JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Mevcut çalışmada geliştirilen akut karaciğer yetmezliği hayvan modeli potansiyel tedavilerin incelenmesi için uygun bir alternatif sunuyor. Mevcut model, fiziksel ve ilaca bağlı hepatik yaralanmanın kombine etkisini kullanır ve yeni tedavilerin potansiyelini incelemek için uygun bir zaman penceresi sağlar.

Özet

Akut karaciğer yetmezliği (ALF), karaciğerin metabolik, biyokimyasal, sentezleme ve detoksifiye fonksiyonlarının kaybına neden olan çeşitli etiyolojilerin neden olduğu klinik bir durumdur. Çoğu geri dönüşümsüz karaciğer hasarı durumlarda, ortotropik karaciğer nakli (OLT) mevcut tek tedavi kalır. ALF için bir tedavinin tedavi potansiyelini incelemek için, ALF bir hayvan modeli nde önceki test esastır. Mevcut çalışmada sıçanlarda ALF modeli %70 parsiyel hepatektomi (PHx) ve 48 saat tedavi penceresi sağlayan asetaminofen (APAP) enjeksiyonları birleştirilerek geliştirilmiştir. Karaciğerin ortanca ve sol lateral lobları karaciğer kitlesinin %70'ini çıkarmak için çıkarıldı ve APAP'a 2 gün boyunca ameliyat sonrası 24 saat verildi. ALF'ye bağlı hayvanlarda sağkalımda ciddi azalma saptandı. ALF gelişimi alanin amino transferaz (ALT), aspartat amino transferaz (AST), alkalen fosfataz (ALP) enzimlerinin değiştirilmiş serum düzeyleri ile doğrulandı; protrombin zaman değişiklikleri (PT); ve uluslararası normalleştirilmiş oranın (INR) değerlendirilmesi. QPCR ile gen ekspresyonu profilinin incelenmesi, apoptoz, inflamasyon ve karaciğer hasarının ilerlemesinde yer alan genlerin ekspresyon düzeylerinde artış olduğunu ortaya koymuştur. Histolojik değerlendirme ile hepatositlerin diffüz dejenerasyonu ve immün hücrelerin infiltrasyonu gözlendi. AlF'nin geri döndürülemeoranı, sinjenezik sağlıklı sıçan hepatositlerinin intrasplenik transplantasyonu ndan sonra ALT, AST ve ALP'in sağkalım ve serum düzeylerinin restorasyonu ile doğrulandı. Bu model, ALF'nin patofizyolojisini incelemek ve ALF için yeni bir tedavinin potansiyelini değerlendirmek için mevcut ALF hayvan modellerine güvenilir bir alternatif sunmaktadır. İki farklı yaklaşımın kullanımı da fiziksel ve ilaca bağlı karaciğer hasarının kombine etkisini incelemek mümkün kılar. Mevcut yordamın tekrarlanabilirliği ve fizibilitesi modelin ek bir yararıdır.

Giriş

Akut karaciğer yetmezliği (ALF) Amerikan Derneği Karaciğer Hastalıkları Çalışma için herhangi bir hasar belirti olmadan akut karaciğer hasarının hızlı gelişimi olarak tanımlanır ve karaciğer ciddi bozulma ile karakterizedir, metabolik, ve karaciğer detoksifiye fonksiyonları1. ALF, uzun bir süre boyunca neden olduğu karaciğer hasarı ve ani karaciğer hasarı kronik karaciğerhastalıkları2 ,3,4sonucu gerçekleşir akut kronik karaciğer yetmezliği (ACLF), oluşur kronik karaciğer yetmezliği farklıdır . ALF için mevcut tek tedavi ortotopik karaciğer nakli (OLT), ya da ölüm oluşabilir. Karaciğer donör sıkıntısı nedeniyle, ALF muzdarip hastalarda mortalite oranı çok yüksektir.

Alternatif terapötik yaklaşımların potansiyelini incelemek ve ALF'nin patofizyolojisini daha iyi anlamak için, insanlarda meydana gelen ALF'yi yansıtabilen hayvan modellerine ihtiyaç vardır. Zaten mevcut ALF hayvan modellerinin çoğu birkaç eksiklikleri var. Asetaminofen (APAP) etkileri nin çoğaltılması zordur ancak temporal, klinik, biyokimyasal ve patolojik parametreler açısından en yakın benzerliklere sahiptir. APAP kaynaklı hayvan modelleri sık sık APAP ve ara5,6,7hemoglobin oksidasyonu nedeniyle methemoglobine varlığı nedeniyle sorunlarla karşılaşır. Başka bir sorun öngörülemeyen doz yanıtları ve ölüm saati yansıyan tekrarlanabilirlik eksikliğidir. Karbon tetra klorür (CCl4)kullanılarak üretilen ALF hayvan modelleri8,9,10,11'de düşük tekrarlanabilirlik vardır. Konkavalin A (Con A) ve lipoplysaccharide (LPS) indüklenen ALF hayvan modelleri insan hastalığının klinik modelini yansıtmaz, onlar otoimmün karaciğer hastalıkları ve sepsis çalışmada sırasıyla dahil hücresel mekanizmaların çalışmada avantajları olmasına rağmen12,13,14,15. Benzer şekilde, tiyoacetamide (TAA) da aktif bir metabolit tiyoacetamide sülfoksit biyotransformasyon gerektirir ve türlerin varyasyongösterir 16,17,18,19. D-galaktosamin (D-Gal) bazı biyokimyasal üretir, metabolik, ve fizyolojik değişiklikler ALF benzer ama tüm ALF patolojik durumu yansıtmak mümkün değildir20,21,22,23. Daha iyi bir şekilde ALF sendromu yansıtmak mümkün bir ALF modeli geliştirmek için bu yöntemlerin iki veya daha fazla birleştirmek için çok az girişimleri olmuştur13. Bu nedenle, daha fazla çalışma hastalık parametrelerini yansıtabilir bir model geliştirmek için gereklidir, daha iyi tekrarlanabilirlik vardır, ve terapötik bir müdahalenin etkilerini incelemek için yeterli zaman sağlar.

Mevcut çalışmada, sıçanlarda alternatif bir ALF modeli parsiyel hepatektomi (PHx) ve hepatotoksik reaktifin daha düşük dozlarda etkileri birleştirilerek oluşturulmuştur. APAP karaciğer hasarına neden iyi kurulmuş bir role sahiptir5,24,25. Yaygın olarak kullanılan bir analjeziktir ve toksik metabolitler oluşturarak supratherapeutic dozlarda karaciğer için toksiktir. APAP gelişmiş ülkelerde birçok ölüm nedenidir. Kısmi hepatektominin neden olduğu fiziksel yaralanma, inflamasyonla ilgili çeşitli süreçlerin aktivasyonunun yanı sıra karaciğer rejenerasyonunu da başlatır. Hepatotoksik ajan APAP enjeksiyonu karaciğerde düşmanca bir ortama neden olur, hepatositlerin çoğalmasını önler. Bu hayvan üzerindeki stres süresini azaltır, hangi hepatotoksin daha küçük dozlarda ile kombine edildiğinde, prosedürün daha iyi tekrarlanabilirlik yol açar. Bu nedenle, bu model kullanılarak, karaciğer yaralanmaları iki tür bir kombinator etkisi çalışılmıştır. Geliştirilen ALF hayvan modelini karakterize etmek için fizyolojik ve biyokimyasal parametreler incelenmiştir. AlF'nin başarılı geri dönüşü sinjenezik sağlıklı sıçan hepatositlerinin transplantasyonu ile doğrulandı.

Protokol

Aşağıda açıklanan prosedür, Yeni Delhi Ulusal İmmünoloji Enstitüsü Kurumsal Hayvan Etik Komitesi tarafından onaylanmıştır. Onay seri referans numarası IAEC#355/14'tür.

1. Hazırlık

  1. Das B ve ark.26tarafından daha önce açıklandığı gibi cerrahi işlem için hazırlanın.
  2. Vücut ağırlığı 200-250 g olan 6-8 haftalık inbred Wistar sıçanları kullanın.
  3. Standart hayvan bakım koşulları altında ev hayvanları ve işlem öncesi ve sonrası sıçan chow ve libitum ile beslemek.
  4. %70 PHx yaparken, intraperitoneal olarak enjekte edilen ketamin hidroklorür (100 mg/kg vücut ağırlığı) ve ksilazin (10 mg/kg vücut ağırlığı) karışımını standart bir kokteyl karışımı kullanın.
    NOT: Kullanılan anestezinin tipinin mortalite ve morbidite üzerinde postoperatif etkileri olabilir.
  5. Hücre nakli sırasında, inhalant anestezi Isoflurane kullanın (2-kloro-2-(difluoromethoxy)-1,1,1-trifloro-etan) transplantasyon ameliyatı sonrası hayvanın iyileşme süresini azaltmak için.
  6. Özelleştirilmiş bir anestezi sistemi kullanarak inhalasyon anestezisini teşvik edin ve bakımını koruyun. Oksijen akışını 4 L/dk'da koruyun. İndüksiyon kullanımı için %4, bakım kullanımı için %2-3 cerrahi işlem sırasında.

