Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.
Method Article
* Bu yazarlar eşit katkıda bulunmuştur
Bu makalede, bir kısıtlamacı kullanarak kronik immobilize fareler depresif benzeri davranış indüksiyon için Basitleştirilmiş ve standartlaştırılmış bir protokol sağlar. Buna ek olarak, depresyon indüksiyonu doğrulamak için davranış ve fizyolojik teknikler açıklanmıştır.
Depresyon henüz tam olarak anlaşılmadı, ancak çeşitli etken faktörler bildirilmiştir. Son zamanlarda, depresyon prevalansı arttı. Ancak, depresyon veya depresyon araştırma için terapötik tedaviler az. Böylece, mevcut yazıda, biz hareket kısıtlaması ile indüklenen depresyon bir fare modeli öneriyoruz. Kronik hafif stres (CMS) depresif benzeri davranışları teşvik etmek için tanınmış bir tekniktir. Ancak, çeşitli hafif gerilimlerin bir kombinasyonundan oluşan karmaşık bir prosedür gerektirir. Buna karşılık, kronik immobilizasyon stres (BDT), belirli bir süre için bir kısıtlama kullanarak hareketi kısıtlayarak depresif davranışı tetikleyen bir kısıtlama modelinden değiştirilmiş, kolayca erişilebilen bir kronik stres modelidir. Depresif benzeri davranışları değerlendirmek için, sakaroz tercih testi (SPT), kuyruk süspansiyon testi (TST), ve stıtk tahlil stres Marker kortikosteron seviyeleri ölçmek için bu deney birleştirilir. Açıklanan protokoller, CIS indüksiyonu ve depresyon doğrulama için davranış ve fizyolojik faktörlerin değişikliklerin değerlendirilmesi göstermektedir.
Major depresif bozukluk (MDD) dünya çapında zihinsel özürlülük önde gelen nedenidir, beklenenden daha hızlı artan bir insidansı ile. 2001 yılında, Dünya Sağlık Örgütü MDD 2020 tarafından dünyada ikinci en yaygın hastalık olacağını tahmin etmiştir. Ancak, zaten ikinci en yaygın 20131oldu. Buna ek olarak, mevcut antidepresanlar gecikme etkinliği, ilaç direnci, Relapse ve çeşitli yan etkileri2,3dahil olmak üzere birçok sınırlama vardır. Araştırmacılar bu nedenle daha etkili antidepresanlar geliştirmelidir. Ancak MDD 'nin belirsiz patofizyolojisi, yeni antidepresanların gelişmesine engel teşkil etmiştir.
Uzun vadeli stres MDD için ana risk faktörüdür. Aynı zamanda MDD etiyolojisi4,5ile ilgili Hipotalamik-hipofiz-adrenal (hPa) eksen, disfonksiyon neden olabilir. Daha önce açıklandığı gibi, hPa eksen stres kaynaklı psikiyatrik patofizyolojide depresyon ve anksiyete bozuklukları da dahil olmak üzere önemli bir rol oynar kortikoone seviyeleri artırarak6,7,8, 9. many hayvan modelleri, MDD4olan hastalarda gözlenen hPa ekseninin sürekli aktivasyonuna dayanmaktadır. Dahası, kronik stres ve subkutan enjekte glukokortikoidler tarafından indüklenen yüksek glukokortikoidler nöronal hücre ölümü ile birlikte depresif davranışlar neden, Nörojen süreçlerin atrofi, ve kemirgenler beynin azaltılmış yetişkin nörojenezi10 , 11. depresyon ile ilişkili başka bir önemli beyin alanı medial prefrontal korteks (MPFC). MPFC hipotalamus ve amigdala gibi beyin subregions kontrol önemli bir rol oynar, bu kontrol duygusal davranış ve stres tepkiler,8,9. Örneğin, dorsal MPFC kaynaklı hPa eksen disfonksiyonunda lezyonlar ve kısıtlama stresi nedeniyle Gelişmiş kortikoone salgılanması12,13. Yeni bir çalışmada aynı zamanda tekrarlanan kısıtlama stres artmış kortikosteron seviyeleri gösterdi, hangi glutamat ile glüamin takviyesi tarafından azalmış olabilir-glutamin döngüsü nöronlar ve astrosit arasında mPFC9.
