının iyi bilinen bir deneysel model, kullanın. Renal kitle brüt azalma ilerici glomerüler ve tübülo-interstisyel yaralanma, kalan nefron kaybı ve sistemik ve glomerüler hipertansiyon gelişimine neden olur. Bu Progr ile ilişkiliessive böbrek içi kılcal kaybı ^4, inflamasyon ve glomeruloskleroz. Için risk faktörleri her zaman endotel fonksiyonu ⁵ üzerindeki etkisi CKD. Biz CKD gelişimi nispeten dirençli olan bir fare suşu (Lewis) kullanılan ve bu nedenle nitrik oksit (NO) azalması ^{6, 7, 8} ve yüksek tuz diyeti ^9, renal kitle 5/6th çıkarılması birleştirilir. Varış ve iklimlendirme sonra, hayvanlar iki gün sonra L-NNA devamı ile sağ taraflı uninephrectomy (UNX) takip 4 haftalık bir süre için içme suyu (20 mg / L) için ilave bir NO sentaz inhibitörü (L-NNA), almak . Bir hafta sonra, renal kitle 2/3rds subtotal nefrektomi (SNX) yani kaldırma sol tarafında yapılır. SNX sonra, hayvanlar, 4 haftalık bir süre için içme suyu içinde 20 mg / L, LNNA yine ardından 2 gün süre ile iyileşmeye bırakıldı edilir. Zemin chow (zaman çizgisi bkz. Şekil 1) de ilave bir yüksek tuz diyeti (% 6), deney boyunca devam edilir. TO yandaki UNX gerçekleştirmek için bir neden ve sol taraftaki SNX böbrek damarlarının daha kolay böbrek vücut dışında maruz bırakıldığında çok damarları germeden böbrek erişimi kolaylaştırır sol taraftaki uzun olmasıdır . Literatürde, model bir hafta sonra ^10,11,12 sağ böbrek UNX ardından, sol böbrek kutup önce kaldırılır olduğu tarif edilmektedir. Bizim ellerde bu model böbrek yetmezliği çok daha hızlı bir gelişme gösterdi, ama aynı zamanda böbrek fonksiyon kaybı çok daha büyük bir değişim. Böbrek yetmezliğinin ilerlemesi plazma üre, sistolik kan basıncı ve proteinüri ölçerek zaman içinde takip eder. SNX sonra altı hafta, böbrek yetmezliği, geliştirmiştir glomerüler filtrasyon hızında belirgin bir azalma (% 69) ve etkin renal plazma akışı (% 62) ¹³ hipertansiyon (sistolik kan basıncı> 150 mmHg), proteinüri (ile karakterize> 50 mg/24 saat) ve hafif üremi (> 10 mM). Histolojik özellikleri tubul içeriro-interstisyel zarar inflamasyon, tübüler atrofi ve fibrozis ve kalan nüfus (<% 10) içinde sağlıklı glomerül büyük azalmaya yol açan fokal glomerüloskleroz yansıyan. Takip 12 hafta sonrasına kadar SNX terapötik girişimlerin değerlendirilmesi için bir fırsat penceresi sağlayan, CKD daha fazla ilerleme gösterir.

Protokol

Tüm deneyler Utrecht deneysel hayvan komitenin hayvan deneysel etik kılavuz çizgileri uygun olarak yürütülür. Protokol yazarın kurumun hayvan bakımı ve kullanımı komitesi rehberlik ve onay altında yapılır.

CKD 8 hafta yaşında erkek doğuştan Lewis sıçan (Charles River, Sulzfeld, Almanya) indüklenir. Sıçanlar bir ışık, sıcaklık ve nem kontrollü bir ortamda, standart koşullar altında muhafaza edilmektedir.