2. Ameliyat öncesi işlemler

  1. Adım 3.1 intraperitoneally açıklanan ketamin-ksilazin karışımı enjekte ederek sıçan anestezik. Hayvanın ayak parmaklarını çimdikleyerek tam anesteziyi onaylayın. Diğer işlemler sadece pedal refleksi olmadığında gerçekleştirilir.
  2. Kornea desiccation önlemek için, her iki göze karboksi metil selüloz bazlı göz damlası uygulayın.
  3. Anestezili hayvanı beyaz bant kullanarak cerrahi tahtaya kadar dizginleyin. Karın tarafı yukarı bakacak şekilde hayvanı yerleştirin, ameliyatı gerçekleştiren kişinin ağzının distal tarafta olmasını sağlar.
  4. Bir elektrikli makas kullanarak sağ üst karın cerrahi bölgesinden saç çıkarın.
  5. Cerrahi bölgeyi üç alternatif povione iyot ve %70 etanol ile sterilize edilmiş pamuk pedleri kullanarak dairesel hareketlerle dezenfekte edin.

3. Parsiyel hepatektomi (PHx) karaciğer kütlesinin% 70 kaldırmak için

NOT: Tüm cerrahi işlemi steril bir ortamda laminar akış kaputunda gerçekleştirin. Ameliyat sonrası enfeksiyon riskini en aza indirmek için sadece steril cerrahi aletler kullanın. Karaciğer kütlesinin% 70 çıkarılması, adlı 70% parsiyel hepatektomi (%70 PHx), C. Mitchell ve H. Willenbring, 200827tarafından açıklandığı gibi yapıldı .

  1. Ameliyat başlamadan önce, ayak parmaklarını çimdikleyerek hayvanın tam anestezisini onaylayın. Diğer işlemler sadece pedal refleksi olmadığında gerçekleştirilir.
  2. Sternumun hemen altında, xiphoid'e dik ve göğüs kafesine paralel olarak kesilecek deriyi işaretleyin.
  3. İşaretli deri üzerinde yaklaşık 3 cm x 1 cm açık lık olan steril bir örtü tabakası yerleştirin.
  4. Neşter ile işaretli çizgi boyunca yaklaşık 2-3 cm enine kesi yapın. 22 no'da cerrahi bıçak kullanın. Hafifçe steril nemlendirilmiş pamuk ipuçları kullanarak kesici alan çevresinde altta yatan kas tabakasına cilt eki kaldırın.
  5. Sonra, xiphoid sürecinin hemen altında periton tabakası ile bir enine kesi yapmak.
  6. İki tuzlu nemlendirilmiş pamuk uçları yardımıyla, toraks üzerinde nazik basınç uygulayarak karaciğersol lob ortaya çıkarmak. Karaciğer lobu yukarı kaldırmak için kesici bölgenin diyafragmatik bölgeye bir pamuk ucu ve incili bölgenin altına diğer pamuk ucunu yerleştirin.
  7. 8-10 cm uzunluğunda steril naylon iplik halkasını (boyut 4–0, 0.15 mm çapında) maruz kalan karaciğer lobunun etrafına kaydırın. Mikrodissecting forceps veya nemlendirilmiş pamuk tomurcukları yardımıyla hilum yakın lob tabanına döngü alın.
  8. Mikrocerrahi iğne tutucu ve mikrokops yardımıyla, döngü iki ucunu kravat, kan damarı daraltmak ve karaciğer lob çıkarıldıktan sonra kanamayı azaltmak için mümkün olduğunca lob tabanına yakın düğüm yerleştirerek. Diğer tarafta iki ek düğüm bağlayın.
  9. Aksi takdirde venöz obstrüksiyona (darlık) neden olabilir yakındaki kan damarları, çok yakın düğüm bağlamak için önlem alın.
  10. Düğümhemen üzerinde bağlı lob kesmek için mikrocerrahi makas kullanın, hangi lob yerine iskemik kütük denilen doku renksiz bir kitle bırakır.
    NOT: Fare karaciğeri, fareler gibi, dört ayrı loba ayrılır: median lob, sağ lateral lob, sol lateral lob, ve kaudat lob, yaklaşık temsil eden 40%, 20%, 30%, ve 7% toplam karaciğer kütlesi, sırasıyla. Bu lobların herhangi bir kombinasyonu% 70 karaciğer kütlesi çıkarmak için kaldırılabilir. Bu çalışmada median lob ve sol lateral loblar çıkarıldı.
  11. Sol lateral lobun kalan kütüğüne zarar vermeden ortanca lobu dikkatlice bulun. Yavaşça karın boşluğundan çekin, ve lob un tabanında daha önce belirtildiği gibi 8-10 cm uzunluğunda naylon iplik (boyut 4-0) düğüm kravat. Diğer tarafta iki ek düğüm bağlayın. Dikkatle çıkarmak ve belirtilen tüm önlemleri alarak bağlı medyan lob kaldırın.
  12. Lobları çıkardıktan sonra, periton dikiş sürekli dikiş ile emilebilir bir kromik 4-0 dikiş kullanarak ve ardından kesilen bir dikiş ile cilt dikiş.
  13. Enfeksiyonu önlemek için sütürleri çevreleyen cilde povison iyot uygulayın.
  14. Örtü tabakasını çıkarın ve hayvanı ameliyat panosundan çıkarın.

4. Hayvanlarda postoperatif bakım

  1. İntraperitoneal 1 mL glukoz çözeltisi 1 mL bir doz 12 mg sefotaksim antibiyotik ile 1 mL şırınga ile postoperatif enfeksiyon riskinden korumak için hayvan enjekte.
  2. Ameliyat sonrası ağrı kesici için analjezik meloksikam (1 mg/kg vücut ağırlığı) deri altı enjeksiyonuyguluyor ve rejimi günde bir doz olarak tutarak iki doz daha takip edin.
  3. 12 saat açık/karanlık döngü standart koşullar altında işletilen hayvanlar ev ve düzenli aralıklarla izlemek.

5. Karaciğer yetmezliğine neden olmak için kısmen hepatektomizlenmiş hayvanlarda ilaç enjeksiyonu

  1. 24 saat ameliyat sonrası hayvanlar %70 PHx'ten başarıyla iyileştiğinde, enjeksiyonları takip eden hayvanın vücut ağırlığını ölçün.
  2. Hayvanların cerrahi işlemden başarılı bir şekilde iyileşmesinden sonra %70 PHx'ten sonra kısmen hepatektomize edilmiş hayvanlara 750 mg/kg apap intraperitoneal olarak enjekte edin. 24 saat sonra tekrar dozu tekrarlayın.
    NOT: İki doz APAP hayvana intraperitoneal olarak uygulanır (sırasıyla %70 PHx prosedüründen sonra 24 saat ve 48 saat).
  3. APAP enjeksiyonundan sonra her zaman noktasında, iyileşen hayvanın vücut ağırlığını ölçün.
    NOT: APAP (biyosetamol) hayvanlara %2 benzil alkolde 150 mg/mL çözelti olarak enjekte edilir.

6. ALF hayvan modellerinde sağlıklı hepatosit transplantasyonu

NOT: Sıçanlarda ALF'nin geri döndürülemezliğini incelemek için, ALF'ye bağlı hayvanlarda sağlıklı sinjenezik sıçan hepatositlerini apap 1dozile birlikte intrasplenik olarak nakledin. Mevcut çalışmada, homing ve engraftment için nakledilen hücrelere yeterli zaman sağlamak için, transplantasyon APAP 1doz verildikten hemen sonra yapıldı. Sıçan hepatositler ilk Berry ve Friends ve ark.28 tarafından yayınlanan bir protokol ile izole edilmiş ve daha sonra çeşitli diğer çalışmalarda uyarlanmış29,30,31 bazı değişiklikler ile. ALF hayvan modelindeki hücrelerin intrasplenik nakli için aşağıda belirtilen adımları izleyin.

  1. 250-350 g vücut ağırlığına sahip bir sıçan için% 4 izofluran ve 4 L / dk oksijen akışı ile anestezi indüksiyonu için bir poli (metil metakrilat) odasına sıçan yerleştirin. Hayvanın ayak sıkışma pedal refleksleri eksikliği ile anestezi derinliği kontrol edin.
  2. Anestezili sıçanı cerrahi tahtaya sol yan kısmı yukarı bakacak şekilde yerleştirin. Uygun bir ağızlık ile% 2-3 izofluran inhalasyon anestezi korumak.
  3. Sol lateral bölgede cilt tıraş ve povidon iyot çözeltisi ile sterilize.
  4. Derinin tıraş lı bölgesinde enine kesi yapın.
  5. Dalağını ortaya çıkarmak için periton tabakasında 1-2 cm'lik bir kesim yapın.
  6. Yavaşça periton boşluğunun dalak çıkarmak ve iki nemlendirilmiş pamuk ipuçları yardımıyla kaldırın.
  7. Hücreleri (genellikle hayvan başına 107) 50 μL IMDM ortamda 29 G iğne ile 1 mL insülin şırıngasında askıya alınacak şekilde tutun.
  8. İğneyi yavaşça dalak korteksine batırın ve hücre süspansiyonuna 2-3 dakika içinde dalak bırakın.
  9. Hücre nakli tamamlandıktan sonra, dikkatlice iğne çıkarmak ve bölgeden hücre süspansiyon sızıntısını önlemek için nemlendirilmiş bir pamuk ucu ile iğne delinme alanı dab.
  10. Periton ve cildi sırasıyla sürekli ve kesintisiz dikiş ile 4-0 emilebilir dikiş ile kapatın.
  11. Ameliyat edilen bölgede enfeksiyonu önlemek için sütürlerin yerine cilde povison iyot solüsyonu uygulayın.
  12. İntraperitoneal 1 mL hacim 12 mg/mL antibiyotik (örneğin, sefotaksim) çözeltisi enjekte ve subkutan analjezik enjekte (örneğin, meloksikam) 1 mg / kg vücut ağırlığı hayvana postoperatif bakım bir parçası olarak. Hayvanı sıcak bir kurtarma kafesine taşıyın.
  13. Ameliyat edilen hayvanı, cerrahi yaralar tamamen iyileşene kadar 12 saat açık/karanlık döngü normal koşullarda izole edin. Bu işlem 3-4 gün sürebilir.

7. ALF gelişiminin karakterizasyonu

  1. APAP tedavisinin2 doz undan sonra ketamin-ksilazin çözeltisi 2 saat aşırı doz ile hayvanları ötenazi ve kan ve doku örnekleri toplamak.
  2. Biyokimyasal çalışmalar için kandan serum toplamak32.
  3. Histolojik ve gen ekspresyonu çalışmaları için süreç karaciğer dokusu örnekleri33,34,35.

Sonuçlar

ALF hayvan modellerinde sağkalım yüzdesi
APAP'ın alf'ye %70 PHx ile birlikte neden olan optimum dozu 750 mg/kg vücut ağırlığı olarak standartlaştırıldı. Tedavi rejimi% 70 PHx sonra 24 saat başladı, hayvanlar tamamen cerrahi kurtarıldı zaman, ve 24 saat aralıklarla iki APAP dozları oluşuyordu. Mortalite, ameliyat sonrası 48 saat olan Ikinci APAP dozu verildikten sonra %80 oranında gözlendi. Hayatta kalma yüzdesi Kaplan-Meier yöntemi ile analiz edilerek çizildi (

Tartışmalar

ALF için uygun bir hayvan modelinin geliştirilmesi patogenezin daha iyi anlaşılması ve ALF'nin ilerlemesi için çok önemlidir. Iyi karakterize ALF hayvan modeli de alf karşı yeni terapötik yaklaşımların geliştirilmesi ve deneme için fırsat sağlar. Birçokgirişimalf6,12, 21,23,46,47,