MDD etiyolojisini incelemek için kullanılan ilk kronik stres paradigması Katz14tarafından önerilmiştir. Willner ve al. sonra Katz bulguları dayalı bir kronik hafif stres (CMS) modeli önerdi. Bu modelin, antidepresanların CMS kaynaklı anhedonik davranış gibi15,16' ya geri yüklendiğini gözlemleyerek öngörü geçerliliği olduğunu doğruladı. Tipik olarak, CMS modeli hafif gürültü, kafes eğme, ıslak yatak, değiştirilmiş ışık-karanlık döngüleri, kafes sallayarak, zorla yüzme ve sosyal yenilgi gibi çeşitli hafif gerilimlerin bir kombinasyonu oluşur. CMS modeli yaygın araştırmacılar tarafından kullanılmaktadır; Ancak, bu model kötü çoğaltabilirlik ve zaman ve enerji-verimsizdir. Bu nedenle, depresyon değerlendirmek için depresif benzeri davranış ve fizyolojik analiz indüksiyon için standardize ve basitleştirilmiş bir protokol için artan bir talep vardır. CMS modeline kıyasla, kronik immobilizasyon stres (BDT; Ayrıca kronik kısıtlama stres olarak da bilinir) modeli daha basit ve daha etkilidir; Bu nedenle, BDT modeli yaygın kronik stres çalışmaları kullanılabilir17,18,19,20,21,22,23, 24. Buna ek olarak, BDT hem erkek hem de kadın fareler depresif davranışlar geliştirmek için kullanılabilir25,26. BDT döneminde, hayvanlar 2 veya 4 hafta9,27,28için günde 1-8 saat boyunca vücut uygun boyutta bir silindir yerleştirilir. Bu, 2 hafta boyunca günde 2 saat için kısıtlama stres koşulu fareler en az ağrı ile depresif davranışlar neden yeterlidir9,28. Kısıtlama koşullarında kan kortikoone seviyeleri hızla arttı9,28,29. Çeşitli çalışmalar BDT modelinin öngörü geçerliliği olduğunu göstermiştir, BDT kaynaklı depresif belirtileri antidepresanlar tarafından restore edildiğini teyit19,20,30,31. Burada, BDT 'nin ayrıntılı prosedürlerini, ayrıca CIS 'den sonra bazı davranışsal ve fizyolojik sonuçları rapor ediyoruz.
Tüm deneysel protokoller ve hayvan bakımı, Gyeongsang Ulusal Üniversitesi (GLA-100917-M0093) hayvan araştırmaları için üniversite Hayvansal bakım Komitesi 'nin yönergelerine göre yapılmıştır.
1. malzemeler
2. BDT kısıtlama tarafından depresyon indüksiyon
Not: fareyi hafifçe, ancak güvenle sıkıca tutun. Hem kaba hem de belirsiz kullanım, deneyde başka bir stres faktörüdür ve fare ile mücadele, ısırma ve çizilmeye yönelik önemli bir nedenidir.
3. sukrose tercih testi
4. kuyruk süspansiyon testi
5. ELISA tarafından kandaki kortikoone düzeylerini ölçme
Not: davranış testinden bir gün sonra, fareler kan toplama için feda edilir.
Temsili denemede tüm veriler grup başına 6-8 fareler tarafından elde edilmiştir. Şekil 1' de temsili materyaller ve fareyi gönüllü olarak eklemek için yöntem gösterilir.
BDT indüksiyonunda davranış testini ve kan örneklemesini gerçekleştirmek için fare, Şekil 2a'da özetlenen deneysel prosedüre tabi tutulmuştur. Şekil 2 ve Şekil 3' te gösterildiği gi...
Beynin karmaşıklığı ve MDD heterojenliği tamamen durumu yeniden hayvan modelleri oluşturmak için zor hale. Birçok araştırmacı bir endophenotype tabanlı yaklaşım32kullanarak bu zorluk üstesinden gelmiştir, hangi Anhedoni (ödüllendirici uyaranlara ilgi eksikliği) ve umutsuzluk evrimsel olarak korunan ve ölçülebilir davranışlar hayvan modellerinde kabul edilir, Ayrıca depresyon33hastalarda görülür. Şu anda, BDT ve MDD arasında translasyonel alaka...
Yazarların ifşa etmesi gereken hiçbir şey yok.
Bu araştırma, Eğitim Bakanlığı (NRF-2015R1A5A2008833 ve NRF-2016R1D1A3B03934279) tarafından finanse edilen Kore Ulusal Araştırma Vakfı (NRF) ile temel bilim araştırma programı tarafından destekleniyordu ve Sağlık Bilimleri Enstitüsü 'nün hibe (ıHS GNU-2016-02) Gyeongsang Ulusal Üniversitesi 'nde.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
1 ml disposable syringes | Sungshim Medical | P000CFDO | |
Balance | A&D Company | FX-2000i | |
Ball nozzle | Jeung Do B&P | JD-C-88 | |
CCTV camera | KOCOM | KCB-381 | |
Corticosterone ELISA kits | Cayman Chemical | ||
Digital lux meter | TES | TES-1330A | |
Ethovision XT 7.1 | Noldus Information Technology | ||
Isoflurane | HANA PHARM CO., LTD. | Ifran solution | |
Mice | Koatech | C57BL/6 strain | |
Restrainer | Dae-jong Instrument Industry | DJ-428 | |
Saccharose (sucrose) | DAEJUNG | 7501-4400 | |
Small animal isoflurane anaesthetic system | Summit | ||
Acrylic bar | The apparatus was made in the lab for TST test | ||
Tail suspension box | The apparatus was made in the lab | ||
Timer | Electronics Tomorrow | TL-2530 | |
Water bottle | Jeung Do B&P | JD-C-79 |
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiThis article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır