Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.
Method Article
* Bu yazarlar eşit katkıda bulunmuştur
Nekrotizan enterokolit (NEC), prematüre bebeklerde, özellikle çok düşük doğum ağırlıklı bebeklerde, yüksek mortalite ve belirsiz patogenez ile sıklıkla ortaya çıkan en şiddetli gastrointestinal (GI) hastalıktır. NEC'in nedeni inflamatuar immün düzenleyici sistem anormallikleri ile ilgili olabilir. Bir NEC hayvan modeli, NEC hastalığı bağışıklık araştırmaları için vazgeçilmez bir araçtır. NEC hayvan modelleri genellikle C57BL /6J yenidoğan fareleri kullanır; BALB/c yenidoğan fareleri nadiren kullanılır. İlgili çalışmalar, fareler enfekte olduğunda, BALB / c farelerinde C57BL / 6J farelere kıyasla Th2 hücre farklılaşmasının baskın olduğunu göstermiştir. Çalışmalar, NEC'in oluşumu ve gelişiminin T yardımcı tip 2 (Th2) hücrelerindeki artışla ilişkili olduğunu ve genellikle enfeksiyon eşlik ettiğini ileri sürmektedir. Bu nedenle, bu çalışmada neonatal BALB/c fareleri, NEC'li çocuklarda gözlemlenenlerle benzer klinik özelliklere ve bağırsak patolojik değişikliklere sahip bir NEC modeline neden olmak için kullanılmıştır. Bu hayvan modelinin NEC'deki Th2 hücre yanıtlarını incelemek için kullanılıp kullanılamayacağını belirlemek için daha fazla çalışma yapılması garanti edilir.
Nekrotizan enterokolit (NEC), prematüre bebeklerde, özellikle çok düşük doğum ağırlıklı bebeklerde, yüksek mortalite ve belirsiz patogenez ile sıklıkla ortaya çıkan en şiddetli gastrointestinal (GI) hastalıktır. NEC'in nedeni inflamatuar immün düzenleyici sistem anormallikleri ile ilgili olabilir. Bir NEC hayvan modeli, NEC hastalığı bağışıklık araştırmaları için vazgeçilmez bir araçtır. NEC hayvan modelleri genellikle C57BL /6J yenidoğan fareleri kullanır; BALB/c yenidoğan fareleri nadiren kullanılır. İlgili çalışmalar, fareler enfekte olduğunda, BALB / c farelerinde C57BL / 6J farelere kıyasla Th2 hücre farklılaşmasının baskın olduğunu göstermiştir. Çalışmalar, NEC'in oluşumu ve gelişiminin T yardımcı tip 2 (Th2) hücrelerindeki artışla ilişkili olduğunu ve genellikle enfeksiyon eşlik ettiğini ileri sürmektedir. Bu nedenle, bu çalışmada neonatal BALB/c fareleri, NEC'li çocuklarda gözlemlenenlerle benzer klinik özelliklere ve bağırsak patolojik değişikliklere sahip bir NEC modeline neden olmak için kullanılmıştır. Bu hayvan modelinin NEC'deki Th2 hücre yanıtlarını incelemek için kullanılıp kullanılamayacağını belirlemek için daha fazla çalışma yapılması garanti edilir.
En şiddetli gastrointestinal (GI) hastalık olan nekrotizan enterokolit (NEC), prematüre bebeklerin çoğunda (%>90), özellikle de çok düşük doğum ağırlığına (VLBW) sahip bebeklerde görülür 1. VLBW bebeklerde hastalığın görülme sıklığı %10 ile %12 arasında değişmektedir ve NEC tanısı alan çocukların mortalitesi %20 ile %30 arasında 2,3'tür. NEC'in nedeni mukozal yaralanmalar, patojenik bakterilerin istilası ve bağırsak beslenmesi ile ilgili olabilir, bu da enflamatuar yanıtlara ve hassas konaklarda bağırsak yaralanmalarının indüksiyonuna yol açabilir3. NEC patogenez belirsizdir. İlgili araştırmalar, etkilenen bebeğin immün yanıtının anormal olduğunu ve genetik duyarlılık, mikrovasküler gerginlik ve bağırsak bakteri değişikliklerinin hastalıkta önemli roller oynayabileceğini göstermektedir3.
NEC hayvan modeli, NEC patogenezini araştırmak için vazgeçilmez bir araçtır. NEC modelleri için kullanılan hayvan türleri domuzlar, sıçanlar ve farelerdir. Bununla birlikte, uzun gebelik süresi, büyüme döngüleri ve yüksek maliyetler nedeniyle, son yıllarda domuzlar NEC modelleri için ilk tercih olmamıştır ve sıçanlar veya farelerle değiştirilmiştir4. Farklı fare suşlarının bağışıklık arka planında farklılıklar olduğu için5, farklı çalışmaların NEC hayvan modelleri oluşturmak için farklı fare suşları kullanması gerekir. BALB/c fareleri önemli bir özelliğe sahiptir; enfekte olduklarında veya dış hasarla başa olduklarında, farelerde enfeksiyon sırasında TH2 hücrelerinin polarizasyonu, diğer fare suşlarındakinden önemli ölçüde daha güçlüdür6,7,8. T yardımcı hücreleri NEC'in oluşumunda ve ilerlemesinde, özellikle TH2 hücrelerinin gelişiminde çok önemli bir rol oynar3,9,10,11. Bu nedenle, bu çalışmada T hücreleri üzerinde NEC hastalığı araştırmaları için yararlı olabilecek NEC modelini oluşturmak için BALB / c fareleri kullanılmıştır.
Bu araştırma Guangzhou Kadın ve Çocuk Tıp Merkezi Tıbbi Etik Komitesi (NO. 174A01) ve Guangzhou Forevergen Biyobilim laboratuvarı Hayvan Merkezi Hayvan Etik Komitesi (IACUC-G160100) tarafından onaylanmıştır. Tüm hayvanlar belirli bir patojen içermeyen (SPF) ortamda aynı odada yetiştirildi ve deneyler geleneksel bir ortamda gerçekleştirildi. Üreme için kullanılan fareler 7-8 haftalıktı; NEC (n = 72) indüklemek için fareler 4. günde barajdan ayrılmış ve barajlar (n=14) orijinal kafeste tutularak kontrol (Cont.) grubu fareleri (n=24) emzirilmiştir.
1. Reaktiflerin ve cihazların hazırlanması
2. Yenidoğan BALB/c farelerinde nekrotizan enterokolit indükle
3. Fareyi gavage
4. Hematoksilin ve eozin (H&E) lekelenmesi için taze bağırsak dokusu örnekleri toplayın
BALB/c fare NEC modeli formül besleme, LPS besleme, hipoksi ve soğuk stimülasyon ile indüklendi. İndüksiyon döneminde, fareler bağırsak patolojisi, dışkı özellikleri, vücut ağırlığı değişiklikleri ve günlük sağkalım için gözlendi. NEC indüksiyonu sırasında ince bağırsağın temsili görüntüleri; resimdeki sayılar 0 (normal epitel) ile 4 (en şiddetli) arasında bağırsak patolojisi skorunu temsil eder (Şekil 3A). Bağırsak patolojisi skoru NEC grubunda K...
NEC, özellikle prematüre bebeklerde görülme sıklığı ve mortalitesi yüksek olan yenidoğanlarda en sık görülen gastrointestinal sistem acil durumudur1,2,3. Bununla birlikte, patogenez hala belirsizdir. Şu anda mukozal hasar, patojen istilası ve enteral beslemenin NEC3 için yüksek riskli faktörler olduğuna inanılmaktadır. Bugüne kadar, NEC modeli için kullanılan hayvanlar çoğunlukla...
Yazarların açıklayacak çıkar çatışmaları yoktur.
Yazarlar, klinik örneği sağladığı için Guangzhou Kadın ve Çocuk Tıp Merkezi Klinik Biyolojik Kaynak Bankası'na ve fare sağladığı için Guangzhou Forevergen Biyobilimler Laboratuvarı Hayvan Merkezi'ne teşekkür ediyor. Bu araştırma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı hibe 81770510 (R.Z.) tarafından desteklendi.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Absolute ethanol | Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. | 100092683 | |
Goat Milk powder | Petag | 71795558417 | |
HE dye solution | Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. | G1003 | |
Isoflurane | RWD, Shenzhen Reward Life Technology Co., LTD. | R510 | |
LPS | Sigma-Adrich | L2880 | |
Medical oxygen | various | various | |
Microscope | NIKON | NIKON imaging system (DS-Ri2) | |
Neutral resin | Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. | 10004160 | |
Paraffin | various | various | |
Premature baby milk powder | Abbott | 57430 | |
Xylene | Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. | 10023418 | |
1% Hydrochloric acid | various | various | |
10% Formalin | LEAGENE | DF0110 |
An erratum was issued for: A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis. The Representative Results section was updated.
Figure 1 was updated from:
Figure 1: Induction of the BALB/c NEC model process. (A) The mice in the NEC group were separated from the dam at birth until they were 4 days old (on Day 4) and fasted that night. The NEC model was induced from Day 5 onwards after birth and lasted for 5 days. Intestinal tissue specimens were collected on Day 10 or earlier. The mice in the Cont. group were housed with and nursed by the dam. (B) The sequence of operations for each day after inducing the NEC model. Abbreviations: Cont. = control; NEC = necrotizing enterocolitis; LPS = lipopolysaccharide. Please click here to view a larger version of this figure.
to:
Figure 1: Induction of the BALB/c NEC model process. (A) The mice in the NEC group were separated from the dam at birth until they were 4 days old (on Day 4) and fasted that night. The NEC model was induced from Day 5 onwards after birth and lasted for 5 days. Intestinal tissue specimens were collected on Day 10 or earlier. The mice in the Cont. group were housed with and nursed by the dam. (B) The sequence of operations for each day after inducing the NEC model. Abbreviations: Cont. = control; NEC = necrotizing enterocolitis; LPS = lipopolysaccharide. Please click here to view a larger version of this figure.
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiThis article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır