Çeşitli fare Adipose depoları tanımlama ve diseksiyon

Özet

Adipositler ayrı depolarında var ve benzersiz mikro ortamlarında çeşitli rolleri vardır. Adiposit karakteri ve fonksiyonunda bölgesel farklılıklar ortaya çıktığı için, depoların standartlaştırılmış tanımlaması ve yalıtımı alanın ilerlemesi için çok önemlidir. Burada, çeşitli fare yağ depolarının eksizyonu için ayrıntılı bir protokol sunuyoruz.

Özet

Adipoz dokular, yerel ve küresel ihtiyaçlara yanıt olarak enerji depolama ve seferberlik, ısı üretmek için metabolizmanın tıkanması ve tüm vücut homeostazisini düzenleyen adipokinlerin salgılanması da dahil olmak üzere geniş bir dizi fonksiyon ile karmaşık organlardır. bağışıklık yanıtı. Gelişmekte olan araştırmalar, vücut boyunca ayrık depoların içinde yer alan adipanositlerin gelişimsel, moleküler ve fonksiyonel profillerinde önemli bölgesel farklılıkları tespit etmektir. Metabolik hastalıkların genellikle depoya özgü efektleri göstermesiyle depoların farklı özellikleri tıbbi olarak ilgilidir. Bu protokol, çeşitli fare adipoz dokularının yeniden üretilebilen ve doğru tanımlanması ve eksizyonu için ayrıntılı bir anatomik Atlas ve diseksiyon Kılavuzu ile müfettişlere yardımcı olacaktır. Ayrık yağ depolarının standartlaştırılmış diseksiyonu, çeşitli beslenme ve çevresel koşullarda moleküler ve metabolik özelliklerinin ve yerel ve sistemik patolojik durumlara katkılarının ayrıntılı karşılaştırmalarına izin verecektir.

Giriş

Adipoz dokularında, yerel ve küresel ihtiyaçlar, termoregülasyon ve adipokinlerin salgılanması, enerji dengesini, metabolizmayı ve bağışıklık yanıtlarını düzenlemek için enerji depolama ve serbest bırakılması da dahil olmak üzere tüm vücut homeostasis 'te kritik roller oynar^{1 , 2}. adipocytes ayrı depoları içinde vücut boyunca dağıtılır, ve bazı durumlarda kendi mikroortamlar içinde özel roller hizmet^3,4,5. Tarihsel olarak, yağ dokusu çalışma beyaz yağ dokusu (WAT) üzerinde odaklı ve enerji homeostaz bakımını rolü. En adipositler subkutan ve visseral Wat depoları vücut boyunca dağıtılır. Bu depoların özellikleri metabolik hastalıkların diferansiyel duyarlılık için önemlidir. Derinin altında bulunan subkütan adipositler, koruyucu metabolik etkilere sahip⁵. Hayati organları çevreleyen ve gonadal, perirenal, retroperitoneal, omental ve perikardial depoları içinde yer alan Visceral adilositler, genellikle tip 2 diyabet ve kardiyovasküler hastalık dahil olmak üzere metabolik bozukluklara bağlıdır² . Kahverengi adipoz dokular (BAT) da kapsamlı olarak incelenmiştir. Kahverengi ve kahverengi benzeri adiposit unoupling protein 1 (UCP1) ve adaptif termogenesis ve glikoz homeostazı^6,7önemli roller oynayın. Klasik kahverengi adipanositler interensüler BAT Depot⁸' de yer alır. Kahverengi adilositlerin kümeleri de diğer yerlerde bulunur, supraclaviküler dahil, infra/subsörüler, servikal, paravertebral ve periaort depoları^8,9.

