Asit maserasyon yöntemini kullanarak tüm böbrek netron numarasının tahmini

Özet

Bütün böbrek netron sayısının tahminleri klinik ve deneysel olarak önemli olup, ne, sayısı ile böbrek ve kardiyovasküler hastalık riski arasında ters bir ilişki olduğu için. Burada, tüm böbrek netron sayısının hızlı ve güvenilir tahminlerini sağlayan asit maserasyon yönteminin kullanımı gösterilmiştir.

Özet

Nephron bağış bir bireyin doğduğu toplam nefron sayısını ifade eder, insanlarda nefrogenit gebelik 36 hafta tarafından tamamlanmış ve yeni nefron Doğum sonrası oluşturulur. Netron numarası, Doğum sonrası zaman içinde herhangi bir noktada ölçülen nefron toplam sayısını ifade eder. Hem genetik hem de çevresel faktörler hem netron bağış hem de sayıyı etkiler. Daha düşük netron tedavisi veya sayısına sahip bireyler böbrek veya kardiyovasküler hastalık gelişimi açısından daha yüksek bir risk altında olduğu düşünülmektedir gibi belirli genler veya faktörlerin nefrogenik ve netron kaybı veya ölümü sürecini nasıl etkilediğini anlamak önemlidir. Bir kişinin ömür boyu boyunca çevresel pozlarının netron numarasını nasıl etkilediğini anlamak, gelecekteki hastalık riskinin belirlenmesinde de hayati önem taşır. Böylece, tüm böbrek netron numarasını hızlı ve güvenilir bir şekilde değerlendirmek yeteneği, nefrogenit veya netron kaybına katkı sağlayan veya teşvik eden mekanizmaları daha iyi anlamak için temel bir deneysel gerekliliktir. Burada, Damadian, Shawayri ve Bricker tarafından açıklanan prosedüre göre tüm böbrek netron numarasının tahmin edilmesi için asit maserasyon yöntemini tarif ediyoruz, hafif modifikasyonlar ile. Asit maserasyon yöntemi, daha gelişmiş, pahalı olsa da, manyetik rezonans görüntüleme gibi yöntemler kullanılarak Belirlenenlerin% 5 ' i içinde olan netron sayısının hızlı ve güvenilir tahminler (glomeruli sayma tarafından değerlendirilir) sağlar. Dahası, asit maserasyon yöntemi çok sayıda numune veya deneysel koşullarda ne, sayısını değerlendirmek için mükemmel bir yüksek verimlilik yöntemidir.

Giriş

Netron hem temel yapısal hem de böbrek¹' in fonksiyonel birimidir. Yapısal olarak, netron Bowman kapsülü içinde bulunan glomerülden (kapiller ve podositler) ve böbrek tübülü oluşur, proksimal tübül oluşan, Henle döngü, ve toplama kanalına sona erer distal tubüs. Fonksiyonel olarak, netron rolü su ve elektrolit filtrasyon ve reemilimi ve atıkların salgılanmasını olduğunu. Genel olarak, nefrogenis tamamlanan 36 gebelik hafta insanlarda ve kısa bir süre sonra fare ve sıçan²gibi çeşitli türler doğumdan sonra. Nefron bağış, bir bireyin doğduğu toplam nefron sayısını ifade eder, zira netron sayısı her zaman Doğum sonrası

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protokol

Aşağıda listelenen sarf malzemeleri ve reaktifler, tek bir fareyle tüm böbrek netron numarasının belirlenmesi için, yani iki böbrek. Sıçan için asit maserasyon yönteminin kullanımı için değişiklikler yıldız ile tanımlanır. Tüm deneysel protokoller, Laboratuvar hayvanlarının bakımı ve kullanımı için Ulusal Sağlık Kılavuzu Enstitüleri 'ne konmuştur ve Mississippi Tıp Merkezi Üniversitesi 'nde kurumsal hayvan bakımı ve kullanım Komitesi tarafından onaylanmıştır.

1. böbrek yalıtım prosedürü

1. Fare (veya diğer türler) tartmak ve bir izofluran ile ötenize (% 5-8%) doz aşımı veya pentobarbital (150 mg/kg intraperitoneal enjeksiyon).
....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Sonuçlar

Aşağıda hipertansiyon kurulan bir fare modeli ve yaş ile ilgili kronik böbrek hastalığı bir genetik sıçan modeli tüm böbrek netron numarasının temsili tahminleri vardır. Glomerüllerin anahtar tanımlayıcı özellikleri, örneğin ön veya post-arteriolar veya tübüler yapıları ile veya bağlı olmayan küresel bir yapı gibi, asit maserasyon yöntemine yeni olanlar için vurgulanır (Şekil 1).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

İyi deneysel teknikle, asit maserasyon yöntemi tüm böbreklerde netron numarasını tahmin etmek için idealdir. Böbrek asit içinde çözünmüş olsa da, glomerül büyük ölçüde bozulmamış kalır ve kolayca tanımlanabilir, bireysel glomerül sayımı nispeten kolay ve basit hale. Asit maserasyon tekniği özellikle çeşitli nedenlerle avantajlıdır. İlk olarak, asit maserasyon yöntemi gider ve fiziksel çaba açısından nispeten az gerektiren hızlı ve kullanışlı bir yöntemdir. Asit maserasyon yön.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Isoflurane anesthesia	Abbott Laboratories	05260-05
Isoflurane vaporizor system & flow gauge	Braintree Scientific	VP I	Include medical grade oxygen supply
Leica Inverted Microscope DMIL LED	Leica Microsystems	DMIL LED	Any make also suitable
Digital water bath	Fisher Scientific	2239	Any make also suitable
ToughCut Fine surgical scissors	Fine Science Tools	14058-11	25 mm cutting edge, 11.5 cm length; Tips: sharp-sharp; Tip shape: straight
Micro dissecting forceps 4 1/4 in.	Biomed Res Instruments, Inc	10-1760	Curved tip
Plexiglass board 5 in. x 7 in.	any source suitable	n/a	Any make also suitable
Hexagonal polystyrene weighing dish	Fisher Scientific	02-2002-100	Any make also suitable
Razor blades	Fisher Scientific	12-640	Single edge carbon steel 0.009
Gauze sponges 4 x 4 in. 8 ply	Fisher Scientific	MSD-1400250
10x concentrate phosphate buffered saline (PBS)	Sigma Aldrich	P5493-4L	Dilute to 1x
6 N Hydrocholric acid solution	Sigma Aldrich	3750-32
15 mL conical centrifuge tube	Fisher Scientific	14-959-70C	Any make also suitable
50 mL conical centrifuge tube	Fisher Scientific	14-959-49A	Any make also suitable
Disposable 5 mL syringe	Cole Palmer	EW-07944-06	Any make also suitable
18G1.5 disposable needle	Fisher Scientific	14-826-5D	Any make also suitable
21G1.5 disposable needle	Fisher Scientific	14-826-5B	Any make also suitable
12-well multiple-well cell culture plates with lid	Cole Palmer	#FW-01959-06	Any make also suitable
Polypropylene modular test tube rack	Cole Palmer	#EW-06733-00	Capable of accommodating 15 and 50 mL conical tubes; any make also suitable