Bu çalışma NIH / NINDS Hibeler NS26380 ve NS55976, Christopher ve Dana Reeve Vakfı ve Daniel Heumann Omurilik Araştırma Fonu tarafından desteklenmiştir. Drexel University College Tıp Omurilik Araştırma Merkezi, bu işi tamamlamak için kullanılan çekirdek tesisleri için destek sağlar.

1) mikroskobik cerrahi için hazırlığı <ol><li> Cerrahi istasyonu, temiz ve aletleri ve aksesuar malzemeleri önce sulandırılmış çamaşır suyu çözeltisi ile filtrelenmiyor gerekir. Araçların 1 gün cerrahi öncesi otoklava ve steril bir kap içinde saklanan olacak. Farklı hayvanların prosedürleri arasındaki araçlardan patojenler ve mikrobik kirleticiler kaldırmak için kullanılan Hot Boncuk Sterilizatör (Güzel Bilim Araçları) açın. </li><li> Termal bariyer takın, cerrahi işlem sırasında vücut ısısını korumak için kullanılır. Kanamayı kontrol etmek için kullanılan pamuklu ve gazlı bez ayarlayın. Steril salin solüsyonu mikro-hemostaz ve batırmayın için kullanılacak Jel Köpük küçük (&lt;2mm 3) adet hazırlayın. </li><li> İsofluranın indüksiyon odası ve anestezi Yeri sıçan (oksijen buharlaştırılarak,% 5, debisi 2.0 L / dk). Odasından hazırlama tablo hayvan çıkarın ve kürk amaçlanan cerrahi alanında geniş bir alanda tıraş. Alanının merkezinde% 70 izopropil alkol başında ile silin ve aynı şekilde Polyhydroxidine Çözüm (Xenodine) ile ovma, dışa doğru yayılan. Yıkar 3 kez tekrarlayın. </li><li> Termal bariyer, kapak burun ve ağız ile inhalasyon koni Yeri hayvan,% 3 ve 0.2 L / dak akış hızı İsofluranın azaltır. Intramüsküler cilt altı enjeksiyonu ve analjezik (Buprenorfin 0.05 mg / kg) uygun doz antibiyotik (ampisilin) ​​sunun. </li><li> Cerrah Xenodine çözüm ellerini fırçalayın ve su ile durulayın. Steril cerrahi önlük cerrah üzerine monte edilebilir; eller steril bir havlu ile kurutulur ve steril eldiven ile kaplı olacak. Bu prosedür, bu metinde açıklanan her bir cerrahi işlem için takip eder. </li><li> Steril aletleri kapsayan kapağı bir asistan tarafından silinecektir ve araçlar cerrah tarafından steril bir örtü üzerinde atılacak. </li></ol> 2) PN transeksiyonu dejenerasyon teşvik etmek <ol><li> Hayvan yan yatarken düz bir çizgi paralel tutarak diz doğru femur başı kesi ve femur yaklaşık 3mm olun. Altta yatan vastus lateralis kası ortaya çıkarmak için, cilt insizyonu ile aynı hat boyunca yüzeysel biceps femoris kasları kesti. </li><li> Kullanımı makas vastus lateralis diz yakınındaki küçük bir kesim yapmak ve femur başının doğru bu kadar uzanır. Yine makas ile siyatik sinir yapışık tibial ve peroneal sinir dallarının kadar yavaşça vastus lateralis ayrı görselleştirildiği (femur paralel çalışan). </li><li> Siyatik sinirin ana gövde tespit edilene kadar bu dalların femur başı doğru iz. Siyatik sinir çatallanma altında ince forseps (bu daha geniş dalıdır), tibial sinir dalı çevreleyen bağ dokusu (epineurium) dikkatli bir şekilde ayırmak için kullanın. </li><li> Bir kez izole tibial sinir etrafında 6-0 ipek ligatür kayma ve sıkın. Ligatür rostral sinir transeksiyonu için mikro makas kullanın. Vastus lateralis kası ile dikiş hattı Pass ve kapalı bir düğüm kravat. Sinir 7-10 gün sonra hasat edilebilir olduğunda bu tibial sinir kesme sonu kolay konumu için bir satır sağlayacaktır. </li><li> Aksonal büyüme için yeni bir sinir hazırlık daha önce aşılama tibial sinir dejenerasyonu daha uygun bir ortam sağlar. </li><li> 6-0 ipekle vastus lateralis kası kapatın. 6-0 ipek sütür ile biseps femoris kas kapatın. Michel yara klipler ile cilt kapatın. İsofluranın, akış kapatın, termal bariyer kafesi tutan Solunduğunda burun konisi yer ve hayvan kaldırmak ve uyanık ve aktif bir kez evde kafes dönmek. </li></ol> 3) Kaldırma PN segmenti <ol><li> Yukarıda açıklandığı gibi amaçlanan cerrahi alan (1.3) tıraş ve temiz, hayvan anestezisi. Termal bariyer hayvan yerleştirin. </li><li> Yara klipleri ve ayrı önceki cilt insizyonu çıkarın. Vastus lateralis maruz yüzeysel kas dikiş kesti ve bu kas dikiş kesti. </li><li> Tibial sinir ucu ve sinir dikiş kaldırmak için dikiş çizgi çiziniz. Tibial sinir 15 mm uzunluğu epineurium incelemek ve bu distal sonuna kadar kesmek için ince forseps kullanın. Steril Hanks Dengeli Tuz Çözeltisi sinir segment ve batırmayın çıkarın. </li><li> Bu ise bir heterolog greft deney Euthasol intraperitoneal hayvan euthanize. Bu aşağıda anlatıldığı gibi bir otolog greft deney, bacak kas ve 2.6 &#39;da açıklandığı gibi cilt kapalı) ve servikal spinal kord yaralanması için hazırlanan hayvan. </li></ol> 4) Servikal hemisection yaralanma ve transplantasyon 1. Gün <ol><li> Hayvan anestezisi, tıraş ve kütüphane olduğu söylenebilir temizYukarıda açıklandığı gibi ded cerrahi alan (1.3). Termal bariyer hayvan yerleştirin. Antibiyotik ve analjezikler (1.4) yukarıdaki gibi yönetin. </li><li> Oksipital çentik ve önde gelen T2 dorsal vertebra süreci bulun ve bu dış simge arasında tam uzunlukta bir kesi yapmak. Yüzeysel trapezius kas orta hat kesti ve altta yatan servikal rhomboideus kasları ayrı. Dışında bir dağıtıcı ekleyerek kasları tutun. </li><li> Derin supraspinal kasları dorsal vertebra süreçleri, C4, C5 ve C6 kesilmelidir. Kullanarak, tüm sağ tarafında ve omuriliğin sol tarafında medial kısmını açığa çıkarmak için rongeurs C5 kısmi laminektomi gerçekleştirin. Spinal kord orta hat için bir dönüm noktası olarak belirgin bir dorsal ven kullanın. </li><li> Delmek duramater, bir mikro-neşter bıçak ya da 30 iğne kullanın ve C5 omurilik üzerinde kesi uzatmak. Yatan subaraknoid ve pia mater küçük bir kesi olun. </li><li> Çekilmiş bir cam mikro-kanül, doku ayrı ve kaldırılmasını kolaylaştırmak için hafif basınç ve mikro-forseps kullanarak, omurilik dorsal, sağ tarafında aspire başlar. Dorsalden ventral ve lateral orta hat meninksler için tam 2 mm uzunluğunda bir kavite oluşturmak için spinal kord orta ve ventral kısımları ile devam edin. </li><li> Hemostaz sağlamak için tuzlu bulanmış jel köpük boşluğuna yerleştirin. </li><li> Hanks çözüm periferik sinir segmentinde çıkarın. Proksimal sinir segmentinde 3mm ve epineurium hafifçe kabuğu hemisection lezyon boşluğuna rostral duvara Bu amaçla appose. Duramater epineurium ile 10-0 sütür ile segmentinde Güvenli, daha sonra dura greft implante ucuna kapalı sütür. </li><li> Sandviç, daha sonraki bir zaman noktasında koruma ve kolay izolasyon için silastik membran (Biobrane) 2 adet arasında greft. C6, C7 ve T1 vertebra süreçleri yanında koyun. Distal sinir ucu, omurilik ya da kas dokusu appose etmeyin. </li><li> 4-0 dikiş ve yara klipleri ile yakın cilt insizyonu ile katmanları kapatın kasları. </li><li> Uyanık ve aktif bir kez termal bariyer ve dönüş evde kafes kafes tutarak yerleştirin hayvan. </li></ol> 21. gün <ol start="11"><li> Yukarıda açıklandığı gibi amaçlanan cerrahi alan (1.3) tıraş ve temiz, hayvan anestezisi. Termal bariyer hayvan koyun ve antibiyotik ve analjezikler (1.4) yukarıdaki gibi yönetmek. Sinir grefti çevreleyen silastik membran maruz yüzeysel sütür kesin. Ince forseps ve yaylı makas ve cerrahi alanında yansıtmak kullanarak silastik membran sinir dikkatlice uzunluğu. </li><li> C7 vertebral sürecinin sağ tarafında kısmi laminektomi gerçekleştirin. Pierce, yukarıdaki gibi meninksler (4.4) ve aspirasyon C7 spinal kord, 1 mm 3 dorsal kadranda lezyon boşluğuna hazırlar . Hemostaz elde etmek ve sonra chondroitinase ABC ile ıslatılmış jel köpük yerine tuzlu su bulanmış jel köpük kullanın. 15 dakika boyunca her 5 dakikada bir chondroitinase batırılmış taze jel köpük sağlayarak, lezyon yerinde davranın. </li><li> Silastik zarı ile sinir grefti dış uzunluğu Kapak. 4-0 sütür ve yara klipler ile cilt insizyonu ile yüzeysel kasları kapatın. Uyanık ve aktif bir kez termal bariyer ve dönüş evde kafes kafes tutarak yerleştirin hayvan. </li></ol> Gün 23 <ol start="14"><li> Yukarıda açıklandığı gibi amaçlanan cerrahi alan (1.3) tıraş ve temiz, hayvan anestezisi. Termal bariyer hayvan koyun ve antibiyotik ve analjezikler (1.4) yukarıdaki gibi yönetmek. Sinir grefti çevreleyen silastik membran maruz yüzeysel sütür kesin. Greft rahatsız değil, C7 greft sitesinde teşhir etmek ve omurilik spinal kord apozisyon greft distalinde yaklaşık 1 mm sağ tarafında chondroitinase ABC 1μl microinject çekti cam kanül ile Hamilton şırınga kullanın etmeyin. </li><li> Sinir segmentinde distal 2mm epineurium hafifçe kabuğu ve C7 lezyon boşluğuna Bu amaçla appose. Segment duramater epineurium ile 10-0 sütür ile sabitleyin. </li><li> 4-0 sütür ve yara klipler ile cilt insizyonu ile yüzeysel kasları kapatın. Uyanık ve aktif bir kez termal bariyer ve dönüş evde kafes kafes tutarak yerleştirin hayvan. </li></ol> 5) greft ve distal spinal kord aksiyon potansiyeli Elektrofizyolojik kayıt <ol><li> Elektriksel aktivite, PNG içine rejenere olan aksonlar aracılığıyla iletilen olup olmadığını belirlemek için ilk olarak ortaya çıkarmak ve greft izole gerekir. Özel bakım Bu işlem sırasında, fiziksel olarak greft zarar görmesini önlemek için alınan ve bu greft yerleştirildikten sonra silastik membran kullanımı önemli bir yerdir olmalıdır. Yukarıda açıklandığı gibi amaçlanan cerrahi alan (1.3) tıraş ve temiz, hayvan anestezisi. Yeri incitermal bariyer e hayvan. </li><li> Cilt açılması ve yüzeysel kasları ayıran sonra, silastik zar şeritleri tespit ve dikkatli bir şekilde greft disseke. </li><li> Kullanımı rongeurs PNG-omurilik apozisyon sitelerine hemen rostral ve kaudal dorsal vertebra süreci çıkarın. Bu yaklaşım sırasında greft çok fazla rahatsız etmemek için özen gösterin. Duramater her iki düzeyde de bir yarık olun. </li><li> C5 greft-omurilik apozisyon sitesi yaklaşık 1cm rostral yaklaşık 1mm derinliğe kadar tek bir tel (platin-iridyum karışımı) lezyona ipsilateral omuriliğe uyarıcı elektrot, yerleştirin. Iki kutuplu bir çengel elektrot üzerine greft merkezi bölümü dikkatlice kaldırın. 100μsec süresi ile 10μA tek uyarıcı darbeler sağlayın ve greft içine rejenere olan aksonlar aracılığıyla seyahat aksiyon potansiyelleri olup olmadığını belirlemek. </li><li> Bağladım elektrot uyarıcı elektrot olur ve böylece tek bir tel, PNG, omurilik ve omurilik aksiyon potansiyelleri kayıt girişimi apozisyon distal spinal kord eklenir tel bağlantıları ve konumu açın. </li><li> Deneyin sonunda toplam 1hr, 50Hz 100μsec süre için 1mA uyaranların bir tren sağlar. 1hr hayvanlar daha sonra Euthanize, PNG rejenere aksonları ile aktive olan nöronlarda cFos immünositokimyasal tespiti için% 4 paraformaldehid ve süreç omurilik dokusu ile serpmek. </li></ol> 6) nöronların Retrograd etiketleme, PNG ve omuriliğe geri rejenere akson anterograd etiketleme aksonlar rejenere <ol><li> Elektrofizyolojik önlemlerle test değil hayvanlar için omurilikte greft ve kendi fesih içine büyümeye akson kaynağını tespit etmek mümkün. Yukarıda açıklandığı gibi amaçlanan cerrahi alan (1.3) tıraş ve temiz, hayvan anestezisi. Termal bariyer hayvan yerleştirin ve PNG maruz yukarıda 6.1 &#39;de açıklandığı gibi. </li><li> Orta noktada greft kesti ve greft uçları epineurium geri şerit mikro makas kullanın. Kesim birbirinden uzakta biter ve her yatıyordu parafilm ayrı bir kağıda yansıtır. </li><li> True Blue, PNG bir akson katkıda etiket nöron için proksimal kesik ucuna jel köpük ile ıslatılmış bir pledget yerleştirin. Biotinlenmiş dekstran amin (BDA), omurilik içine greft arka uzanan etiket aksonların distal kesim sonunda batırılmış jel köpük pledget yerleştirin. </li><li> 3-4d sonra hayvanlar Euthanize,% 4 paraformaldehid ve süreç True Blue etiketli nöron veya etiketli aksonlar BDA histokimya için floresan mikroskopi için beyin ve omurilik doku kesitlerinde serpmek. </li></ol> 7) Göğüs tam transeksiyonu yaralanma ve nakli Bu yukarıdaki servikal hemisection yaralanma modeline alternatif bir yaklaşım sunmaktadır. Burada, daha ciddi bir ikili yaralanma üretilir ve periferik sinir segmentleri, süresi ve yaralı spinal kord rostral ve kaudal kütükleri lezyon boşluğuna yerleştirilir. 1. Gün <ol><li> Yukarıda açıklandığı gibi amaçlanan cerrahi alan (1.3) tıraş ve temiz, hayvan anestezisi. Termal bariyer hayvan yerleştirin. Antibiyotik ve analjezikler (1.4) yukarıdaki gibi yönetin. </li><li> T12 vertebra düzeyinde son kaburga yerleştirilmesi noktasında tanımlayın. T11, T10 ve T9 vertebra süreçleri üzerinde rostral bu noktadan cilt insizyonu olun. Bu üç süreç bağlı supraspinal kasları yoluyla yüzeysel fasya kesti. </li><li> T10 vertebra sürecinin tam laminektomi (örten T12 omurilik segmenti) gerçekleştirin. Delmek duramater bir mikro-neşter bıçak ya da 30 iğne kullanın ve T12 omurilik üzerinde kesi uzatmak. Yatan subaraknoid ve pia mater küçük bir kesi olun. </li><li> Çekilmiş bir cam mikro-kanül, doku ayrı ve kaldırılmasını kolaylaştırmak için hafif basınç ve mikro-forseps kullanarak, bilateral T12 omurilik aspire başlar. Ventral ve lateral meninksler arasında tam dorsal 3 mm uzunluğunda bir kavite oluşturmak için spinal kord orta ve ventral kısımları ile devam edin. </li><li> Hemostaz elde etmek ve sonra chondroitinase ABC ile ıslatılmış jel köpük yerine tuzlu su bulanmış jel köpük kullanın. 15 dakika boyunca her 5 dakikada bir chondroitinase batırılmış taze jel köpük sağlayarak, lezyon yerinde davranın. </li><li> Hank s çözüm periferik sinir segmentinde çıkarın. Yavaşça sinir segmentinin proksimal 4mm epineurium yansıtacak ve omuriliğin bir tarafın rostral ve kaudal kütükleri arasında rahatça sığacak şekilde uzunluğu kesmek. Omurilik diğer tarafında apposed ilk aşılı segmentinde yanında ikinci bir segment yerleştirin. Sütür dura implante greftler üzerinde kapalı ve küçük bir dura kapağısilastik membran parçası. </li><li> 4-0 dikiş ve yara klipleri ile yakın cilt insizyonu ile katmanları kapatın kasları. </li><li> Uyanık ve aktif bir kez termal bariyer ve dönüş evde kafes kafes tutarak yerleştirin hayvan. </li></ol> 3. Gün <ol start="9"><li> Yukarıda açıklandığı gibi amaçlanan cerrahi alan (1.3) tıraş ve temiz, hayvan anestezisi. Termal bariyer hayvan koyun ve antibiyotik ve analjezikler (1.4) yukarıdaki gibi yönetmek. Greft üzerinde silastik membran maruz yüzeysel sütür kesin. Greft rahatsız, ancak yerine greft kaudal omurilik ve omurilik spinal kord apozisyon greft distalinde yaklaşık 1 mm her iki tarafında chondroitinase ABC 1μl microinject maruz çekti cam kanül ile Hamilton şırınga kullanmak etmeyin. </li><li> 4-0 sütür ve yara klipler ile cilt insizyonu ile yüzeysel kasları kapatın. Uyanık ve aktif bir kez termal bariyer ve dönüş evde kafes kafes tutarak yerleştirin hayvan. Elektrofizyolojik uyarılması ve kayıt ve yukarıda tracer 5 açıklandığı gibi etiketleme) ve 6) gerçekleştirin. </li></ol> 8) Temsilcisi Sonuçlar Bu yordamı optimize edilmiştir periferik sinir segmentinde yakından ev sahibi omurilik ile entegre olacak. , Artan ve spinal aksonlar azalan greft girmek greft uzunluğu nispeten düz bir çizgi paralel olarak büyümeye ve günde yaklaşık 1 mm hızında greft distal ucuna kadar uzanan. Chondroitinase çevresindeki skar dokusu inhibitör proteoglikanların kaldırmak için kullanılır olmuştur distal ucu ulaştıktan sonra, aksonlar komşu omurilik nüfuz edecek. Fonksiyonel bağlantı greft içindeki aksonlar uyarılması omurilik nöronları tarafından bir yanıt elektrofizyolojik ve immünositokimyasal algılama tarafından tespit edilecektir. Fonksiyonel iyileşme için anatomik korelasyon omurilik sinir grefti ötesine akson sayısı ve uzunluğu izleme değerlendirilecektir.

<ol>
	<li>Houle, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Demonstration+of+the+potential+for+chronically+injured+neurons+to+regenerate+axons+into+intraspinal+peripheral+nerve+grafts.">Demonstration of the potential for chronically injured neurons to regenerate axons into intraspinal peripheral nerve grafts.</a> Exp. Neurol. 113, 1-9 (1991).</li><li>Ye, J. H., Houle, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+the+chronically+injured+spinal+cord+with+neurotrophic+factors+can+promote+axonal+regeneration+from+supraspinal+neurons.">Treatment of the chronically injured spinal cord with neurotrophic factors can promote axonal regeneration from supraspinal neurons.</a> Exp. Neurol. 143, 70-81 (1997).</li><li>Houle, J. D., Tom, V., Mayes, D., Wagoner, G., Phillips, N., Silver, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combining+an+autologous+peripheral+nerve+bridge+and+matrix+modification+by+chondroitinase+allows+robust+functional+regeneration+across+a+hemisection+lesion+of+the+adult+rat+spinal+cord.">Combining an autologous peripheral nerve bridge and matrix modification by chondroitinase allows robust functional regeneration across a hemisection lesion of the adult rat spinal cord.</a> J. Neurosci. 26, 7405-7415 (2006).</li><li>Tom, V., Houle, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraspinal+microinjection+of+chondroitinase+ABC+following+injury+promotes+axonal+regeneration+out+of+a+peripheral+nerve+graft.">Intraspinal microinjection of chondroitinase ABC following injury promotes axonal regeneration out of a peripheral nerve graft.</a> Exp. Neurol. 211, 315-319 (2008).</li></ol>

<ol><li> Deney tekrarlanabilirlik için spinal kord yaralanması, hayvandan hayvana tutarlı olması çok önemlidir. Bu nedenle laminektomi için uygun vertebra süreç tespit edilmesi önemlidir. Biz bu çalışma için bir hemisection veya transeksiyonu lezyon modeli kullanarak Çünkü lezyonun boyutu hakkında veya belirli omurilik yollarında yaralı veya yokolma olmadığını belirsizlik yoktur. </li><li> Periferik sinir akson büyümesinin destekleyen birkaç nörotrofik faktörler üretmek için, çünkü periferik aksonları bu başl...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>10-0 silk suture</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>ArosSurgical</td>
<td>T5A10N10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>6-0 silk suture</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>McKesson</td>
<td>2693</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ampicillin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>McKesson</td>
<td>483549</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Antibody to cFos</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>F7799</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Biotinylated dextran Amine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>D7135</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Buprenorphin (.3mg/ml)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>McKesson</td>
<td>12496075701</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Chondroitinase ABC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Associates of Cape Cod</td>
<td>100332-1A</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Euthasol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Webster Veterinary</td>
<td>07-805-9296</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hanks Balanced Salt Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cellgro</td>
<td>21-021-CV</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Isoflurane</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Henry Schein</td>
<td>209-1966</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Michel Wound Clips</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>12040-02</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Neurotrace Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>N7167</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>True Blue</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>T5891</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Xenodine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Webster Veterinary</td>
<td>92201</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hot Bead Sterilizer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forced Exercise Wheel</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Lafayette Instruments</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>TreadScan System</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Clever System</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Infinite Horizon Impact Device</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Precision Systems and Instrumentation</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Magnetic Stimulation Device</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MagStim Inc.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

combining peripheral nerve grafting and matrix modulation to repair the injured rat spinal cord

Spinal kord (SCI) travmatik yaralanma nöronların ölümü, motor ve duyusal sinir lifi (akson) yolları ve beyin ile iletişimi kesintiye uğraması bozulmasına neden olur. Araştırmamızın amaçlarından biri lezyon sitesi üzerinden bağlantı geri akson rejenerasyonu teşvik etmektir. Bunu başarmak için, periferik sinir segmentleri siyatik sinir ya da omurilik hasarlı uçları arasında doğrudan yerleştirilir veya lezyon çapında bir köprü oluşturmak için kullanılır tekniği greft (PN) geliştirdi. Diğer nöral dokuların nakli ile karşılaştırıldığında bu yaklaşım birçok avantaj vardır; rejenere aksonları belirli bir hedef alanına doğru yönlendirilebilir, rejenere akson sayısı ve kaynak kolayca izleme teknikleri tarafından belirlenir, greft ölçmek için elektrofizyolojik deneyleri için kullanılan olabilir greft aksonlar fonksiyonel iyileşme ile ilişkili olduğunu ve bir otolog sinir greft reddi olasılığını azaltmak için kullanmak mümkündür. Laboratuarımızda biz karşılaştırılabilir sonuçlar hem otolog (verici ve alıcı aynı hayvan) ve heterolog (bağışçı ve alıcı farklı hayvanların) greftler gerçekleştirdik. Bu yaklaşım, akut hem de kronik yaralanma durumlarında başarıyla kullanılmaktadır. PN greft distal sonuna ulaşmak rejenere aksonları genellikle omuriliğe geri genişletmek için başarısız, bu yüzden chondroitinase, SCI alanı çevreleyen bağ dokusu ile ilişkili inhibitör molekülleri düşmeye microinjections kullanabilirsiniz. Aynı zamanda ekzojen büyüme ve trofik molekülleri sağlayan omurilik içine uzun mesafe aksonal regrowth teşvik bulduk. Birkaç ay transplantasyonu sonrası, spinal kord yaralı hayvanlar kurtarma fonksiyonu değerlendirmek için, anatomik, davranışsal ve elektrofizyolojik testler çeşitli gerçekleştirin. Bu deneysel bir yaklaşım yaralanma farklı düzeylerde ve farklı türlerde (fare, sıçan ve kedi), birkaç spinal kord yaralanması modelleri başarılı bir şekilde kullanılır olmuştur. Önemlisi, periferik sinir grefti yaklaşım, akut ve kronik yaralı nöronlar tarafından rejenerasyonu teşvik etkilidir.

Watch this Scientific Journal Video about Combining Peripheral Nerve Grafting and Matrix Modulation to Repair the Injured Rat Spinal Cord at JoVE.com

Combining Peripheral Nerve Grafting and Matrix Modulation to Repair the Injured Rat Spinal Cord

Spinal kord travması sonucu beyin ile iletişimi bozar. Kayıp bağlantısı geri yüklemek için uzun mesafe büyümeyi teşvik etmek için inhibitör molekülleri kaldırmak için nörotrofik faktörler ve matris-modüle enzimler ile kombinasyon halinde rejenere lifler için altyapısını sağlamak üzere bir periferik sinir grefti kullanmaktadır.

Periferik Sinir Aşılama ve Matrix Modülasyon birleştiren Yaralı Rat Spinal Kord Onarım

Traumatic injury to the spinal cord (SCI) causes death of neurons, disruption of motor and sensory nerve fiber (axon) pathways and disruption of ...

combining-peripheral-nerve-grafting-matrix-modulation-to-repair

Research

JoVE Journal

Biology

16.3K Görüntüleme.  Drexel University College of Medicine. Spinal kord travması sonucu beyin ile iletişimi bozar. Kayıp bağlantısı geri yüklemek için uzun mesafe büyümeyi teşvik etmek için inhibitör molekülleri kaldırmak için nörotrofik faktörler ve matris-modüle enzimler ile kombinasyon halinde rejenere lifler için altyapısını sağlamak üzere bir periferik sinir grefti kullanmaktadır.

Video: Combining Peripheral Nerve Grafting and Matrix Modulation to Repair the Injured Rat Spinal Cord

Spinal Cord Electrophysiology

The neonatal mouse spinal cord is a model for studying the development of neural circuitries and locomotor movement. We demonstrate the spinal cord dissection and preparation of recording bath artificial cerebrospinal fluid used for locomotor studies. Once dissected, the spinal cord ventral nerve roots can be attached to a recording electrode to record the electrophysiologic signals of the central pattern generating circuitry within the lumbar cord.

A demonstration of the isolation of neonatal mouse spinal cord for electrophysiologic studies.

Omurilik Elektrofizyoloji

The neonatal mouse spinal cord is a model for studying the development of neural circuitries and locomotor movement. We demonstrate the spinal cord ...

Biyoloji

Using the optokinetic response to study visual function of zebrafish

Optokinetic response (OKR) is a behavior that an animal vibrates its eyes to follow a rotating grating around it. It has been widely used to assess the visual functions of larval zebrafish1-5. Nevertheless, the standard protocol for larval fish is not yet readily applicable in adult zabrafish. Here, we introduce how to measure the OKR of adult zebrafish with our simple custom-built apparatus using a new protocol which is established in our lab. Both our apparatus and step-by-step procedure of OKR in adult zebrafish are illustrated in this video. In addition, the measurements of the larval OKR, as well as the optomotor response (OMR) test of adult zebrafish, are also demonstrated in this video. This OKR assay of adult zebrafish in our experiment may last for up to 4 hours. Such OKR test applied in adult fish will benefit to visual function investigation more efficiently when the adult fish vision system is manipulated.
Su-Qi Zou and Wu Yin contributed equally to this paper.

Optokinetic response has been widely used to assess the visual functions of larval zebrafish. Nevertheless, the standard protocol for larval fish is not yet readily applicable in adults1-5. Here, we introduce how to measure the OKR of adult zebrafish using a new protocol which is established in our lab.

Zebrafish görme fonksiyonu çalışma optokinetik yanıt

Optokinetic response (OKR) is a behavior that an animal vibrates its eyes to follow a rotating grating around it. It has been widely used to assess the ...

In Vivo SiRNA Transfection and Gene Knockdown in Spinal Cord via Rapid Noninvasive Lumbar Intrathecal Injections in Mice

This report describes a step-by-step guide to the technique of acute intrathecal needle injections in a noninvasive manner, i.e. independent of catheter implantation. The technical limitation of this surgical technique lies in the finesse of the hands. The injection is rapid, especially for a trained experimenter, and since tissue disruption with this technique is minimal, repeated injections are possible; moreover immune reaction to foreign tools (e.g. catheter) does not occur, thereby giving a better and more specific read out of spinal cord modulation. Since the application of the substance is largely limited to the target region of the spinal cord, drugs do not need to be applied in large dosages, and more importantly unwanted effects on other tissue, as observed with a systemic delivery, could be circumvented1,2. Moreover, we combine this technique with in vivo transfection of nucleic acid with the help of polyethylenimine (PEI) reagent3, which provides tremendous versatility for studying spinal functions via delivery of pharmacological agents as well as gene, RNA, and protein modulators.

In Vivo SiRNA Transfection and Gene Knockdown in Spinal Cord via Rapid Noninvasive Lumbar Intrathecal Injections in Mice

This report describes a simple and rapid technique of intrathecal needle puncture for a localized transfection of siRNA in the lumbar spinal cord in mouse under short lasting light anesthesia.

Farelerde Hızlı noninvaziv Lomber İntratekal enjeksiyon yoluyla Vivo siRNA&#39;nın Transfaksiyon ve Omurilik Gen demonte olarak

This report describes a step-by-step guide to the technique of acute intrathecal needle injections in a noninvasive manner, i.e. independent of catheter ...

Combining Single-molecule Manipulation and Imaging for the Study of Protein-DNA Interactions

The paper describes the combination of optical tweezers and single molecule fluorescence detection for the study of protein-DNA interaction. The method offers the opportunity of investigating interactions occurring in solution (thus avoiding problems due to closeby surfaces as in other single molecule methods), controlling the DNA extension and tracking interaction dynamics as a function of both mechanical parameters and DNA sequence. The methods for establishing successful optical trapping and nanometer localization of single molecules are illustrated. We illustrate the experimental conditions allowing the study of interaction of lactose repressor (lacI), labeled with Atto532, with a DNA molecule containing specific target sequences (operators) for LacI binding. The method allows the observation of specific interactions at the operators, as well as one-dimensional diffusion of the protein during the process of target search. The method is broadly applicable to the study of protein-DNA interactions but also to molecular motors, where control of the tension applied to the partner track polymer (for example actin or microtubules) is desirable.

Here we describe the instrumentation and methods for detecting single fluorescently-labeled protein molecules interacting with a single DNA molecule suspended between two optically trapped microspheres.

Protein-DNA Etkileşiminin Çalışmaları Tek molekül Manipülasyon ve Görüntüleme birleştiren

The paper describes the combination of optical tweezers and single molecule fluorescence detection for the study of protein-DNA interaction. The method ...

Scanning Electron Microscopy of Macerated Tissue to Visualize the Extracellular Matrix

Fibrosis is a component of all forms of heart disease regardless of etiology, and while much progress has been made in the field of cardiac matrix biology, there are still major gaps related to how the matrix is formed, how physiological and pathological remodeling differ, and most importantly how matrix dynamics might be manipulated to promote healing and inhibit fibrosis. There is currently no treatment option for controlling, preventing, or reversing cardiac fibrosis. Part of the reason is likely the sheer complexity of cardiac scar formation, such as occurs after myocardial infarction to immediately replace dead or dying cardiomyocytes. The extracellular matrix itself participates in remodeling by activating resident cells and also by helping to guide infiltrating cells to the defunct lesion. The matrix is also a storage locker of sorts for matricellular proteins that are crucial to normal matrix turnover, as well as fibrotic signaling. The matrix has additionally been demonstrated to play an electromechanical role in cardiac tissue. Most techniques for assessing fibrosis are not qualitative in nature, but rather provide quantitative results that are useful for comparing two groups but that do not provide information related to the underlying matrix structure. Highlighted here is a technique for visualizing cardiac matrix ultrastructure. Scanning electron microscopy of decellularized heart tissue reveals striking differences in structure that might otherwise be missed using traditional quantitative research methods.

Shown here is a method for visualizing extracellular matrix ultrastructure in decellularized cardiac tissues.

Macerated Tissue taramalı elektron mikroskobu Ekstraselüler Matrix Visualize&#39;a

Fibrosis is a component of all forms of heart disease regardless of etiology, and while much progress has been made in the field of cardiac matrix ...

Cystometric and External Urethral Sphincter Measurements in Awake Rats with Implanted Catheter and Electrodes Allowing for Repeated Measurements

Lower urinary tract function is mainly assessed by means of cystometric bladder function analysis in rodents. Conventional cystometries are usually performed as terminal analysis under urethane anesthesia. It is well known that anesthetic drugs can influence bladder function. Hence, the aim of this technique is to perform cystometric measurements of the urinary bladder and external urethral sphincter in lightly restrained awake rats. For this purpose, a bladder catheter is implanted into the bladder dome. Subsequently, two electrodes are implanted bilateral to the external urethral sphincter and a ground electrode is sutured to a non-responsive skeletal muscle. The bladder catheter and the three electrodes are finally tunneled subcutaneously to the neck region and affixed to a harness. With this technique, the lower urinary tract can be measured at multiple time points in the same animal to assess lower urinary tract function. The main application of this technique is the follow-up of simultaneous urinary bladder and external urethral sphincter function in awake healthy rats and after induction of a disease or injury. Moreover, subsequent lower urinary tract monitoring can be performed during evaluation of the disease/injury and to monitor treatment efficacy.

This protocol first describes the surgical procedure of the permanent implantation of a urinary bladder catheter combined with external urethral sphincter electrodes, and second, the measurement of the function of the urinary bladder and external urethral sphincter in implanted awake animals.

Cystometric ve dış üretral sfinkter ölçümleri implant kateter ve tekrarlanan ölçülerini izin elektrotları ile uyanık Sıçanlarda

Lower urinary tract function is mainly assessed by means of cystometric bladder function analysis in rodents. Conventional cystometries are usually ...

Sensitive Measurement of Mitophagy by Flow Cytometry Using the pH-dependent Fluorescent Reporter mt-Keima

Mitophagy is a process of selective removal of damaged or unnecessary mitochondria using autophagy machinery. Close links have been found between defective mitophagy and various human diseases, including neurodegenerative diseases, cancer, and metabolic diseases. In addition, recent studies have shown that mitophagy is involved in normal cellular processes, such as differentiation and development. However, the precise role of and molecular mechanisms underlying mitophagy require further study. Therefore, it is critical to develop a robust and convenient method for measuring changes in mitophagy activity. Here, we describe a detailed protocol for quantitatively assessing mitophagy activity through flow cytometry using the mitochondria-targeted fluorescent protein Keima (mt-Keima). This flow cytometry assay can analyze mitophagy activity more rapidly and sensitively than conventional microscopy- or immunoblotting-based methods. This protocol can be applied to analyze mitophagy activity in various cell types.

Mitophagy, the selective degradation of mitochondria, has been implicated in mitochondrial homeostasis and is deregulated in various human diseases. However, convenient experimental methods for measuring mitophagy activity are very limited. Here, we provide a sensitive assay for measuring mitophagy activity using flow cytometry.

Hassas ölçüm Mitophagy floresan muhabir akış sitometresi kullanarak pH bağımlı mt-Keima tarafından

Mitophagy is a process of selective removal of damaged or unnecessary mitochondria using autophagy machinery. Close links have been found between ...

Adipo-Clear: A Tissue Clearing Method for Three-Dimensional Imaging of Adipose Tissue

Adipose tissue plays a central role in energy homeostasis and thermoregulation. It is composed of different types of adipocytes, as well as adipocyte precursors, immune cells, fibroblasts, blood vessels, and nerve projections. Although the molecular control of cell type specification and how these cells interact have been increasingly delineated, a more comprehensive understanding of these adipose-resident cells can be achieved by visualizing their distribution and architecture throughout the whole tissue. Existing immunohistochemistry and immunofluorescence approaches to analyze adipose histology rely on thin paraffin-embedded sections. However, thin sections capture only a small portion of tissue; as a result, the conclusions can be biased by what portion of tissue is analyzed. We have therefore developed an adipose tissue clearing technique, Adipo-Clear, to permit comprehensive three-dimensional visualization of molecular and cellular patterns in whole adipose tissues. Adipo-Clear was adapted from iDISCO/iDISCO+, with specific modifications made to completely remove the lipid stored in the tissue while preserving native tissue morphology. In combination with light-sheet fluorescence microscopy, we demonstrate here the use of the Adipo-Clear method to obtain high-resolution volumetric images&#160;of an entire adipose tissue.

Due to the high lipid content, adipose tissue has been challenging to visualize using traditional histological methods. Adipo-Clear is a tissue clearing technique that allows robust labeling and high-resolution volumetric fluorescent imaging of adipose tissue. Here, we describe the methods for sample preparation, pretreatment, staining, clearing, and mounting for imaging.

Adipo-Clear: Bir doku Yöntem yağ dokusu üç boyutlu görüntüleme için temizlenmesi

Adipose tissue plays a central role in energy homeostasis and thermoregulation. It is composed of different types of adipocytes, as well as adipocyte ...

Assessment of Vascular Tone Responsiveness using Isolated Mesenteric Arteries with a Focus on Modulation by Perivascular Adipose Tissues

Altered vascular tone responsiveness to pathophysiological stimuli contributes to the development of a wide range of cardiovascular and metabolic diseases. Endothelial dysfunction represents a major culprit for the reduced vasodilatation and enhanced vasoconstriction of arteries. Adipose (fat) tissues surrounding the arteries play important roles in the regulation of endothelium-dependent relaxation and/or contraction of the vascular smooth muscle cells. The cross-talks between the endothelium and perivascular adipose tissues can be assessed ex vivo using mounted blood vessels by a wire myography system. However, optimal settings should be established for arteries derived from animals of different species, ages, genetic backgrounds and/or pathophysiological conditions.

The protocol describes the use of wire myography to evaluate the transmural isometric tension of mesenteric arteries isolated from mice, with special consideration of the modulation by factors released from endothelial cells and perivascular adipose tissues.

Perivasküler Adipose dokularında modülasyon odaklı Izole mezenterik arterlerin kullanıldığı vasküler ton tepkisini değerlendirmek

Altered vascular tone responsiveness to pathophysiological stimuli contributes to the development of a wide range of cardiovascular and metabolic ...

A Single Cell Dissociation Approach for Molecular Analysis of Urinary Bladder in the Mouse Following Spinal Cord Injury

We describe the implementation of spinal cord injury in mice to elicit detrusor-sphincter dyssynergia, a functional bladder outlet obstruction, and subsequent bladder wall remodeling. To facilitate assessment of the cellular composition of the bladder wall in non-injured control and spinal cord injured mice, we developed an optimized dissociation protocol that supports high cell viability and enables the detection of discrete subpopulations by flow cytometry.
Spinal cord injury is created by complete transection of the thoracic spinal cord. At the time of tissue harvest, the animal is perfused with phosphate-buffered saline under deep anesthesia and bladders are harvested into Tyrode&#8217;s buffer. Tissues are minced prior to incubation in digestion buffer that has been optimized based on the collagen content of mouse bladder as determined by interrogation of publicly available gene expression databases. Following generation of a single cell suspension, material is analyzed by flow cytometry for assessment of cell viability, cell number and specific subpopulations. We demonstrate that the method yields cell populations with greater than 90% viability, and robust representation of cells of mesenchymal and epithelial origin. This method will enable accurate downstream analysis of discrete cell types in mouse bladder and potentially other organs.

The goal of this protocol is to apply an optimized tissue dissociation protocol to a mouse model of spinal cord injury and validate the approach for single cell analysis by flow cytometry.

Omurilik Yaralanmasını Takiben Faredeki İdrar Kesesinin Moleküler Analizi için Tek Hücreli Ayrışma Yaklaşımı

We describe the implementation of spinal cord injury in mice to elicit detrusor-sphincter dyssynergia, a functional bladder outlet obstruction, and ...