Büyük WAT ve BAT depoları kendi konumuna ek olarak, adipanositler vücut boyunca ayrık niş var⁴, onlar kendi mikroortamlar içinde özel fonksiyonlar gerçekleştirebilir nerede. Örneğin, kemik iliği yağ dokusu (BMAT) bir lipid rezervuar olarak hizmet vermektedir, adiponektin dolaşan önemli bir kaynağıdır, ve yakından osteoblastlar ile etkileşimde, osteocsürer, ve hematopoetik hücreler^10,11. Dermal adipositler, yara iyileşmesi, bağışıklık tepkisi, termoregülasyon ve saç folikül büyümesi dahil olmak üzere yaygın süreçlere katkıda bulunur^12,13. Ayrıca, epikardiyal adiposit çeşitli adipokinler ve koroner arter hastalığının gelişimi ve ilerlemesi üzerinde yerel ve sistemik etkileri sağlayan kemokinler üretebilir¹⁴. İnter/intramusküler WAT genişleme artmış adiposity ile olumlu korelasyon, sistemik insülin direnci, ve azalma kas gücü ve hareketlilik¹⁵. Buna ek olarak, popliteal adipositler enfeksiyon sırasında lenfatik genişleme için bir lipid rezervuar olarak hizmet¹⁶. Farklı eklem depolarının belirli rolleri genellikle bilinmiyor iken, diz içinde Hoffa depo (infrapatellar) şimdi patolojilere katkıda düşünülen, anterior diz ağrısı ve osteoartrit dahil olmak üzere¹⁷.

Adiposit karakter ve fonksiyonunda bölgesel farklılıklar yoğun bir çalışma altında olmakla beraber, alan şu anda farklı fare depolarının tanımlanması ve diseksiyonu için standartlaştırılmış bir protokol eksikliği ile sınırlıdır. Daha önce yayımlanan yöntemler genellikle bir veya iki özel depoların izolasyonunu tarif etmiş ve üniforma eksizyonu^18,19için gerekli ayrıntı düzeyini eksikliği. Bu yazıda açıklanan protokol, birçok farklı fare yağ depolarının spesifik anatomik konumları ve izolasyon adımları için kapsamlı bir kılavuz sağlar. WAT depoları Bu makalenin birincil odağı olmasına rağmen, interskulüler BAT eksizyonu da ayrıntılı olarak açıklanmıştır. Bu protokol kullanılarak eksiz yağ dokularında, eksplant çalışmaları, Histoloji ve gen ifadesi analizleri dahil olmak üzere çok çeşitli deneysel uç noktalar için kullanılabilir.

Bu makalenin amacı, müfettişlerin hem belirgin hem de daha az çalışılan fare yağ depoları (Şekil 1) açıkça ve kesin bir şekilde tanımlamak ve izole etmek için ayrıntılı bir protokol sunmasıdır. Bu kaynak, çeşitli niş içindeki adilositlerin gelişimsel, moleküler ve fonksiyonel özelliklerinin daha eksiksiz bir şekilde incelenmesi konusunda kolaylaştıracaktır.

Resim 1: Bu protokolde fare yağ depolarının şematik gösterimi. Bu görüntü Bagchi et al., 2018⁴. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek Için lütfen tıklayınız.

Protokol

Tüm hayvan prosedürleri Michigan Üniversitesi Kurumsal hayvan bakımı ve kullanım Komitesi (ıAYUC) onayı ile gerçekleştirilir.

1. ötenizasyon

Not: Bu video protokolünün amacı için 4 ila 6 aylık C57BL/6J fareler kullanılır.

1. Fareyi bir izofluran Buharlaştırıcı odasına yerleştirin ve Isoflurane akış hızını% 5 veya daha büyük olarak ayarlayın. Solunum durduktan sonra bir dakika kadar Isoflurane pozlama devam edin. Daha sonra Buharlaştırıcı odasından fareyi çıkarın ve onaylanmış bir ikincil tedbir kullanarak ötenazi onaylayın.
   Not: Onaylı ikincil önlemler kurum ve hayvan protokolüne göre farklılık gösterecektir ve servikal çıkığı veya deyapıştırma içerebilir.
2. Diseksiyon Pan üzerinde ötenize fare yerleştirin. % 70 etanol kullanarak farenin dorsal ve ventral dış yüzeylerini sterilize edin. Diseksiyon sırasında kürkün kontaminasyonunu en aza indirmek için farenin dış yüzeyinin yeterince ıslak olduğundan emin olun.