1. Cerrahi Hazırlık

1. Cerrahi aletler sterilize:
   • 1 öğrenci doku 1-2 diş 12 cm forseps
   • 1 öğrenci standart desen forseps
   • 2 Semken forseps
   • 1 Mayo makas
   • 1 öğrenci iris makası
   • Makasla 1 Olsen-Hegar iğne tutucu
   • Battaniye
2. Envanter listesini kontrol edin:
   • Isınma pad ve lamba ile masa Çalışma
   • O _{2, izofluran}
   • Dokular
   • Tıraş makinesi
   • Terazi
   • Steril çalışma seti
   • Steril gazlı bez 5x5 ve 10x10
   • % 70 alkol
   • % 0.9 'luk NaCl çözeltisi
   • 1 ml şırınga
   • Iğneler (25G)
   • Jel köpük pedler: spongostan
   • Vicryl 4.0 ve 5.0
   • Buprenorfin, 0.03 mg / kg (1:10 fizyolojik tuz içinde seyreltilmiş)
   • Ameliyat sonrası sıçanlar için temiz bir kafes

2. Sağ Taraf Uninephrectomy

1. % 70 alkol ile masaya dezenfekte edin.
2. Yeri indüksiyon kutusunda fare ve% 4 izofluran ve O ₂ 1 litre akışı ile anestezi neden. Not: Kullanılan sıçan suşu bağlı olarak, ön ve perioperatif analjezi reçete edilir, yerel veteriner hekim ile görüşülmelidir bu ihtiyacı.
3. Koni içine masa ve yer burun sıçan aktarın. Sıçan ve burun konisi sıçan vücut ısısını korumak için bir ısıtma pedi üzerine yerleştirilir. Sıçan is O ₂ izofluran ve 1 litre% 2 karışımı ile havalandırılan.
4. Sıçan kanadını Tıraş ve alkol ile dezenfekte edin. Yıkayın ve dezenfekte el ve steril cerrahi eldiven giyin. Kafa kapağı ve bir maske. 1 olun - 1.5 cm kesi paralel anatomik forseps ve künt makas kullanılarak kaburga. Arka kasların künt diseksiyon ile böbrek Açığa.
5. Böbreğin alt kutbu görünür, dikkatle perirenal yağ dokusu kavrama küçük künt forseps kullanabilir. Hafifçe forseps ile perirenal yağ çekerek böbrek dışa. Bu işlem sırasında böbreküstü bezi rahatsız dikkat edin. Böbrek üstü bezi kolayca yağ dokusunda medial sitesinde bir forseps koyarak çıkarıldı ve hafifçe böbreküstü bezi ve Şekil 2'de gösterildiği gibi, böbrek arasında yukarı doğru hareket ettirilebilir.
6. Gazlı bez ve yağ ve bağ dokusu çevreleyen açık hafifçe böbrek yerleştirin. Renal arter ve ven belirlenmesi ve bir bağ (5.0 yervikril) gemilerin etrafında tek bir düğüm ile, ancak düğüm kapalı kravat yok.
7. Böbrek ve düğüm arasında boşluk oluşturmak için, yaklaşık 0.5 cm aorta doğru damarları boyunca dikkatle gevşek düğüm taşıyın. Bu kesim sonra kaymasını bağ önlemek için yapılır.
8. Iki çift düğüm ile düğüm. Perfüzyon durduruldu ise böbreğin renk hemen kahverengiye kadar değişecektir. Bağ ucunda kesmeyin.
9. Böbrek yakın böbrek damarları kesin ve böbrek çıkarın. Yavaşça böbrek damarlarının kanama kontrol etmek için dikilen uzun ucunda çekin. Bağ gemide yerde kalmak gerekir. Bağ uzun biter kesin. Not, kalan böbrek damarlarının hemen karın boşluğuna geri çekilecektir.
10. Leke eksize böbrek kuru ve tartın.
11. Vicryl 5.0 ile sütürlerinin ile iskelet kası kesi kapatın. Arka bacak, 0.10 mL (0.03 mg / kg) enjekte buprenorfin im. Yakınintrakutanöz dikişler ile Vicryl 4.0 ile cilt. Bu yara açmasını sıçan engeller. Not: Lewis sıçanlarda solunum depresyonu nedeniyle, sadece sadece izofluran kapatmadan önce post-operatif analjezi verir.
12. Yiyecek ve su kolay erişim ile temiz bir tek kafeste sıçan ev. Isınma pad O / N kafes yarım yerleştirin ve dikkatli bir şekilde sıçan ertesi gün kontrol edin. Yara kapatıldı ve sıçan ameliyat sonrası 6 ile 12 saat arasında normal olan, aktif olduğunda, sıçan grubu gövde içine tekrar yerleştirilebilir.

