RAW Zon ve Davidson araştırma laboratuarları, kademeli olarak, son on yılda yetişkin zebrafish bu diseksiyon tekniği şekillendiren stratejiler geliştirmek için yardımcı olmak için onların sayısız katkılarından dolayı üyelerine teşekkür etmek istemektedir. Buna ek olarak, bizim Zebra balığı koloni için mükemmel devam eden hayvancılık bakım sağlamak için Notre Dame Zebra balığı Araştırma Merkezi personeli için şükranlarımızı ifade etmek istiyoruz. RAW NIH-NIDDK hibe DK083512 araştırma fonu aldı ve University of Notre Dame cömert laboratuar start-up finansman.

1. Sabitlenmemiş bir hayvan örneği, erişkin zebrafish böbrek Diseksiyon <ol><li> Diseksiyon için yaş 3-6 ay arasında bir yetişkin zebrafish seçin. </li><li> Balık solungaçları hareketli ve kalbim duracak gibi oluyor durdurmak görmek için dikkatle izlerken, yaklaşık 4-5 dakika boyunca,% 0.2 Tricaine pH 7.0 ile bir çanak içine yerleştirerek Euthanize. </li><li> Bir kaşık kullanarak, küçük bir miktar çözüm Tricaine banyo balık kaldırmak çözüm süzün ve yavaşça bir kağıt havlu üzerine hayvan. </li><li> Diseksiyon makas keskin bir çift solungaç operculum&#39;un (Şekil 1, yolu A) hemen arkasında bir kesim yapma, hayvanın baş kaldırmak için kullanın. Biohazard bir çöp bidonuna kafa atın. </li><li> Başlayarak baş ve kuyruk yüzgeci tabanı (Şekil 1, yol B) kuyruk sonlandırma, uzun ventral kesi yaparak, hayvanın vücut açmak için diseksiyon makas kullanın. </li><li> Bir çift diseksiyonu cımbız / forseps kullanarak hayvanın iç organları çıkarın ve biyolojik tehlikeli atık koyun. Bu böbrek yeri (Şekil 2) olarak, dorsal vücut duvarı fırça için dikkatli olun. Eğer bir kadın balık seçtiyseniz, gelişmekte olan yumurta, vücut boşluğu, açılı çift forseps veya cımbız kullanarak en kolay yapılabilir kepçe gerekecektir. </li><li> Diseksiyonu tepsiye beden duvarları açık pin ve böbrek görüntülenmiştir böylece pimleri açısını diseksiyon iğneleri kullanın. Böbrek, karakteristik bir şekli (baş, gövde / eyer, kuyruk) ve renk siyah Mutfak dekorasyonunun puf noktalari pigmentasyon (Şekil 2) ile serpiştirilmiş sahip olacaktır. Ayrıca, periferik kan, organ yapısı orta hatta aşağı doğru akıyor dolu aort görebilirsiniz. </li><li> Dorsal vücut duvarı, böbrek, böbrek, bunun altında yatan bağ doku organ ayrı olarak kaldırmak için forseps bir çift kullanarak ayırmak için ince forseps kullanın. </li><li> FACS hazırlanması için 1x PBS içeren bir mikrosantrifüj tüp olarak daha fazla canlı hücre çalışmaları, istenilen araca böbrek yavaşça yerleştirin. </li></ol> 2. Sabit bir hayvan örneği yetişkin zebrafish böbrek hazırlanması ve diseksiyon <ol><li> % 4 paraformaldehyde/1X PBST bir çözüm hazırlayın. PFA çözüm içine çözmek için çözüm kaynatın, sonra 4 ° C karışımı serin ve% 0.1 dimethylsülfoksit eklemek. Biz dondurulmuş alikot karşı taze yapılmış PFA çözümleri kullanılarak doku korunması ile en başarılı olmuştur. Diseksiyon sırasında yetişkin zebrafish batığın için yeterli bir çözüm olun. </li><li> Diseksiyonu tepsi batığın diseksiyonu sırasında yetişkin zebrafish için yeterli fiksasyon çözümü ile doldurun. Biz fiksasyon kokulara maruz kalma en aza indirmek için bir kimyasal başlığı yerleştirilebilir mikroskop altında konumlandırılmış bu tepsi, sonraki adımları gerçekleştirin. </li><li> Diseksiyon için yaş 3-6 ay arasında bir yetişkin zebrafish seçin. </li><li> Görmek için dikkatle izlerken, yaklaşık 5 dakika boyunca% 0.2 Tricaine pH 7.0 ile bir çanak içine koyarak balık Euthanize solungaçları ve kalp durma dayak. </li><li> Bir kaşık kullanarak, küçük bir miktar çözüm Tricaine banyo balık