2. majör subkutan Adipose Ddepots (anterior subkutan, Dorsolumbar, Inguinal, gluteal) ve Interkasüüler kahverengi Aadipose doku tanımlama ve yalıtım

1. Anterior Subkutanöz belirlenmesi ve yalıtılması Wat
   Not: Anterior subkutan WAT scapulae arasında yer alır, fare⁷' nin aksiye boyun ense inen. Bu depo alternatif olarak supraskapüler⁸ veya ınterscapular²⁰ Wat olarak tarif edilmiştir ve doğrudan intersbirer bat deposunun üstünde yatıyor.
   1. Anterior subkutan deposunun izole edilmesi için, fareyi meyilli bir pozisyonda karnına yatırın. Üst ve alt ekstremite diseksiyon pimleri ile diseksiyon Pan güvenli.
   2. Boynun altında dorsal cildi kaldırmak için forseps kullanın. Cilt içinde küçük (1 mm) kesim yapmak için iris makas kullanın.
   3. İlk kesimin içine iris makas bir bıçak takın ve deri yoluyla bir orta çizgi dikey kesi (2-3 cm) yapmak, boyun ve orta arka için omurga boyunca inen başlangıç.
   4. İki yatay kesikler olun (1 cm her) iris makas kullanarak, orta çizgiden yanal uzanan, ilk dikey kesi üst ve alt.
   5. Cildinizi dikkatlice soymak ve anterior subkutan deposunun açığa çıkarmak için forseps kullanın.
   6. Doku doğal sınırlarını takip depo kaldırmak için iris makas kullanın.
      Not: Bu yöntem hem anterior subkutan WAT hem de intersküüler BAT yalıtır.
   7. Diseksiyon Pan üzerinde kesme depo yerleştirin ve dikkatle iris makas kullanarak kontamine BAT çıkarın.
2. Tanımlama ve izole etme c lassical bat
   Not: Klasik BAT ön subkutan WAT deposunun altında yer almaktadır.
   1. BAT izole etmek için, depo doğal sınırını takiben, anterior subkutan doku alt kenarı boyunca yatay olarak kesmek için iris makas kullanın.
   2. Sonra, doku doğal sınırlarını takip, depodaki lateral kenarlar boyunca iki dikey kesikler yapmak için iris makas kullanın.
   3. Dikkatli bir şekilde depo çevirmek ve WAT içinde gömülü kelebek şeklinde intersiçüler BAT ortaya çıkarmak için forseps kullanın. Çevreleyen WAT dan BAT dışarı dikkatle incelemek.
3. Tanımlama ve izole etme posterior subkutan Wat,
   1. Fareyi bir sırtüstü konumuna geri koy.
   2. Diseksiyon pimleri ile üst ve alt ekstremite güvenliğini sonra, sternum tabanında Cilt yukarı kaldırmak ve küçük bir (1 mm) cilt kesilmiş yapmak için forseps kullanın.
   3. İlk kesime iris makas bir bıçak takın ve deri yoluyla bir orta çizgi kesi (4 – 5 cm) yapmak, sternum tabanına başlayarak ve kuyruk tabanına inen. Bu kesi yaparken dikkatli olun çünkü ventral cilt çok ince ve altta yatan periton kavite duvarıyla yakından ilişkilidir.
   4. İlk dikey kesi üst kısmındaki orta çizgiden yanal uzanan, İris makas kullanarak iki yatay kesikler (1 cm her) olun.
   5. Deri ile ilişkili kalması gereken posterior subkutan WAT bulmak için peroneal boşluğundan ve bacağından cildi dikkatle geri soyma için forseps kullanın. WAT tam eksizyonu kolaylaştırmak için diseksiyon pimleri ile uzanmış cilt güvenli.
      Not: Posterior subkutan WAT sürekli olarak görünse de, aslında üç ayrı depotdan oluşur: Dorsolumbar, inguinal, ve gluteal¹. Dorsolumbar deposu, lomber omurgadan, arka ekstremite tabanına uzanır. Üçgen inguinal depo, kasık boyunca direk olarak ekstremite tabanında uzanır ve belirgin bir lenf nodu içerir. Gluteal depo kasık tabanına inferiora uzanır ve kuyruk tabanına bacak etrafında sarar.

