Sıcak iskemi / reperfüzyon hasarının bir sıçan akciğer transplantasyon modeli: sonuçları iyileştirmek için optimizasyonlar

Özet

Burada, sonuçları iyileştirmeye hizmet eden bir sıçan akciğer nakli modeline optimizasyonlar sunuyoruz. Vücut ağırlığına göre manşetler için bir boyut kılavuzu, 4. interkostal boşluğu belirlemek için bir ölçüm stratejisi ve yara kapatma ve BAL (bronkoalveoler lavaj) sıvı ve doku toplama yöntemleri sunuyoruz^.

Özet

Sıçan akciğer nakli ile ilgili deneyimlerimizden, iyileştirilmesi gereken birkaç alan bulduk. Pulmoner ven (PV), pulmoner arter (PA) veya bronş (Br) için uygun manşet boyutlarını seçme yöntemlerine ilişkin mevcut literatürdeki bilgiler çeşitlidir, bu nedenle sıçan akciğer transplantasyonu sırasında uygun manşet boyutunun belirlenmesi deneme yanılma egzersizi haline getirilmiştir. Kelepçeleme tekniğini, damarın veya bronşun boyutuna uygun en küçük etkili manşeti kullanacak şekilde standartlaştırarak, transplantasyon prosedürünü daha güvenli, daha hızlı ve daha başarılı hale getirebiliriz. PV, PA ve Br'nin çapları sıçanın vücut ağırlığı ile ilişkili olduğundan, ağırlığa dayalı bir kılavuz kullanarak uygun bir boyut seçmek için bir strateji sunuyoruz. Akciğer hacmi vücut ağırlığı ile de ilişkili olduğundan, sıcak iskemi sırasında donör akciğer enflasyonu için uygun hava hacmini seçerken ve bronkoalveoler lavaj (BAL) sıvı toplanması sırasında aşılanacak uygun PBS hacmi için bu ilişkinin de göz önünde bulundurulmasını öneririz. Ayrıca 4^{. interkostal} boşluk diseksiyonu, yara kapatma ve hem doğal hem de transplante loblardan örnek toplama yöntemlerini de tanımladık.

Giriş

Otuz yılı aşkın bir süredir, araştırmacılar sıçan akciğer nakli modellerini değiştirmekte ve geliştirmektedir, böylece üretilen veriler daha tutarlı ve gerçek klinik durumu daha yansıtmaktadır. Laboratuvarımızın bu modeli uyguladığı dönemde, dört iyileştirme alanı belirledik: anastomozlar için kelepçeleme teknikleri, alıcının 4^{. interkostal} boşluğunun tanımlanması, alıcının prosedürü sırasında akciğer şişirmesi ve yara kapanması ve analiz için örneklerin toplanması.

Anastomozlar için kelepçeleme tekniği modifikasyonları, donör akciğerin 1,2,3,4,5,6 işlem süresini kısaltarak ve anastomoz prosedürünü mikrocerrah için daha hızlı ve teknik olarak daha kolay hale getirerek tüm transplantasyon prosedürünü iyileştirebilir. Nakledilen akciğere gerekli kan ve hava akışını sağlamak için uygun boyutta manşetlerin kullanılması kritik olmakla birlikte, pulmoner ven (PV), pulmoner arter (PA) veya bronş (^{Br) için} manşetlerin boyutunun nasıl seçilmesi gerektiği konusunda sınırlı rehberlik vardır5,7,8,9. PV, PA ve Br'nin çapları donör ve alıcı sıçanların vücut ağırlığı ile ilişkili olduğundan, manşet boyutunun vücut ağırlığına dayanmasını öneriyoruz. Bu rapor, nakledilen akciğere kan ve hava beslemesini optimize etmeye yarayan bir sıçanın vücut ağırlığına (180 g ila 270 g'ın üzerinde) dayanan manşetler için bir boyut kılavuzu sunmaktadır (Tablo 1).