3. Sol Taraf Ara toplam nefrektomi

1. Yedi gün sonra, aynı preparatlar olarak da 2.1 'den 2.5' e tarif sağ tarafı için de sol tarafta yapılır. Ameliyattan önce, sağ böbrek ağırlığının yaklaşık 2/3rds karşılık kaldırılması gerekiyor böbrek doku miktarı hesaplanır. Ameliyat öncesi jel köpük küçük parçalar (Spongostan, Johnson & Johnson, New Jersey) hazırlayın.
2. Sol böbrek üst kutup etrafında keskin bir makas yerleştirin ve bir inme (makas konumu için, bkz. Şekil 3) en üst kutup rezeke. Jel köpük bir parça ile hemen kapak ve steril gazlı bez ile hafif baskı.
3. 3.3 'de olduğu gibi böbrek alt kutup ile tekrarlayın.
4. Cilt üzerinde pıhtılaşma önlemek için böbrek kaldırın. Kanama durana kadar steril gazlı bez ile jel köpük pedler hem de hafif basınç koruyun. Kanama devam zaman, başka bir köpük yastık ekleyin.
5. Karın içinde yapışık jel köpük pedler ile kalan böbrek yerleştirin. Kas ve deri kapatın ve 2,9-2,12 izleyin.

4. Sham Cerrahi

1. Sham çalışan kontrolleri böbrekler ortaya koymak için aynı prosedürü tabi. Bunun yerine böbrek kökünü kazıma ya da bir hafta sonra direkleri kesme, böbrekler her iki böbreküstü bezleri rahatsız etmemek için özen, bir hafta arayla decapsulated vardır. Yara kapatılması ve ameliyat sonrası bakım kimliği olan2.11 ve 2.12 için entical.

Sonuçlar

Subtotal nefrektomi sonra, toplam böbrek kütlesinin yaklaşık 1/6th bırakılır. Şekil 4 önceki iki deneylerde ortalama ve standart sapma ile doğru böbrek Çıkarılan parçanın ağırlığını gösterir. Bir UNX sonra hafta, sol böbrek hipertrofisi oluşur tutmalı; belirten 5/6th kaldırma daha az doğru böbrek her zaman sonuçlarının ağırlığına göre hesaplanan kaldırılması gerekiyor ağırlık. Bu ameliyat sırasında sol böbrek ağırlığını belirlemek mümkün olmadığı...

Tartışmalar

Yüksek tuz diyeti ve geçici NOS inhibisyonu ile birlikte Lewis sıçanlarda renal kitle, bir 5/6th cerrahi olarak çıkarılması insan CKD benzer CKD bir modeli yol açar ve CKD medikal tedavinin nedensel mekanizmaları ve etkinliğinin çalışma sağlar.

5/6th nefrektomi modeli CKD, iyi bilinen ve geniş çapta tarif modelidir. Ancak, sadece böbrek kitle 5/6th kaldırarak tüm sıçan suşları acil böbrek yetmezliğine yol açmaz. Biz GFP + Lewis sıçan ²¹ durumu gibi CKD...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
			Reagent
L-NNA	Sigma-aldrich	N5501
Spongostan dental: gel foam pads 1x1x1 cm	Johnson&Johnson	Ms0005
Ethicon Vicryl FS-2S naald 4/0 V392H p/36	Ethicon	V303H
Ethicon Vicryl RB-1+ naald 5/0 V303H p/36	Ethicon	V392H
Buprenorphine (0.3 mg/ml)	Via local pharmacist ordered by Reckitt Benckiser pharmaceuticals	unknown
			Equipment
Student Tissue Forceps - 1x2 Teeth 12 cm	Fine Science Tools (FST)	91121-12
Student Standard Pattern Forceps	FST	91100-12
Mayo Scissors	FST	14010-15
2X Semken Forceps	FST	11008-13
Student Iris Scissors	FST	91460-11
Olsen-Hegar Needle Holder	FST	12002-14