3. Visceral Adipose depoları (gonadal, perirenal, retroperitoneal, omental, perikardial) tanımlaması ve yalıtımı

1. Tanımlama ve izole etme visseral Wat depoları
   Not: Büyük ölçüde torasik ve periton boşluklar içinde bulunan Wat depoları, bir sırtüstü pozisyonda fareyi tutmak. Üst ve alt ekstremite diseksiyon pimleri ile diseksiyon Pan güvenli.
   1. Sternum tabanında ince periton kavite duvarı yukarı kaldırmak ve iris makas kullanarak küçük bir kesim (1 mm) yapmak için forseps kullanın.
   2. İris makas bir blade kesim içine yerleştirin ve bir inen dikey kesi (4 – 5 cm) periton boşluğu (sternum tabanı) rektum için.
   3. İki yatay kesikler (1 cm her) iris makas ile, orta çizgiden yanal uzanan, üst ve dikey kesi altında olun.
   4. Periton geri soyma ve karın boşluğu içeriğini açığa forseps kullanın. Uzanmış peritonumu diseksiyon tavaya sabitleyin.
2. Tanımlama ve izole etme g onadal Wat
   Not: Gonadal Wat kadınlarda rahim ve yumurtalıkların (ovarya veya parametrial) ve epididim ve testis erkeklerde (epididymal) çevreleyen. Ovaryalı WAT yumurtalıkları, uterusu ve mesane çevreleyen. Obez hayvanlarda, gonadal ve perirenal anjiyomiksoma Wat sürekli olarak görünebilir-bu durumda, uterus boynuz ve yumurtalıkların depolarını ayırın. Epididimal Wat epididymis, testis ve belirgin epididimal kan damarına bağlı olarak bulunur.
   1. Gonadlar (testis veya yumurtalıklar) bulun ve ilişkili gonadal Wat yukarı kaldırmak için forseps kullanın.
   2. Dikkatli bir şekilde gonads gelen WAT için iris makas kullanın.
3. Tanımlama ve izole etme p erirenal Wat
   Not: Perirenal WAT, böbrekleri bilaterally çevrelemektedir. Obez hayvanlarda, bu depo uterus boynuz ve yumurtalıkların üstüne inferiora uzatmak için görünebilir. Perirenal anjiyomiksoma Wat geleneksel olarak bir visserat depo²¹olarak sınıflandırılmış olmasına rağmen, birkaç grup bir kahverengi depo Lineage izleme ve radyoaktif glikoz Alım çalışmaları dayalı olarak tespit etti⁸,^{9, 20}. histolojik olarak beyaz ve kahverengi adipanositlerin karışımı oluşur.
   1. Perirenal anjiyomiksoma deposundan çıkarmak için böbrek bulun ve forseps kullanın ve perirenal anjiyomiksoma ve retroperitoneal depoları arasında net bir bölünme görmek için orta çizgi çekin.
   2. Doğrudan böbrekler ile ilişkili WAT tüketim. Böbreklerin üzerinde bulunan adrenal bezlerin WAT 'dan çıkarıldığından emin olun.
4. Tanımlama ve izole etme r etroperitoneal Wat
   Not: Retroperitoneal WAT bir paravertebral pozisyonda yer almaktadır, posterior karın duvarı ve omurilik arasındaki sınır boyunca.
   1. Bu depodaki tüketim için, perirenal anjiyomiksoma ve retroperitoneal depoları arasındaki sınırı açıkça görmek için böbrek yukarı ve orta hat doğru kaldırmak için forseps kullanın.
      Not: Obez hayvanlarda, bu sınırın belirlenmesi zor olabilir.
   2. Sonra, arka periton duvarın retroperitoneal Wat dikkatle incelemek için iris makas kullanın.
5. Omental WAT 'ın belirlenmesi ve yalıtılması
   Not: Omental WAT mide büyük eğrilik boyunca yer almaktadır. Omental adipoz insanlarda önemli bir depo olmasına rağmen, genellikle sadece moral obez farelerde mevcut.
   1. Visseral omental WAT tanımlamak için, mide yukarı kaldırmak için forseps kullanın. Mide inferior sınır boyunca ilişkili yağ dokusu kaldırmak için iris makas kullanın. Pankreas ile omental WAT karıştırmayın.
6. Mezenterik tanımlama ve izole etme Wat
   Not: Mezenterik WAT, küçük ve büyük bağırsakları çevreleyen ve ilişkili bir Web benzeri bir yapıdadır.
   1. Bu depodan çıkarmak için, mide ve rektum tabanında keserek sindirim sisteminin geri kalanından bağırsak çıkarın. Bağırsakları visseral boşluğun dışında kaldırmak ve onları çözmek için forseps kullanın.
   2. Dikkatle duodenum başlayarak ve kolon sonuna kadar devam bağırsak gelen mezenterik WAT incelemek için iris makas kullanın. Mezenterik depoyla yakından ilişkili olan lenf nodlarını dikkatle kaldırın.
7. Tespit ve perikardial WAT yalıtan
   Not: Perikardial WAT visseral perikardium dışında ve parietal perikardium dış yüzeyinde, kalp¹⁴alt yönü boyunca genellikle bulunur.
   1. Torasik boşluğa erişim elde etmek için, fareyi bir supin pozisyonunda tutun. Üst ve alt ekstremite diseksiyon pimleri ile diseksiyon Pan güvenli.
   2. Xyphoid sürecini (sternum tabanında kıkırdak) kaldırmak ve torasik kavite duvarında küçük (1 mm) kesim yapmak için forseps kullanın.
   3. İris makas bir blade kesim içine takın ve iki yatay kesikler (1 cm her) sternum tabanında yanal uzanan olun. Bu, torasik boşluğun diyaframını ve inferior sınırını açığa çıkarır.
   4. İki artan dikey kesikler (3 – 4 cm), ribcage aracılığıyla, torasik boşluğun lateral sınırlarından köprücük kemiğine kadar yükselerek kesme makas kullanın.
   5. Ribcage ventral yarısını kaldırmak için forseps kullanın. Göğüs kafesi kaldırmak ve torasik kavite içeriğini açığa köprücük aşağı uzunluğu boyunca son kesim (2 cm) yapmak için kesme makas kullanın.
   6. Varsa, perikardyün dış yüzeyinden perikardial adipoz dikkatle gözden.