Yeni bir mikrocerrah, donör prosedürü sırasında bir donör akciğeri başarılı ve kolay bir şekilde temin edebilirken, alıcının prosedürü sırasında akciğerin nakli daha karmaşıktır ve mikrocerrahın deneyimine bağlıdır. Alıcının sol akciğerine erişmek için 4^{. interkostal} boşluğu bulma girişimleri, biraz öznellik taşıyan ve işlem süresini artırabilen daha zor adımlardan biridir. Bu nedenle, göğüs ölçümlerini ve^kalbin çarpıntılarını kullanarak 4^{. interkostal} boşluk yerinin belirlenmesine yardımcı olacak basit ve objektif bir yöntem sunarak 4,5,6,10,11,12 diseke edilecek doğru alanı göğüs duvarını bulmayı amaçlıyoruz^.

Ayrıca, organda potansiyel bir yaralanma kaynağı olan donör akciğer enflasyonunda bir iyileşme öneriyoruz. Donör akciğer, reperfüzyon başlayana kadar söndürülür. 4. interkostal boşluğu dikerken, donör akciğer genellikle PEEP'i 2 cmH 2 O'dan 6 cmH₂O'ya yükselterek şişirilir^. Aşırı enflasyondan kaynaklanan akciğer hasarını en aza indirmek için, basit çift düğümlü 4^. kaburganın 5^{. kaburganın} altına üç adet 6-0 naylon dikişin yerleştirildiği bir teknik öneriyoruz. Yara kapanma zamanı geldiğinde, üç dikişin uçları her iki elde hemostatlarla tutulur, yara her iki taraftan yukarı çekilerek bir kerede kapatılır ve PEEP hemen 2 cmH₂O'ya düşürülür. Bu şekilde, akciğerin mümkün olan en kısa sürede genişlemesine izin verilir¹⁰.

Bir deneyin sonunda, araştırmacı genellikle her nakilden birçok analiz türü için birçok örnek türü toplamak ister. Örneğin, dondurulmuş doku, formalin sabit dokusu, pulmoner ödemi belirlemek için ıslak-kuru ağırlık oranı için doku ve bronkoalveloler lavaj (BAL) sıvısı, naklin ne kadar iyi gittiğini değerlendirmek için kullanılabilir. BAL sıvısını toplamanın geleneksel yöntemi, hem alıcının doğal loblarından hem de donörün nakledilen lobundan^13,14,15 karışık bir havuzlanmış numuneye izin verir. Bunun üstesinden gelmek için, nakledilen ve doğal akciğerlerin durumu hakkında daha kesin bir fikir verebilecek hilar alanları sıkıştırmak için bir yöntem sunuyoruz. Ek olarak, akciğerlerin her iki tarafından BAL sıvısını toplamak için kullanılan PBS'nin hacmi dikkate alınması önemlidir, çünkü BAL sıvısı, konsantrasyonla ölçülen sitokinler ve kemokinler gibi çok sayıda çözünür faktör içerir. Akciğer kapasitesinin tahmini hacmine aşılanan sıvının hacmini normalleştirmek, karşılaştırmaya yardımcı olabilir. Sağ tarafta dört lob ve sol tarafta bir lob ile, sıçanın beş lobunun her biri farklı bir hacme ve yüzey alanına sahiptir¹⁶. Backer ve ark. tarafından akciğer loblarının hacim ölçümü üzerine yapılan önceki bir araştırmaya göre, tüm akciğerin toplam hacminin sağ loblarının hacmi% 63 (4400 mm 3) ve sol lob% 37'dir (2500 mm³). Bu nedenle, BAL sıvısını toplamak için kullanılan PBS hacminin, sağ akciğer için% 63 ve sol akciğer için% 37 ile çarpılan tidal hacmin (7.2 mL / kg) iki katı olarak hesaplanmasını öneririz. Bu yaklaşımı kullanarak, vücut ağırlığı ve zamanlama^10,16 gibi değişkenleri daha iyi kontrol edebilirsiniz.

Sonuçta, bu raporda, sıçan akciğer transplantasyonunun standart deneysel modelinde, prosedürü daha verimli hale getirebilecek ve her deneyden daha doğru ve bol miktarda veri üretme yeteneğini artırabilecek birkaç değişiklik göstereceğiz.

Protokol

Erkek Sprague-Dawley sıçanları (180-270 g vücut ağırlığı) ticari olarak satın alındı (örneğin, Envigo) ve Ohio State Üniversitesi Hayvan Tesisi'nde patojensiz koşullar altında barındırıldı. Tüm prosedürler, NIH ve Ulusal Araştırma Konseyi'nin Laboratuvar Hayvanlarının İnsancıl Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'na göre ve Ohio State Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi'nin (IACUC Protokolü # 2012A00000135-R2) onayıyla insancıl bir şekilde gerçekleştirilmiştir.

1. İlk kurulum

1. Cerrahi cihazları ayarlayın.
   NOT: Bu hayatta kalma dışı bir ameliyattır. Sağkalım ameliyatı yapılacaksa, steril aletler ve bariyer önlemlerinin alınması gerekecektir.
   1. Kalp atış hızı/oksijen doygunluğu izleme ekipmanını ve ısıtma kartını 42 ° C'ye açın.
   2. İzofluran evaporatörünü önceden ısıtmak için havalandırma ve anestezi makinesini açın.
      NOT: 7,2 mL/kg tidal hacim (Td), 2 cmH₂O pozitif uçlu ekspiratuar basınç (PEEP) ve 80 bpm solunum hızı kullanın.
   3. Anestezi şırıngasını 10 mL sıvı izofluran ile doldurun ve şırıngayı havalandırma ve anestezi makinesine monte edin.
   4. Cerrahi mikroskobu, mikrocerrahın tercihlerine göre ayarlanmış yükseklik ve odak ile açın.
   5. Elektrokoter cihazını açın.
2. Cerrahi aletleri hazırlayın ve yerleştirin (Şekil 1).
   NOT: Tüm cerrahi aletler 121 °C'de 30 dakika süreyle otoklavlandı.
3. Donör ve alıcı sıçanların vücut ağırlığını toplayın ve kaydedin.
4. Manşet yapmak için kullanılacak anjiyo-kateterin (20, 18, 16, 14 veya 12 G) doğru ölçüsünü belirlemek için Tablo 1'i ve sıçanın vücut ağırlığını kullanın.
5. Vücut ağırlığına göre boyut kılavuzunu kullanarak pulmoner arter (PA), bronş (Br) ve pulmoner ven (PV) için manşetler hazırlayın (Tablo 1 ve Şekil 2).
   1. 20 G, 18 G, 16 G, 14 G veya 12 G boyutlarında anjiyo-kateter (Şekil 2A-E) cerrahi mikroskop altında steril bir yüzeye yerleştirin.
   2. Daha sonra, manşet gövdesinin üstünde 1 mm X 1 mm tırnağı (genişlik x yükseklik) olan 2 mm uzunluğunda bir manşet gövdesi oluşturmak için anjiyo-kateteri 90 ° 'lik bir açıyla kesmek için bir kaburga sırtı cerrahi bıçağı # 11 (Şekil 2F) kullanın (Şekil 2G).
   3. Manşetleri kullanıma hazır olana kadar steril salin içinde saklayın.
6. Çözümler hazırlayın.
   1. 10 mL ketamine (100 mg / mL) 1 mL ksilazin (100 mg / mL) ekleyerek steril bir enjeksiyon şişesinde ketamin ve ksilazin karışımı hazırlayın.
      NOT: Bu kokteylin son kullanma tarihi, kullanılan bileşenlerin en erken son kullanma tarihi kullanılarak belirlenir.
   2. Şırıngalara sıçanlar için uygun dozu çekin (100 g sıçanın vücut ağırlığı başına 0.1 mL ketamin / ksilazin karışımı; örneğin, 200 g'lık bir sıçan için, 0.2 mL ketamin / ksilazin karışımı verilecektir).
      NOT: Bu dozaj, sıçana 91 mg / kg ketamin ve 9.1 mg / kg ksilazin verecektir ve bir sıçanı 60-80 dakika boyunca sakinleştirmelidir.
   3. 1.000 U / kg'lık bir dozda verilecek olan heparini hazırlayın.
   4. Salin, PBS ve koruma solüsyonunu buz üzerinde saklayın (Malzeme Tablosu).