kaldırmak çözüm süzün ve yavaşça bir kağıt havlu üzerine hayvan. </li><li> Diseksiyon makas keskin bir çift solungaç operculum&#39;un (Şekil 1, yolu A) hemen arkasında bir kesim yapma, hayvanın baş kaldırmak için kullanın. Biohazard bir çöp bidonuna kafa atın ve hemen hayvan PFA içeren diseksiyon tepsisine yerleştirin. </li><li> Başlayarak baş ve kuyruk yüzgeci tabanı (Şekil 1, yol B) kuyruk sonlandırma, uzun ventral kesi yaparak, hayvanın vücut açmak için diseksiyon makas kullanın ve vücut sırasında kısmen sular altında tutmak prosedür. </li><li> Bir çift diseksiyonu cımbız / forseps kullanarak hayvanın iç organları çıkarın ve biyolojik tehlikeli atık koyun. Bu böbrek yeri (Şekil 2) olarak, dorsal vücut duvarı fırça için dikkatli olun. </li><li> Beden duvarları açık iğne, böbrek görüntülenmiştir böylece pimleri açısını diseksiyon iğneleri kullanın. Böbrek siyah Mutfak dekorasyonunun puf noktalari pigmentasyon (Şekil 2) ile serpiştirilmiş olan karakteristik bir şekli (baş, sırt, kuyruk) ve renk, sahip olacaktır. Ayrıca, periferik kan, organ yapısı orta hatta aşağı doğru akıyor dolu aort görebilirsiniz. </li><li> 4 tepsiye yerleştirerek, bir gecede Fix örnek ° C zaman istenilen örneklerin düzenlenmesi ile yapılır. </li><li> Ertesi gün, tepsiden çıkarın ve PFA çözümü 1x PBST ile değiştirin. </li><li> Ince forseps dikkatle dorsal vücut duvarı, böbrek, böbrek, bunun altında yatan bağ doku organ ayrı olarak kaldırmak için forseps bir çift kullanarak ayırmak için kullanın. DMSO fiksatif çözüm böbrek dokusu mümkün, tek parça olarak tüm böbrek organ incelemek için, yumuşak ve esnek olacaktır. </li><li> Geniş birbir mikrosantrifüj tüp içine böbrek yerleştirmek için delik transfer pipetlemeyin. </li><li> Böbrek istenilen çalışmada in situ gen ekspresyon çalışmaları histolojik veya tamamen montaj yapmak için daha da işlenebilir . </li></ol> 3. Temsilcisi sonuçları: Şekil 1&#39;de diyagramlanabilmiştir adımlar diseksiyonu prosedürü göstermektedir. Şekil 2&#39;de gösterildiği gibi böbrek, onun karakteristik şekil ve renklenme, hayvanın vücut boşluğunun dorsal duvarında anatomik konuma dayalı tespit edilebilir. Şekil 3&#39;te görüldüğü gibi, in situ hibridizasyon sabit bir böbrek örnek, tüm montaj diseksiyonu sonra ilgi bir gen ifadesi lokalize etmek için kullanılabilir. <img src="/files/ftp_upload/2839/2839fig1.jpg" alt="Şekil 1"/> Şekil 1: Prosedür zebrafish yetişkin böbrek diseksiyon için doğrudan erişim sağlar. (A) araştırmacı tam böbrek organ kolay erişim vermek için ötenazi Zebra balığı (numaraları ve oklarla gösterilir), kademeli bir biçimde disseke edilir . Görüntüler önce karın boşluğuna (B) ve sonra (C), abdominal organların çıkarılması. <img src="/files/ftp_upload/2839/2839fig2.jpg" alt="Şekil 2"/> Şekil 2: Bir Sabitlenmemiş örnek zebrafish böbrek Görselleştirme takiben vücut boşluğunda organlarının çıkarılması, böbrek, bağ dokuları (A) ile dorsal vücut duvarına yapışık olduğu, tek bir düzleştirilmiş organı olarak görünür ve şematize edilmiştir (B), anatomik şekil göstermek için. <img src="/files/ftp_upload/2839/2839fig3.jpg" alt="Şekil 3"/> Şekil 3: Tüm montaj yerinde döllemeler tüm yetişkin böbrek organ yapılan. (B (A) cadherin17 transkript, (A &#39;) olarak büyütülmüş, yetişkin böbrek nefron tübül tespit edilir (B) mafba transkript, (panelinde tüm tübül karşılaştırmak A) erişkin böbrek proksimal nefron hücre tipleri lokalizedir . &#39; ) transkript, özellikle kan filtresi (glomerulus) ve dolambaçlı proksimal tübül (PCT) podosit (P) hücrelerin lokalize mafba ifade genişlemiş bir görünüm ortaya koymaktadır.

