Isı Ağrı Test Thermostimulator TSA II 1. Giriş <ol><li> Bu prosedür, TSA II, Thermode&#39;un (Medoc Gelişmiş Medikal Sistemler, Durham, NC) ile cilde ısı uyaranlara teslim ticari olarak satılan bir termo-duyusal analizörü kullanır. Merkezi bir birim Thermode&#39;un sinyal üretir ve iletir. Bu sinyal genellikle merkezi ünitesine bağlı bir dizüstü bilgisayarda saklanan özel yazılımı tarafından kontrol edilir. Ayrıca bir çalışma konusu Thermode&#39;un ısıtma durdurmak için, elde tutulan bir kontrol merkezi ünitesine bağlı. </li><li> Yedi sıralı ve aynı ısı uyaranlara 30s arası uyaran aralıklarla teslim edilir. Bazal Thermode&#39;un sıcaklığı rahat bir 35 º C&#39;de Thermode&#39;un ısınır oranı 1 º C / s, 10 º C / s soğuyuncaya hangi hızda ise , Maksimum Thermode&#39;un sıcaklık 52 º C olarak belirlenmiştir. </li></ol> 2. Hazırlık ve Eğitim Konuları <ol><li> Baş, kol ve bacaklar için yeterli destek sağlar uzanmış bir sandalyede rahat bir ısı ağrı testi koltuk onları konuları hazırlamak için. Sandalye de, incelenen vücut sitelerine kolay erişim izin vermelidir. </li><li> Test tesisi, rahat bir oda sıcaklığında ve herhangi bir oyalama ile sakin ve nötr bir ortam sağlamak gerekir. </li><li> Deney başlamadan önce tüm katılımcılara ısı ağrı test tüm yönleriyle iyi eğitimli olmalıdır. Eğitim deneyden önce herhangi bir zamanda gerçekleşebilir. </li><li> Veri toplamak için gerekli olan çalışma konuları ve araştırmacılar arasındaki etkileşimler ile sınırlı olmalıdır. Veri tutarlılığını tehlikeye atabilir, çünkü şaka ve küçük tartışma vazgeçilmiştir. Çalışma konuları etkileşimleri kasıtlı olarak bu deneyler sırasında biraz monoton ve nötr olacağı bildirilir. </li><li> Talimatları, açık, basit ve tutarlı tutun. Ağrı öznel ve hiçbir doğru veya yanlış cevaplar vardır vurgulayın. Bu tutarlı olması çok önemlidir. Isı ağrı eşiği &quot;ile ilgili acı verici&quot; ve arasındaki noktası olarak tanımla &quot;sadece acı oldu.&quot; </li><li> Bu bir konu bir test oturumu sırasında ne olacağını tam olarak bilir kritik öneme sahiptir. Herhangi bir &quot;sürprizler&quot; anksiyete gibi karışıklıklar olabilir, çünkü, daha az tutarlı veri neden olabilir. Yedi ısı ağrı uyaranlara ısı ağrı eşiği belirlemek için kullanılır Örneğin, konu bu bilmeli. </li><li> Herhangi bir anda, konu, elde tutulan bir kontrol düğmeye basarak herhangi bir sıcak Thermode&#39;un durdurabilirsiniz. Kontrol altında olan bir konu anksiyete azaltmak ve verilerin daha güvenilir hale getirmek olacaktır. </li><li> Eğitim oturumu bir çalışma performansını değerlendirmek için bir fırsat sunmaktadır. 03:58 test döngüsü sırasında bireysel ağrı eşikleri 0.8 &#39;den daha fazla ° C ve 0.6&#39; den daha ideal ° C arasında son iki test döngülerine. Göre değişir böylece konularda eğitmek için iyi olabilir Sürekli gerçekleştirmek için başarısız Başlık genellikle çalışma kapsamı dışındadır. </li></ol> 3. Ağrı Eşik Belirlenmesi <ol><li> Başlamak için ağrı eşiği testi döngüleri konu cilt Thermode&#39;un yerleştirme işaretleyin. Bu deneyde, mikrodiyaliz için kullanılan aynı iltihaplı cilt lezyonu ağrısı için ağrı testine yanıt olarak yayımlanan biyokimyasalın öğrenmek için test edilecektir. </li><li> Sonra Thermode&#39;un işaretli cilt alanı üzerine koyarak, her döngü başlatırlar. Mümkün olduğunca yakından işaretler Maç Thermode&#39;un pozisyonu. Cilt ve Thermode&#39;un arasındaki sıcaklık 35 dengelenmesi için izin ver ° C - güvenli bir şekilde herhangi bir ağrıya neden olacak bir sıcaklık. Bu yaklaşık 5 saniye sürecek ve 35 ° C bilgisayar ekranında bir okuma ile belirtilir. </li><li> Başlamadan önce, konuya elle kontrol verir. </li><li> Test sırasında konu deri ile tam temas Thermode&#39;un tüm yüzey tutmak için sürekli ve hafif bir basınç kullanın. </li><li> Şimdi önceden programlanmış test algoritması başlar. Thermode&#39;un 1 ısınma başlayacak ° C / s En kısa sürede söz konusu deneyimlerin ağrısı gibi, elle tutulan bir cihaz tuşuna basın. </li><li> Elle tutulan bir cihaz üzerindeki düğmeye bastıktan sonra, Thermode&#39;un sıcaklık ağrılarına sebep otomatik olarak kayıtlı olması ve 10 ° C 35, bazal sıcaklık / s aşağı ° C. hızında azalmaya başlayacak </li><li> Sıcaklık probu otomatik olarak 1 tekrar yükselen başlamadan önce 30 saniye 35 ° C&#39;de muhafaza olacak ° C / s, bir konu yine, elde tutulan bir cihaz düğmeye basar kadar. Thermode&#39;un sıcaklık yeniden yükselmeye hakkında hemen önce, bu konuda ne olduğu konusu hatırlatır. Bu konu odaklı devam edecektir. </li><li> Bu dizi yedi sıcaklık kayıtları kayıtlı kadar tekrarlanır. Bu tempe ortalama değerini hesaplamaproblemsizce okumaları; bu ısı ağrı eşiği. </li></ol> Kesintili Basınç Probları Mekanik Ağrı Test 1. Giriş <ol><li> Geleneksel olarak kullanılan ve piyasada bulunan von Frey kıllar daha tutarlı sonuçlar sağlar çünkü, ısmarlama kalibre sıçramalı basınç probları kullanır. Sondalar geniş içinde serbestçe hareket eden, çeşitli ağırlıkları bakır çubuklar üzerine monte aynı silindirik paslanmaz çelik teller (240 mikron çaplı) (1, 2, 4, 8, 16, 32, 49, 64, ve 81 gram) yapılan el- alüminyum boru düzenledi. </li><li> Isı ağrı test etmek için ana hatlarıyla aynı genel deneysel koşullar altında mekanik ağrı test geçerlidir. Konularda iyi hazırlanmış ve eğitimli olmalıdır. Probları künt ve ponksiyon cilt olmayacak konularda rahatlatmak için özellikle önemlidir. Bu konularda tutarlı veri dinlenmek ve sağlamak için yardımcı olacaktır. </li></ol> 2. Mekanik Ağrı Eşik Belirlenmesi <ol><li> Mekanik ağrı eşiğini belirlemek için, ilk deneysel iltihaplı lezyonun merkezinde cilt dik çelik tel ucu hafif prob geçerlidir. </li><li> Elle tutulan alüminyum boru sonra dokunmadan cilt doğru indirilir. Bu şekilde, alüminyum boru içinde, bakır çubuk tüm ağırlığını, çelik tel ucu dayanmaktadır. </li><li> Çalışmada konu daha sonra &quot;evet&quot; veya söyleyerek prob ağrıya neden olup olmadığını gösterir &quot;hayır.&quot; </li><li> Konu cevaplar &quot;hayır,&quot; sonra da aynı prob veya sonraki ağır prob sonraki kullanılmalıdır durumunda. Bu algoritma artan bir uyarılma dizisi denir. Rasgele sonraki prob ağır ya da aynı ağırlıkta olup olmadığını belirler. Bu algoritma kör bir konu devam edecektir. </li><li> Bir konuya cevap verene kadar &quot;evet&quot; bu serinin son iki probları ortalama ağırlığı ilk sapma noktası olarak kaydedilir artan sırayla probları uygulayın. </li><li> Konu cevaplar sonra &quot;evet,&quot; azalan stimülasyon dizisi kullanarak başlatın ve daha önce olduğu gibi daha hafif bir prob veya aynı prob kullanın. Rasgele sonraki prob hafif ya da aynı ağırlıkta olup olmadığını belirler. Bu algoritma kör bir konu devam edecektir. </li><li> Konu cevap &quot;hayır&quot; bu sıra son iki probları ortalama ağırlığı ikinci sapma noktası teşkil kadar azalan bir sırayla yoklamaları uygulayın. </li><li> Konu cevap &quot;hayır,&quot; artan bir uyarılma sırasına geri geçtiğinizde. Yedi sapma noktaları kaydedilir kadar artan ve azalan dizileri arasında geçiş. Bu yedi puan ortalaması mekanik ağrı eşiğini. </li></ol>

<ol>
	<li>Angst, M. S., Clark, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comment+on+Koltzenburg+et+al.:+Differential+sensitivity+of+three+experimental+pain+models+in+detecting+the+analgesic+effects+of+transdermal+fentanyl+and+buprenorphine.">Comment on Koltzenburg et al.: Differential sensitivity of three experimental pain models in detecting the analgesic effects of transdermal fentanyl and buprenorphine.</a> Pain. 126, 165-174 (2006).</li><li>Angst, M. S., Clark, J. D., Carvalho, B., Tingle, M., Schmelz, M., Yeomans, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokine+profile+in+human+skin+in+response+to+experimental+inflammation,+noxious+stimulation,+and+administration+of+a+COX-inhibitor:+A+microdialysis+study.">Cytokine profile in human skin in response to experimental inflammation, noxious stimulation, and administration of a COX-inhibitor: A microdialysis study.</a> Pain. , (2008).</li><li>Angst, M. S., Koppert, W., Pahl, I., Clark, J. D., Schmelz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short-term+infusion+of+the+mu-opioid+agonist+remifentanil+in+humans+causes+hyperalgesia+during+withdrawal.">Short-term infusion of the mu-opioid agonist remifentanil in humans causes hyperalgesia during withdrawal.</a> Pain. 106, 49-57 (2003).</li><li>Lotsch, J., Angst, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mu-opioid+agonist+remifentanil+attenuates+hyperalgesia+evoked+by+blunt+and+punctuated+stimuli+with+different+potency:+a+pharmacological+evaluation+of+the+freeze+lesion+in+humans.">The mu-opioid agonist remifentanil attenuates hyperalgesia evoked by blunt and punctuated stimuli with different potency: a pharmacological evaluation of the freeze lesion in humans.</a> Pain. 102, 151-161 (2003).</li></ol>

Bu video gönüllü insanların iltihaplı deride ısı ve mekanik ağrı eşiğini değerlendirmek için algoritmalar göstermektedir. Ağrı algısı özneldir. Yeterli ağrı verilerinin toplanması, uygun bir test tesisi (örneğin, sakin ve rahatlatıcı), dahili veri kalitesi kontrol önlemlerinin (test-tekrar test güvenilirlik), standart bir çalışma protokole sıkı sıkıya bağlı kalmanın ve karıştırıcı faktörlerin kaçınma ile Çalışmaya katılanların kapsamlı eğitim gerektirir (örneğin, stres, anksiyete). Bir analjezik ilaç idaresi ve nosiseptif mediatörlerin yerel sürümü olarak mekanistik veri toplama gibi müdahaleler ile eşleştirilmiş ağrı hassasiyetine Güvenilir öznel veriler, ağrı mekanizmaları içine değerli bilgiler sunmak ve bunu önlemek veya azaltmak için anlamına gelir.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>TSA-II Neuro Sensory Analyzer</td>
<td>Tool</td>
<td>Medoc Advanced Medical Systems</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Puntuated Pressure Probes</td>
<td>Tool</td>
<td>Custom-made</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Alternatively, commercially available von Frey Hairs can be used.</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

determining heat and mechanical pain threshold in inflamed skin of human subjects

Bir önceki makalede, biz insanlarda doku-spesifik nosiseptif ve inflamatuar biyokimyasalın toplanması için cilt mikrodiyaliz teknikleri göstermiştir görüntülenmiştir Deneyler Journal of. Bu yazıda, genellikle mikrodiyaliz prosedürleri ile birlikte kullanılan ağrı test paradigmalar gösterecektir. Mikrodiyaliz ile ağrı testleri birleştiren ağrı üreten ve çoğaltım için tanımlayıcı anahtar biyokimyasalın sorumlu sağlar davranışsal ve biyokimyasal verileri arasında önemli bir bağlantı sağlar. Insan Çalışmaya katılanların iltihaplı deride çağrıştıran ağrı iki model gösterilmektedir. İlk modeli, ısı uyaranlara yardımı ile ağrı çağrıştırıyor. Burada açıklandığı gibi Isı uyarılmış ağrı ağırlıklı olarak küçük, non-miyelinli periferik nosiseptif sinir lifleri (C-lifleri) aracılığıyla olur. İkinci model, sıçramalı basınç uyaranlar aracılığıyla ağrı çağrıştırıyor. Sıçramalı basınç uyarılmış ağrı ağırlıklı olarak küçük ve miyelinli periferik nosiseptif sinir liflerinin (A-delta lifleri) aracılığı ile. Her iki model mekanistik ayrı ve bağımsız olarak, ağrı sinyalizasyon dahil iki büyük periferik sinir lifi popülasyonları nosiseptif işleme incelemek. Isı ağrı TSA II, piyasada bulunan bir termo-duyusal analizörü (Medoc Gelişmiş Medikal Sistemler, Durham, NC) yardımı ile uyarılmış. Stimulus yapılandırma ve teslimat, özel bir yazılım yardımı ile gerçekleştirilir. Thermodes büyüklüğü ve şekli değişir ama prensip olarak ısıtılan veya çeşitli oranlarda ve farklı zaman dilimleri için soğutmalı bir metal plaka oluşur. Isı uyarılmış ağrı değerlendirilmesinde Algoritmalar çeşitlidir. Burada gösterilen deneylerde, çalışmaya katılanların cilt ile temasında Thermode&#39;un ağrı uyandırmak olmayan bir sıcaklıkta başlangıç ​​önceden belirlenmiş bir hızda ısıtılır ağrısı hangi noktada belirtmek için istenir. Bir konu ağrısı başlar Thermode&#39;un sıcaklık ısı ağrı eşiği teşkil etmektedir. Mekanik ağrı sıçramalı problar ile uyarılmış. Bu probları çeşitli üreticilerin (von Frey kıllar) temin edebilirsiniz. Bununla birlikte, von Frey kılların doğruluğunu eleştirdi ve birçok araştırmacı, özel sıçramalı basınç probları kullanımı olmuştur. Burada gösterilen deneylerde farklı ağırlıklar sekiz ısmarlama sıçramalı probları ardışık sırayla uygulanır, algısal sapma noktaları, yani bir değişiklik, herhangi bir ağrı hissi ağrı ya da tam tersi hissi tanımlamak için bir prosedür, yukarı-aşağı algoritma olarak adlandırılır. Algısal bir sapma neden ortalama ağırlığı mekanik ağrı eşiğini oluşturmaktadır.

Watch this Scientific Journal Video about Determining heat and mechanical pain threshold in inflamed skin of human subjects at JoVE.com

Determining heat and mechanical pain threshold in inflamed skin of human subjects

Algoritmalar insan deneklerin deneysel iltihaplı deride ısı ve mekanik ağrı eşikleri değerlendirilmesi gösterilmiştir. Iki ağrı test paradigmalar, acı verici, iki büyük periferik sinir lifi popülasyonları bağımsız nosiseptif işleme incelemek, yani miyelinli olmayan C lifleri ve küçük A-delta lifleri miyelinli.

İnsan denekler üzerinde iltihaplı cilt ısı ve mekanik ağrı eşiğini Belirlenmesi

In a previous article in the Journal of Visualized Experiments we have demonstrated skin microdialysis techniques for the collection of tissue-specific ...

determining-heat-mechanical-pain-threshold-inflamed-skin-human

Research

JoVE Journal

Biology

20.8K Görüntüleme.  Stanford University School of Medicine. Algoritmalar insan deneklerin deneysel iltihaplı deride ısı ve mekanik ağrı eşikleri değerlendirilmesi gösterilmiştir. Iki ağrı test paradigmalar, acı verici, iki büyük periferik sinir lifi popülasyonları bağımsız nosiseptif işleme incelemek, yani miyelinli olmayan C lifleri ve küçük A-delta lifleri miyelinli.

Video: Determining heat and mechanical pain threshold in inflamed skin of human subjects

Using Micro-Electro-Mechanical Systems (MEMS) to Develop Diagnostic Tools

Using Micro-Electro-Mechanical Systems MEMS to Develop Diagnostic Tools

Teşhis Araçları Geliştirmek İçin Mikro-Elektro-Mekanik Sistemler (MEMS)

Biyoloji

Implantation of Engineered Tissue in the Rat Heart

Rodent surgery is often an important component in assessing the utility of engineered tissues. A wide variety of surgical procedures can be performed in common laboratory rats or mice and these quite frequently serve as an intermediate step between bench-top experiments and large animal testing or human trials. Given that rodents provide an established, cost-effective, and physiologically-relevant model system in which to test novel combinations of scaffolding materials and cells, they are particularly well-suited for cardiovascular tissue engineering studies. Presently, we describe an open-heart surgical procedure to implant engineered tissue containing myogenic progenitor cells in the atrioventricular (AV) groove of a rat heart. These implants are intended to create an electrical conduit between the right atrium and right ventricle with the ultimate goal of providing an alternative treatment to conventional pacemaker implantation in pediatric patients with complete heart block[1]. The engineered tissue is implanted in the AV-groove by means of a thoracotomy. For our purposes, Lewis rats are anesthetized and invasively ventilated to maintain positive airway pressure during the sterile surgical procedure. The approach to the heart is performed by a right thoracotomy through an antero-lateral incision at the 5th intercostal space. The tissue construct is fixed in the AV groove using a single 7-0 Prolene suture and positioned between the right ventricle and atrium at the ventral portion of the heart. The epicardium is partially removed to allow direct contact between the recipient myocardial cells and those contained in the engineered tissue. Following implantation, the chest wall is closed in layers, any pneumothorax is evacuated, and the animal is extubated and treated with analgesic.

Here, we describe a cardiac surgical procedure to implant engineered tissue in the atrioventricular (AV)-groove of an adult Lewis rat.

Sıçan Kalp Engineered Doku implantasyonu

Rodent surgery is often an important component in assessing the utility of engineered tissues. A wide variety of surgical procedures can be performed in ...

Demonstration of Cutaneous Allodynia in Association with Chronic Pelvic Pain

Pelvic pain is a common condition that is associated with dysmenorrhea and endometriosis. In some women the severe episodes of cyclic pain change and the resultant pain becomes continuous and this condition becomes known as Chronic Pelvic Pain. This state can be present even after the appropriate medical or surgical therapy has been instituted. It can be associated with pain and tenderness in the muscles of the abdomen wall and intra-pelvic muscles leading to severe dyspareunia. Additional symptoms of irritable bowel and interstitial cystitis are common. A common sign of the development of this state is the emergence of cutaneous allodynia which emerges from the so-called viscero-somatic reflex. A simple bedside test for the presence of cutaneous allodynia is presented that does not require excessive time or special equipment. This test builds on previous work associated with changes in sensation related to gall bladder function and the viscera-somatic reflex(1;2).
The test is undertaken with the subject s permission after an explanation of how the test will be performed. Allodynia refers to a condition in which a stimulus that is not normally painful is interpreted by the subject as painful. In this instance the light touch associated with a cotton-tipped applicator would not be expected to be painful. A positive test is however noted by the woman as suddenly painful or suddenly sharp. The patterns of this sensation are usually in a discrete pattern of a dermatome of the nerves that innervate the pelvis.
The underlying pathology is now interpreted as evidence of neuroplasticity as a consequence of severe and repeating pain with changes in the functions of the dorsal horns of the spinal cord that results in altered function of visceral tissues and resultant somatic symptoms(3). 
The importance of recognizing the condition lies in an awareness that this process may present coincidentally with the initiating condition or after it has been treated. It also permits the clinician to evaluate the situation from the perspective that alternative explanations for the pain may be present that may not require additional surgery.

Demonstration of Cutaneous Allodynia in Association with Chronic Pelvic Pain

A demonstration of the bedside test for cutaneous allodynia and its clinical implications.

Gösterme Deri allodini Kronik Pelvik Ağrı Derneği

Pelvic pain is a common condition that is associated with dysmenorrhea and endometriosis.  In some women the severe episodes of cyclic pain change and the ...

Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate daughter cells that retain the stem cell phenotype and transit-amplifying cells (TA cells) that migrate from the stem cell niche, undergo rapid proliferation and terminally differentiate to repopulate the tissue.
Epithelial stem cells have been identified in the epidermis, hair follicle, and intestine as cells with a high in vitro proliferative potential and as slow-cycling label-retaining cells in vivo 1-3. Adult, tissue-specific stem cells are responsible for the regeneration of the tissues in which they reside during normal physiologic turnover as well as during times of stress 4-5. Moreover, stem cells are generally considered to be multi-potent, possessing the capacity to give rise to multiple cell types within the tissue 6. For example, rodent hair follicle stem cells can generate epidermis, sebaceous glands, and hair follicles 7-9. We have shown that stem cells from the human hair follicle bulge region exhibit multi-potentiality 10.
Stem cells have become a valuable tool in biomedical research, due to their utility as an in vitro system for studying developmental biology, differentiation, tumorigenesis and for their possible therapeutic utility. It is likely that adult epithelial stem cells will be useful in the treatment of diseases such as ectodermal dysplasias, monilethrix, Netherton syndrome, Menkes disease, hereditary epidermolysis bullosa and alopecias 11-13. Additionally, other skin problems such as burn wounds, chronic wounds and ulcers will benefit from stem cell related therapies 14,15. Given the potential for reprogramming of adult cells into a pluripotent state (iPS cells)16,17, the readily accessible and expandable adult stem cells in human skin may provide a valuable source of cells for induction and downstream therapy for a wide range of disease including diabetes and Parkinson's disease.

A rapid, robust way of isolating viable adult epithelial stem cells from human skin is described. The method utilizes enzymatic digestion of skin collagen matrix , followed by plucking of hair follicles and isolation of single cell suspensions or tissue fragments for cell culture.

İnsan Cilt Yetişkin Epitel Kök Hücre İzolasyonu ve Kültür

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate ...

Mechanical Stimulation of Chondrocyte-agarose Hydrogels

Articular cartilage suffers from a limited repair capacity when damaged by mechanical insult or degraded by disease, such as osteoarthritis. To remedy this deficiency, several medical interventions have been developed. One such method is to resurface the damaged area with tissue-engineered cartilage; however, the engineered tissue typically lacks the biochemical properties and durability of native cartilage, questioning its long-term survivability. This limits the application of cartilage tissue engineering to the repair of small focal defects, relying on the surrounding tissue to protect the implanted material. To improve the properties of the developed tissue, mechanical stimulation is a popular method utilized to enhance the synthesis of cartilaginous extracellular matrix as well as the resultant mechanical properties of the engineered tissue. Mechanical stimulation applies forces to the tissue constructs analogous to those experienced in vivo. This is based on the premise that the mechanical environment, in part, regulates the development and maintenance of native tissue1,2. The most commonly applied form of mechanical stimulation in cartilage tissue engineering is dynamic compression at physiologic strains of approximately 5-20% at a frequency of 1 Hz1,3. Several studies have investigated the effects of dynamic compression and have shown it to have a positive effect on chondrocyte metabolism and biosynthesis, ultimately affecting the functional properties of the developed tissue4-8. In this paper, we illustrate the method to mechanically stimulate chondrocyte-agarose hydrogel constructs under dynamic compression and analyze changes in biosynthesis through biochemical and radioisotope assays. This method can also be readily modified to assess any potentially induced changes in cellular response as a result of mechanical stimuli.

The biosynthesis of cartilaginous extracellular matrix by chondrocytes can be affected by application of mechanical stimuli. This method describes the technique of applying dynamic compressive strains to chondrocytes encapsulated in 3D constructs and the evaluation of induced changes in chondrocyte metabolism.

Kondrosit-agaroz Hidrojeller mekanik stimülasyonu

Articular cartilage suffers from a limited repair capacity when damaged by mechanical insult or degraded by disease, such as osteoarthritis. To remedy ...

Digital Inline Holographic Microscopy (DIHM) of Weakly-scattering Subjects

Weakly-scattering objects, such as small colloidal particles and most biological cells, are frequently encountered in microscopy. Indeed, a range of techniques have been developed to better visualize these phase objects; phase contrast and DIC are among the most popular methods for enhancing contrast. However, recording position and shape in the out-of-imaging-plane direction remains challenging. This report introduces a simple experimental method to accurately determine the location and geometry of objects in three dimensions, using digital inline holographic microscopy (DIHM). Broadly speaking, the accessible sample volume is defined by the camera sensor size in the lateral direction, and the illumination coherence in the axial direction. Typical sample volumes range from 200 &#181;m&#160;x 200 &#181;m&#160;x 200 &#181;m using LED illumination, to 5 mm&#160;x 5 mm&#160;x 5 mm or larger using laser illumination. This illumination light is configured so that plane waves are incident on the sample. Objects in the sample volume then scatter light, which interferes with the unscattered light to form interference patterns perpendicular to the illumination direction. This image (the hologram) contains the depth information required for three-dimensional reconstruction, and can be captured on a standard imaging device such as a CMOS or CCD camera. The Rayleigh-Sommerfeld back propagation method is employed to numerically refocus microscope images, and a simple imaging heuristic based on the Gouy phase anomaly is used to identify scattering objects within the reconstructed volume. This simple but robust method results in an unambiguous, model-free measurement of the location and shape of objects in microscopic samples.

Digital Inline Holographic Microscopy DIHM of Weakly-scattering Subjects

The three-dimensional locations of weakly-scattering objects can be uniquely identified using digital inline holographic microscopy (DIHM), which involves a minor modification to a standard microscope. Our software uses a simple imaging heuristic coupled with Rayleigh-Sommerfeld back-propagation to yield the three-dimensional position and geometry of a microscopic phase object.

Zayıf-saçılma Konular Dijital Inline Holografik Mikroskop (DIHM)

Weakly-scattering objects, such as small colloidal particles and most biological cells, are frequently encountered in microscopy. Indeed, a range of ...

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Mitochondrion is a critical intracellular organelle responsible for energy production and intracellular signaling in eukaryotic systems. Mitochondrial dysfunction often accompanies and contributes to human disease. Majority of the approaches that have been developed to evaluate mitochondrial function and dysfunction are based on in vitro or ex vivo measurements. Results from these experiments have limited ability in determining mitochondrial function in vivo. Here, we describe a novel approach that utilizes confocal scanning microscopy for the imaging of intact tissues in live aminals, which allows the evaluation of single mitochondrial function in a real-time manner in vivo. First, we generate transgenic mice expressing the mitochondrial targeted superoxide indicator, circularly permuted yellow fluorescent protein (mt-cpYFP). Anesthetized mt-cpYFP mouse is fixed on a custom-made stage adaptor and time-lapse images are taken from the exposed skeletal muscles of the hindlimb. The mouse is subsequently sacrificed and the heart is set up for Langendorff perfusion with physiological solutions at 37 &deg;C. The perfused heart is positioned in a special chamber on the confocal microscope stage and gentle pressure is applied to immobilize the heart and suppress heart beat induced motion artifact. Superoxide flashes are detected by real-time 2D confocal imaging at a frequency of one frame per second. The perfusion solution can be modified to contain different respiration substrates or other fluorescent indicators. The perfusion can also be adjusted to produce disease models such as ischemia and reperfusion. This technique is a unique approach for determining the function of single mitochondrion in intact tissues and in vivo.

Confocal Imaging of Single Mitochondrial Superoxide Flashes in Intact Heart or In Vivo

Confocal scanning microscopy is applied for imaging single mitochondrial events in perfused heart or skeletal muscles in live animal. Real-time monitoring of single mitochondrial processes such as superoxide flashes and membrane potential fluctuations enables the evaluation of mitochondrial function in a physiologically relevant context and during pathological perturbations.

Tek Mitokondriyal süperoksit Bozulmamış Kalp Flaşlar veya konfokal Görüntüleme<em&gt; In Vivo</em

Mitochondrion is a critical intracellular organelle responsible for energy production and intracellular signaling in eukaryotic systems. Mitochondrial ...

Ex vivo Culture of Mouse Embryonic Skin and Live-imaging of Melanoblast Migration

Melanoblasts are the neural crest derived precursors of melanocytes; the cells responsible for producing the pigment in skin and hair. Melanoblasts migrate through the epidermis of the embryo where they subsequently colonize the developing hair follicles1,2. Neural crest cell migration is extensively studied in vitro but in vivo methods are still not well developed, especially in mammalian systems. One alternative is to use ex vivo organotypic culture3-6. Culture of mouse embryonic skin requires the maintenance of an air-liquid interface (ALI) across the surface of the tissue3,6. High resolution live-imaging of mouse embryonic skin has been hampered by the lack of a good method that not only maintains this ALI but also allows the culture to be inverted and therefore compatible with short working distance objective lenses and most confocal microscopes. This article describes recent improvements to a method that uses a gas permeable membrane to overcome these problems and allow high-resolution confocal imaging of embryonic skin in ex vivo culture6. By using a melanoblast specific Cre-recombinase expressing mouse line combined with the R26YFPR reporter line we are able to fluorescently label the melanoblast population within these skin cultures. The technique allows live-imaging of melanoblasts and observation of their behavior and interactions with the tissue in which they develop. Representative results are included to demonstrate the capability to live-image 6&#160;cultures in parallel.

Ex vivo Culture of Mouse Embryonic Skin and Live-imaging of Melanoblast Migration

We describe the dissection and ex vivo culture of mouse embryonic skin. The culture system maintains an air-liquid interface across the tissue surface and allows imaging on an inverted microscope. Melanoblasts, a component of the developing skin, are fluorescently labeled allowing their behavior to be observed using confocal microscopy.

Fare Embriyonik Cilt ve Melanoblast Göç Canlı görüntüleme ex vivo Kültür

Melanoblasts are the neural crest derived precursors of melanocytes; the cells responsible for producing the pigment in skin and hair. Melanoblasts ...

Efficient Generation Human Induced Pluripotent Stem Cells from Human Somatic Cells with Sendai-virus

A few years ago, the establishment of human induced pluripotent stem cells (iPSCs) ushered in a new era in biomedicine. Potential uses of human iPSCs include modeling pathogenesis of human genetic diseases, autologous cell therapy after gene correction, and personalized drug screening by providing a source of patient-specific and symptom relevant cells. However, there are several hurdles to overcome, such as eliminating the remaining reprogramming factor transgene expression after human iPSCs production. More importantly, residual transgene expression in undifferentiated human iPSCs could hamper proper differentiations and misguide the interpretation of disease-relevant in vitro phenotypes. With this reason, integration-free and/or transgene-free human iPSCs have been developed using several methods, such as adenovirus, the piggyBac system, minicircle vector, episomal vectors, direct protein delivery and synthesized mRNA. However, efficiency of reprogramming using integration-free methods is quite low in most cases.
Here, we present a method to isolate human iPSCs by using Sendai-virus (RNA virus) based reprogramming system. This reprogramming method shows consistent results and high efficiency in cost-effective manner.

Here, we present our established method to reprogram human somatic cells into transgene-free human iPSCs with Sendai virus, which shows consistent outcome and enhanced efficiency.

Sendai-virüs ile İnsan Somatik Verimli Üretimi İnsan uyarılmış pluripotent kök hücrelerin

A few years ago, the establishment of human induced pluripotent stem cells (iPSCs) ushered in a new era in biomedicine. Potential uses of human iPSCs ...

Gap Junctional Intercellular Communication: A Functional Biomarker to Assess Adverse Effects of Toxicants and Toxins, and Health Benefits of Natural Products

This protocol describes a scalpel loading-fluorescent dye transfer (SL-DT) technique that measures intercellular communication through gap junction channels, which is a major intercellular process by which tissue homeostasis is maintained. Interruption of gap junctional intercellular communication (GJIC) by toxicants, toxins, drugs, etc. has been linked to numerous adverse health effects. Many genetic-based human diseases have been linked to mutations in gap junction genes. The SL-DT technique is a simple functional assay for the simultaneous assessment of GJIC in a large population of cells. The assay involves pre-loading cells with a fluorescent dye by briefly perturbing the cell membrane with a scalpel blade through a population of cells. The fluorescent dye is then allowed to traverse through gap junction channels to neighboring cells for a designated time. The assay is then terminated by the addition of formalin to the cells. The spread of the fluorescent dye through a population of cells is assessed with an epifluorescence microscope and the images are analyzed with any number of morphometric software packages that are available, including free software packages found on the public domain. This assay has also been adapted for in vivo studies using tissue slices from various organs from treated animals. Overall, the SL-DT assay can serve a broad range of in vitro pharmacological and toxicological needs, and can be potentially adapted for high throughput set-up systems with automated fluorescence microscopy imaging and analysis to elucidate more samples in a shorter time.

This protocol describes a scalpel loading-fluorescent dye transfer technique that measures intercellular communication through gap junction channels. Gap junctional intercellular communication is a major cellular process by which tissue homeostasis is maintained and disruption of this cell signaling has adverse health effects.

Gap Junctional Hücreler arası iletişim: Doğal Ürünler Toksikantların ve Toksinler Yan Etkileri değerlendirmek için Fonksiyonel Biyomarker ve Sağlık Faydaları

This protocol describes a scalpel loading-fluorescent dye transfer (SL-DT) technique that measures intercellular communication through gap junction ...