2. Donör sıçan hazırlığı

1. Ketamin ve ksilazin karışımını intraperitoneal olarak enjekte ederek ve ayak parmağının sıkışmasına yanıt eksikliği ile değerlendirilebilecek cerrahi bir anestezi düzleminin gelişmesi için ~ 10 dakika bekleyerek donör sıçanda anesteziyi indükleyin.
2. Kesi bölgesini elektronik makas kullanarak tıraş edin.
3. Donör sıçanı cerrahi ısıtma tahtasına sırtüstü pozisyonda yerleştirin ve insizyon bölgesini betadin ile ıslatılmış steril bir gazlı bezle silin. Ardından alanı% 70 izopropil alkollü çubukla silin. 3 kez tekrarlayın.
4. Makas kullanarak boynun ortasından 3 ila 4 cm'lik bir orta hat cilt insizyonu yapın ve forseps kullanarak (kanamayı önlemek için makas yerine) deri altı dokuları ve kasları dikkatlice diseke edin.
5. Endotrakeal entübasyon için, trakea etrafına 4-0 ipek sütür iplik takın ve trakeaya 16 G anjiyo-kateter yerleştirin. Sütürü trakea etrafına çift düğümle sıkıca bağlayın ve ardından anjiyo-kateteri yerinde tutmak için tek bir düğümle bitirin.
6. Anjiyo-kateteri ventilatöre bağlayın ve sıçanda% 1-2 izofluran içeren cerrahi bir anestezi düzlemi tutun.
7. Makas kullanarak kombine orta hat ve enine insizyon olarak laparo-sternotomi yapın.
8. Heparini (1.000 U / kg) inferior vena kava (IVC) yoluyla bir insülin şırıngası ile enjekte edin ve sistemik dolaşım için 10 dakika bekleyin.
   NOT: Bu heparin uygulaması, donör akciğerdeki kan pıhtılaşmasını önler.
9. Torasik kemer boyunca keserek diyaframı dikkatlice diseke edin ve ardından sternumu boyuna kadar takip ederek göğüs boşluğunu açığa çıkarın.