<ol>
	<li>Stocum, D. L., Zupanc, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stretching+the+limits:+stem+cells+in+regeneration+science.">Stretching the limits: stem cells in regeneration science.</a> Dev. Dyn. 237, 3648-3671 (2008).</li><li>Lieschke, G. J., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+human+disease:+zebrafish+swim+into+view.">Animal models of human disease: zebrafish swim into view.</a> Nat. Rev. Genet. 8, 353-367 (2007).</li><li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullman, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish.">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev. Dyn. 203, 253-310 (1995).</li><li>Gupta, T., Mullins, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+organs+from+the+adult+zebrafish.">Dissection of organs from the adult zebrafish.</a> J Vis Exp. (37), (2010).</li><li>Mione, M. C., Trede, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+as+a+model+for+cancer.">The zebrafish as a model for cancer.</a> Dis. Model Mech. 3, 517-523 (2010).</li><li>Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+biology+of+hematopoiesis.">Developmental biology of hematopoiesis.</a> Blood. 86, 2876-2891 (1995).</li><li>Davidson, A. J., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+'definitive'+(and+'primitive')+guide+to+zebrafish+hematopoiesis.">The 'definitive' (and 'primitive') guide to zebrafish hematopoiesis.</a> Oncogene. 23, 7233-7246 (2004).</li><li>Orkin, S. H., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoiesis:+an+evolving+paradigm+for+stem+cell+biology.">Hematopoiesis: an evolving paradigm for stem cell biology.</a> Cell. 132, 631-644 (2008).</li><li>Reimschuessel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+fish+model+of+renal+regeneration+and+development.">A fish model of renal regeneration and development.</a> ILAR J. 42, 285-291 (2001).</li><li>Zhou, W., Boucher, R. C., Bollig, F., Englert, C., Hildebrandt, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+mesonephric+development+and+regeneration+using+transgenic+zebrafish.">Characterization of mesonephric development and regeneration using transgenic zebrafish.</a> Am. J. Physiol. Renal Physiol. 299, F1040-F1047 (2010).</li><li>Diep, C. Q., Ma, D., Holm, T., Naylor, R., Arora, N., Wingert, R., Bollig, F., Djordjevic, G., Lichman, B., Zhu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+adult+nephron+progenitors+capable+of+kidney+regeneration+in+zebrafish.">Identification of adult nephron progenitors capable of kidney regeneration in zebrafish.</a> Nature. 470, 95-100 (2011).</li><li>Traver, D., Paw, B. H., Poss, K. D., Penberthy, W. T., Lin, S., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+and+in+vivo+imaging+of+multilineage+engraftment+in+zebrafish+bloodless+mutants.">Transplantation and in vivo imaging of multilineage engraftment in zebrafish bloodless mutants.</a> Nat. Immunol. 4, 1238-1246 (2003).</li><li>Weber, G. J., Choe, S. E., Dooley, K. A., Paffett-Lugassy, N. N., Zhou, Y., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutant-specific+gene+programs+in+the+zebrafish.">Mutant-specific gene programs in the zebrafish.</a> Blood. 106, 521-530 (2005).</li><li>Sumanas, S., Jorniak, T., Lin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+novel+vascular+endothelial-specific+genes+by+the+microarray+analysis+of+the+zebrafish+cloche+mutants.">Identification of novel vascular endothelial-specific genes by the microarray analysis of the zebrafish cloche mutants.</a> Blood. 106, 534-541 (2005).</li><li>Burns, C. E., Traver, D., Mayhall, E., Shepard, J. L., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoietic+stem+cell+fate+is+established+by+the+Notch-Runx+pathway.">Hematopoietic stem cell fate is established by the Notch-Runx pathway.</a> Genes Dev. 19, 2331-2342 (2005).</li><li>Little, M. H., Bertram, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+there+such+a+thing+as+a+renal+stem+cell.">Is there such a thing as a renal stem cell.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 20, 2112-2117 (2009).</li><li>Stachura, D. L., Reyes, J. R., Bartunek, P., Paw, B. H., Zon, L. I., Traver, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+kidney+stromal+cell+lines+support+multilineage+hematopoiesis.">Zebrafish kidney stromal cell lines support multilineage hematopoiesis.</a> Blood. 114, 279-289 (2009).</li><li>North, T. E., Goessling, W., Walkley, C. R., Lengerke, C., Kopani, K. R., Lord, A. M., Weber, G. J., Bowman, T. V., Jang, I. H., Grosser, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prostaglandin+E2+regulates+vertebrate+haematopoietic+stem+cell+homeostasis.">Prostaglandin E2 regulates vertebrate haematopoietic stem cell homeostasis.</a> Nature. 447, 1007-1011 (2007).</li><li>Wingert, R. A., Selleck, R., Yu, J., Song, H. D., Chen, Z., Song, A., Zhou, Y., Thisse, B., Thisse, C., McMahon, A. P., Davidson, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cdx+genes+and+retinoic+acid+control+the+positioning+and+segmentation+of+the+zebrafish+pronephros.">The cdx genes and retinoic acid control the positioning and segmentation of the zebrafish pronephros.</a> PLoS Genet. 3, 1922-1938 (2007).</li><li>de Groh, E. D., Swanhart, L. M., Cosentino, C. C., Jackson, R. L., Dai, W., Kitchens, C. A., Day, B. W., Smithgall, T. E., Hukriede, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+histone+deacetylase+expands+the+renal+progenitor+cell+population.">Inhibition of histone deacetylase expands the renal progenitor cell population.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 21, 794-802 (2010).</li></ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Yetişkin kök hücreleri, yetişkin vücut formu 1 sürdüren dinamik ve temel bileşenleridir . Yetişkin kök hücreleri hasara karşı vücudun hastalık durumlarında sırasında doğurur ve fonksiyon bozukluğu veya kaybı, yetişkin kök hücrelerin organ fonksiyonu azalmaya yol açabilir ve kanser maligniteler sürücü ve yaşlanma katkıda karıştığı edildiğini hizmet edebilir. Yetişkin kök hücreleri farklılaşmış hücre tipleri ayırt hücresel özellikleri sergilerler. Hücre bölünmesi üzerine, yetişkin kök hücreler, kendini yenileme ve progenitör hücrelerin farklı farklılaştırılmış yavrular da ortaya çıkmasına neden olabilir üretimi yeteneğine sahip. 1 doku homeostazı önemli roller nedeniyle hücre kaderinin kararları ve yetişkin kök hücreleri potens düzenleyen yollarının anlaşılmasında büyük ilgi var. Örneğin, birçok bilim adamı şu anda kendi niş çeşitli yetişkin kök hücre popülasyonlarının, ya da uzman mikroçevresinin ve bu niş humoral etkenler tarafından nasıl etkiledi korumak sinyalleri tespit etmeye. Yetişkin hematopoietik kök hücreler (HKH&#39;lerin) 8 hayvanların kan hücrelerinin sürekli gençleşme yakıt pluripotent hücreler. Hematopoez olgun farklılaştırılmış kan hücre tiplerinin kısa ömürlü ve dolayısıyla düzenli olarak doldurulan olmalıdır çünkü, omurgalı bir organizmanın hayatı boyunca sürekli olarak devam etmektedir canlı bir süreçtir. Bölmek gibi, kendini sürekli yenileyen ve eritroid megakaryositlerin, lenfoid ve myeloid soy doğuran atalarıdır seri üretiminde HKH&#39;lerin, bu çok önemli bir arz talep. Bu kan hücre tiplerinin her biri, doku yaralanmaları kan damarlarının pıhtı oluşumu anlamına gelir, ya da işgalci patojenlere karşı savunma mekanizmaları tarafından sızdırmazlık için bir şekilde gaz alışverişi sağlamak da dahil olmak üzere, dolaşımda bulunan benzersiz fonksiyonları gerçekleştirir. HKH&#39;lerin uzun yıllardır kabul edilmiş olsa da, bir bolluk, bu inanılmaz hücreler hakkında ilginç sorular cevapsız kalmaktadır. Son çalışmalar, farklı uzun vadeli kendini yenileme özellikleri ve niş parçaları ve HSC davranış 8 modüle sinyaller aydınlatılması HKH&#39;lerin alt sınıfları belirledik . Zebra balığı, bu hayvan modelinde 8, genetik ve moleküler özellikleri hakkında göre, hematopoez araştırma paradigmaların taşları arasında . Araştırma kullanan Zebra balığı, kara memelileri gibi yüksek omurgalılar ile konserve balık kan tetkikleri 8 biyomedikal önemi vurgulayan HSC biyoloji hakkında yeni bakış açıları yol açmıştır. Tarihsel olarak, yetişkin kök hücrelerinin vücudun diğer organları tarafından korunur keşfetmek isteyen seferler için HKH&#39;lerin hakkında bilgi yolunu açmıştır. Beyin, bağırsak, deri, ve iskelet kası farklı yapılar arasında değişen çok sayıda yetişkin kök hücre popülasyonlarının var takdir edilmektedir. Kök hücre alanındaki çabaların sürmesi, yetişkin kök hücreleri ve hatta diğer farklılaşmış hücre tipleri çeşitli ayarları gelişmiş potens gösterilecek nasıl tespit etmeye. Böbrek ile ilgili olarak, böbrek kök hücreler 16 var olup olmadığını nefrolog arasında büyük bir tartışma yaşandı . Bağımsız bulgular böbrek hücreleri nüfusu rejeneratif potansiyeli değişen derecelerde sahip memeliler belgelenmiş, ama bu raporların uyumlu bir anlayış sağlanabilir henüz. İlginçtir ki, birçok balık türünün sağlam hasarlı nefron rejenerasyon yanı sıra yakıt, yetişkinlik 9 sırasında tamamen yeni bir nefron büyüyebilir hücrelerin sahip olduğu görüşünü desteklemek için güçlü bir kanıt yoktur. Son çalışmalar, erişkin böbrek kök hücrelerin moleküler işaretlerinden tespit zebrafish 10,11 ve bu sözde böbrek kök / progenitör hücrelerin (RPC) 11 kendi kendini yenileme potens gösterdi . Gelecek çalışmalar memelilerde analog böbrek hücreleri mevcut olup olmadığını tespit etmek için gerekli. Bununla birlikte, balık RPC düzenleyen hücresel ve moleküler mekanizmalar hakkında devam eden araştırmalar memeli böbrek rejeneratif kahramanlık nasıl teşvik edilebilir içgörü sağlayabilir. Bu çok RPC hakkında anlaşılabilir kalır ve zebrafish araştırmacı şimdi birçok araç bu ilginç soruları çözmek için uygulanabilir olduğu açıktır. Bu protokolde, yetişkin zebrafish böbrek anatomik tanımlama ve diseksiyon yöntemi tarif. Alternatif adımlar diseksiyon makas kullanılarak ventral kesi ile karın boşluğuna açılması gibi böbrek, incelemek için kullanılabilir; ancak, karın duvarı açık tutturulmuş ve baş kaldırıldığında tüm böbrek erişimde en başarılı karşılaştı. Bu hücre tiplerinin izole etmek ve çalışmak isteyen hem kan ve böbrek araştırmacılar diseksiyon yöntemi birini kullanabilirsiniz. Belirtmek gerekir ki, yalıtma ve workin için tarif yöntemig zebrafish yetişkin böbrek ile kesinlikle bu organ diseksiyonu fizyolojisi ile yaşlanma arasında değişen konular hakkında soruşturmalar takip eden araştırmacılar için çalışmalarını kolaylaştıracak gibi, yetişkin kök hücre biyolojisi sorular takip etmek isteyen bilim adamları ile sınırlı değildir. Dahası, bu yöntem moleküler etiket ve daha sonra kan veya böbrek hücreleri wild tip veya genetik mutant zebrafish 11 ayrı alt popülasyonlar arındırmak ve eğitim amacıyla böyle transgenik gibi diğer teknolojileri ile birleştiğinde olabilir . Böyle ayrıntılı arıtma işlemleri, kök ve progenitör hücre tiplerinin ileri davranışlarını nasıl düzenlendiği hakkında bilgi edinmenin önemli arıyorsunuz nakli veya progenitör kültür gibi operasyonel testler esas teşkil gibi, bu hücrelerin potens ve kimlik tanımlanır. Hematopoetik progenitör kültür yöntemleri son gelişmeler için birçok çalışma yeni yollar açmak ve böbrek popülasyonları 17 kültür adapte olabilir. Zebra balığı kimyasal genetik HKH&#39;lerin ve çeşitli bağlamlarda 18-20 böbrek atalarıdır modüle ve yukarıdaki hücre biyolojisi teknikleri ile birlikte test etmek için yararlı bir cadde olmaya devam edecektir yollarının belirlenmesinde başarılı olmuştur. Birlikte ele alındığında, bir dizi zebrafish modeli kullanılarak, hematoloji ve nefroloji alanlarında çığır açan katkıları olmuştur ve bu alanlarda araştırma devam önümüzdeki yıllarda ellerinde daha fazla dönüştürücü anlayışlar vaat ediyor.

<table border="1"><tbody><tr><th> Reaktifin Adı </th><th> Şirket </th><th> Katalog numarası </th></tr><tr><td> Diseksiyon makası </td><td> Roboz </td><td> RS-5882 </td></tr><tr><td> Diseksiyon forseps </td><td> Roboz </td><td> RS-5010 </td></tr><tr><td> Diseksiyon açılı forseps </td><td> Roboz </td><td> RS-5058 </td></tr><tr><td> Tricaine </td><td> Sigma </td><td> E10521 </td></tr><tr><td> Paraformaldehit </td><td> Elektron Mikroskopi Hizmetleri </td><td> 19210 </td></tr></tbody></table>

dissection of the adult zebrafish kidney

Gelişen erişkin kök hücre biyolojisi alanında çalışan araştırmacılar, kök hücrelerin normal homeostaz ve hastalık durumlarında sırasında davranış ve fonksiyon düzenleyen sinyalleri anlamaya çalışıyoruz. Anlayış yetişkin kök hücrelerin rejeneratif tıp 1 geleceği için geniş kapsamlı etkileri vardır. Örneğin, yetişkin kök hücre biyolojisi hakkında daha iyi bilgi organları kendileri ya da in vitro insanlarda 1 naklediliyor olabilir büyüyen organlar için yöntemlerin oluşturulması bile iyileşmek için devreye girdiği tedavi stratejileri tasarımı kolaylaştırabilir . Zebra balığı omurgalı hücre biyolojisi 2 çalışma için güçlü bir hayvan modeli haline gelmiştir. Kapsamlı bir belgeleme ve analiz zebrafish 3 embriyonik gelişme olmuştur. Sadece son zamanlarda Erişkin çalışmalarında bu araştırma organizmanın uygulamalarını genişletmek için, zebrafish toplum içinde ilerici bir hareket var olduğu gibi, yetişkin anatomi ve cerrahi diseksiyon teknikleri 4 belgelemek için çalışan bilim adamları var. Örneğin, yetişkin kök hücre popülasyonlarının biyolojisi araştırmak ve kanser 5 gibi hastalıkların gelişmiş yetişkin modeller yapmak için zebrafish kullanarak çıkarları genişletiyoruz . Tarihsel olarak, böbrek kan hücresi üretimi balık 6,7 anatomik konuma olarak zebrafish yetişkin böbrek izolasyonu, hematopoez çalışmak için enstrümantal olmuştur. Böbrek müdahale alanlarda boyunca dağınık hematopoetik doku ile çevrili arborized düzenlemeler bulundu nefron işlevsel birimler oluşur. Hematopoetik bileşeni ölümcül 8 ayırt kadar böbrek yaşamaktadır hematopoietik kök hücreleri (HKH&#39;lerin) ve döl oluşur. Buna ek olarak, diğer balık türlerinin 9-11 de görüldüğü gibi, böbrek kök / progenitör hücrelerin (RPC) bir grup da Zebra balığı böbrek organ yaşayan ve böbrek yenilenme ve büyüme hem etkinleştirmek takdir edilmektedir. , Bu yeni bulgunun ışığında, zebrafish bir böbrek, iki yetişkin kök hücre biyolojisi çalışmaları için heyecan verici fırsatlar yerini barındıran bir organdır. Bu çok üstün sorular bu deneysel sistem ile servis olabilir açıktır. Bu alanda genişleme teşvik etmek, görselleştirme ayrıntılı yöntemleri belge ve daha sonra yetişkin zebrafish böbrek organın izole faydalıdır. Bu protokol, Sabitlenmemiş hem de sabit hayvanlar yetişkin böbrek diseksiyon için bizim prosedür. Böbrek organ Diseksiyon, histoloji, floresan hücre aktif sıralama (FACS) 11,12, ifade profil 13,14 ve 11,15 nakli olarak kurulan teknikleri kullanarak ve böbrek hematopoetik kök hücreler ve onların çocukları izole ve karakterize etmek için kullanılabilir. Biz bu protokolün bu yayılması, sonuçta insan uygulama için tercüme edilebilir zebrafish çalışmaların daha geniş kullanım uygulamak için bilgi ile araştırmacılar sağlayacaktır umuyoruz.

Watch this Scientific Journal Video about Dissection of the Adult Zebrafish Kidney at JoVE.com

Dissection of the Adult Zebrafish Kidney

Zebrafish böbrek, her iki böbrek ve hematopoetik yetişkin kök / progenitör hücrelerin ev ve bu omurgalı bir model organizmadaki hücre tipleri ve onların soyu incelemek için olağanüstü bir fırsat teşkil etmektedir. Burada, yetişkin zebrafish böbrek hücre izolasyonu, nakli, böbrek ve / veya kan hücre popülasyonlarının ifade çalışmaları gibi uygulamalar için de kullanılabilir belirlemek ve cerrahi kaldırmak için araştırmacı sağlayan ayrıntılı bir diseksiyon prosedürü göstermektedir.

Yetişkin Zebra balığı Böbrek diseksiyonu

Researchers working in the burgeoning field of adult stem cell biology seek to understand the signals that regulate the behavior and function of stem ...

Research

JoVE Journal

Biology

36.5K Görüntüleme.  University of Notre Dame. Zebrafish böbrek, her iki böbrek ve hematopoetik yetişkin kök / progenitör hücrelerin ev ve bu omurgalı bir model organizmadaki hücre tipleri ve onların soyu incelemek için olağanüstü bir fırsat teşkil etmektedir. Burada, yetişkin zebrafish böbrek hücre izolasyonu, nakli, böbrek ve / veya kan hücre popülasyonlarının ifade çalışmaları gibi uygulamalar için de kullanılabilir belirlemek ve cerrahi kaldırmak için araştırmacı sağlayan ayrınt...

Video: Dissection of the Adult Zebrafish Kidney

Transplantation of Whole Kidney Marrow in Adult Zebrafish

Hematopoietic stem cells (HSC) are a rare population of pluripotent cells that maintain all the differentiated blood lineages throughout the life of an organism. The functional definition of a HSC is a transplanted cell that has the ability to reconstitute all the blood lineages of an irradiated recipient long term. This designation was established by decades of seminal work in mammalian systems. Using hematopoietic cell transplantation (HCT) and reverse genetic manipulations in the mouse, the underlying regulatory factors of HSC biology are beginning to be unveiled, but are still largely under-explored. Recently, the zebrafish has emerged as a powerful genetic model to study vertebrate hematopoiesis. Establishing HCT in zebrafish will allow scientists to utilize the large-scale genetic and chemical screening methodologies available in zebrafish to reveal novel mechanisms underlying HSC regulation. In this article, we demonstrate a method to perform HCT in adult zebrafish. We show the dissection and preparation of zebrafish whole kidney marrow, the site of adult hematopoiesis in the zebrafish, and the introduction of these donor cells into the circulation of irradiated recipient fish via intracardiac injection. Additionally, we describe the post-transplant care of fish in an "ICU" to increase their long-term health. In general, gentle care of the fish before, during, and after the transplant is critical to increase the number of fish that will survive more than one month following the procedure, which is essential for assessment of long term (&lt;3 month) engraftment. The experimental data used to establish this protocol will be published elsewhere. The establishment of this protocol will allow for the merger of large-scale zebrafish genetics and transplant biology.

In this article, we demonstrate a method to perform HCT in adult zebrafish.

Yetişkin Zebra balığı Tüm Böbrek İliği Nakli

Hematopoietic stem cells (HSC) are a rare population of pluripotent cells that maintain all the differentiated blood lineages throughout the life of an ...

Biyoloji

Gross and Fine Dissection of Inner Ear Sensory Epithelia in Adult Zebrafish (Danio rerio)

Neurosensory epithelia in the inner ear are the crucial structures for hearing and balance functions. Therefore, it is important to understand the cellular and molecular features of the epithelia, which are mainly composed of two types of cells: hair cells (HCs) and supporting cells (SCs). Here we choose to study the inner ear sensory epithelia in adult zebrafish not only because the epithelial structures are highly conserved in all vertebrates studied, but also because the adult zebrafish is able to regenerate HCs, an ability that mammals lose shortly after birth. We use the inner ear of adult zebrafish as a model system to study the mechanisms of inner ear HC regeneration in adult vertebrates that could be helpful for clinical therapy of hearing/balance deficits in human as a result of HC loss.
Here we demonstrate how to do gross and fine dissections of inner ear sensory epithelia in adult zebrafish. The gross dissection removes the tissues surrounding the inner ear and is helpful for preparing tissue sections, which allows us to examine the detailed structure of the sensory epithelia. The fine dissection cleans up the non-sensory-epithelial tissues of each individual epithelium and enables us to examine the heterogeneity of the whole epithelium easily in whole-mount epithelial samples.

Gross and Fine Dissection of Inner Ear Sensory Epithelia in Adult Zebrafish Danio rerio

The inner ear sensory epithelium of adult zebrafish is a good model system for understanding the mechanisms of hair cell regeneration in adult vertebrates. This protocol demonstrates the fine dissection of the epithelia, through which we can get tissue samples for studying the regenerative events at cellular and subcellular levels.

Yetişkin Zebra balığı İç Kulak Duyu Epiteli Brüt ve Güzel Diseksiyon ( Danio rerio)

Neurosensory epithelia in the inner ear are the crucial structures for hearing and balance functions. Therefore, it is important to understand the ...

Dissection of Organs from the Adult Zebrafish

Over the last 20 years, the zebrafish has become a powerful model organism for understanding vertebrate development and disease.  Although experimental analysis of the embryo and larva is extensive and the morphology has been well documented, descriptions of adult zebrafish anatomy and studies of development of the adult structures and organs, together with techniques for working with adults are lacking. The organs of the larva undergo significant changes in their overall structure, morphology, and anatomical location during the larval to adult transition.  Externally, the transparent larva develops its characteristic adult striped pigment pattern and paired pelvic fins, while internally, the organs undergo massive growth and remodeling.  In addition, the bipotential gonad primordium develops into either testis or ovary.  This protocol identifies many of the organs of the adult and demonstrates methods for dissection of the brain, gonads, gastrointestinal system, heart, and kidney of the adult zebrafish. The dissected organs can be used for in situ hybridization, immunohistochemistry, histology, RNA extraction, protein analysis, and other molecular techniques.  This protocol will assist in the broadening of studies in the zebrafish to include the remodeling of larval organs, the morphogenesis of organs specific to the adult and other investigations of the adult organ systems.

This protocol describes a procedure for identifying and dissecting organs from the adult zebrafish.

Yetişkin Zebra balığı Organları diseksiyonu

Over the last 20 years, the zebrafish has become a powerful model organism for understanding vertebrate development and disease.  Although experimental ...

