Işınlama <ol><li> Transplantasyon öncesi 25Gy 2 gün ışın tedavisi WT balık </li></ol> Böbrek diseksiyonu <ol><li> Tricaine (~ 100ml 4mg/ml Tricaine balık su / litre) (500.000 hücreler donör balık başına ortalama) uygun sayıda floresan donörlerin Kurban </li><li> 0.9X PBS +% 5 FCS +% 1 Penn strep (PBS + &quot;) tüp içine böbrek Isolate </li><li> 18 1 / 2 G iğne ile, daha sonra 10 ml şırınga ile 1 ml pipetlemeyin Break ile </li><li> Konik 50ml içine aktarın ve PBS ile doldurmak + </li><li> @ 1500rpm 8dk aşağı Spin </li><li> 40micron filtresi aracılığıyla geniş hacim ve filtre, tekrar süspansiyon pelet dökeceğim </li><li> @ 1500rpm 8dk aşağı Spin </li><li> 1ml PBS içinde tekrar süspansiyon, dışarı dökün +, Eppendorf tüpüne transfer </li><li> Saymak için: 10ul hücre sol + 90ul tripan mavi (şimdi 10X seyreltilir) </li><li> 10ul hücre sol + 90ul PBS + (şimdi seyreltilir 10X) </li><li> Hemasitometre her iki tarafında her iki 10ul sol ekleyin, 5 dakika bekletin </li><li> Ölüm oranı büyük bir kutu (5x5), hesap hücre sayımı önemli. </li><li> Hücre / ml = (hücre sayısı) (10 4) (x10 dil faktörü) Örnek - 60 hemasitometre sayılır hücrelerinin toplam 6.000.000 hücreleri </li><li> Örnek @ 1500rpm aşağı Spin 8dk </li><li> Uygun hücre konsantrasyonu elde etmek için tekrar süspansiyon pelet giriş hacmini </li><li> 3ul WKM ve 2ul olan periferik kan enjekte etmek 5ul toplam hacmi </li><li> Örnek - 6.000.000 hücrelerinin toplam alıcı başına 200.000 hücre nakli için 20 alıcı var 66.667 hücre / ul (200.000 hücre / 3ul) istiyor 90ul tekrar süspansiyon pelet (6.000.000 hücre / 66.667 hücre / ul) Sadece bunun 60ul hakkında gerekli (20recip x 3ul) </li></ol> Periferik kan emme <ol><li> Tricaine (~ 100ml 4mg/ml Tricaine balık su / litre) WT balık taşıyıcı kan (donör ortalama 2.000.000 hücreleri ortalama) uygun sayıda Kurban </li><li> Antikoagülan: 1ml PBS seyreltik 1ul (3unit/ul) + </li><li> Heparin ile Coat pipetlemeyin ucu, pipetlemeyin ucu ile solungaç üzerinden bıçak, PBS kan + </li><li> Spin 1.5mL içinde tekrar süspansiyon 1500rpm 5min </li><li> Spin 1ml içinde tekrar süspansiyon 1500rpm 5min </li><li> 40micron filtre süzülür </li><li> Yukarıdaki gibi hücre sayımı </li><li> Hücre / ml = (hücre sayısı) (10 4) (x10 dil faktörü) </li><li> Hesap ölüm </li><li> Tabanda hacmi yukarıdaki gibi hesaplayın </li></ol> Enjeksiyon <ol><li> Hamilton şırınga kullanarak her alıcı kalp içine enjekte 5ul </li><li> Nemli bir sünger tricaine balık (4.2ml (4mg/ml) Tricaine / 100ml balık su) ve yer anestezisi </li><li> Kalp arkasında küçük bir ipucu Ekle </li><li> Kan küçük bir patlama (kalp vurmak anlamı) görene kadar kalp alanı çevresinde Poke -&gt; görüyorum ama yine de enjekte değil Olabilir </li></ol> Balık ICU - enjeksiyon sonrası <ol><li> Enfeksiyonu önlemek için, 1 hafta boyunca akış kapalı balık tutun </li><li> Kafes ortalama 5-10 balık koyun </li><li> Ölü çıkarın ve kaydını tutmak </li><li> El ile her gün su değişimi </li></ol>

transplantation of whole kidney marrow in adult zebrafish

Hematopoetik kök hücrelerin (HSC) bir organizmanın hayatı boyunca tüm farklılaştırılmış kan soy korumak pluripotent hücreler nadir bir nüfus. HSC işlevsel tanımı sulandırmak ışınlanmış bir alıcı, uzun vadeli tüm kan soy yeteneği olan bir nakledilen hücre. Bu atama memeli sistemlerinde seminal çalışma yıllardır tarafından kurulmuştur. Hematopoetik hücre transplantasyonu (HCT) ve fareyi ters genetik manipülasyonları kullanarak, HSC biyolojinin temel düzenleyici faktörleri açıkladı başlıyor, ama hala büyük ölçüde altında incelenmiştir. Son zamanlarda, Zebra balığı omurgalı hematopoez çalışmak için güçlü bir genetik model olarak ortaya çıkmıştır. Zebrafish içinde HCT kurulması bilim adamları HSC yönetmelik altında yatan yeni mekanizmalar ortaya zebrafish mevcut büyük ölçekli genetik ve kimyasal tarama metodolojileri kullanmak için izin verecektir. Bu makalede, biz yetişkin zebrafish HCT gerçekleştirmek için bir yöntem ortaya koymaktadır. Biz zebrafish tüm böbrek iliği diseksiyon ve hazırlık zebrafish yetişkin hematopoez site, bu donör hücreleri ışınlanmış alıcı balık intrakardiyak enjeksiyon yoluyla dolaşıma giriş ve göstermektedir. Ayrıca, uzun vadeli sağlık artırmak için bir &quot;YB&quot; balık nakil sonrası bakım açıklar. Balık genel, nazik bakım öncesinde, esnasında ve sonrasında nakli, uzun vadeli değerlendirme (&lt;3 ay) engraftman için gerekli bir aydan fazla Aşağıdaki prosedür, hayatta balık sayısını artırmak için kritik öneme sahiptir. Bu protokol kurmak için kullanılan deneysel veriler başka bir yerde ilan edilecektir. Bu protokolün kurulması, büyük ölçekli zebrafish genetik ve nakli biyoloji birleşme için izin verecektir.

Watch this Scientific Journal Video about Transplantation of Whole Kidney Marrow in Adult Zebrafish at JoVE.com

Transplantation of Whole Kidney Marrow in Adult Zebrafish

Yetişkin Zebra balığı Tüm Böbrek İliği Nakli

Hematopoietic stem cells (HSC) are a rare population of pluripotent cells that maintain all the differentiated blood lineages throughout the life of an ...