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Teşekkürler

Bu çalışma Biyoteknoloji Bölümü, Hindistan Hükümeti Ulusal İmmünoloji Enstitüsü, Yeni Delhi alınan çekirdek hibe tarafından desteklenmiştir.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
Acetaminophen (Biocetamol)EG PharmaceuticalsNo specific Catalog Number (Local Procurement)
Alkaline Phosphatase Kit (DEA)Coral Clinical System, IndiaNo specific Catalog Number (Local Procurement)
Automated analyserTulip, Alto Santracruz, IndiaScreen Maaster 3000Biochemical analyser for liver functional test
Betadine (Povidon-Iodine Solution)Win-Medicare; IndiaNo specific Catalog Number (Local Procurement)
Biological safety cabinet (Class I)Kartos international; IndiaNo specific Catalog Number (Local Procurement)
Bright Field MicroscopeOlympus, JapanLX51
Cefotaxime (Taxim®)AlKem; Indiacefotaxime sodium injection, No specific Catalog Number (Local Procurement)
Cell StrainerSigma; USCLS431752
Collagenase Type IGibco by Life Technologies17100-017
Cotton BudsPure Swabs Pvt Ltd; IndiaNo specific Catalog Number (Local Procurement)
Drape SheetJSD Surgicals, Delhi, IndiaNo specific Catalog Number (Local Procurement)
DPX MountantSigma; US6522
Eosin Y solution, alcoholicSigma; USHT110132
ForcepsMajor Surgicals; IndiaNo specific Catalog Number (Local Procurement)
Gas Anesthesia SystemUgo Basile; Italy211000
GlucoseHimedia, IndiaGRM077
Hair removing cream (Veet®)Reckitt Benckiser, IndiaNo specific Catalog Number (Local Procurement)
Hematoxylin Solution, Mayer'sSigma; USMHS16
Heparin sodium saltHimedia; IndiaRM554
Hyaluronidase From Sheep TestesSigma; USH6254
I.V. Cannula (Plusflon)Mediplus, IndiaRef 1732411420
Insulin SyringesBD; USREF 303060
Isoflurane (Forane®)Asecia QueenboroughNo B506Inhalation Anaesthetic
Ketamine (Ketamax®)Troikaa Pharmaceuticals Ltd.Ketamine hydrochloride IP, No specific Catalog Number (Local Procurement)
Meloxicam (Melonex®)Intas Pharmaceuticals Ltd; IndiaNo specific Catalog Number (Local Procurement)
Micro needle holders straight &
curved		Mercian; EnglandBS-13-8
Micro needle holders straight &
curved		Mercian; EnglandBS-13-8
MicrotomeHisto-Line Laboratories, ItalyMRS3500
Nylon ThreadMighty; IndiaNo specific Catalog Number (Local Procurement)
ParaformaldehydeHimedia; IndiaGRM 3660
Percoll®GE Healthcare17-0891-01
Refresh Tears/Eyemist GelAllergan India Private Limited/Sun Pharma, IndiaP3060No specific Catalog Number
RPMIHimedia; IndiaNo specific Catalog Number (Local Procurement)
ScalpelMajor Surgicals; IndiaNo specific Catalog Number (Local Procurement)
ScissorsMajor Surgicals; IndiaNo specific Catalog Number (Local Procurement)
SGOT (ASAT) KITCoral Clinical System, IndiaNo specific Catalog Number (Local Procurement)
SGPT (ALAT) KITCoral Clinical System, IndiaNo specific Catalog Number (Local Procurement)
Shandon Cryotome E CryostatThermo Electron Corporation; USNo specific Catalog Number
SucroseSigma; USS0389
Surgical Blade No. 22La Medcare, IndiaNo specific Catalog Number (Local Procurement)
Surgical BoardLocally madeNo specific Catalog Number (Local Procurement)
Surgical White Tape3M India; India1530-1Micropore Surgical Tape
SuturesEthicon, Johnson & Johnson, IndiaNW 5047
Syringes (1ml, 26 G)Dispo Van; IndiaNo specific Catalog Number (Local Procurement)
Trimmer (Clipper)PhilipsNL9206AD-4 DRACHTEN QT9005
Weighing MachineBraunNo specific Catalog Number (Local Procurement)
William's E MediaHimedia; IndiaAT125
Xylazine (Xylaxin®)Indian Immunologicals LimitedSedative, Pre-Anaesthetic, Analgesic and muscle relaxant

