Popülasyon Düzeyinde Anemiyi Tahmin Etmek için Entegre Karar Destek Aracına Sahip Bir Bakım Noktası Yöntemi

Özet

Bakım noktasında doğru bir hemoglobin tahmin yöntemi eksiktir ve anemi tedavisi için popülasyona dayalı programları engelleyebilir. Bu nedenle, hemoglobin değerlerini farklı anemi derecelerine göre kategorize etmek için havuzlanmış kılcal kan ve özel bir yazılım uygulamasına entegre edilmiş bir oto-analizöre dayalı bir bakım noktası yöntemi geliştirdik.

Özet

Popülasyon düzeyinde anemiyi tahmin etmek için sağlam bakım noktası yöntemleri gereklidir. Doğru yöntemler laboratuvar tabanlıdır ve bakım noktasında kullanılamaz. Bu uyarıyı gidermek için, Hb'nin tahmini için havuzlanmış kılcal kan ve taşınabilir bir otoanalizöre dayanan yeni bir yöntem geliştirilmiştir. Ayrıca, katılımcıları anında aneminin farklı aşamalarına ayırabilen bir karar destek aracı geliştirilmiştir. Karar destek aracı, Dünya Sağlık Örgütü'nün (WHO) nüfus düzeyinde anemi sınırına dayalı olarak tasarlandı ve tüm yaş ve cinsiyet grupları için mevcuttu. Bu basit ve kullanıcı dostu araç, sınırlı teknik becerilere sahip ön saflardaki sağlık çalışanları tarafından kolayca kullanılabilir. Genel olarak, geliştirilen yöntem bakım noktasında kullanılabilir ve doğrudur. Bu yüksek verimli yöntem, tüm yaş ve cinsiyet grupları için popülasyon düzeyinde anemi taraması için kullanılabilir.

Giriş

Anemi, küresel olarak, özellikle Hindistan'da önemli bir halk sağlığı sorunudur. Aneminin, nüfusun iş verimliliği ve ülkenin ekonomik büyümesi üzerinde zararlı bir etkisi olduğu iyi bilinmektedir¹. Anemiyi azaltmak için ulusal düzeydeki çabalardan yararlanmak için, 2018'de başlatılan en son halk sağlığı programı Anemi Mukt Bharat programıdır (AMB). AMB, hassas yaş gruplarında anemi prevalansını azaltmak için en umut verici yaklaşımlardan biri olarak 'test' ve ardından kişiye özel 'tedavi' kavramını tanımlamaktadır². Bununla birlikte, AMB'nin 'test et ve tedavi et' stratejisini uygulamak için anemi teşhisi için hemoglobinin (Hb) doğru bakım noktası (POC) tahminine ihtiyaç vardır. Ayrıca, büyük ölçekli topluluk anketlerinde anemiyi doğru bir şekilde tahmin etmek için sağlam yöntemler yararlıdır. Mevcut POC yöntemleri, non-invaziv ve minimal invaziv cihazları içerir ve Hb tahmini³ için kılcal kan örneklerini kullanırlar. Bununla birlikte, parmak delme boyutlarındaki varyasyon, derinin kalınlığı ve POC cihazlarının çevresel koşullar altındaki stabilitesi gibi birkaç pre-analitik faktör, kesin olmayan ölçümlere yol açar ve yaygınlık tahminlerinde büyük farklılıklara neden olur ^3,4,5. Bu nedenle, mobil, kısa bir geri dönüş süresine (TAT) sahip ve kaynak açısından zayıf ayarlar için uygun bir Hb tahmin yöntemi oluşturmaya ihtiyaç vardır⁶. Bu ihtiyaçları karşılamak için, potasyum etilendiamintetraasetik asit (EDTA) mikrotainer tüplerine 6-8 damla serbest akışlı kan örneğini kolaylaştırmak için dokunmayla etkinleştirilen bir neşter (tek tip dikme derinliği ve boyutu sağlamak için) kullanılarak havuzlanmış bir kılcal kan alma yöntemi geliştirilmiştir. Bu örneklerdeki Hb daha sonra kesintisiz bir güç kaynağı ile donatılmış POC'de veya elektriği olan yakındaki bir merkezde (Anganwadi, Sağlık kliniği, Panchayath veya ev) bir araca yerleştirilen taşınabilir bir oto-analizör kullanılarak ölçüldü. Bu yöntemi iki altın standart yöntemle (eşleştirilmiş venöz kan örnekleri ve siyanometamoglobin yöntemi) karşılaştıran bir doğrulama çalışması, yüksek doğruluk ve kesinlik göstermiştir ^7,8.

Geçerli ve güvenilir bir POC yöntemi oluşturmanın yanı sıra, popülasyon düzeyinde aneminin taranmasını ve tedavisini kolaylaştırmak için hızlı karar vermeye ihtiyaç vardır. Bu, Hb tahmininin sağlık kuruluşunda yapıldığı ve bir sağlık görevlisinin demir ve folik asit (IFA) takviyelerinin dağıtımını doğrudan denetlediği durumlarda şu anda mümkün değildir. Birinci basamak sağlık merkezlerindeki sağlık görevlileri tarafından karşılanan büyük nüfus nedeniyle, müdahalenin başlatılmasında önemli bir gecikme yaşanmaktadır. Sağlık görevlisi üzerindeki iş yükünü azaltabilecek ve ön saflardaki sağlık çalışanlarını, tıbbi personelin doğrudan katılımı olmadan müdahale sunumunu gerçekleştirmeleri için güçlendirebilecek teknolojiye ihtiyaç vardır. Bu nedenle, çalışma, makineden gelen verileri otomatik olarak iletebilen özel bir uygulama (eSTAR uygulaması) ve ön saflardaki çalışanlara Hb değerleri, yaş ve cinsiyet gruplarına dayalı olarak IFA dozu konusunda karar desteği sağlayan yerleşik bir algoritma geliştirmeyi amaçladı. Yazılım, entegre bir geliştirme ortamı olarak Visual Studio Code ile PHP: hypertext preprocessor (PHP) betik dili ve PHP masaüstü chrome gibi açık kaynaklı araçlar kullanılarak tasarlanmıştır. Anemi Mukt Bharat yönergelerine dayalı ayrıntılı bir tedavi protokolü Android uygulamasına^{entegre edilmiştir 2}.

Bu entegre yöntem, doğruluğu ve kesinliği korurken test sonuçlarının geri dönüş süresini kısaltmak için sürekli artan talebi ele alır. Ayrıca, dakikalar içinde sonuç verme yeteneği, tedavinin başlatılması konusunda hızlı karar vermeyi sağlar ve daha iyi müdahale sunumu ile sonuçlanır⁹. Bu entegre yöntem, Hb testini içeren herhangi bir saha düzeyindeki anketler veya müdahale programları için uyarlanabilir. Ek olarak, sağlık kuruluşunda sağlık personelinin IFA tedavisine karar vermesi için bir iş yardımı olarak kullanılabilir.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protokol

Protokol, ICMR-Ulusal Beslenme Enstitüsü, Haydarabad, Hindistan (IRB. No.08/I/2018).

1. Hematoloji analizörü kullanılarak Hb analizi için havuzlanmış kılcal numune toplama^10,11

1. Barkod yazıcıyı ve tarayıcıyı yapılandırma
   1. Barkod yazıcıyı dizüstü bilgisayar sistemine bağlayın.
   2. Barkod yazıcı sürücüsünü dizüstü bilgisayara yükleyin.
   3. Yazıcıyı yazıcı özelliklerinde paylaşın.
   4. Herhangi bir hata için uygulamadaki barkod yazdırmayı test edin.
   5. Barkod tarayıcıyı Otomatik analizöre bağlayın, kendini otomatik olarak yapılandıracaktır.
   6. Masaüstü/dizüstü bilgisayarda yüklü olan uygulama yazılımını açmak için simgeye çift tıklayın. Oturum açma sayfasında yetkili kimlik bilgilerini girin.
      NOT: Uygulamanın ana sayfası, laboratuvar sonucu yükleme, barkod yazdırma kalite kontrol (QC) raporları ve nihai hematoloji raporu için sekmelerden oluşur.
   7. Barkod oluşturmak için, Barkod Yazdırma sekmesine tıklayın. Katılımcı listesi, köy adları gibi coğrafi bilgiler girildikten sonra otomatik olarak barkod yazdırma sekmesinde görünür.
   8. Ekran Seçimi'ne tıklayın. Liste görüntülenir. Barkod yazdır'a tıklayın.
2. Havuzlanmış kılcal kan örneği alımı (Şekil 1)
   1. Yetişkin bir hastada kılcal kan örneklemesi için sol elin orta üç parmağından birini kullanın.
   2. Katılımcıdan rahat bir pozisyonda oturmasını isteyin,bu da flebotomistin parmağa erişmesini sağlar.
   3. Parmağınızı alkollü bir bezle (%70 izopropil alkol içerir) temizleyin ve kurumasını bekleyin.
   4. Mikrotainerleri, katılımcının tanımlanmasından hemen sonra ve cilt delinmeden önce katılımcıyla ilgili bilgilerle (barkod) etiketleyin.
   5. Kan örneğini tek kullanımlık bir güvenlik lanseti (temasla etkinleştirilen lanset 2.0 X 1.5 mm) kullanarak toplayın. Kan örneğini toplamak için, cildi parmağın ucundan orta nokta ile parmağın yan tarafı arasında yaklaşık 1 cm delin. Delinme, orta veya yüzük parmağının parmak ucunun avuç içi yüzeyinde olmalıdır.
   6. İlk kan damlasını silin ve sonraki kan örneklerini kaplanmış bir mikrotainerde toplayın.
   7. Parmağa masaj yapmayın.
   8. Mikrotainer'ı delinme bölgesinin altına dikey olarak yerleştirin, böylece kan damlacıkları basınç uygulamadan tüpe serbestçe akar. 4-6 damla (yaklaşık 200 μL) toplanana kadar tekrarlayın.
   9. İçeriği döndürerek ve ters çevirerek hafifçe karıştırın, ancak mikrotainer kabını kapattıktan sonra.
   10. 3-4 kan damlası toplandıktan sonra, parmak ucuna bir pamuklu çubuk bastırın ve katılımcının hareketsiz oturmasını sağlayın. Kanamayı durdurmak için manuel basınç uygulayın.
   11. Lanseti derhal biyolojik atık imha yönergelerine göre atın.

2. Hematoloji analizörü kullanarak analizler

1. Otomatik analizörün yazılımla yapılandırılması
   1. FileZilla Server bileşenlerini (127.0.0.1) dizüstü bilgisayara indirin ve yükleyin.
      Not: Windows güvenlik duvarını veya üçüncü taraf güvenlik duvarlarını devre dışı bırakın.
   2. Özel yazılımı dizüstü bilgisayara yükleyin ve Amerikan Test ve Malzeme Derneği (ASTM) dosya konumunun yolunu kopyalayın (C/programfiles x86/hedef klasör/ Web/wb/astmfiles)
   3. FileZilla sunucu uygulamasında, kullanıcı ve şifreyi oluşturun ve astm dosya konumunu eşleyin.
   4. Otomatik çözümleyici makinesinde aynı IP serisini yapılandırın (ana ayarlarda).
   5. Otomatik analizörde, astm senkronizasyon seçeneğini FTP olarak değiştirin ve dizüstü bilgisayarda yapılandırılan IP ve kimlik bilgilerini sağlayın (örneğin, 192.168.1.1 ve FileZilla kullanıcı adı ve şifresi yapılandırıldı).
   6. Otomatik analizörü yeniden başlatın ve hazır olduğunda dosya senkronizasyon işlemini test edin.
2. Otoanalizör kullanılarak kan örneklerinin analizi
   1. Hb ve diğer kırmızı hücre indekslerinin (ortalama korpüsküler hacim [MCV], ortalama korpüsküler hemoglobin [MCH], ortalama korpüsküler hemoglobin konsantrasyonu [MCHC] ve kırmızı hücre dağılım genişliği [RDW]) anında ölçümü vermek için POC ayarında kullanılabilmesi için tam otomatik ve taşınabilir bir hematoloji analizörü kullanın.
   2. Çözücü seviyelerini kontrol edin (Reaktif^{şişesinin en} az 1/4'ü doldurulur) ve yeterli miktarda bulunup bulunmadıklarını onaylayın.
      NOT: Çözücüler, enzimatik çözelti, lizing çözeltisi ve tamponlu izotonik çözeltiden oluşur (Malzeme Tablosu).
   3. Makinedeki ON/OFF düğmesine tıklayarak cihazı açın. Cihazın bir folyo bükümlü çift (FTP) kablosuyla bir dizüstü bilgisayara bağlandığından emin olun.
   4. Dış sıcaklığın analize başlamak için uygun olup olmadığını anlamak için sıvı kristal ekran (LCD) ekranını kontrol edin. >35 °C sıcaklık tavsiye edilmez. Makineyi ortam sıcaklığının <35 °C olduğu bir ortama yerleştirin.
   5. Başlatma tamamlandığında, analizörün otomatik olarak bir başlatma döngüsü çalıştırmasına izin verin (otomatik başlatma işlevi varsayılan olarak etkindir).
   6. Başlatma döngüsünden sonra, referans boş sayım için cihaz ekranını kontrol edin. Boş referans sayılarının aşağıdaki parametre sınırlarını aşmadığından emin olun: Hb < 0,3 g/dL ve WBC < 0,3 x 10³/^mm3, RBC < 0,02 x 10⁶/mm³; HCT %0 ve PLT < 10 x 10³/mm³. Ardından, boş sonuçları doğrulamak için √ düğmesine basın.
   7. Başlatma aşaması tamamlandıktan sonra analizör otomatik olarak bir başlatma döngüsü çalıştırmazsa, döngüyü başlatmak için cihazın ön panelindeki START-UP tuşuna basın.
   8. Şimdi, analizör bir oturum açma sayfası gösterecektir. Önceden tanımlanmış kullanıcı adı ve şifreyi girin. Daha fazla ilerlemek için √ düğmesine basın.
   9. Numune analizinden önce, analizörün hassasiyetini kontrol etmek için üç kontrol seviyesi (düşük, normal ve yüksek) çalıştırın. Kumandayı 2-8 °C'de saklayın ve kullanmadan önce oda sıcaklığına (RT) getirin. Kullanmadan önce kontrolleri birkaç kez hafifçe karıştırın.
      NOT: Kontroller, üreticiden kullanıma hazır reaktifler olarak temin edilir ve olduğu gibi yüklenir. Şişeler 4 °C'de saklanır. Normal raf ömrü 15 gündür. Kontroller, Levey Jenning'in grafiği kullanılarak düzenli olarak izlenmelidir. Kontrol değeri 3 SD'nin üzerine veya altına düşerse, tedarikçi tarafından sağlanan yıkama solüsyonunu kullanarak konsantre bir temizlik yapın.
   10. Kalite kontrol adımı başarıyla tamamlandıktan sonra numune analizine hazırlanın.
   11. Numune kabına yapışan barkodu, analizöre bağlı tarayıcı ile tarayın ve X işaretine basın.
   12. Deneğin cinsiyetini (erkek veya kadın) belirtin ve devam etmek için √ düğmesine basın.
   13. Araç, konunun ayrıntılarını bir kodla birlikte gösterecektir. Girilen bilgiler yanlışsa X tuşuna basın.
   14. Kan örneğini makineye yüklemeden önce, kan örneğini nazikçe ve iyice karıştırın.
   15. Kan dökülmesine izin vermemek için kapağı dikkatli bir şekilde çıkarın.
   16. Tüpü numune alma iğnesinin altına yerleştirin ve numune alma iğnesi kana girene kadar tüpü yukarı doğru hareket ettirin.
   17. Başlat anahtarına basın. Örnekleme iğnesi 10 μL kan aspire edecektir. Analiz döngüsü yaklaşık 60 saniye sürecektir. Döngünün sonunda, sonuç LED panelinde görüntülenecektir.
   18. Yazıcı simgesine tıklayarak sonuçları yazdırın.
   19. İkinci örneğe devam etmek için geri oka tıklayın.
   20. Analiz tamamlandıktan sonra laboratuvar test sonuçlarını yükleyin.
3. Verileri çözümleyiciden sunucuya yükleyin.
   1. Sistemi minimum 20 mbps hız sağlayan herhangi bir İnternet servis sağlayıcısına bağlayın.
   2. Kurulumdan sonra masaüstünde görünen uygulama yazılımı simgesini açmak için simgeye çift tıklayın. Oturum açma sayfasında yetkili kimlik bilgilerini girin.
      NOT: Uygulamanın ana sayfası, laboratuvar sonucu yükleme, barkod yazdırma QC raporları ve nihai hematoloji raporu için sekmelerden oluşur. Laboratuvar test sonucu yükleme sayfası, tamamlanan testleri gösterir. Dosya adı, makine kimliğinden ve .astm biçimindeki analiz tarihinden oluşur.
   3. Sonuçları Yükle düğmesine tıklayın. Sonuçlar başarıyla yüklendikten sonra, sunucuda.astm dosyaları .csv formatına dönüştürülür ve dönüştürülen dosyalar hematoloji raporunda görünür. Kayıtlar için dosyaları .astm formatında indirin.
      NOT: Sayfa, açılır dosyaların başarıyla yüklendiğini gösterecektir. Yinelenen dosyalar varsa, bunlar tanımlanacaktır.
   4. ASTM dosyalarının yüklendiği katılımcılar için anemi durumu kararı ( Tablo 1 ve Tablo 2'ye göre) web uygulamasında bir rapor olarak oluşturulacaktır. Anemi ile ilgili kararı görüntülemek için web uygulamasına giriş yapın, Raporlar'a tıklayın ve ardından EDSS'ye tıklayın. Rapor, tüm katılımcılar için tablo olarak görünür.
   5. Bireysel test sonuçlarını ve anemi durumu ile tedavi rejimi hakkındaki kararları görüntülemek için, takip uygulamasına giriş yapın, kimliği veya adı kullanarak katılımcıyı arayın, EDSS düğmesine tıklayın ve sonuçları görüntüleyin.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Sonuçlar

Yöntemin geçerliliğinin test edilmesi
Bu yöntemin geçerliliği, venöz kan otoanalizörü tabanlı yöntem olan altın standart ile karşılaştırılarak ortaya konmuştur. Doğrulama çalışması başka bir yerde ayrıntılı olarak açıklanmıştır⁸. Kısaca, görünüşte sağlıklı olan 748 gönüllü, aynı gün içinde art arda bir venöz örnek ve bir kılcal damar örneği verdi. Analizler POC'de gerçekleştirildi. Katılımcılar çok çeşitli Hb değerleri...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

Bu makale, havuzlanmış bir kılcal kan örneği ve bir oto-analizör kullanan bir bakım noktası yöntemini açıklamaktadır. Yöntem, analizörden gelen sonuçları otomatik olarak sunucuya yükleyebilen ve anemi hakkında kararlar üretebilen özel bir yazılımla entegre edildi. Ayrıca, Ulusal program^2'nin protokolüne göre IFA'nın tedavi dozlarını sağlayabilir.

Özel yazılım, barkod yazdırmayı, hematoloji verilerini dışa aktarmayı ve verilerin görs...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
ABX Miniclean	Horiba Ltd, Japan	23-450-004	Enzymatic solution
ABX Minidil LMG	Horiba Ltd, Japan	23-450-008	Buffered isotonic solution for RBC/PLT dilution, sleeving and cleaning
ABX Minilyse	Horiba Ltd, Japan	23-450-006	Hb measurement; lysing solution
ABX Minocal	Horiba Ltd, Japan	2032002	Calibrator
ABX Minoclair	Horiba Ltd, Japan	23-450-003	Cleaning reagent
ABX Minotrol 16 - 2H	Horiba Ltd, Japan	2042209	Blood control
ABX Minotrol 16 - 2L	Horiba Ltd, Japan	2042208	Blood control
ABX Minotrol 16 - 2N	Horiba Ltd, Japan	2042202	Blood control
Autoanalyzer	Horiba Ltd, Japan	ABX Micros ES 60	The FTP port should be functional
Barcode printer	Technology service corporation, USA	TSC Model TE 244	400 Mhz 32 bit RISC processor with 16 MB SDRAM, 8 MB Flash memory
Barcode Scanner	Retsol	LS-450	Any company which can provide a scanner with the following specifications: 32 bit CPU fast decode ability, IP 54 rated, Light source – visible laser diode 650 nm, Single scan pattern with scan rate of 100scans/second, Scan width of 200 mm & precision of 4 mil, Scan angle – YAW 65 Deg, Rotation 30 Deg & Pitch 55 Deg, Scan indication – buzzer, light indicator, Scan mode both manual & continue scanning
BD needles holder	Becton, Dickinson and company Ltd, Dublin, Ireland	364879
Contact activated lancet	Becton, Dickinson and company Ltd, Dublin, Ireland	366594, 366593	For children below 1 year, venous blood sample has been collected.
Custom software	Kavin Corporation, Bangalore	N/A
K2-EDTA Microtainer-5 mL	Becton, Dickinson and company Ltd, Dublin, Ireland	363706	EDTA tube for blood profile analysis with 1.0 mg K2 EDTA, dimensions 13 x 75 mm
Labels	G-Technologies, Secunderabad, telangana	N/A
Laptop	Any	N/A	Intel Core I3-1005G1,  8GB DDR4, 1TB HDD, 15.6 FHD LED, WIN 11 HOME  and MS OFFICE H&S