3. Donör akciğer sıcak iskemisi ve tedariki

1. IVC'yi keserek donör sıçanı ötenazi yapın.
2. Akciğerler hala ventilasyon yaparken, hem sağ hem de sol kulak kepçelerini mikro diseksiyon yay makası ile kesin ve yerçekimi, akciğerleri, tüpe bağlı yerçekimi ve doğrudan pulmoner arterden sokulan 18 G anjiyo-kateter ile 28 cmH₂O'da asılı bir şırıngada 20 mL koruma çözeltisi ile yıkayın.
3. Vantilatörü endotrakeal tüpten ayırın ve vücut ağırlığına bağlı olarak uygun miktarda hava ile doldurulmuş 5 mL'lik bir şırıngaya bağlayın.
   NOT: Akciğerleri şişirmek için havanın hacmi, gelgit hacminin iki katı (Td = 7.2 mL / kg) ile hesaplanabilir, örneğin, 200 g'lık bir sıçanın Td'si 1.44 mL'dir ve 2 ile çarpılması, akciğerleri şişirmek için gereken 2.88 mL havaya eşit olacaktır.
4. Donörün akciğerlerini şişirin.
5. Akciğerleri şişirmek için trakeaya bir Yaşargil kelepçesi koyun ve akciğerleri ve kalbi steril pamuklu gazlı bezle örtün. Gazlı bezi tuzlu suyla nemlendirin, donör sıçanı bir alt ped ile sarın ve akciğerlerde sıcak iskemiyi indüklemek için ısınma ameliyat tahtasında 1 saat bekletin (Şekil 3).
6. 1 saatlik sıcak iskemiden sonra, kalp-akciğer bloğunu mikro diseksiyon yay makası ve forseps ile eksize edin ve buz üzerinde steril bir Petri kabı üzerinde buz gibi soğuk PBS ile nemlendirilmiş steril gazlı bez üzerine yerleştirin.
   NOT: Aşağıdaki adımların tümü, akciğerler buz üzerindeki Petri kabının üzerindeyken gerçekleşmelidir.
7. Sol akciğeri yemek borusundan ve post-kaval lobdan ayırmak için pulmoner ligamentleri mikro diseksiyon yay makası ile dikkatlice kesin.
8. Sol akciğer hilar bölgesini Vannas-Tübingen yay makası ile dikkatlice kesin ve sol PV, PA ve Br'yi temin edin.
9. Manşetleri PV, PA veya Br üzerine yerleştirin (Şekil 4A-C).
   1. Manşet tırnağını kapmak için bir sivrisinek hemostatı kullanın.
   2. PV, PA veya Br'nin distal ucunu uygun manşet gövdesinden tutmak, manşetin etrafındaki ekstra dokuyu atmak ve 8-0 kullanarak güvence altına almak için ince forseps kullanın naylon dikiş. Ekstra dokuyu ve manşet gövdesinin etrafındaki manşeti kesmek için Vannas-Tübingen yay makası kullanın.
10. Donör akciğeri, alıcı sıçana nakledilmeye hazır olana kadar buz üzerindeki Petri kabında tuzlu su ile nemlendirilmiş gazlı bezle kaplı tutun (Şekil 4D).
    NOT: Ortalama soğuk iskemi süresi 84 dakika ± 11 dakika S.D.'dir.

4. Alıcı sıçan hazırlığı

1. Ketamin ve ksilazin karışımını (100 g sıçan başına 0.1 mL) intraperitoneal olarak enjekte ederek ve ayak parmağının sıkışmasına yanıt verilmemesi ile değerlendirilebilecek cerrahi bir anestezi düzleminin gelişmesi için 10 dakika bekleyerek alıcı sıçanda donör sıçanla aynı şekilde anestezi indükleyin.
2. Elektronik makas kullanarak kesi alanını tıraş edin.
3. Donör sıçanı sırtüstü pozisyona yerleştirin ve insizyon bölgesini betadine ile ıslatılmış steril bir gazlı bezle silin. Ardından alanı% 70 izopropil alkollü çubukla silin. 3 kez tekrarlayın.
4. Sıçan havalandırma makinesine sabitlenmeden önce, 4^{. interkostal} boşluğu bulmaya hazırlanırken sıçanın göğsüne çizgiler çizin.
   1. Göğsü suprasternal çentikten ksifoid sürece kadar ölçün ve bir çizgi çizin (Şekil 5A).
   2. Bu çizginin ortasında, göğsün sol tarafı boyunca, ölçümün yarısını suprasternal çentikten ksifoid sürece kadar ölçen bir çizgi çizin (Şekil 5A ve B).
5. Endotrakeal entübasyon kitinden bir LED ışığına bağlı fiber optik kabloyu kullanarak görselleştirme yoluyla 16 G anjiyo-kateter kullanarak alıcıyı entübe edin.
6. Anjiyo-kateteri ventilatöre bağlayın ve% 1-2 izofluran ile cerrahi anestezi düzlemini koruyun.
7. 4^{. interkostal} boşluğu bulmak için, göğüs duvarının güçlü bir palpe edilebilir kardiyak impulsun hissedilebileceği alanını bulun (Şekil 5C, kırmızı daire).
8. Bu konumda, cildi makasla ve kası mikro diseksiyon yaylı makasla kesin ve 4^{. interkostal} boşluğu mümkün olduğunca geniş açmak için retraktörü kullanın (Şekil 5D ve E).
   NOT: Kas diseksiyonu sırasında kanamayı önlemek veya durdurmak için elektriksel koter kullanın.
9. İnterkostal boşluk geniş bir şekilde açıldıktan sonra, Vannas-Tübingen yay makası kullanarak alıcının sol akciğerinin etrafındaki bağları dikkatlice inceleyin ve steril pamuklu çubuklar ve forsepsler kullanarak akciğeri göğüs bölgesinden dışarı çekin.
10. Sol akciğerin etrafına steril gazlı bez yerleştirin ve bir Dieffenbach bulldog kelepçesi ile tutun.
11. Sol akciğer hilar bölgesine mümkün olduğunca yakından bir Yaşargil kelepçesi uygulayın.

5. Anastomozlar

1. Pulmoner ven (PV) anastomozu
   1. Alıcının PV'sinin etrafına 7-0 naylon sütür yerleştirin.
   2. Üst ve alt segmental damarları mümkün olduğunca distal olarak enine keserek Vannas-Tübingen yay makası kullanarak alıcının PV'sini kesin ve bir insülin şırıngası kullanarak kanı 0.2 mL heparinize salin (1 U / mL) ile temizleyin.
   3. Donör akciğeri hala buz gibi soğuk ıslak steril gazlı bezle sarılmış olarak göğüs boşluğuna yerleştirin.
   4. Donörün kelepçeli PV'sini alıcının PV'sine yerleştirin ve ardından önceden konumlandırılmış 7-0 naylon sütür ile sabitleyin (Şekil 6).
2. Bronşiyal (Br) anastomoz
   1. Alıcının Br'sinin etrafına 7-0 naylon sütür yerleştirin.
   2. Üst ve alt segmental hava yollarını Vannas-Tübingen yay makası ile mümkün olduğunca distal olarak enine keserek alıcının Br'sini kesin.
   3. Donörün kelepçeli Br'sini alıcının Br'sine yerleştirin ve önceden konumlandırılmış 7-0 naylon sütür ile sabitleyin (Şekil 6).
3. Pulmoner arter (PA) anastomozu:
   1. Alıcının PA'sının etrafına 7-0 naylon sütür yerleştirin.
   2. Alıcının PA'sını adventitial kılıfından kesin, damarın çevresinin yarısını Vannas-Tubingen yay makası ile kesin ve daha sonra bir insülin şırıngası kullanarak PA'daki kanı 0.2 mL heparinize salin (1 U / mL) ile temizleyin.
   3. Donörün kelepçeli PA'sını alıcının PA'sına yerleştirin ve önceden konumlandırılmış 7-0 naylon sütür ile sabitleyin (Şekil 6).

6. Reperfüzyon

1. Nakledilen donör akciğerin reperfüzyonuna ve ventilasyonuna izin vermek için hilum üzerindeki Yaşargil kelepçesini çıkarın (Şekil 7).
2. Mikro diseksiyon yay makası ve forseps kullanarak alıcının doğal sol akciğerini diseke edin.
3. Nakledilen sol akciğeri alıcının toraksına dikkatlice yeniden konumlandırın.
4. Torakotomi insizyonunu 6-0 naylon sütür kullanarak kapatın.
   1. Kaburgaların etrafına basit çift düğümlü üç adet 6-0 naylon sütür yerleştirin: 4^{. kaburgadan} üstün ve 5. kaburgadan daha düşük (Şekil 8A).
   2. Üç sütürü bir araya getirmek için hemostatları kullanın (Şekil 8B).
   3. Havalandırma ayarlarında PEEP'i 6 cmH₂O'ya yükseltin.
   4. Yarayı kapatmak için üç düğümü de çekerek aynı anda birbirine bağlayın (Şekil 8C).
   5. PEEP'i hemen 2 cmH₂O'ya düşürün.
   6. 6-0 naylon dikiş ile cildi kapatın.
      NOT: Laboratuvarımız transplantasyon sonrası akut fazı incelediğinden, bu modeldeki alıcı sıçan ventilasyon ve anestezi altında nakil sonrası 3 saat hayatta kalır ve daha sonra örnekler toplanır.

7. Deneysel örneklerin toplanması (plazma, akciğer dokusu)

1. Kontrol örnekleri için, 3 saatlik reperfüzyon periyodu başlatıldıktan sonra donörün sağ loblarını toplayın.
   1. Protein veya RNA ekspresyon analizleri için superior lob ve post-kaval lobu snap-freeze yapın, histoloji için orta lobu koruyun ve ıslak-kuru ağırlık oranı için inferior lobu kullanın (Şekil 9A).
2. 3 saatlik reperfüzyon süresinin bitiminden 10 dakika önce, juguler ven içine bir insülin şırıngası ile heparin (1.000 U / kg) enjekte ederek alıcı örnekleri toplamaya hazırlanın.
   NOT: Bu heparin uygulaması, akciğerlerdeki kan pıhtılaşmasını önler ve tedarik sırasında daha kapsamlı bir kızarmaya izin verir.
3. Plazma toplama
   1. 3 saatlik reperfüzyon süresinin sonunda, IVC yoluyla bir şırınga ile 1 mL kan toplayın.
   2. Buz üzerinde saklayın ve daha sonra plazmayı hasat etmek için 10 dakika boyunca 2.000 x g'de santrifüj yapın.
4. Ekssanguinasyona izin vermek için IVC'yi keserek alıcı sıçanı ötenazi yapın.
5. Torasik kemer boyunca diyaframı diseke edin ve göğüs kafesini diseke ederek göğüs boşluğunu ortaya çıkarın.
6. İstenirse doğal veya nakledilen akciğerlerden BAL sıvısı toplayın (isteğe bağlı).
   NOT: Akciğerde ıslak-kuru ağırlık oranı veya histoloji yapılıyorsa, sonuçları etkileyebileceğinden BAL sıvı toplanması yapılmamalıdır.
   1. Trakea etrafına 4-0 ipek sütür iplik takın ve sıvı sızıntısını önlemek için trakea ve entübasyon tüpünün etrafına sıkı bir çift düğüm bağlayın.
   2. Sağ loblardan ve sol lobdan BAL sıvı alımı için buz gibi soğuk PBS miktarını hesaplayın.
      NOT: Sağ akciğer için hacim oranı %63, sol akciğer için hacim oranı %^37'dir16. Bu nedenle, her iki tarafa da aşılanacak PBS miktarını belirlemek için, hacim tidal hacmin iki katı (Td = 7.2 mL / kg) sağ akciğer için% 63 ve sol akciğer için% 37 ile çarpılarak hesaplanmalıdır.
   3. Sol akciğer hilar bölgesine bir Yasargil kelepçesi yerleştirin (Şekil 10A) ve anjiyo-katetere bağlı bir şırınga ile, hesaplanan miktarda buz gibi soğuk PBS'yi sağ akciğere (alıcının doğal lobları) aşılayın ve şırınga pistonunu yavaşça yukarı çekerek BAL sıvısını toplayın. İki kez gerçekleştirin.
      NOT: Aşılanan sıvının% 70-80 oranında geri kazanılması beklenmelidir.
   4. Sol akciğerdeki Yaşargil kelepçesini çıkarın ve kelepçeyi sağ akciğer hiler bölgesine yerleştirin (Şekil 10B).
   5. Nakledilen sol lobdan BAL sıvısını sağ loblar için toplandığı gibi toplayın ve ardından sağ akciğer hiler bölgesindeki kelepçeyi çıkarın.
7. Sağ ve sol kulak kepçelerini mikro diseksiyon yay makası ile kesin ve akciğerleri, boruya bağlı 18 G anjiyo-kateter ve 28 cmH₂O'da asılı 20 mL önceden soğutulmuş koruma çözeltisi içeren bir şırınga kullanarak PA boyunca yerçekimi ile yıkayın.
8. Alıcının akciğerinden örnekler toplayın.
   1. Protein veya RNA ekspresyon analizleri için superior lob ve post-kaval lobu snap-freeze edin, histoloji için orta lobu koruyun ve ıslak-kuru ağırlık oranı için inferior lob kullanın) (Şekil 9A).
   2. Sol nakledilen sol lobu üç bölüme ayırın: dondurulmuş için toplanan üst bölge, histoloji için orta bölge ve ıslak-kuru ağırlık oranı için alt bölge (Şekil 9B).