4. diğer Adipose Depotların tanımlanması ve yalıtımı

1. Merkez üssü WAT belirleme ve izole etme
   Not: Epicardial WAT visseral perikardium içinde yer alır ve doğrudan Miyokardiyum yüzeyi ile ilişkilidir.
   1. Mevcut ise,% 10 nötr tampon formalin 24 saat içinde perfkullanılan kalbin izolasyonunda ve fikreme işleminden sonra histolojik olarak epifarara adipositler görülebilir.
2. Tanımlama ve izole etme p opliteal Wat
   Not: Popliteal WAT arka diz popliteal fossa bulunur ve büyük bir lenf düğümü içerir. Bu depo genellikle genç hayvanlarda görünmez.
   1. Popliteal WAT izole etmek için, dikkatle ayak arka ekstremite tabanına cilt kaldırmak için iris makas kullanın.
   2. Patella diseksiyon Pan karşı yerleştirin ve ayak içinde bir pin ile uzanmış bacak güvenli. Dizinin arkasındaki popliteal fossa 'nın yukarı doğru baktığından emin olun.
   3. Gasronemius kasının medial ve lateral başkanları alt sınırında bir kesim yapmak için iris makas kullanın. Kas yukarı kaldırmak ve üçgen popliteal depo ortaya çıkarmak için forseps kullanın.
   4. Doğal doku sınırları boyunca depodan çıkarmak için iris makas kullanın.
3. Dermal WAT tanımlamak ve izole etmek
   Not: Dermal Wat retiküler dermis ve panniculus carnosus kas tabakası arasında bulunan adipositler ince bir katmandır.
   1. Dermal adipositlerin histolojik yöntemlerle tanımlanması için, fareyi midesine meyilli bir pozisyonda yerleştirin. Diseksiyon pimleri ile üst ve alt ekstremite güvenceye aldıktan sonra, cilt ıslak 70% etanol ile fare dış yüzeyi sprey.
   2. Fare arkasındaki cildin kare bir kısmından ıslak kürk kaldırmak için bir neşter kullanın.
   3. Dikkatli bir şekilde cilt tıraş kısmı, retiküler dermis, dermal WAT, panniculus carnosus ve bazı subkutan WAT dahil olacak ekilmek için iris makas kullanın.
   4. İnce dikey şeritler halinde eksiz cilt kesmek için bir neşter kullanın.
   5. İnce dikey şeritleri, yapışkan subkutan WAT tabakası aşağı bakacak şekilde konumlandırın.
   6. Bir ucunda başlayarak, bir sarmal oluşturmak için kendi üzerine şerit rulo. Spiral dışında yapışkan subkutan WAT tabakası sabitleme sırasında şeklini korumak için rulo sağlayacaktır.
   7. Spirali, histolojik işleme²²' den önce 24 saat için% 10 nötr tamponlu formalin içeren 24 kuyu plakasına yerleştirin.
4. İnterkas WAT belirleme ve izole etme
   Not: Interkaslı WAT, kasların derin fasya altında bulunan adipanosit olarak geniş bir şekilde tanımlanır. Bu terim, aynı zamanda intramusküler Wat olarak bilinen iskelet kasının kas lifleri arasında serpiştirilmiş adipositler içerir ve adipositler kas demetleri kendilerini içinde bulunan. Wildtype fareler genellikle çok sayıda interkas adipocytes yok. Ancak, belirli koşullar altında histolojik yöntemlerle interkas WAT tanımlamak için mümkündür. Bazı koşullarda, interkas adipanositler aynı zamanda diyaframı gibi pürüzsüz kaslarda bulunabilir.
   1. Tibialis anterior (ta) kas izole etmek için, örneğin, bir sırtüstü pozisyonda geri fareyi yerleştirin ve diseksiyon pin kullanarak diseksiyon Pan için alt ekstremite güvenli. Kürk ile kontaminasyon en aza indirmek için% 70 etanol ile cilt ıslak.
   2. Dikkatle bacak cilt kaldırmak ve femur şaftında diz üzerinde bulunan kuadriseps kas grubunu açığa, ve ta Tibia ventral yüzeyinde diz altında bulunan iris makas kullanın.