Referanslar

  1. Polson, J., Lee, W. M. AASLD position paper: the management of acute liver failure. Hepatology. 41, 1179-1197 (2005).
  2. Chung, R. T., et al. Pathogenesis of liver injury in acute liver failure. Gastroenterology. 143, 1-7 (2012).
  3. Fyfe, B., Zaldana, F., Liu, C. The Pathology of Acute Liver Failure. Clinical Liver Disease. 22, 257-268 (2018).
  4. Lefkowitch, J. H. The Pathology of Acute Liver Failure. Advances in Anatomic Pathology. 23, 144-158 (2016).
  5. Mitchell, J. R., et al. Acetaminophen-induced hepatic necrosis. I. Role of drug metabolism. Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 187, 185-194 (1973).
  6. Rahman, T. M., Hodgson, H. J. Animal models of acute hepatic failure. International Journal of Clinical and Experimental Pathology. 81, 145-157 (2000).
  7. Rahman, T. M., Selden, A. C., Hodgson, H. J. A novel model of acetaminophen-induced acute hepatic failure in rabbits. Journal of Surgical Research. 106, 264-272 (2002).
  8. Dashti, H., et al. Thioacetamide- and carbon tetrachloride-induced liver cirrhosis. European Surgical Research. 21, 83-91 (1989).
  9. Demirdag, K., et al. Role of L-carnitine in the prevention of acute liver damage-induced by carbon tetrachloride in rats. Journal of Gastroenterology and Hepatology. 19, 333-338 (2004).
  10. Sheweita, S. A., Abd El-Gabar, M., Bastawy, M. Carbon tetrachloride-induced changes in the activity of phase II drug-metabolizing enzyme in the liver of male rats: role of antioxidants. Toxicology. 165, 217-224 (2001).
  11. Sinicrope, R. A., Gordon, J. A., Little, J. R., Schoolwerth, A. C. Carbon tetrachloride nephrotoxicity: a reassessment of pathophysiology based upon the urinary diagnostic indices. American Journal of Kidney Diseases. 3, 362-365 (1984).
  12. Takada, Y., Ishiguro, S., Fukunaga, K. Large-animal models of fulminant hepatic failure. Journal of Artificial Organs. 6, 9-13 (2003).
  13. Takada, Y., et al. Increased intracranial pressure in a porcine model of fulminant hepatic failure using amatoxin and endotoxin. Journal of Hepatology. 34, 825-831 (2001).
  14. Leist, M., Wendel, A. A novel mechanism of murine hepatocyte death inducible by concanavalin A. Journal of Hepatology. 25, 948-959 (1996).
  15. Mizuhara, H., et al. Strain difference in the induction of T-cell activation-associated, interferon gamma-dependent hepatic injury in mice. Hepatology. 27, 513-519 (1998).
  16. Bruck, R., et al. Hypothyroidism minimizes liver damage and improves survival in rats with thioacetamide-induced fulminant hepatic failure. Hepatology. 27, 1013-1020 (1998).
  17. Chieli, E., Malvaldi, G. Role of the microsomal FAD-containing monooxygenase in the liver toxicity of thioacetamide S-oxide. Toxicology. 31, 41-52 (1984).
  18. Fontana, L., et al. Serum amino acid changes in rats with thioacetamide-induced liver cirrhosis. Toxicology. 106, 197-206 (1996).
  19. Peeling, J., et al. Cerebral metabolic and histological effects of thioacetamide-induced liver failure. American Journal of Physiology. 265, 572-578 (1993).
  20. Blitzer, B. L., et al. A model of fulminant hepatic failure in the rabbit. Gastroenterology. 74, 664-671 (1978).
  21. Diaz-Buxo, J. A., Blumenthal, S., Hayes, D., Gores, P., Gordon, B. Galactosamine-induced fulminant hepatic necrosis in unanesthetized canines. Hepatology. 25, 950-957 (1997).
  22. Maezono, K., Mawatari, K., Kajiwara, K., Shinkai, A., Maki, T. Effect of alanine on D-galactosamine-induced acute liver failure in rats. Hepatology. 24, 1211-1216 (1996).
  23. Patzer, J. F., et al. D-galactosamine based canine acute liver failure model. Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 1, 354-367 (2002).
  24. Newsome, P. N., Plevris, J. N., Nelson, L. J., Hayes, P. C. Animal models of fulminant hepatic failure: a critical evaluation. Liver Transplantation. 6, 21-31 (2000).
  25. Yoon, E., Babar, A., Choudhary, M., Kutner, M., Pyrsopoulos, N. Acetaminophen-Induced Hepatotoxicity: a Comprehensive Update. Journal of Clinical and Translational Hepatology. 4, 131-142 (2016).
  26. Das, B., et al. Intrasplenic Transplantation of Hepatocytes After Partial Hepatectomy in NOD.SCID Mice. Journal of Visualized Experiments. , (2018).
  27. Mitchell, C., Willenbring, H. A reproducible and well-tolerated method for 2/3 partial hepatectomy in mice. Nature Protocols. 3, 1167-1170 (2008).
  28. Berry, M. N., Friend, D. S. High-yield preparation of isolated rat liver parenchymal cells: a biochemical and fine structural study. Journal of Cell Biology. 43, 506-520 (1969).
  29. Fry, J. R., Jones, C. A., Wiebkin, P., Bellemann, P., Bridges, J. W. The enzymic isolation of adult rat hepatocytes in a functional and viable state. Analytical Biochemistry. 71, 341-350 (1976).
  30. Green, C. J., et al. The isolation of primary hepatocytes from human tissue: optimising the use of small non-encapsulated liver resection surplus. Cell Tissue Bank. 18, 597-604 (2017).
  31. Ismail, T., et al. Growth of normal human hepatocytes in primary culture: effect of hormones and growth factors on DNA synthesis. Hepatology. 14, 1076-1082 (1991).
  32. Greenfield, E. A. Sampling and Preparation of Mouse and Rat Serum. Cold Spring Harbor Protocols. 11, (2017).
  33. Walsh, K. M., Timms, P., Campbell, S., MacSween, R. N., Morris, A. J. Plasma levels of matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) and tissue inhibitors of metalloproteinases -1 and -2 (TIMP-1 and TIMP-2) as noninvasive markers of liver disease in chronic hepatitis C: comparison using ROC analysis. Digestive Diseases and Sciences. 44, 624-630 (1999).
  34. Thiele, N. D., et al. TIMP-1 is upregulated, but not essential in hepatic fibrogenesis and carcinogenesis in mice. Scientific Reports. 7, 714 (2017).
  35. Li, C. P., Li, J. H., He, S. Y., Li, P., Zhong, X. L. Roles of Fas/Fasl, Bcl-2/Bax, and Caspase-8 in rat nonalcoholic fatty liver disease pathogenesis. Genetics and Molecular Research. 13, 3991-3999 (2014).
  36. Kim, W. R., Flamm, S. L., Di Bisceglie, A. M., Bodenheimer, H. C. Serum activity of alanine aminotransferase (ALT) as an indicator of health and disease. Hepatology. 47, 1363-1370 (2008).
  37. Henry, L. Serum transaminase levels in liver disease. Journal of Clinical Pathology. 12, 131-137 (1959).
  38. Giannini, E. G., Testa, R., Savarino, V. Liver enzyme alteration: a guide for clinicians. Canadian Medical Association Journal. 172, 367-379 (2005).
  39. Hammam, O., et al. The role of fas/fas ligand system in the pathogenesis of liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma. Hepatitis Monthly. 12, 6132 (2012).
  40. Prystupa, A., et al. Activity of MMP-2, MMP-8 and MMP-9 in serum as a marker of progression of alcoholic liver disease in people from Lublin Region, eastern Poland. The Annals of Agricultural and Environmental Medicine. 22, 325-328 (2015).
  41. Sekiyama, K. D., Yoshiba, M., Thomson, A. W. Circulating proinflammatory cytokines (IL-1 beta, TNF-alpha, and IL-6) and IL-1 receptor antagonist (IL-1Ra) in fulminant hepatic failure and acute hepatitis. Clinical and Experimental Immunology. 98, 71-77 (1994).
  42. Schwabe, R. F., Brenner, D. A. Mechanisms of Liver Injury. I. TNF-alpha-induced liver injury: role of IKK, JNK, and ROS pathways. American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 290, 583-589 (2006).
  43. Ataseven, H., et al. The levels of ghrelin, leptin, TNF-alpha, and IL-6 in liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma due to HBV and HDV infection. Mediators of Inflammation. 2006, 78380 (2006).
  44. Ambrosino, G., et al. Cytokines and liver failure: modification of TNF- and IL-6 in patients with acute on chronic liver decompensation treated with Molecular Adsorbent Recycling System (MARS). Acta Bio Medica Atenei Parmensis. 74, 7-9 (2003).
  45. Robert, A., Chazouilleres, O. Prothrombin time in liver failure: time, ratio, activity percentage, or international normalized ratio. Hepatology. 24, 1392-1394 (1996).
  46. Francavilla, A., et al. A dog model for acetaminophen-induced fulminant hepatic failure. Gastroenterology. 96, 470-478 (1989).
  47. Terblanche, J., Hickman, R. Animal models of fulminant hepatic failure. Digestive Diseases and Sciences. 36, 770-774 (1991).
  48. Tunon, M. J., et al. Rabbit hemorrhagic viral disease: characterization of a new animal model of fulminant liver failure. Journal of Laboratory and Clinical Medicine. 141, 272-278 (2003).

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

T pSay 153akut karaci er yetmezli i modeliALFparsiyel hepatektomiasetaminofenAPAPintrasplenik transplantasyonWistar s anlarhepatosit nakli

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır