Bu çalışma American Diabetes Association (ADA), Grant JF1-10-14 (MDiF) tarafından finanse edildi. Biz WSU az Hayvan Kaynakları Laboratuvarı personeline teşekkür etmek istiyorum. Yazarlar minnetle Neil Paton, doktora gelen verilerin istatistiksel analizi ile yardım kabul

Fare ve sıçanların TNTs kullanılarak belirlenir artan sıcak-plate metre [iHPAM, IITC A.Ş. Yaşam Bilimleri (Woodland Hills, CA)]. ; Veri toplama için bir ısı kontrol ünitesi, yazılım (IITC Bölüm # Yumuşak Serisi 8), bir PC (kişisel altındaki ısıtma sistemi ve yukarıda bir pleksiglas gözlem odası ile bir alüminyum plaka (10 x 20 cm): ekipmanları birkaç bileşenden oluşur bilgisayar) ve bir ayak pedalı uzaktan başlangıç ​​için, durdurmak veya birimin kontrol sıfırlayın. Isıtma sistemi de başlangıç ​​/ durdurma / ekipman önünde bir tuş takımı üzerinden manuel ısıtma sürecinin sıfırlamayı sağlar. IHPAM çeşitli ısıtma hızları, bekleme / eşik sıcaklığa ayarlanabilir. 1. Ekipman Set-up <ol><li> Test hayvanları önce, görsel olarak seçilen ısıtma hızı (örneğin, 6 ° C / dk), başlangıç ​​bekleme ve kesme son sıcaklıklarda (örneğin 28 ° C ile 55 ° C, sırasıyla) corroborate üniteyi inceleyin. </li><li> Tüm bağlantıları kontrol edin. Sonuçlarının elektronik kopyasını tutmak için, birim Yazılım Serisi 8 çalıştıran bir bilgisayara bağlı olması gerekir. Alternatif olarak, sonuçların sabit kopya birim seri port üzerinden dışarı basılabilir. </li><li> Ekipmanı test edin. İlk bekleme, son kesme sıcaklıkları ve kesme sıcaklığa ulaşması için gereken saniye cinsinden zamanı: Yazılım Serisi 8 kayıtları veri emin olmak için bir kez ayak basın. </li><li> Bir başka kontrol testi olarak, deney dahil araştırmacılar kendilerini cihazı tecrübe gerekebilir. Ağrı algı anı (46-48 ° C) saçtan elini çekme ne cilde zarar ne de daha sonraki herhangi bir rahatsızlık oluşturur gerekir. </li><li> Birimi kurmak ve adımları 1.3 ve 1.4 sonuçları kaydedildi kez onlar karşılaştırılabilir. Bu ünitenin kullanımı geçersiz olabilecek olası sorunları tespit etmek yararlı olur. Örneğin, başlangıç ​​/ nihai bekleme kesme tempe arasındaki uyumsuzluklarratures ve gerçek biriminin okunması ve / veya birimi ve elle çekilmesi için gerekli olan gerçek plaka sıcaklığı ile gösterilen sıcaklıkları arasında farklılıklar. </li></ol> 2. Normal Hayvanlar Test Ya genç veya yetişkin Wistar rat [post-natal (p) yaşı 21-25 gün], veya herhangi bir genetik arka plan veya cinsiyet farelerde (p21-25) kullanılabilir. Deneylerde kullanılan farelerin suşu C57BL/6J taşımaktadır. <ol><li> Deneyler yapılacak gece önce, iHPAM yerleştirilir bankta kafese koyarak hayvanlar alıştırıldı. Testleri yapılmadan önce iki saat, birimin arka plan gürültü ile hayvanları tanıtmak iHPAM açın. Bu noktada, iHPAM kurmak ve (Adımlar 1) düzgün fonksiyonu doğrulamak için test edilebilir. Yiyecek ve su hayvan (Basamak 2.1) gözlem odacık içinde olması durumu dışında, test boyunca ad libitum sağlanır. Not: Bu impdavranışsal deneylerde laboratuar koşullarında varsayılan tarafından kontrol edildiğini varsaymak değil ortant. Özel dikkat davranışsal çalışmalar (7 Yorumlar) sonucunu etkileyebilecek genetik ve çevresel faktörlere dikkat edilmelidir. </li><li> Yavaşça birim ısıtma plakası üstünde Pleksiglas gözlem odasında normal bir fare / sıçan yerleştirin. Hayvan rahat bir davranışı gösterir kadar hayvan ısıtılmış yüzey (° C ile 28 olarak belirlenmiştir) gelmesini bekleyin. Not: Bu koşullar altında normal erişkin sıçan koklama sırasında zaman zaman gözlem odasının kapağı yukarı doğru duran, bir ilk keşif davranışı göstermektedir. Birkaç dakika sonra, sıçanlar damat gündelik nöbetleri ve rahat bir davranış gösterebilir. Raslantı Çevreyi koklama ederken Bazen, fareler rahat bir vücut postürü (eğilimli uzantısı) ile yatıyordu. Normal fare genellikle sıçan daha aktiftir. Ancak, fareler i birkaç dakika sonra rahat bir keşif davranışı göstermekgözlem odası n. Bu ya (örneğin, atlama, gözlem odasından kaçmaya çalışırken) kaçan davranışlar veya savunma tutumları (örneğin, squealing) gözlemlemek oldukça nadirdir. Farelerin bir fare diğerine 8 ağrı iletişim dikkat etmek de önemlidir. Bu nedenle, ayrı kafeslere yerleştirilir testi fareler için önemli olabilir. </li><li> Yeri her açıda gözlemler izin vermek, gözlem odasının arka yansıtır. Bir dijital video kamera tutan bir üçayak nocifensive (ağrı kaçınarak) davranış ortaya çıkmıştı hangi anı belirlemek için yardımcı olabilir. </li><li> Bir kez hayvan ayak basarak plakası kadar gözlem odasında sıcağında rahat. Plaka sıcaklığı 6 ° C / dakika hızında ısındığı zaman, normal hayvanlar ya arka-pençe içeren nocifensive davranışlar 46 ila 48 ° C 3,5,9,10 için öfkeli * Genellikle sıcaklıklar. Böylece, hayvan gözlemler, tipik çıkarıldı formuduryaklaşık 3 dakika sonra ation odası. Not: sallayarak ve / veya kaldırma sırasında bir fare ya da fare yani tipik nocifensive yanıtı gözlemek, arka-pençe, yalama, termal uyaran sona erdirmek için yeterlidir. Bu, ayak pedalı presleme ile elde edilir. Bu noktada, yazılım plaka sıcaklığı kaydeder ve plaka hemen bekleme sıcaklığında (28 ° C) kadar soğur (~ 0.5 dakika) ulaşılır. Bu sıcaklık, yani herhangi bir nocifensive tepki uyandıran bir normal (kontrol) hayvanın zararlı ısı eşiği (TNT) olarak kabul edilir. * Bazen, özellikle farelerde, zararlı sıcaklığına nocifensive davranışı ilk görülen veya her iki forepaws (örneğin, otururken yalama), birkaç saniye arka-pençeleri önce olabilir. Bununla beraber, ön-pençe yalamaya bakım davranış normal bir bileşendir. Bundan dolayı, sadece arka pençe-reaksiyonlar değerlendirilir. Durumlarda ise farelerin de onların arka-pençeleri damat olabilir. Ancak, normal bir tımar n doBirkaç saniye öteye ot, yalama yoğun içermez ve genellikle onun pençeleri temizledikten sonra sona erer. </li><li> Yavaşça plakadan hayvan kaldırmak ve ilgili kafese yerleştirin. Isı eşik ölçümleri daha sonra diğer kontrol (normal) bir hayvan için tekrarlanır. Not: TNTs gözlem odasından gelen hayvan çıkarmadan 1-2 dakika aralıklar ile tek bir hayvanda tespit edilebilir. Sıçan ya da fare TNT tespitler birkaç gün içinde birkaç kez tekrarlanabilir. Bu, ortalama bir birey hayvanın TNT yanı sıra, yaş ile değişimlerini belirlemek için özellikle yararlıdır. </li><li> Kontrol hayvanları TNT, üç ya da daha fazla eşik ± SEM ortalaması olarak ifade edilir. </li><li> Elde edilen verilerin istatistiksel analizi farelere veya sıçanlara farklı tedavi grupları karşılaştırmak için yapılır. Varyans analizi de dahil olmak üzere Parametrik prosedürler uygun veriler normal dağılım nerede kullanılır ve tedavi gruplarının homo nerede olabilirskedastic; bu koşullar aşağıdaki yaklaşımlar uygulanabilir tatmin edildiğinde. Ile birlikte / tedavi edilmeden veya farklı zaman noktalarında (örn., Şekil 3 içinde verilerin) bireysel TNTs tekrarlanmıştır birden ölçümleri yani farklılıklar tespit etmek için Newman-Keuls testi, ardından varyans analizi. Eşleştirilmiş Student t-testi ilaç tedavisinden sonra vs önce iki veri grupları, yani TNTs karşılaştırmak için kullanılabilir; t-testi eşleştirilmemiş (örneğin araç ile tedavi edilen hayvanlar vs uyuşturucu tedavi edilen TNT değişiklikler farklılıkları belirlemek için kullanılabilir Şekil 4, veri). </li></ol> 3. Diyabetik Hayvanlar Test Streptozotosin (STZ) ile diyabet sıçan PDN mekanizmaları incelemek ve analjezik ilaçlar ve tedaviler 11,12 değerlendirmek için en sık kullanılan hayvan modelidir. Sıçanlar STZ bir intraperitoneal tek doz (60 mg / kg) olabilir b tarafından yapılan diyabetike diyabet 11 başlangıcından sonra 3. haftasında termal hiperaljezi için test. O değil tüm diyabetik sıçanlarda PDN geliştirmeye dikkat etmek önemlidir. Bununla birlikte, hiperaljezi (~% 50) geliştirmek mi hayvanların kolayca tespit edilebilir. Gerçekten de, kendi TNTs Normal * daha düşüktür. C yerine, 28 * STZ-diyabetik sıçan TNTs belirlemek için, 15 bir başlangıç ​​plaka sıcaklığı ° C kullanılır. Bu değişimin nedeni PDN ile en diyabetik hayvan hiperaljezik 2,11 olması bekleniyor olmasıdır. Bu nedenle, normal zararlı ısı eşikleri daha düşük olacaktır (örneğin, &lt;45 ° C). <ol><li> A, diyabetik sıçan test cihazının üst kısmında gözlem haznesi yerleştirilir. Hayvan, hayvan rahat bir davranışı gösterir kadar plaka yüzeyine gelmesini izin verilir. Not: Tipik olarak, bir diyabetik sıçan normal davranış çok göstermez. Diyabetik sıçanlarda uyuşuk, genellikle hipoaktif vardır; genellikle gösterenhareket kısıtlılığı ve yavaş tımar. Bu gözlem odasının kapağı doğru sıralamalar gözlemlemek nadirdir. Birkaç dakika sonra, diabetik ratlarda sakince rahat çevrenin koklama ile, odanın bir köşesinde kalabilirsiniz. </li><li> Diyabetik hayvan gözlem odasında rahat bir kez diyabetik sıçan arka / ön pençesini ya içeren nocifensive davranışlar gösterebilir Adım 2.3 gibi, plaka ısıtılır. Bu genellikle zararlı olmayan plaka sıcaklıkları (örneğin, &lt;45 ° C), ya da 6 ° C / dk sıcaklık artışı ile birlikte odasında en fazla 5 dakika sonra olur. Not: Bir genç erişkin diyabetli sıçanlarda nocifensive tepkisi normal bir sıçan bu farklı değildir. Ancak, bu tür davranışları çağrıştıran en düşük sıcaklık önemli ölçüde azaltılmaktadır. </li><li> Adım 2.4 bak </li><li> Deney günü içinde üçten fazla eşiklerinin ortalama ° C olarak ifade edilen ortalama ± SEM diabeti bir zehirli ısı eşik olarak kabul edilirc hayvan. Not: birine benzer bir paradigma normal veya diabetik ratlarda için açıklanan ısı eşiklerinde analjezik termal anti-nocifensive etkisini belirlemek için takip edilebilir. </li></ol> 4. Test Analjezi Ilaçların anti-nosiseptif özellikleri (örn., analjezikler) yanı sıra, bu en az etkili bir doz olarak farmakolojik parametrelerinin belirlenmesi kolayca yukarıda anlatılan aşamalara göre elde edilebilir. Bu sıçanlar / farelere bir analjezik uygun dozlarda kendi TNTs artacağı tahmin edilmektedir. Bu termal hiperaljezi 3 olan hayvanlarda, özellikle duyarlıdır. Ancak, sonuçların yorumlanması önyargı önlemek için, bir hayvan grubunun davranış gözlem katılan araştırmacılar bilmek ya da hayvanların tedavi veya değil olsaydı farkında olmamalıdır. Ayrıca, gözlemci tarafından enjekte edilecek ilaçların başka bir araştırmacı tarafından hazırlanan ve etiketli olabilirA, B, C, vb Dozaj tanımlanan hayvan başına tek tek doz listeleyen bir çıktı sağlanmaktadır. Test edilecek ilaç ile ilgili olarak, potansiyel bir analjezik farklı dozlar normal veya diabetik hayvanlar 5-15 dakika önce, davranış testleri için de uygulanabilir. Uygun denetimleri dahil (örneğin, taşıt enjekte yaştaki hayvanlar tek başına ve / veya PDN olmayan diyabetik sıçan) ve (plaka örneğin, aynı başlangıç ​​sıcaklığı) aynı koşullar kullanılarak test edilmelidir. Ilaçların kronik etkileri de test edilebilir. 5.. Temsilcisi Sonuçlar Genç yetişkin, normal olmayan sıçanlarda veya farelerin ya arka-pençesinde nocifensive reaksiyonlar çağrıştıran düşük plaka sıcaklığı 2-6 aşağıdaki adımları 2-1 belirlendi. Şekil 1 normal, genç yetişkin sıçan ve farelerin TNT gösterildiği gibi idi 47.2 ± 0.2 ° C ve 47.5 ± 0.5 ° C idi. Biz obse varbireyin TNTs (Şekil 2A), ne de aynı yaştaki bireylerin (Şekil 2B) arasında TNTs önemli değişiklikler SVEd ne önemli günlük değişim. Cinsiyet nedeniyle TNT farklar (gösterilmemiştir) görülmedi. Genç erişkin STZ-diyabetik sıçan TNTs normal farelere (Adımlar 3,1-3,3) için de benzer bir şekilde belirlenmiştir. Ancak, başlangıç ​​plakası sıcaklığı 15 ayarlandı ° C yerine 28 ° C STZ-diyabetik sıçan nocifensive davranışının bir birey içinde ve onbir gün post-STZ enjeksiyon başlangıç ​​günlük bir şekilde, en az üç kez değerlendirildi. Şekil 3, STZ-diyabetik sıçan TNT önemli bir düşüş (p &lt;0.01) &#39;de gösterildiği belirgindir iki hafta post-STZ enjeksiyon hale gelir. STZ-diyabetik sıçanların ortalama TNT 45.6 ± 0.1 ° C (n = 16, 14-23 gün birikintilerini değerleri). Norma göre anlamlı derecede düşük TNT sergileyerek Diyabetik sıçanlardal PDN olarak değerlendirildi. Bunlar, sıçanlar, bir analjezik, anti-akut nosiseptif özellikleri (bileşik A) test etmek için kullanıldı. TNTs beş dakika testinden önce tek başına bileşik veya aracı ya tek bir dozunun enjekte normal ve diyabetik sıçan belirlendi. Aracın tek başına (45.6 ° C vs 47.6 ° C, sırasıyla) ile tedavi edilen sıçanlarda karşılaştırıldığında, Şekil 4&#39;te gösterildiği gibi, bileşiğin tek bir doz periton içi önemli ölçüde diyabetik sıçan TNTs artmıştır. Bileşik A ve anti-nocifensive etkisi ayrıca normal farelere görülmüştür;. Önemlidir (p &lt;0.01), bu daha az belirgin (47.4 ° C vs 48.0 ° C, sırasıyla) olmasına rağmen, <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/3785/3785fig1.jpg" /> Şekil 1.. Normal yetişkin genç sıçan veya fare TNTs Tayini: erişkinlerde sıçanları (p21-24) veya farelerin (P20-21) arasında TNTs adımları abo anlatılanlara iHPAM test edilmiştirettik. 12, sıçan ve farelerin 25 arasında olan toplam test edildi. Ölçümleri birkaç gün içinde yapıldı ve sonuçlar toplandı. Sonuçlar ortalama ± SEM olarak ifade edildi. Bu fareler kaydedilen minimum ve maksimum değerler TNT 46.2 ° C ve 48.6 ° C idi. Farelerin durumunda, kayıt maksimum ve minimum değerlerinin TNT sırasıyla 48.8 ° C ila 44.9 ° C idi. <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/3785/3785fig2.jpg" /> Şekil 2. Sıçanlar ve fareler TNTs Yaşı-bağımlılık: A) çizilen 5 gün boyunca en az günde üç kez tespit yaş 21 gün dört normal ratlar (n = 4) TNTs olan B) farelerin TNTs belirtilen bir kez tespit littermates. yaşları. Her belirlenmesi nokta üst üste sayılar kullanılır littermates sayısını temsil eder. <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/3785/3785fig3.jpg" /> Şekil 3. Diyabetik sıçanlarda hiperaljezik 3 haline bizDiyabetin başlangıcından sonra eks: altı (n = 6) yaşça genç erişkin STZ-diyabetik sıçan TNTs 11 gün diyabet sonrası indüksiyon başlangıç ​​her gün belirlendi. TNT günlük ortalamalar (ortalama ± SEM) gösterilir. 11-13 gün sonrası STZ enjeksiyonu arasında tespit Diyabetik TNTs normal sınırlarda (kırmızı çizgi) içinde idi. STZ enjeksiyonu TNTs 45.1 olarak ölçüldü İki hafta sonra ± 0.4 ° ​​C (p &lt;0.05). <img alt="Şekil 4" src="/files/ftp_upload/3785/3785fig4.jpg" /> Şekil 4. STZ-Diyabetik sıçanlarda bileşik B Akut anti-nocifensive etkiler. Genç erişkin normal farelere (mavi grubu n = 12) ve yaş STZ-diyabetik sıçan hiperaljezik (yeşil grubu n = 6) araç intraperitoneal sonra iHPAM test edilmiştir eşleştirilmiş (koyu çubuklar) ya da bileşik, A (açık çubuklar). Her bir işlem (aracın kontrolü ya da bileşik, A-arıtılmış) için ortalama ± SEM TNT gösterilmiştir. Asteriskler istatistiksel olarak farklılık göstermek(P &lt;0.05).

<ol>
	<li>Baron, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+neuropathic+pain:+From+mechanisms+to+symptoms.">Peripheral neuropathic pain: From mechanisms to symptoms.</a> Clin. J. Pain. 16, S12-S20 (2000).</li><li>Calcutt, N. A., Jorge, M. C., Yaksh, T. L., Chaplan, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tactile+allodynia+and+formalin+hyperalgesia+in+streptozotocin-diabetic+rats:+Effects+of+insulin,+aldose+reductase+inhibition+and+lidocaine.">Tactile allodynia and formalin hyperalgesia in streptozotocin-diabetic rats: Effects of insulin, aldose reductase inhibition and lidocaine.</a> Pain. 68, 293-299 (1996).</li><li>Bolcskei, K., Petho, G., Szolcsanyi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noxious+heat+threshold+measured+with+slowly+increasing+temperatures:+Novel+rat+thermal+hyperalgesia+models.">Noxious heat threshold measured with slowly increasing temperatures: Novel rat thermal hyperalgesia models.</a> Methods Mol. Biol. 617, 57-66 (2010).</li><li>Ankier, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+hot+plate+tests+to+quantify+antinociceptive+and+narcotic+antagonist+activities.">New hot plate tests to quantify antinociceptive and narcotic antagonist activities.</a> Eur. J. Pharmacol. 27, 1-4 (1974).</li><li>Almasi, R., Petho, G., Bolcskei, K., Szolcsanyi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+resiniferatoxin+on+the+noxious+heat+threshold+temperature+in+the+rat:+A+novel+heat+allodynia+model+sensitive+to+analgesics.">Effect of resiniferatoxin on the noxious heat threshold temperature in the rat: A novel heat allodynia model sensitive to analgesics.</a> Br. J. Pharmacol. 139, 49-58 (2003).</li><li>Bolcskei, K., Horvath, D., Szolcsanyi, J., Petho, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heat+injury-induced+drop+of+the+noxious+heat+threshold+measured+with+an+increasing-temperature+water+bath:+A+novel+rat+thermal+hyperalgesia+model.">Heat injury-induced drop of the noxious heat threshold measured with an increasing-temperature water bath: A novel rat thermal hyperalgesia model.</a> Eur. J. Pharmacol. 564, 80-87 (2007).</li><li>Chesler, E. J., Wilson, S. G., Lariviere, W. R., Rodriguez-Zas, S. L., Mogil, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+ranking+of+genetic+and+laboratory+environment+factors+influencing+a+behavioral+trait,+thermal+nociception,+via+computational+analysis+of+a+large+data+archive.">Identification and ranking of genetic and laboratory environment factors influencing a behavioral trait, thermal nociception, via computational analysis of a large data archive.</a> Neurosci. Biobehav. Rev. 26, 907-923 (2002).</li><li>Langford, D. J., Crager, S. E., Shehzad, Z., Smith, S. B., Sotocinal, S. G., Levenstadt, J. S., Chanda, M. L., Levitin, D. J., Mogil, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Social+modulation+of+pain+as+evidence+for+empathy+in+mice.">Social modulation of pain as evidence for empathy in mice.</a> Science. 312, 1967-1970 (2006).</li><li>Hunt, S. P., Koltzenburg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The neurobiology of pain. , (2005).</li><li>Willis, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The pain system : The neural basis of nociceptive transmission in the mammalian nervous system. , (1985).</li><li>Calcutt, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Modeling diabetic sensory neuropathy in rats. In: Methods in molecular medicine. Pain research: Methods and protocols. , (2004).</li><li>Bars, D. L. e., Gozariu, M., Cadden, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+nociception.">Animal models of nociception.</a> Pharmacol. Rev. 53, 597-652 (2001).</li><li>Shaikh, A. S., Somani, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+and+biomarkers+of+neuropathy+in+diabetic+rodents.">Animal models and biomarkers of neuropathy in diabetic rodents.</a> Indian J. Pharmacol. 42, 129-134 (2010).</li><li>Hargreaves, K., Dubner, R., Brown, F., Flores, C., Joris, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+and+sensitive+method+for+measuring+thermal+nociception+in+cutaneous+hyperalgesia.">A new and sensitive method for measuring thermal nociception in cutaneous hyperalgesia.</a> Pain. 32, 77-88 (1988).</li><li>Hardy, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Method+for+the+rapid+measurement+of+skin+temperature+during+exposure+to+intense+thermal+radiation.">Method for the rapid measurement of skin temperature during exposure to intense thermal radiation.</a> J. Appl. Physiol. 5, 559-566 (1953).</li><li>Sumino, R., Dubner, R., Starkman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Responses+of+small+myelinated+&amp;quot;warm&amp;quot;+fibers+to+noxious+heat+stimuli+applied+to+the+monkey's+face.">Responses of small myelinated &amp;quot;warm&amp;quot; fibers to noxious heat stimuli applied to the monkey's face.</a> Brain Res. 62, 260-263 (1973).</li><li>Hammond, D. L., Ruda, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+alterations+in+thermal+nociceptive+threshold+and+the+distribution+of+immunoreactive+calcitonin+gene-related+peptide+and+substance+p+after+neonatal+administration+of+capsaicin+in+the+rat.">Developmental alterations in thermal nociceptive threshold and the distribution of immunoreactive calcitonin gene-related peptide and substance p after neonatal administration of capsaicin in the rat.</a> Neurosci. Lett. 97, 57-62 (1989).</li></ol>

Biz bu deneylerde kullanılan analjezik kimliğini ifşa etmemeyi karar verdik. Burada gösterilen sonuçların bir kısmı Amerikan Diyabet Derneği (San Diego CA) ve diyabet (Lizbon, Portekiz) Çalışmaları, Avrupa Birliği 47 inci Yıllık Toplantısı 71 st Bilimsel Toplantısı&#39;nda sunulan edilmiştir.

Benzer şekilde termal hiperaljezi 4,13 ölçmek için klasik hot plate testi, nosisepsiyon tayininde burada açıklanan sıçanlar ve fareler nocifensive davranışı ölçmek için hızlı ve güvenilir bir şekilde izin verir. Ancak, klasik test aksine, artan sıcak-levha yöntemi non-invaziv ve neredeyse stressiz olduğunu. Dizginlemek bazı (yani, hayvanın gözlem odasında olmalı) testi gerçekleştirmek için gerekli olmakla birlikte, sıçan ya da fare benzeri alanlarda (örneğin,...

<table border="1"><tbody><tr><td> Isim </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> Artımlı Hot-Plate Analjezi Metre </td><td> IITC A.Ş. Yaşam Bilimleri </td><td> Part # PE34 </td></tr><tr><td> Yumuşak Serisi 8 </td><td> IITC A.Ş. Yaşam Bilimleri </td><td> Part # Series8 </td></tr><tr><td> Streptozosin </td><td> Calbiochem </td><td> 572201 </td></tr></tbody></table>

rapid determination of the thermal nociceptive threshold in diabetic rats

Ağrılı diyabetik nöropati (PDN) hiperaljezi, yani zararlı uyarana artmış duyarlılığı ve allodini yani, normalde zararsız 1 uyaranlara karşı aşırı duyarlılığı ile karakterize edilir. Hiperaljezi ve allodynia 2 diabetes mellitus, birçok farklı kemirgen modellerinde incelenmiştir. Ancak, Bölcskei ark, hayvan modellerinde &quot;acı&quot; nın belirlenmesi belirttiği kendi öznel doğası 3 dolayı zordur. Ayrıca, zararlı termal uyaranlara davranışsal tepkileri belirlemek için kullanılan geleneksel yöntemler genellikle tekrarlanabilirlik ve farmakolojik hassasiyeti 3 yoksundur. Örneğin, Ankier 4 arasında sıcak plaka yöntemi kullanılarak, kılını, yoksunluk ve / ya da arka-ve / veya ön-pençelerin yalamaya sabit bir yüksek ısı uyarıcılar (52-55 ° C) refleksi olarak ölçülür. Ancak, termal uyarana hiperaljezik hayvanların tekrarlanabilir yeniden farklılıklar görünmüyorbu supra-eşik sıcaklıkları 3,5 kullanarak esnek gecikmeleri. Bölcskei ve ark. 6 arasında yakın zamanda açıklanan bir yöntem olarak, burada açıklanan prosedürler farelerde ve sıçanlarda termal nosiseptif eşiklerinin hızlı, hassas ve kesin olarak belirlenmesi (TNTs) sağlar. Metodu fare / sıçan plantar yüzeyinin derisine uygulanmış çok yavaş artan termal uyaran kullanır. Yöntemi gibi PDN gibi hiperaljezik devletleri sırasında, anti-nosisepsiyon incelemek için duyarlıdır. Körük açıklanan prosedürler Almasi ark 5 ve Bölcskei ark 3 ile detaylı olarak yayınlanan olanlar dayanmaktadır. Prosedürler Laboratuar Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (LACUC), Wright State University onaylanmıştır Burada anlatılan.

Watch this Scientific Journal Video about Rapid Determination of the Thermal Nociceptive Threshold in Diabetic Rats at JoVE.com

Rapid Determination of the Thermal Nociceptive Threshold in Diabetic Rats

Burada, biz, sıçan ya da fare nocifensive davranışı göstermek olduğu en düşük sıcaklık belirlemek için hızlı, güvenilir ve basit bir prosedür tarif<em&gt; Yani</em&gt;<em&gt; Termal nosiseptif eşiği</em&gt; (TNT). Eğer varsa bu yöntem hayvanlara, stres, en az TNTs hassas ve tekrarlanabilir bir tahmini sağlayan bir yavaş artan termal uyaran de geçerlidir.

Diyabetik Sıçanlarda Termal Nosiseptif Eşik Hızlı Belirlenmesinde

Painful diabetic neuropathy (PDN) is characterized by hyperalgesia i.e., increased sensitivity to noxious stimulus, and allodynia i.e., hypersensitivity ...

rapid-determination-thermal-nociceptive-threshold-diabetic

Research

JoVE Journal

Neuroscience

27.4K Görüntüleme.  Wright State University. Burada, biz, sıçan ya da fare nocifensive davranışı göstermek olduğu en düşük sıcaklık belirlemek için hızlı, güvenilir ve basit bir prosedür tarif Yani Termal nosiseptif eşiği (TNT). Eğer varsa bu yöntem hayvanlara, stres, en az TNTs hassas ve tekrarlanabilir bir tahmini sağlayan bir yavaş artan termal uyaran de geçerlidir.

Video: Rapid Determination of the Thermal Nociceptive Threshold in Diabetic Rats

A General Method for Evaluating Incubation of Sucrose Craving in Rats

For someone on a food-restricted diet, food craving in response to food-paired cues may serve as a key behavioral transition point between abstinence and relapse to food taking 1. Food craving conceptualized in this way is akin to drug craving in response to drug-paired cues. A rich literature has been developed around understanding the behavioral and neurobiological determinants of drug craving; we and others have been focusing recently on translating techniques from basic addiction research to better understand addiction-like behaviors related to food 2-4.
As done in previous studies of drug craving, we examine sucrose craving behavior by utilizing a rat model of relapse. In this model, rats self-administer either drug or food in sessions over several days. In a session, lever responding delivers the reward along with a tone+light stimulus. Craving behavior is then operationally defined as responding in a subsequent session where the reward is not available. Rats will reliably respond for the tone+light stimulus, likely due to its acquired conditioned reinforcing properties 5. This behavior is sometimes referred to as sucrose seeking or cue reactivity. In the present discussion we will use the term "sucrose craving" to subsume both of these constructs.
In the past decade, we have focused on how the length of time following reward self-administration influences reward craving. Interestingly, rats increase responding for the reward-paired cue over the course of several weeks of a period of forced-abstinence. This "incubation of craving" is observed in rats that have self-administered either food or drugs of abuse 4,6. This time-dependent increase in craving we have identified in the animal model may have great potential relevance to human drug and food addiction behaviors.
Here we present a protocol for assessing incubation of sucrose craving in rats. Variants of the procedure will be indicated where craving is assessed as responding for a discrete sucrose-paired cue following extinction of lever pressing within the sucrose self-administration context (Extinction without cues) or as responding for sucrose-paired cues in a general extinction context (Extinction with cues).

Responding for food or drug-paired cues increases over the course of a period of abstinence and this may relate to an increased susceptibility to relapse behaviors. Here we detail a procedure for evaluating this "incubation of craving" in rats that have self-administered sucrose.

Sıçanlarda Sakkaroz Craving Kuluçka değerlendirilmesi için Genel Bir Yöntem

For someone on a food-restricted diet, food craving in response to food-paired cues may serve as a key behavioral transition point between abstinence and ...

Nörobilim

Local and Global Methods of Assessing Thermal Nociception in Drosophila Larvae

In this article, we demonstrate assays to study thermal nociception in Drosophila larvae. One assay involves spatially-restricted (local) stimulation of thermal nociceptors1,2 while the second involves a wholesale (global) activation of most or all such neurons3. Together, these techniques allow visualization and quantification of the behavioral functions of Drosophila nociceptive sensory neurons.
The Drosophila larva is an established model system to study thermal nociception, a sensory response to potentially harmful temperatures that is evolutionarily conserved across species1,2. The advantages of Drosophila for such studies are the relative simplicity of its nervous system and the sophistication of the genetic techniques that can be used to dissect the molecular basis of the underlying biology4-6 In Drosophila, as in all metazoans, the response to noxious thermal stimuli generally involves a "nocifensive" aversive withdrawal to the presented stimulus7. Such stimuli are detected through free nerve endings or nociceptors and the amplitude of the organismal response depends on the number of nociceptors receiving the noxious stimulus8. In Drosophila, it is the class IV dendritic arborization sensory neurons that detect noxious thermal and mechanical stimuli9 in addition to their recently discovered role as photoreceptors10. These neurons, which have been very well studied at the developmental level, arborize over the barrier epidermal sheet and make contacts with nearly all epidermal cells11,12. The single axon of each class IV neuron projects into the ventral nerve cord of the central nervous system11 where they may connect to second-order neurons that project to the brain.
Under baseline conditions, nociceptive sensory neurons will not fire until a relatively high threshold is reached. The assays described here allow the investigator to quantify baseline behavioral responses or, presumably, the sensitization that ensues following tissue damage. Each assay provokes distinct but related locomotory behavioral responses to noxious thermal stimuli and permits the researcher to visualize and quantify various aspects of thermal nociception in Drosophila larvae. The assays can be applied to larvae of desired genotypes or to larvae raised under different environmental conditions that might impact nociception. Since thermal nociception is conserved across species, the findings gleaned from genetic dissection in Drosophila will likely inform our understanding of thermal nociception in other species, including vertebrates.

Local and Global Methods of Assessing Thermal Nociception in Drosophila Larvae

In this article, we demonstrate assays to study thermal nociception in Drosophila larvae. One assay involves spatially-restricted (local) stimulation of thermal nociceptors1,2 while the second involves a wholesale (global) activation of most or all such neurons3. Together, these techniques allow visualization and quantification of the behavioral functions of Drosophila nociceptive sensory neurons.

Termal nosisepsiyon değerlendirilmesi Yerel ve Küresel Yöntemleri<em&gt; Drosophila</em&gt; Larva

In this article, we demonstrate assays to study thermal nociception in Drosophila larvae. One assay involves spatially-restricted (local) stimulation of ...

Assessment of Morphine-induced Hyperalgesia and Analgesic Tolerance in Mice Using Thermal and Mechanical Nociceptive Modalities

Opioid-induced hyperalgesia and tolerance severely impact the clinical efficacy of opiates as pain relievers in animals and humans. The molecular mechanisms underlying both phenomena are not well understood and their elucidation should benefit from the study of animal models and from the design of appropriate experimental protocols. 
We describe here a methodological approach for inducing, recording and quantifying morphine-induced hyperalgesia as well as for evidencing analgesic tolerance, using the tail-immersion and tail pressure tests in wild-type mice. As shown in the video, the protocol is divided into five sequential steps. Handling and habituation phases allow a safe determination of the basal nociceptive response of the animals. Chronic morphine administration induces significant hyperalgesia as shown by an increase in both thermal and mechanical sensitivity, whereas the comparison of analgesia time-courses after acute or repeated morphine treatment clearly indicates the development of tolerance manifested by a decline in analgesic response amplitude. This protocol may be similarly adapted to genetically modified mice in order to evaluate the role of individual genes in the modulation of nociception and morphine analgesia. It also provides a model system to investigate the effectiveness of potential therapeutic agents to improve opiate analgesic efficacy.

We describe a protocol to examine the development of opioid-induced hyperalgesia and tolerance in mice. Based on the measurement of thermal and mechanical nociceptive responses of na&#239;ve and morphine-treated animals, it allows to quantify the increase in pain sensitivity (hyperalgesia) and decrease in analgesia (tolerance) associated with chronic opiate administration.

Termal ve Mekanik nosiseptik Usuller kullanma Farelerde Morfin kaynaklı Hiperaljezi ve Analjezik Hoşgörü Değerlendirilmesi

Opioid-induced hyperalgesia and tolerance severely impact the clinical efficacy of opiates as pain relievers in animals and humans. The molecular ...

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such behavior is spontaneous locomotor activity. Here we describe our protocol that utilizes Drosophila population monitors and a tracking system that allows continuous monitoring of the spontaneous locomotor activity of flies for several days at a time. This method is simple, reliable, and objective and can be used to examine the effects of aging, sex, changes in caloric content of food, addition of drugs, or genetic manipulations that mimic human diseases.

Determination of the Spontaneous Locomotor Activity in Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster are useful in studying genetic or environmental manipulations that affect behaviors such as spontaneous locomotor activity.&#160; Here we describe a protocol that utilizes monitors with infrared beams and data analysis software to quantify spontaneous locomotor activity.&#160;

Olarak spontan lokomotor aktivitenin belirlenmesi<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Drosophila melanogaster has been used as an excellent model organism to study environmental and genetic manipulations that affect behavior. One such ...

Rapid In Situ Hybridization using Oligonucleotide Probes on Paraformaldehyde-prefixed Brain of Rats with Serotonin Syndrome

3,4-Methylenedioxymethamphetamine (MDMA; ecstasy) toxicity may cause region-specific changes in serotonergic mRNA expression due to acute serotonin (5-hydroxytryptamine; 5-HT) syndrome. This hypothesis can be tested using in situ hybridization to detect the serotonin 5-HT2A receptor gene htr2a. In the past, such procedures, utilizing radioactive riboprobe, were difficult because of the complicated workflow that needs several days to perform and the added difficulty that the technique required the use of fresh frozen tissues maintained in an RNase-free environment. Recently, the development of short oligonucleotide probes has simplified in situ hybridization procedures and allowed the use of paraformaldehyde-prefixed brain sections, which are more widely available in laboratories. Here, we describe a detailed protocol using non-radioactive oligonucleotide probes on the prefixed brain tissues. Hybridization probes used for this study include dapB (a bacterial gene coding for dihydrodipicolinate reductase), ppiB (a housekeeping gene coding for peptidylprolyl isomerase B), and htr2a (a serotonin gene coding for 5-HT2A receptors). This method is relatively simply, cheap, reproducible and requires less than two days to complete.

Rapid In Situ Hybridization using Oligonucleotide Probes on Paraformaldehyde-prefixed Brain of Rats with Serotonin Syndrome

This protocol describes a rapid and simplified in situ hybridization method ideal forparaformaldehyde-prefixed brain, thus reducing the need for prolonged complex steps while using fresh frozen tissues. The method is validated using the identification of the serotonin 5-HT2A receptor gene htr2a in rats.

Çabuk<em&gt; In Situ</emSerotonin Sendromu ile Ratlarda Paraformaldehyde-öneki Beyin oligonükleotid Problar kullanarak&gt; Melezleme

3,4-Methylenedioxymethamphetamine (MDMA; ecstasy) toxicity may cause region-specific changes in serotonergic mRNA expression due to acute serotonin ...

Measurement &amp; Analysis of the Temporal Discrimination Threshold Applied to Cervical Dystonia

The temporal discrimination threshold (TDT) is the shortest time interval at which an observer can discriminate two sequential stimuli as being asynchronous (typically 30-50 ms). It has been shown to be abnormal (prolonged) in neurological disorders, including cervical dystonia, a phenotype of adult onset idiopathic isolated focal dystonia. The TDT is a quantitative measure of the ability to perceive rapid changes in the environment and is considered indicative of the behavior of the visual neurons in the superior colliculus, a key node in covert attentional orienting. This article sets out methods for measuring the TDT (including two hardware options and two modes of stimuli presentation). We also explore two approaches of data analysis and TDT calculation. The application of the assessment of temporal discrimination to the understanding of the pathogenesis of cervical dystonia and adult onset idiopathic isolated focal dystonia is also discussed.

Methods for the measurement and analysis of the temporal discrimination threshold are presented, and its application to the study of the pathogenesis of cervical dystonia are discussed.

Ölçme ve analiz için servikal distoni uygulanan zamansal ayrımcılık eşiği

The temporal discrimination threshold (TDT) is the shortest time interval at which an observer can discriminate two sequential stimuli as being ...

Rapid and Specific Immunomagnetic Isolation of Mouse Primary Oligodendrocytes

The efficient and robust isolation and culture of primary oligodendrocytes (OLs) is a valuable tool for the in vitro study of the development of oligodendroglia as well as the biology of demyelinating diseases such as multiple sclerosis and Pelizaeus-Merzbacher-like disease (PMLD). Here, we present a simple and efficient selection method for the immunomagnetic isolation of stage three O4+ preoligodendrocytes cells from neonatal mice pups. Since immature OL constitute more than 80% of the rodent-brain white matter at postnatal day 7 (P7) this isolation method not only ensures high cellular yield, but also the specific isolation of OLs already committed to the oligodendroglial lineage, decreasing the possibility of isolating contaminating cells such as astrocytes and other cells from the mouse brain. This method is a modification of the techniques reported previously, and provides oligodendrocyte preparation purity above 80% in about 4 h.

We describe the immunomagnetic isolation of primary mouse oligodendrocytes, which allows the rapid and specific isolation of the cells for in vitro culture.

Fare birincil Oligodendrocytes hızlı ve spesifik Immunomagnetic izolasyonu

The efficient and robust isolation and culture of primary oligodendrocytes (OLs) is a valuable tool for the in vitro study of the development of ...

Establishment of Acute Pontine Infarction in Rats by Electrical Stimulation

Pontine infarction is the most common stroke subtype in the posterior circulation, while there lacks a rodent model mimicking pontine infarction. Provided here is a protocol for successfully establishing a rat model of acute pontine infarction. Rats weighing about 250 g are used, and a probe with an insulated sheath is injected into the pons using a stereotaxic apparatus. A lesion is produced by the electrical stimulation with a single pulse. The Longa score, Berderson score, and beam balance test are used to assess neurological deficits. Additionally, the adhesive-removal somatosensory test is used to determine sensorimotor function, and the limb placement test is used to evaluate proprioception. MRI scans are then used to assess the infarction in vivo, and TTC staining is used to confirm the infarction in vitro. Here, a successful infarction is identified that is located in the anterolateral basis of the rostral pons. In conclusion, a new method is described to establish an acute pontine infarction rat model.

Presented here is a protocol for establishing acute pontine infarction in a rat model via electrical stimulation with a single pulse.

Elektrikstimülasyon ile Sıçanlarda Akut Pontin Enfarktüsü Kurulması

Pontine infarction is the most common stroke subtype in the posterior circulation, while there lacks a rodent model mimicking pontine infarction. Provided ...

Laser-Induced Brain Injury in the Motor Cortex of Rats

A common technique for inducing stroke in experimental rodent models involves the transient (often denoted as MCAO-t) or permanent (designated as MCAO-p) occlusion of the middle cerebral artery (MCA) using a catheter. This generally accepted technique, however, has some limitations, thereby limiting its extensive use. Stroke induction by this method is often characterized by high variability in the localization and size of the ischemic area, periodical occurrences of hemorrhage, and high death rates. Also, the successful completion of any of the transient or permanent procedures requires expertise and often lasts for about 30 minutes. In this protocol, a laser irradiation technique is presented that can serve as an alternative method for inducing and studying brain injury in rodent models.
When compared to rats in the control and MCAO groups, the brain injury by laser induction showed reduced variability in body temperature, infarct volume, brain edema, intracranial hemorrhage, and mortality. Furthermore, the use of a laser-induced injury caused damage to the brain tissues only in the motor cortex unlike in the MCAO experiments where destruction of both the motor cortex and striatal tissues is observed.
Findings from this investigation suggest that laser irradiation could serve as an alternative and effective technique for inducing brain injury in the motor cortex. The method also shortens the time for completing the procedure and does not require expert handlers.

The protocol presented here shows a technique to create a rodent model of brain injury. The method described here uses laser irradiation and targets motor cortex.

Farelerin Motor Korteksinde LazerE Bağlı Beyin Hasarı

A common technique for inducing stroke in experimental rodent models involves the transient (often denoted as MCAO-t) or permanent (designated as MCAO-p) ...

Induction of Diffuse Axonal Brain Injury in Rats Based on Rotational Acceleration

Traumatic brain injury (TBI) is a major cause of death and disability. Diffuse axonal injury (DAI) is the predominant mechanism of injury in a large percentage of TBI patients requiring hospitalization. DAI involves widespread axonal damage from shaking, rotation or blast injury, leading to rapid axonal stretch injury and secondary axonal changes that are associated with a long-lasting impact on functional recovery. Historically, experimental models of DAI without focal injury have been difficult to design. Here we validate a simple, reproducible and reliable rodent model of DAI that causes widespread white matter damage without skull fractures or contusions.

This protocol validates a reliable, easy-to-perform and reproducible rodent model of brain diffuse axonal injury (DAI) that induces widespread white matter damage without skull fractures or contusions.

Rotasyonel İvmeye Dayalı Sıçanlarda Diffüz Aksonal Beyin Hasarıİn İndüksiyonu

Traumatic brain injury (TBI) is a major cause of death and disability. Diffuse axonal injury (DAI) is the predominant mechanism of injury in a large ...