The work was supported by grants from NIH/NINDS (NS054883), Craig H. Neilsen Foundation (280072), and the Veterans Administration and Canadian Spinal Research Organization. We thank the Rat Resource and Research Center, University of Missouri, Columbia, Missouri, for providing GFP rats.

Tüm hayvan protokoller Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır. Laboratuar hayvan bakımı ve güvenliği için NIH kurallar sıkı takip edilir. Cerrahi işlemlerde Hayvanlar yeterli ağrı ve rahatsızlık en aza indirmek için tedavi edildi. 1. Omurilik Curgery ve Hücre Tırnak <ol><li> Tüm ameliyatları öncesinde otoklav cerrahi aletler. Farklı hayvanlar üzerinde prosedür arasındaki araçlardan patojenleri ve mikrobiyal kirleri çıkarmak için Sıcak Boncuk Sterilizatörü (Güzel Bilim Araçları) kullanın. Ameliyat sırasında steril cerrahi eldiven, önlük ve örtüler kullanın. Her cerrahi işlem için aseptik cerrahi tekniğini kullanıyoruz. </li><li> Erkek Fischer intraperitoneal enjeksiyon (i.p.) ile ketamin (25 mg / ml), ksilazin (1.3 mg / ml) ve asepromazin (0.25 mg / ml) bir kombinasyonu ile 344 fareleri (2 ml / kg) anestezisi. </li><li> Arka alanı Tıraş ve Betadine&#39;le ve etanol ile defalarca cildi temizleyin.</li><li> Bir # 10 bıçak kullanarak deriyi kesme ve açık açık kaslar katmanları teşrih. , Omurları izole T3 vertebra maruz ve ince uçlu bir rongeurs kullanarak bir dorsal laminektomi gerçekleştirmek için bir neşter kullanın. </li><li> Uzunlamasına dura insizyon ve omurilik kütükleri arasında yaklaşık 1 mm&#39;lik bir boşluk oluşturmak için rostrokaudal iridektomi makas ve Mikroaspirasyon bir kombinasyonu kullanılarak T4 düzeyinde omurilik transeksiyonu. </li><li> 3-0 Vycril ile tamamen kanama durur, sonra dikiş kaslar kadar 2 dk ve yara klipler ile cilt kapatmak - yaklaşık 1 bekleyin. </li><li> Ringer (5 mi), buprenorfin (0.035 mg / kg) deri altından ameliyattan hemen sonra Ampisilin (33 mg / kg) enjekte edilmiş ve uyanık kadar ılık bir kuluçka makinesi içinde fareleri korumak. </li><li> Enjekte Ringer ve günde iki kez 3 gün boyunca veya ağrı ve sıkıntı belirtileri kaybolana kadar ampisilin günde bir kez 10 güne kadar çözüm ve buprenorfın. F kadar diğer hayvanların şirkete bir hayvanı iade etmeyinully iyileşti. </li><li> Elle boşalma refleks mesane kuruluşuna kadar iki kez yaklaşık iki hafta boyunca bir gün mesane boş, ve sonra gerekirse hayatta boyunca günde bir kez mesane boş. </li><li> İki hafta sonra, yukarıda tarif edildiği gibi, SCI fareler yeniden anestezi ve omurilik lezyon yerinin yeniden maruz kalmaktadır. Lezyon sitedeki implante edilmiş hücreleri korumak için kapalı dura tutun. </li><li> Lezyon kavite merkez ve çoklu enjeksiyon ile lezyonun rostral ve kaudal arayüzü içine, 10 E14 yerde GFP transgenik fare embriyoları toplanan ve fibrinojen gömülü hücre çözümü (3,5 × 10 5 ul), ul ve trombin 5,6 enjekte Bir Hamilton şırınga bağlı 40 um arasında bir iç çapı olan bir çekilmiş cam mikropipet kullanılarak bölgelerini içerebilir. </li><li> Kas katmanları dikin ve yara klipler ile cilt kapatın. </li><li> 1.8 - 1.6 adımlarla açıklandığı gibi cerrahi sonrası enjeksiyon ve mesane bakım yapın. </li><li> Bir hafta olacakön perfüzyon, omurilik 7 intraperitoneal olarak retrograd etiket sempatik pregangliyonik nöronları% 0.5 Fluorogold (FG, damıtılmış su içinde 0.4 mi) enjekte edilir. </li></ol> 2. Verici İmplantasyon <ol><li> Sterilizasyon için, oda sıcaklığında, 2 saat (10 saat kadar) - en az 1 transmittersin% 2 glutaraldehid çözeltisi (96 ml damıtılmış su içinde% 50 glutaraldhyde 4 mi) bekletin. </li><li> Iyice steril% 0.9 serum fizyolojik ile 3 kez vericilerini yıkayın ve kullanım (en fazla 1 saat) kadar tuzlu su içinde saklayın. </li><li> Sekiz hafta E14 hücre transplantasyonu (10 hafta sonrası yaralanma) sonra, veya hücre aşılama ve naif kontrol sıçanların olmadan SCI uygulanan fareler reanesthetize. </li><li> Karın bölgesi ve arka ayakların tıraş. Betadine&#39;le cildi temizleyin. Yatar pozisyonda cerrahi masaya sıçan yerleştirin. </li><li> 15. Bir bıçak kullanarak yandaki ventral karın ve uyluk cilt İnsizyon. </li><li> S kestiubcutaneous bağ dokuları, küçük bir makas kullanarak femoral damarların ve sinir demeti ortaya çıkarmak. </li><li> Kavisli ipuçları ile ince forseps kullanarak ven ve sinirden femoral arter ayırın. </li><li> Arterin altında üç ipek sütür koyun ve her dikiş gevşek bir düğüm yapmak. </li><li> Daha sonra kateterizasyon damar genişlemesini ortaya çıkarmak için arter yüzeyine 0.1 mi lidokain (% 2) uygulanır. </li><li> Proksimale gevşek ipek sütür germe tarafından kalıcı ipek düğümle ve geçici blok ile distalde damar sabitleyin. </li><li> 20 numaralı kavisli iğne kullanılarak arter delinme ve bir kateter yerleştirme aracını kullanarak telemetre kateter (8 cm uzunluğunda) ucunu yerleştirin. </li><li> Rostrally kadar böylece torasik aorta ucunu yerleştirerek 4 cm kateter yerleştirin. </li><li> Femoral arter boyunca üç ipek sütür bağlama ile kap içindeki kateter çapa. </li><li> Göğüs kafesi ve t kaudal kenarı arasındaki kanadını boyunca deri altı cebe olunO bir künt makas ile dizim aralığının en kranial uzantısı. </li><li> Aşırı hareket etmesini önlemek için vericiyi çevreleyen bağ dokusu için cep ve dikiş içine verici vücudu yerleştirin. </li><li> No: 6 ipek iplik ile deriyi dikin. </li><li> Ringer (5 mi), buprenorfin (0.035 mg / kg) deri altından ameliyattan hemen sonra Ampisilin (33 mg / kg) enjekte edilmiş ve uyanık kadar ılık bir kuluçka makinesi içinde fareleri korumak. </li></ol> 3. Bazal Ortalama Arter Basıncı (MAP) ve Kalp Hızı (HR) Kayıt <ol><li> Gibi erken bir verici implante edildikten sonraki bir gün olarak, alıcı yastığı bir canlıya koymak ve vericiyi açın. Kardiyovasküler parametreleri hayvan alışmakta ve stabilize etmek için 15 dakika - yaklaşık 10 bekleyin. </li><li> En az 1 saat boyunca bir bilgisayarlı veri toplama sistemi ile atım arter basıncı elde edilir Kayıt dinlenme MAP ve HR. Veriyi her 5 sn toplayın. </li><li> An Monitörimals sürekli ve görünür spazm oluşumu sırasında veri noktalarını kaldırın. Her bir hayvan için ortalama veri noktaları ortalama değerleri elde edildi. </li></ol> 4. Kolorektal otonomik disrefleksi Distansiyon indüklenen <ol><li> Verici alıcı üzerinde içinde gıda pelet ile birlikte bir havlu NSC-aşılı veya SCI kontrol fareleri kısıtlamaktadır. Genellikle sıçan işlem sırasında işbirliği kalabilir. </li><li> Yaklaşık 2 cm için rektum içine lateks balon uçlu kateter yerleştirin ve bantla 8 ile kuyruk sabitleyin. </li><li> Vericiyi açın ve bekleyin 10 - 15 dakika kan basıncı Ön ekleme taban değere dönmelerine izin. </li><li> Yaklaşık 30 mmHg&#39;lik bir basınç elde etmek için yavaş yavaş, 1 dakika boyunca, 1.4 ml hava ile 10 saniye içinde balonun şişirilmesi kolorektal distansiyon yol açar. </li><li> Tutanak MAP ve daha önce HR 1 dk sırasında 1 dk, ve kolorektal distansiyon 1 dk sonra; örnek verileri 3 dakika işlem sırasında her 3 sn. </li><li>İki denemeler arasında en az 15 dakika kurtarma aralığı ile hayvan başına 3 deneme - 2 gerçekleştirin. </li><li> Eğer başka değerlendirme yukarıda açıklanan çift doz anestezi kombinasyonu ile doz aşımı hayvanlar (ip). % 4 paraformaldehid, ardından tuzlu su ile hayvanlar serpmek. </li><li> Her bir hayvan için, daha önce, sırasıyla kolorektal gerilimi sırasında ortalama değerleri; Başlangıçta ve her deneme için şişme kaynaklı MAP ve İK değişiklikler arasındaki farkı hesaplamak; 2 yılı ortalama - 3 deneme ortalama değerler elde etmek. </li></ol> 5. Verici Temizleme <ol><li> Anesteziden sonra ancak perfüzyon önce hayvan vücudunun gelen vericiyi çıkarın. Temizlenene kadar damıtılmış su ile dolu bir beher içinde hemen bekletin; uzaktan ölçüm cihazının kurumayı önlemek. </li><li> Oda sıcaklığında 24 saat boyunca% 1 Terg-A-Zyme enzimatik bir temizleme çözeltisi (10 g / L su) için telemetre aktarın. </li><li> Kör bir 30 gauge iğne ile verici kateterin ucu REGELRegel şırıngaya bağlanır. </li><li> Dikkatlice katlanmış yumuşak dokuyu kullanarak vericiyi kurulayın ve orijinal plastik tepsi içinde saklayın. </li></ol>

<ol>
	<li>Krassioukov, A. V., Furlan, J. C., Fehlings, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autonomic+dysreflexia+in+acute+spinal+cord+injury:+an+under-recognized+clinical+entity.">Autonomic dysreflexia in acute spinal cord injury: an under-recognized clinical entity.</a> J Neurotrauma. 20, 707-716 (2003).</li><li>Lindan, R., Joiner, E., Freehafer, A. A., Hazel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+and+clinical+features+of+autonomic+dysreflexia+in+patients+with+spinal+cord+injury.">Incidence and clinical features of autonomic dysreflexia in patients with spinal cord injury.</a> Paraplegia. 18, 285-292 (1980).</li><li>Inskip, J. A., Ramer, L. M., Ramer, M. S., Krassioukov, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autonomic+assessment+of+animals+with+spinal+cord+injury:+tools,+techniques+and+translation.">Autonomic assessment of animals with spinal cord injury: tools, techniques and translation.</a> Spinal Cord. 47, 2-35 (2009).</li><li>Mayorov, D. N., Adams, M. A., Krassioukov, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Telemetric+blood+pressure+monitoring+in+conscious+rats+before+and+after+compression+injury+of+spinal+cord.">Telemetric blood pressure monitoring in conscious rats before and after compression injury of spinal cord.</a> J Neurotrauma. 18, 727-736 (2001).</li><li>Hou, S., Tom, V. J., Graham, L., Lu, P., Blesch, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partial+restoration+of+cardiovascular+function+by+embryonic+neural+stem+cell+grafts+after+complete+spinal+cord+transection.">Partial restoration of cardiovascular function by embryonic neural stem cell grafts after complete spinal cord transection.</a> J Neurosci. 33, 17138-17149 (2013).</li><li>Lu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-distance+growth+and+connectivity+of+neural+stem+cells+after+severe+spinal+cord+injury.">Long-distance growth and connectivity of neural stem cells after severe spinal cord injury.</a> Cell. 150, 1264-1273 (2012).</li><li>Akhavan, M., Hoang, T. X., Havton, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+detection+of+fluorogold-labeled+neurons+in+long-term+studies.">Improved detection of fluorogold-labeled neurons in long-term studies.</a> J Neurosci Methods. 152, 156-162 (2006).</li><li>Maiorov, D. N., Fehlings, M. G., Krassioukov, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+severity+of+spinal+cord+injury+and+abnormalities+in+neurogenic+cardiovascular+control+in+conscious+rats.">Relationship between severity of spinal cord injury and abnormalities in neurogenic cardiovascular control in conscious rats.</a> J Neurotrauma. 15, 365-374 (1998).</li><li>Laird, A. S., Carrive, P., Waite, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular+and+temperature+changes+in+spinal+cord+injured+rats+at+rest+and+during+autonomic+dysreflexia.">Cardiovascular and temperature changes in spinal cord injured rats at rest and during autonomic dysreflexia.</a> J Physiol. 577, 539-548 (2006).</li><li>Phillips, A. A., Krassioukov, A. V., Ainslie, P. N., Warburton, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Baroreflex+function+after+spinal+cord+injury.">Baroreflex function after spinal cord injury.</a> J Neurotrauma. 29, 2431-2445 (2012).</li><li>Osborn, J. W., Taylor, R. F., Schramm, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determinants+of+arterial+pressure+after+chronic+spinal+transection+in+rats.">Determinants of arterial pressure after chronic spinal transection in rats.</a> Am J Physiol. 256, 666-673 (1989).</li><li>Rabchevsky, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+gabapentin+on+muscle+spasticity+and+both+induced+as+well+as+spontaneous+autonomic+dysreflexia+after+complete+spinal+cord+injury.">Effects of gabapentin on muscle spasticity and both induced as well as spontaneous autonomic dysreflexia after complete spinal cord injury.</a> Front Physiol. 3, 329 (2012).</li><li>Hou, S., Lu, P., Blesch, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+supraspinal+vasomotor+pathways+and+autonomic+dysreflexia+after+spinal+cord+injury+in+F344+rats.">Characterization of supraspinal vasomotor pathways and autonomic dysreflexia after spinal cord injury in F344 rats.</a> Auton Neurosci. 176, 54-63 (2013).</li></ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Geleneksel olarak, bir sıvı doldurulmuş kanül artere yerleştirilmiş ve her bir hayvan 11 bir uç anlık gibi kalp-damar parametrelerini kaydetmek için bir basınç transdüktörüne bağlanır. Sürekli uzun süre kardiyovasküler performansını izlemek için, radyo-telemetrik sistemler birçok laboratuvarda istihdam edilmektedir. Bu daha rafine araç serbestçe hayvanlar hareket, bilinçli kan basıncını kaydedebilirsiniz. Sıvı dolu kateterler ile karşılaştırıldığında, telemetri doğru SC...

Kardiyovasküler disfonksiyon yüksek seviyelerde spinal kord yaralanması (SKY) sonra oluşur. Bu düzensiz kan basıncı ve kalp hızı istirahat, ortostatik hipotansiyon, egzersiz kaynaklı hipotansiyon ve yaralanma seviyesinin 1,2 altında duyusal uyaranlara yanıt olarak hipertansiyon ve barorefleks bradikardi atakları ile karakterize otonom disrefleksi&#39;ye tecelli. Bu belirtiler spinal kord yaralı hastaların günlük yaşam müdahale. Böylece, SCI ve deneysel tedaviler hayvanlarda kardiyovasküler değişikliklerin araştırılması için etkili araçlar oluşturulması önem taşımaktadır. Hayvanlarda kardiyovasküler fonksiyonu araştırmak için, çeşitli teknikler, kan basıncını ve kalp hızını izlemek için kullanılmıştır. Noninvaziv kuyruk manşetleri periferik kan basıncını 3 ölçmek için istihdam edilebilir, oysa Orta kardiyovasküler parametreler, kanül yerleştirilmesi ve telemetri ile kaydedilebilir. Diğer yöntemler, tele karşılaştırıldığındametri serbestçe hareket eden hayvanlar ve kardiyovasküler fonksiyon 4 uzun süreli izlemede sürekli olarak kaydedilmesini sağlayan temel bir avantaja sahiptir. Omurilik yaralanması, hayvan modellerinde, deneysel uyarıldıktan sonra periferal kan basıncı değişiklikleri tespit edilmesi için yeterince büyük olmayabilir. Bu duruma göre, müsait kalp izleme tekniği omurilik yaralanması olan hayvanlar için seçilmelidir. Bu çalışmada, bir radyo-telemetrik sistem tam omurilik transeksiyondan sonra erişkin sıçanlarda kardiyovasküler fonksiyonu izlemek için tanıtıldı. Sıçanlar lezyon yerinde sinjeneiktir sıçan embriyonik gün 14 (E14) beyin sapı kaynaklı nöral kök hücreler (BS-NSC&#39;lerde) greft aldı. Yaralanma ve hiçbir nakli ve naif, yaralanmamış sıçanlara sıçanlar kontrol olarak görev yaptı. Telemetri prosedürü verici sterilizasyon ve implantasyonu (Şekil 1), bazal kardiyovasküler parametre kayıt, distansiyon kaynaklı yanıtları, ve verici temizlik içerir vedepolama.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="580">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td colspan="2" height="21" style="height:21px;width:315px;">Table of Specific Materials/Equipment:</td>
			<td style="width:103px;"></td>
			<td style="width:164px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="41" rowspan="2" style="height:41px;width:120px;">Reagents</td>
			<td rowspan="2" style="width:195px;">Company</td>
			<td rowspan="2" style="width:103px;">Catalogue</td>
			<td rowspan="2" style="width:164px;">Comment</td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="83" rowspan="2" style="height:83px;width:120px;">Fibrinogen (rat)</td>
			<td rowspan="2" style="width:195px;">Sigma</td>
			<td rowspan="2" style="width:103px;">F6755-25MG</td>
			<td rowspan="2" style="width:164px;">2 hr at 37oC to dissovle</td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="59">
			<td height="80" rowspan="2" style="height:80px;width:120px;">Thrombin (rat)</td>
			<td rowspan="2" style="width:195px;">Sigma</td>
			<td rowspan="2" style="width:103px;">T5772-100UN</td>
			<td rowspan="2" style="width:164px;">Dissovle in 10 mM CaCl2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:120px;">1% Terg-A-Zyme</td>
			<td style="width:195px;">Sigma</td>
			<td style="width:103px;">Z273287</td>
			<td style="width:164px;">Enzymatic solution for telemeter cleaning</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:120px;">Fluorogold</td>
			<td style="width:195px;">Fluorochrome</td>
			<td style="width:103px;"></td>
			<td style="width:164px;">Dissovle in distilled water and avoid light</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:120px;">Telemeter&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; (PA-C40)</td>
			<td style="width:195px;">Data Sciences International</td>
			<td style="width:103px;"></td>
			<td style="width:164px;"></td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:120px;">Telementric recording and analysis system</td>
			<td style="width:195px;">Data Sciences International</td>
			<td style="width:103px;"></td>
			<td style="width:164px;">Signal stimulator, Data Exchange Matrix, receivers, Ambient pressure reference monitor</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:120px;">Balloon-tipped catheter</td>
			<td style="width:195px;">Edward Lifesciences</td>
			<td style="width:103px;">111F7-P</td>
			<td style="width:164px;">For colorectal distension</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a radio-telemetric system to monitor cardiovascular function in rats with spinal cord transection and embryonic neural stem cell grafts

Yüksek torasik veya servikal spinal kord yaralanması (SKY) kardiyovasküler fonksiyon bozukluğuna yol açabilir. Kardiyovasküler parametreleri izlemek için, biz ya da yeşil floresan proteinini ifade embriyonik beyin sapı kaynaklı nöral kök hücrelerin aşılama olmadan T4 omurilik kesiye uygulanan sıçanların femoral artere bir radyo vericisi bağlı bir kateter yerleştirildi. Böyle kanül yerleştirilmesi veya kuyruk-manşet gibi diğer yöntemlerle karşılaştırıldığında, telemetri sürekli serbestçe hareket hayvanlarda kan basıncını ve kalp hızını izlemek için avantajlıdır. Ayrıca, uzun süreli, birden fazla veri satın alma yeteneğine sahiptir. Spinal kord yaralı sıçanlarda, kolorektal distansiyona yanıt dizginlenmemiş durumuna ve otonom disrefleksi&#39;ye altında bazal kardiyovasküler verileri başarıyla kaydedildi. Bir verici, bir omurilik transeksiyonu önce yerleştirilmiş, buna ek olarak, önceki ve omurilik yaralanması sonrasında Kalp damarı parametreler, aynı farede karşılaştırılabilir. Anlatılan telemet bir sınırlamary prosedür femoral artere implantasyonu ipsilateral hindlimb için kan akımını etkileyebilir olmasıdır.

Yukarıda açıklanan telemetri tekniği kullanarak, başarılı spinal kord yaralı hayvanların kardiyovasküler parametreleri kaydedildi. İK önceki raporlarda 9 ile tutarlı naif hayvanlara göre artış ise yalnız omurilik yaralanması olan hayvanlar, MAP önemli ölçüde azaldı. BS-MGK aşılama, MAP ve HR ile hayvanlarda naif hayvanlarda ölçülen düzeyleri (Şekil 2) yaklaştı. Zararlı stimülasyon MAP bir artış ve İK 3,8 bir azalma meydana eğer kolorektal dista...

Watch this Scientific Journal Video about A Radio-telemetric System to Monitor Cardiovascular Function in Rats with Spinal Cord Transection and Embryonic Neural Stem Cell Grafts at JoVE.com

A Radio-telemetric System to Monitor Cardiovascular Function in Rats with Spinal Cord Transection and Embryonic Neural Stem Cell Grafts

Biz lezyon yerinde içine aşılama sekiz hafta embriyonik beyin nöral kök hücre T4 omurilik kesilen sıçanlarda kardiyovasküler parametreleri kaydetmek için bir radyo-telemetrik sisteminin kullanılması için bir protokol mevcut. Telemetri doğru bilinçli serbestçe hareket spinal kord yaralı sıçanlarda kardiyovasküler fonksiyonu değerlendirmek için gelişmiş bir tekniktir.

A Radyo-telemetrik Sistemi Omurilik transeksiyonu ve Embriyonik Nöral Hücre Greftler Kök Sıçanlarda Kardiyovasküler Fonksiyonu Monitör

High thoracic or cervical spinal cord injury (SCI) can lead to cardiovascular dysfunction. To monitor cardiovascular parameters, we implanted a catheter ...

a-radio-telemetric-system-to-monitor-cardiovascular-function-rats

Research

JoVE Journal

Medicine

10.4K Görüntüleme.  Drexel University College of Medicine.  Biz lezyon yerinde içine aşılama sekiz hafta embriyonik beyin nöral kök hücre T4 omurilik kesilen sıçanlarda kardiyovasküler parametreleri kaydetmek için bir radyo-telemetrik sisteminin kullanılması için bir protokol mevcut. Telemetri doğru bilinçli serbestçe hareket spinal kord yaralı sıçanlarda kardiyovasküler fonksiyonu değerlendirmek için gelişmiş bir tekniktir. 

Video: A Radio-telemetric System to Monitor Cardiovascular Function in Rats with Spinal Cord Transection and Embryonic Neural Stem Cell Grafts

Assessing Endothelial Vasodilator Function with the Endo-PAT 2000

The endothelium is a delicate monolayer of cells that lines all blood vessels, and which comprises the systemic and lymphatic capillaries. By virtue of the panoply of paracrine factors that it secretes, the endothelium regulates the contractile and proliferative state of the underlying vascular smooth muscle, as well as the interaction of the vessel wall with circulating blood elements. Because of its central role in mediating vessel tone and growth, its position as gateway to circulating immune cells, and its local regulation of hemostasis and coagulation, the the properly functioning endothelium is the key to cardiovascular health. Conversely, the earliest disorder in most vascular diseases is endothelial dysfunction.
In the arterial circulation, the healthy endothelium generally exerts a vasodilator influence on the vascular smooth muscle. There are a number of methods to assess endothelial vasodilator function. The Endo-PAT 2000 is a new device that is used to assess endothelial vasodilator function in a rapid and non-invasive fashion. Unlike the commonly used technique of duplex ultra-sonography to assess flow-mediated vasodilation, it is totally non-operator-dependent, and the equipment is an order of magnitude less expensive. The device records endothelium-mediated changes in the digital pulse waveform known as the PAT ( peripheral Arterial Tone) signal, measured with a pair of novel modified plethysmographic probes situated on the finger index of each hand. Endothelium-mediated changes in the PAT signal are elicited by creating a downstream hyperemic response. Hyperemia is induced by occluding blood flow through the brachial artery for 5 minutes using an inflatable cuff on one hand. The response to reactive hyperemia is calculated automatically by the system. A PAT ratio is created using the post and pre occlusion values. These values are normalized to measurements from the contra-lateral arm, which serves as control for non-endothelial dependent systemic effects. Most notably, this normalization controls for fluctuations in sympathetic nerve outflow that may induce changes in peripheral arterial tone that are superimposed on the hyperemic response.
In this video we demonstrate how to use the Endo-PAT 2000 to perform a clinically relevant assessment of endothelial vasodilator function.

A noninvasive procedure to assess endothelial function is demonstrated using the Endo-PAT 2000.

Endo-PAT 2000 ile Endotel Vazodilatör Fonksiyon değerlendirilmesi

The endothelium is a delicate monolayer of cells that lines all blood vessels, and which comprises the systemic and lymphatic capillaries. By virtue of ...

Tıp

Acute and Chronic Tactile Sensory Testing after Spinal Cord Injury in Rats

Spinal cord injury (SCI) impairs sensory systems causing allodynia1-8. To identify cellular and molecular causes of allodynia, sensitive and valid sensory testing in rat SCI models is needed. However, until recently, no single testing approach had been validated for SCI so that standardized methods have not been implemented across labs. Additionally, available testing methods could not be implemented acutely or when severe motor impairments existed, preventing studies of the development of SCI-induced allodynia3. Here we present two validated sensory testing methods using von Frey Hair (VFH) monofilaments which quantify changes in tactile sensory thresholds after SCI4-5. One test is the well-established Up-Down test which demonstrates high sensitivity and specificity across different SCI severities when tested chronically5. The other test is a newly-developed dorsal VFH test that can be applied acutely after SCI when allodynia develops, prior to motor recovery4-5. Each VFH monofilament applies a calibrated force when touched to the skin of the hind paw until it bends. In the up-down method, alternating VFHs of higher or lower forces are used on the plantar L5 dermatome to delineate flexor withdrawal thresholds. Successively higher forces are applied until withdrawal occurs then lower force VFHs are used until withdrawal ceases. The tactile threshold reflects the force required to elicit withdrawal in 50% of the stimuli. For the new test, each VFH is applied to the dorsal L5 dermatome of the paw while the rat is supported by the examiner. The VFH stimulation occurs in ascending order of force until at least 2 of 3 applications at a given force produces paw withdrawal. Tactile sensory threshold is the lowest force to elicit withdrawal 66% of the time. Acclimation, testing and scoring procedures are described. Aberrant trials that require a retest and typical trials are defined. Animal use was approved by Ohio State University Animal Care and Use Committee.

We describe two tactile sensory testing methods for acute or chronic periods of spinal cord injury in rats. These validated procedures can detect the development and maintenance of allodynia-like sensations.

Sıçanlarda Spinal Kord Yaralanma sonrası Akut ve Kronik Dokunsal Duyu Testi

Spinal cord injury (SCI) impairs sensory systems causing allodynia1-8. To identify cellular and molecular causes of allodynia, sensitive and valid sensory ...

A Contusion Model of Severe Spinal Cord Injury in Rats

The translational potential of novel treatments should be investigated in severe spinal cord injury (SCI) contusion models. A detailed methodology is described to obtain a consistent model of severe SCI. Use of a stereotactic frame and computer controlled impactor allows for creation of reproducible injury. Hypothermia and urinary tract infection pose significant challenges in the post-operative period. Careful monitoring of animals with daily weight recording and bladder expression allows for early detection of post-operative complications. The functional results of this contusion model are equivalent to transection models. The contusion model can be utilized to evaluate the efficacy of both neuroprotective and neuroregenerative approaches.

A contusion model of severe spinal cord injury is described. Detailed pre-operative, operative and post-operative steps are described to obtain a consistent model.

Sıçanlarda Şiddetli Spinal Kord Yaralanması bir bere modeli

The translational potential of novel treatments should be investigated in severe spinal cord injury (SCI) contusion models. A detailed methodology is ...

Synergetic Use of Neural Precursor Cells and Self-assembling Peptides in Experimental Cervical Spinal Cord Injury

Spinal cord injuries (SCI) cause serious neurological impairment and psychological, economic, and social consequences for patients and their families. Clinically, more than 50% of SCI affect the cervical spine1. As a consequence of the primary injury, a cascade of secondary mechanisms including inflammation, apoptosis, and demyelination occur finally leading to tissue scarring and development of intramedullary cavities2,3. Both represent physical and chemical barriers to cell transplantation, integration, and regeneration. Therefore, shaping the inhibitory environment and bridging cavities to create a supportive milieu for cell transplantation and regeneration is a promising therapeutic target4. Here, a contusion/compression model of cervical SCI using an aneurysm clip is described. This model is more clinically relevant than other experimental models, since complete transection or ruptures of the cord are rare. Also in comparison to the weight drop model, which in particular damage the dorsum columns, circumferential compression of the spinal cord appears advantageous. Clip closing force and duration can be adjusted to achieve different injury severity. A ring spring facilitates precise calibration and constancy of clip force. Under physiological conditions, synthetic self-assembling peptides (SAP) self-assemble into nanofibers and thus, are appealing for application in SCI5. They can be injected directly into the lesion minimizing damage to the cord. SAPs are biocompatible structures erecting scaffolds to bridge intramedullary cavities and thus, equip the damaged cord for regenerative treatments. K2(QL)6K2 (QL6) is a novel SAP introduced by Dong et al.6 In comparison to other peptides, QL6 self-assembles into &#946;-sheets at neutral pH6.14 days after SCI, after the acute stage, SAPs are injected into the center of the lesion and neural precursor cells (NPC) are injected into adjacent dorsal columns. In order to support cell survival, transplantation is combined with continuous subdural administration of growth factors by osmotic micro pumps for 7 days.

Treating cervical spinal cord injury with both self-assembling peptides (SAP) and neural precursor cells (NPC), together with growth factors, is a promising approach to promote regeneration and recovery. A contusion/compression aneurysm clip rat model of cervical SCI and combined treatment involving SAP injection and NPC transplantation is established.

Deneysel Servikal Spinal Kord Yaralanmalarında Sinir Öncü Hücreler ve Öz-montaj Peptitler sinerjik Kullanımı

Spinal cord injuries (SCI) cause serious neurological impairment and psychological, economic, and social consequences for patients and their families. ...

Neural Stem Cell Transplantation in Experimental Contusive Model of Spinal Cord Injury

Spinal cord injury is a devastating clinical condition, characterized by a complex of neurological dysfunctions. Animal models of spinal cord injury can be used both to investigate the biological responses to injury and to test potential therapies. Contusion or compression injury delivered to the surgically exposed spinal cord are the most widely used models of the pathology. In this report the experimental contusion is performed by using the Infinite Horizon (IH) Impactor device, which allows the creation of a reproducible injury animal model through definition of specific injury parameters. Stem cell transplantation is commonly considered a potentially useful strategy for curing this debilitating condition. Numerous studies have evaluated the effects of transplanting a variety of stem cells. Here we demonstrate an adapted method for spinal cord injury followed by tail vein injection of cells in CD1 mice. In short, we provide procedures for: i) cell labeling with a vital tracer, ii) pre-operative care of mice, iii) execution of a contusive spinal cord injury, and iv) intravenous administration of post mortem neural precursors. This contusion model can be utilized to evaluate the efficacy and safety of stem cell transplantation in a regenerative medicine approach.

Spinal cord injury is a traumatic condition that causes severe morbidity and high mortality. In this work we describe in detail a contusion model of spinal cord injury in mice followed by a transplantation of neural stem cells.

Omurilik Yaralanması Deneysel Kontuzif Modelinde Sinir Kök Hücre Nakli

Spinal cord injury is a devastating clinical condition, characterized by a complex of neurological dysfunctions. Animal models of spinal cord injury can ...

Photothrombosis-induced Focal Ischemia as a Model of Spinal Cord Injury in Mice

Spinal cord injury (SCI) is a devastating clinical condition causing permanent changes in sensorimotor and autonomic functions of the spinal cord (SC) below the site of injury. The secondary ischemia that develops following the initial mechanical insult is a serious complication of the SCI and severely impairs the function and viability of surviving neuronal and non-neuronal cells in the SC. In addition, ischemia is also responsible for the growth of lesion during chronic phase of injury and interferes with the cellular repair and healing processes. Thus there is a need to develop a spinal cord ischemia model for studying the mechanisms of ischemia-induced pathology. Focal ischemia induced by photothrombosis (PT) is a minimally invasive and very well established procedure used to investigate the pathology of ischemia-induced cell death in the brain. Here, we describe the use of PT to induce an ischemic lesion in the spinal cord of mice. Following retro-orbital sinus injection of Rose Bengal, the posterior spinal vein and other capillaries on the dorsal surface of SC were irradiated with a green light resulting in the formation of a thrombus and thus ischemia in the affected region. Results from histology and immunochemistry studies show that PT-induced ischemia caused spinal cord infarction, loss of neurons and reactive gliosis. Using this technique a highly reproducible and relatively easy model of SCI in mice can be achieved that would serve the purpose of scientific investigations into the mechanisms of ischemia induced cell death as well as the efficacy of neuroprotective drugs. This model will also allow exploration of the pathological changes that occur following SCI in live mice like axonal degeneration and regeneration, neuronal and astrocytic Ca2+ signaling using two-photon microscopy.

Photothrombosis is a minimally invasive and highly reproducible procedure to induce focal ischemia in the spinal cord and serves as a model of spinal cord injury in mice.

Farelerde Omurilik Yaralanma Modeli Olarak Odak iskemisi Fototromboz kaynaklı

Spinal cord injury (SCI) is a devastating clinical condition causing permanent changes in sensorimotor and autonomic functions of the spinal cord (SC) ...

A Neonatal Mouse Spinal Cord Compression Injury Model

Spinal cord injury (SCI) typically causes devastating neurological deficits, particularly through damage to fibers descending from the brain to the spinal cord. A major current area of research is focused on the mechanisms of adaptive plasticity that underlie spontaneous or induced functional recovery following SCI. Spontaneous functional recovery is reported to be greater early in life, raising interesting questions about how adaptive plasticity changes as the spinal cord develops. To facilitate investigation of this dynamic, we have developed a SCI model in the neonatal mouse. The model has relevance for pediatric SCI, which is too little studied. Because neural plasticity in the adult involves some of the same mechanisms as neural plasticity in early life1, this model may potentially have some relevance also for adult SCI. Here we describe the entire procedure for generating a reproducible spinal cord compression (SCC) injury in the neonatal mouse as early as postnatal (P) day 1. SCC is achieved by performing a laminectomy at a given spinal level (here described at thoracic levels 9-11) and then using a modified Yasargil aneurysm mini-clip to rapidly compress and decompress the spinal cord. As previously described, the injured neonatal mice can be tested for behavioral deficits or sacrificed for ex vivo physiological analysis of synaptic connectivity using electrophysiological and high-throughput optical recording techniques1. Earlier and ongoing studies using behavioral and physiological assessment have demonstrated a dramatic, acute impairment of hindlimb motility followed by a complete functional recovery within 2 weeks, and the first evidence of changes in functional circuitry at the level of identified descending synaptic connections1.

This article describes a method for generating a reproducible spinal cord compression injury (SCI) in the neonatal mouse. The model provides an advantageous platform for studying mechanisms of adaptive plasticity that underlie spontaneous functional recovery.

Bir Yenidoğan Fare Omurilik Sıkıştırma Yaralanması Modeli

Spinal cord injury (SCI) typically causes devastating neurological deficits, particularly through damage to fibers descending from the brain to the spinal ...

Vein Interposition Model: A Suitable Model to Study Bypass Graft Patency

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. Research models for bypass graft failure are essential for a better understanding of pathobiological and pathophysiological processes during graft patency loss. Large animal models, such as pigs or sheep, resemble human anatomical structures but require special facilities and equipment. This video describes a rat vein interposition model to investigate vein graft patency loss. Rats are inexpensive and easy to handle. Compared to mouse models, the convenient size of rats permits better operability and enables a sufficient amount of material to be obtained for further diverse analysis. In brief, the inferior epigastric vein of a donor rat is harvested and used to replace a segment of the femoral artery. Anastomosis is conducted via single stitches and sealed with fibrin glue. Graft patency can be monitored non-invasively using duplex sonography. Myointimal hyperplasia, which is the main cause for graft patency loss, develops progressively over time and can be calculated from histological cross sections.

This video demonstrates a model to study the development of myointimal hyperplasia after venous interposition surgery in rats.

Ven interpozisyonu Model: baypas açıklığının Eğitim için uygun bir model

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. ...

Studying the Hypothalamic Insulin Signal to Peripheral Glucose Intolerance with a Continuous Drug Infusion System into the Mouse Brain

Insulin regulates systematic metabolism in the hypothalamus and the peripheral insulin response. An inflammatory reaction in peripheral adipose tissues contributes to type 2 diabetes mellitus (T2DM) development and appetite regulation in the hypothalamus. Chemokine CCL5 and C-C chemokine receptor type 5 (CCR5) levels have been suggested to mediate arteriosclerosis and glucose intolerance in type 2 diabetes mellitus (T2DM). In addition, CCL5 plays a neuroendocrine role in the hypothalamus by regulating food intake and body temperature, thus, prompting us to investigate its function in hypothalamic insulin signaling and the regulation of peripheral glucose metabolism.
The micro-osmotic pump brain infusion system is a quick and precise way to manipulate CCL5 function and study its effect in the brain. It also provides a convenient alternative approach to generating a transgenic knockout animal. In this system, CCL5 signaling was blocked by intracerebroventricular (ICV) infusion of its antagonist, MetCCL5, using a micro-osmotic pump. The peripheral glucose metabolism and insulin responsiveness was detected by the Oral Glucose Tolerance Test (OGTT) and Insulin Tolerance Test (ITT). Insulin signaling activity was then analyzed by protein blot from tissue samples derived from the animals.
After 7-14 days of MetCCL5 infusion, the glucose metabolism and insulin responsiveness was impaired in mice, as seen in the results of the OGTT and ITT. The IRS-1 serine302 phosphorylation was increased and the Akt activity was reduced in mice hypothalamic neurons following CCL5 inhibition. Altogether, our data suggest that blocking CCL5 in the mouse brain increases the phosphorylation of IRS-1 S302 and interrupts hypothalamic insulin signaling, leading to a decrease in insulin function in peripheral tissues as well as the impairment of glucose metabolism.

This protocol studies the role of chemokine (C-C motif) ligand 5 (CCL5) in the hypothalamus by delivering an antagonist, MetCCL5, into the mouse brain using a micro-osmotic pump brain infusion system. This transient inhibition of CCL5 activity interrupted hypothalamic insulin signaling, leading to glucose intolerance and peripheral systemic insulin sensitivity.

Hipotalamik insülin sinyal fare beyin içine sürekli uyuşturucu infüzyon sistemi ile periferik glikoz intoleransı için eğitim

Insulin regulates systematic metabolism in the hypothalamus and the peripheral insulin response. An inflammatory reaction in peripheral adipose tissues ...

Balloon-based Injury to Induce Myointimal Hyperplasia in the Mouse Abdominal Aorta

The use of animal models is essential for a better understanding of MH, one major cause for arterial stenosis.In this article, we demonstrate a murine balloon denudation model, which is comparable with established vessel injury models in large animals. The aorta denudation model with balloon catheters mimics the clinical setting and leads to comparable pathobiological and physiological changes. Briefly, after performing a horizontal incision in the aorta abdominalis, a balloon catheter will be inserted into the vessel, inflated, and introduced retrogradely. Inflation of the balloon will lead to intima injury and overdistension of the vessel. After removing the catheter, the aortic incision will be closed with single stiches. The model shown in this article is reproducible, easy to perform, and can be established quickly and reliably. It is especially suitable for evaluating expensive experimental therapeutic agents, which can be applied in an economical fashion. By using different knockout-mouse strains, the impact of different genes on MH development can be assessed.

This article demonstrates a murine model to study the development of myointimal hyperplasia (MH) after aortic balloon injury.

Fare Abdominal aort Myointimal Hiperplazi ikna etmek için balon tabanlı yaralanma

The use of animal models is essential for a better understanding of MH, one major cause for arterial stenosis.In this article, we demonstrate a murine ...