      Not: TA, Tibia ve distal ucunda daha fazla tendinöz proksimal ucunu yakın kalın.
   3. Kasının bir parçasını çıkarmak ve histolojik işleme²²' den önce 24 saat boyunca% 10 nötr tampon formalin içinde düzeltmek için iris makas kullanın.
5. Eklem içi WAT depolarını tanımlama ve izole etme
   Not: Intra-artiküler WAT depoları sinoviyal eklem içinde yer almaktadır.
   1. İnfrapatellar WAT tanımlamak için, örneğin, histolojik yöntemlerle, BMAT bölümünde ayrıntılı olarak bacak kemikleri hasat.
   2. Femur-tibial kompleksi çıkarmadan sonra, mümkün olduğunca çok kas ve bağ dokusu kaldırmak için iris makas ve gazlı bez pedleri kullanın. Tibiofemoral eklem kırmayın.
   3. Kireç giderme ve histolojik işlemden önce 24 saat boyunca% 10 nötr tamponlu formalin içinde femur-tibial kompleksi düzeltin (aşağıda açıklanmıştır, adım 4.6.8).
6. Kemik iliği yağ dokusunu tanımlama ve izole etme
   Not: Kemik iliği yağ dokusu (BMAT) kemik içinde yer alır, hematopoetik hücrelerle serpiştirilmiş. Anatomik olarak, BMAT kurucu olarak sınıflandırılabilir (Distal tibia ve kaudal vertebra) veya düzenlenmiş (orta-proksimal tibia, femur, ve lomber vertebra)^10,11. RNA ve protein analizleri için kemik iliği adipositlerinin temiz izolasyonu farelerde zordur. Ancak, fare kemikleri kolayca hasat edilebilir, sabit, decalcified ve parafin-histolojik analizler için gömülür.
   1. Örneğin, bacak kemikleri hasat için, ilk fare bacaklar çıkarın. Asetabulofemoral eklem kesmek için Diseksiyon makas kullanın, femoral kafası sağlam tutmak.
   2. Dikkatle bacak kasları açığa, bacağı cilt kaldırmak için iris makas kullanın.
   3. Dikkatle femur ve Tibia iris makas ve gazlı bez pedleri kullanarak ana kasları dışarı parçalamak.
   4. Femur maruz kaldığında, pelvis ve femur artikülasyonu için kemik kenarı izleyin ve dikkatle asetabulofemoral eklem femoral kafasını serbest bırakın. Femur kalan doku temizlemek için gazlı bez kullanın.
   5. Ayak bileği eklem Tibia sınırını izleyin. Dikkatle, Tibia ucunda bulunan medial Malleolus serbest, ayak bileği ekleminden.
   6. Femur-tibial kompleks izole edildikten sonra, İris makas ve/veya gazlı bez kullanarak mümkün olduğunca çok kas ve bağ dokusu çıkarın.
   7. Tibiofemoral eklem içine iris makas bir bıçak ekleyerek femur gelen Tibia ayırın ve hafifçe medial ve lateral teminat ligamentler ve anterior ve posterior çapraz ligamentler üzerinden kesilmiş. Tibia bozulmamış kalmasını sağlamak için diz eklem kapsülünü kaldırmayın. Tibia herhangi bir kalan doku temizlemek için gazlı bez kullanın.
   8. Oda sıcaklığında 24 saat için% 10 nötr tamponlu formalin içinde kemikler düzeltin ve sonra yıkama ve gelecekteki ihtiyaçlarına göre saklayın.
      1. MİKROBİLGİSAYARLI tomografi (μCT) kullanarak kemik parametrelerini çözümlemek için, Sorensen 'in fosfat tamponunun kemiklerini saklayın, pH 7,4²³.
      2. BMAT ölçüm ve histolojik analizler için, kemikleri% 14 EDTA, pH 7,4, 10-14 gün boyunca çürütmek.
      3. Kireç giderilmesi sonrasında, BMAT²⁴' ü ölçmek için osmiyum tetroksit boyama ve μct Analizi kullanın. Aksi takdirde, Histoloji için proses ve parafin-embed kemikler²³.

Sonuçlar

Yukarıda açıklanan protokol kullanılarak çeşitli fare yağ depolarının başarılı bir şekilde tanımlanması ve yalıtılması sağlanabilir. Şekil 2' de subkutan (A, E-F), kahverengi (B), visseral (C, D, G-J) ve popliteal (K) depotların brüt anatomik konumları gösterilir.

Şekil 2: fare yağ d...

Tartışmalar

Ayrık adilosit kümelerinin farklı moleküler ve fonksiyonel özelliklerinin önemi giderek artmakta olup, alan içindeki müfettişlerin daha fazla analiz için yağ depolarını eşit şekilde tanımlamasına ve öteleklerine önem vermektedir. Bugüne kadar, standart yerelleştirme ve çeşitli fare yağ depoları yalıtım için birkaç protokol var. Önceden yayımlanan Yöntemler öncelikle bir veya iki depoları odaklı ve farklı müfettişlerin tarafından Tekdüzen kimlik ve eksizyon için gerekli detayları<...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
10% neutral buffered formalin	Fisher Scientific	22-110-869
24-well plates, untreated	Sigma-Aldrich	CLS3738
70% ethanol (dilute from 95%)	Fisher Scientific	04-355-226
Dissecting forceps with curved tips	VWR	89259-946
Dissecting pan	Carolina Biological Supply Company	629004
Dissecting scissors (sharp/blunt tip)	VWR	82027-588
Gauze sponges	Vitality Medical	2634	Curity 4 x 4 inch gauze sponge, 12 ply
Handi-Pins for dissection	Carolina Biological Supply Company	629132
Iris scissors (straight)	VWR	470018-890
Isoflurane	VetOne	501017
Scalpel	VWR	100499-578	Feather scalpel handle with blade, disposable