Sonuçlar

Pulmoner ödemi ölçmek için ıslak-kuru ağırlık oranı hesaplandı. Donörün doğal lobu, nakledilen lob ve alıcının doğal lobu protokolde açıklandığı gibi toplandı ve ıslak ağırlık için hemen tartıldı, 48 saat boyunca 60 ° C'de kurutuldu ve daha sonra kuru ağırlık için tekrar tartıldı. Islak-kuru ağırlık oranının artması, pulmoner ödemin göstergesi olacaktır. Sonuçlarımız, nakledilen lobun ıslak-kuru ağırlık oranında donörün veya alıcının ...

Tartışmalar

Bu yazıda, prosedürü optimize etmek için bir sıçan akciğer nakli protokolünde birkaç kritik adımda müdahale ettik. Sıçan akciğer transplantasyonu için çeşitli kelepçeleme teknikleri bildirilmiş olsa da 1,2,3,4,5,6,7,8,9,15, mikrocerrahlar için işlem hala öznel ve zor olabilir.

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
12 Gauge angio-catheter	BD	382277
14 Gauge angio-catheter	B. Braun	4251717-02
16 Gauge angio-catheter	B. Braun	4252586-02
18 Gauge angio-catheter	B. Braun	4251679-02
20 Gauge angio-catheter	B. Braun	4252527-02
4-0 silk suture	Surgical Specialties Corp.	SP116
6-0 nylon suture	AD Surgical	S-N618R13
7-0 nylon suture	AD Surgical	S-N718SP13
8-0 nylon suture	AD Surgical	XXS-N807T6
Betadine Spray	Avrio Health L.P	UPC 367618160039
Clippers	VWR	MSPP-023326
Castroviejo micro dissecting spring scissors	Roboz Surgical Instrument Co	RS-5668
Dumont #5 - Fine Forceps	Fine Science Tools	11254-20
Electrocautery	Macan	MV-7A
Endotracheal intubation kit	Kent Scientific	ETI-MSE
Forceps	Fine Science Tools	11027-12
Halsted-mosquito hemostat	Roboz Surgical Instrument Co	RS-7112
Heparin	Fresnius Medical Care	C504701
Insulin syringe	Life Technologies	B328446
Isoflurane	Piramal Critical Care	NDC 66794-017-25
Isopropyl Alcohol Swabs	BD	326895
Ketamine	Hikma Pharmaceuticals PLC	NDC 0413-9505-10
Dieffenbach Bulldog Clamp	World Precision Instruments	WPI14117
Needle holder/Forceps, Curved	Micrins	MI1542
Needle holder/Forceps, Straight	Micrins	MI1540
Perfadex Plus (Organ Preservation Solution)	XVIVO Perfusion AB	REF# 19950
PhysioSuite	Kent Scientific	PS-MSTAT-RT	Used to check SpO2 and heartbeat
Retractor	Roboz Surgical Instrument Co	RS-6560
Saline	PP Pharmaceuticals LLC	NDC 63323-186-10
Scissors	Fine Science Tools	14090-11
SomnoSuite Small Animal Anesthesia System	Kent Scientific	SS-MVG-Module
Sterile  Cotton Gauze Pad	Fisherbrand	22-415-469
Surgical Microscope	Leica	M500-N w/ OHS
Syringe 5mL	BD	309646
Vannas-Tubingen Spring Scissors	Fine Science Tools	15008-08
Xylazine	Korn Pharmaceuticals Corp	NDC 59399-110-20
Yasargil Clamp	Aesculap, Inc	FT351T	Used to clamp bronchus
Yasargil Clamp	Aesculap, Inc	FT261T	Used to clamp hilum
Yasargil Clamp Applicator	Aesculap, Inc	FT484T