Intraperitoneal Injection into Adult Zebrafish

A convenient method for chemically treating zebrafish is to introduce the reagent into the tank water, where it will be taken up by the fish. However, this method makes it difficult to know how much reagent is absorbed or taken up per fish. Some experimental questions, particularly those related to metabolic studies, may be better addressed by delivering a defined quantity to each fish, based on weight. Here we present a method for intraperitoneal (IP) injection into adult zebrafish. Injection is into the abdominal cavity, posterior to the pelvic girdle. This procedure is adapted from veterinary methods used for larger fish. It is safe, as we have observed zero mortality. Additionally, we have seen bleeding at the injection site in only 5 out of 127 injections, and in each of those cases the bleeding was brief, lasting several seconds, and the quantity of blood lost was small. Success with this procedure requires gentle handling of the fish through several steps including fasting, weighing, anesthetizing, injection, and recovery. Precautions are required to minimize stress throughout the procedure. Our precautions include using a small injection volume and a 35G needle. We use Cortland salt solution as the vehicle, which is osmotically balanced for freshwater fish. Aeration of the gills is maintained during the injection procedure by first bringing the fish into a surgical plane of anesthesia, which allows slow operculum movements, and second, by holding the fish in a trough within a water-saturated sponge during the injection itself. We demonstrate the utility of IP injection by injecting glucose and monitoring the rise in blood glucose level and its subsequent return to normal. As stress is known to increase blood glucose in teleost fish, we compare blood glucose levels in vehicle-injected and non-injected adults and show that the procedure does not cause a significant rise in blood glucose.

We demonstrate intraperitoneal injection into adult zebrafish. We use a 10 &mu;l NanoFil microsyringe controlled by a Micro4 controller and UltraMicroPump III. This demonstration includes the use of cold water as an anesthetic.

Yetişkin Zebra balığı içine intraperitoneal enjeksiyon

A convenient method for chemically treating zebrafish is to introduce the reagent into the tank water, where it will be taken up by the fish. However, ...

Dissection of Oenocytes from Adult Drosophila melanogaster

In Drosophila melanogaster, as in other insects, a waxy layer on the outer surface of the cuticle, composed primarily of hydrocarbon compounds, provides protection against desiccation and other environmental challenges. Several of these cuticular hydrocarbon (CHC) compounds also function as semiochemical signals, and as such mediate pheromonal communications between members of the same species, or in some instances between different species, and influence behavior. Specialized cells referred to as oenocytes are regarded as the primary site for CHC synthesis. However, relatively little is known regarding the involvement of the oenocytes in the regulation of the biosynthetic, transport, and deposition pathways contributing to CHC output. Given the significant role that CHCs play in several aspects of insect biology, including chemical communication, desiccation resistance, and immunity, it is important to gain a greater understanding of the molecular and genetic regulation of CHC production within these specialized cells. The adult oenocytes of D. melanogaster are located within the abdominal integument, and are metamerically arrayed in ribbon-like clusters radiating along the inner cuticular surface of each abdominal segment. In this video article we demonstrate a dissection technique used for the preparation of oenocytes from adult D. melanogaster. Specifically, we provide a detailed step-by-step demonstration of (1) how to fillet prepare an adult Drosophila abdomen, (2) how to identify the oenocytes and discern them from other tissues, and (3) how to remove intact oenocyte clusters from the abdominal integument. A brief experimental illustration of how this preparation can be used to examine the expression of genes involved in hydrocarbon synthesis is included. The dissected preparation demonstrated herein will allow for the detailed molecular and genetic analysis of oenocyte function in the adult fruit fly.

Dissection of Oenocytes from Adult Drosophila melanogaster

In insects, the oenocytes produce cuticular hydrocarbon compounds. These compounds protect against desiccation and facilitate chemical communication. Here we demonstrate a dissection technique used to isolate the oenocytes from adult Drosophila melanogaster, and illustrate how this preparation can be utilized to study genes involved in hydrocarbon synthesis.

Yetişkin gelen Oenocytes diseksiyonu Drosophila melanogaster</em

In Drosophila melanogaster, as in other insects, a waxy layer on the outer surface of the cuticle, composed primarily of hydrocarbon compounds, provides ...

Transplantation of Cells Directly into the Kidney of Adult Zebrafish

Regenerative medicine based on the transplantation of stem or progenitor cells into damaged tissues has the potential to treat a wide range of chronic diseases1. However, most organs are not easily accessible, necessitating the need to develop surgical methods to gain access to these structures. In this video article, we describe a method for transplanting cells directly into the kidney of adult zebrafish, a popular model to study regeneration and disease2. Recipient fish are pre-conditioned by irradiation to suppress the immune rejection of the injected cells3. We demonstrate how the head kidney can be exposed by a lateral incision in the flank of the fish, followed by the injection of cells directly in to the organ. Using fluorescently labeled whole kidney marrow cells comprising a mixed population of renal and hematopoietic precursors, we show that nephron progenitors can engraft and differentiate into new renal tissue - the gold standard of any cell-based regenerative therapy. This technique can be adapted to deliver purified stem or progenitor cells and/or small molecules to the kidney as well as other internal organs and further enhances the zebrafish as a versatile model to study regenerative medicine.

Cell transplantation is an essential technique for studying tissue regeneration and for developing cell-based therapies of disease. We demonstrate here a microsurgical technique that permits the transplantation of genetically labeled cells directly into the kidney of adult zebrafish fish.

Doğrudan Yetişkin Zebra balığı Böbrek Hücre Nakli

Regenerative medicine based on the transplantation of stem or progenitor cells into damaged tissues has the potential to treat a wide range of chronic ...

Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

Zebrafish have become a beneficial and practical model organism for the study of embryonic heart development (see recent reviews1-6), however, work examining post-embryonic through adult cardiac development has been limited7-10. Examining the changing morphology of the maturing and aging heart are restricted by the lack of techniques available for staging and isolating juvenile and adult hearts. In order to analyze heart development over the fish's lifespan, we dissect zebrafish hearts at numerous stages and photograph them for further analysis11. The morphological features of the heart can easily be quantified and individual hearts can be further analyzed by a host of standard methods. Zebrafish grow at variable rates and maturation correlates better with fish size than age, thus, post-fixation, we photograph and measure fish length as a gauge of fish maturation. This protocol explains two distinct, size dependent dissection techniques for zebrafish, ranging from larvae 3.5mm standard length (SL) with hearts of 100&mu;m ventricle length (VL), to adults, with SL of 30mm and VL 1mm or larger. Larval and adult fish have quite distinct body and organ morphology. Larvae are not only significantly smaller, they have less pigment and each organ is visually very difficult to identify. For this reason, we use distinct dissection techniques.
We used pre-dissection fixation procedures, as we discovered that hearts dissected directly after euthanization have a more variable morphology, with very loose and balloon like atria compared with hearts removed following fixation. The fish fixed prior to dissection, retain in vivo morphology and chamber position (data not shown). In addition, for demonstration purposes, we take advantage of the heart (myocardial) specific GFP transgenic Tg(myl7:GFP)twu34 (12), which allows us to visualize the entire heart and is particularly useful at early stages in development when the cardiac morphology is less distinct from surrounding tissues. Dissection of the heart makes further analysis of the cell and molecular biology underlying heart development and maturation using in situ hybridization, immunohistochemistry, RNA extraction or other analytical methods easier in post-embryonic zebrafish. This protocol will provide a valuable technique for the study of cardiac development maturation and aging.

Heart Dissection in Larval, Juvenile and Adult Zebrafish, Danio rerio

A clear, standardized method for dissection and isolation of the zebrafish heart at multiple developmental stages are described. Annotation and quantification techniques are also discussed.

Larvaların Kalp Diseksiyon, Çocuk ve Yetişkin Zebra balığı, Danio rerio</em

Zebrafish have become a beneficial and practical model organism for the study of embryonic heart development (see recent reviews1-6), however, work ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

Many devastating inherited eye diseases result in progressive and irreversible blindness because humans cannot regenerate dying or diseased retinal neurons. In contrast, the adult zebrafish retina possesses the robust ability to spontaneously regenerate any neuronal class that is lost in a variety of different retinal damage models, including retinal puncture, chemical ablation, concentrated high temperature, and intense light treatment 1-8. Our lab extensively characterized regeneration of photoreceptors following constant intense light treatment and inner retinal neurons after intravitreal ouabain injection 2, 5, 9. In all cases, resident M&uuml;ller glia re-enter the cell cycle to produce neuronal progenitors, which continue to proliferate and migrate to the proper retinal layer, where they differentiate into the deficient neurons. 
	We characterized five different stages during regeneration of the light-damaged retina that were highlighted by specific cellular responses. We identified several differentially expressed genes at each stage of retinal regeneration by mRNA microarray analysis 10. Many of these genes are also critical for ocular development. To test the role of each candidate gene/protein during retinal regeneration, we needed to develop a method to conditionally limit the expression of a candidate protein only at times during regeneration of the adult retina. 
	Morpholino oligos are widely used to study loss of function of specific proteins during the development of zebrafish, Xenopus, chick, mouse, and tumors in human xenografts 11-14. These modified oligos basepair with complementary RNA sequence to either block the splicing or translation of the target RNA. Morpholinos are stable in the cell and can eliminate or "knockdown" protein expression for three to five days 12. 
	Here, we describe a method to efficiently knockdown target protein expression in the adult zebrafish retina. This method employs lissamine-tagged antisense morpholinos that are injected into the vitreous of the adult zebrafish eye. Using electrode forceps, the morpholino is then electroporated into all the cell types of the dorsal and central retina. Lissamine provides the charge on the morpholino for electroporation and can be visualized to assess the presence of the morpholino in the retinal cells. 
	Conditional knockdown in the retina can be used to examine the role of specific proteins at different times during regeneration. Additionally, this approach can be used to study the role of specific proteins in the undamaged retina, in such processes as visual transduction and visual processing in second order neurons.

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

A method to conditionally knockdown a target protein&#x2019;s expression in the adult zebrafish retina is described, which involves intravitreally injecting antisense morpholinos and electroporating them into the retina. The resulting protein is knocked down for several days, which allows testing the protein&#x2019;s role in the regenerating or intact retina.

Morpholinos in vivo Elektroporasyon Yetişkin Zebra balığı Retina

Many devastating inherited eye diseases result in progressive and irreversible blindness because humans cannot regenerate dying or diseased retinal ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

Certain species of urodeles and teleost fish can regenerate their tissues. Zebrafish have become a widely used model to study the spontaneous regeneration of adult tissues, such as the heart1, retina2, spinal cord3, optic nerve4, sensory hair cells5, and fins6.
The zebrafish fin is a relatively simple appendage that is easily manipulated to study multiple stages in epimorphic regeneration. Classically, fin regeneration was characterized by three distinct stages: wound healing, blastema formation, and fin outgrowth. After amputating part of the fin, the surrounding epithelium proliferates and migrates over the wound. At 33 &deg;C, this process occurs within six hours post-amputation (hpa, Figure 1B)6,7. Next, underlying cells from different lineages (ex. bone, blood, glia, fibroblast) re-enter the cell cycle to form a proliferative blastema, while the overlying epidermis continues to proliferate (Figure 1D)8. Outgrowth occurs as cells proximal to the blastema re-differentiate into their respective lineages to form new tissue (Figure 1E)8. Depending on the level of the amputation, full regeneration is completed in a week to a month.
The expression of a large number of gene families, including wnt, hox, fgf, msx, retinoic acid, shh, notch, bmp, and activin-betaA genes, is up-regulated during specific stages of fin regeneration9-16. However, the roles of these genes and their encoded proteins during regeneration have been difficult to assess, unless a specific inhibitor for the protein exists13, a temperature-sensitive mutant exists or a transgenic animal (either overexpressing the wild-type protein or a dominant-negative protein) was generated7,12. We developed a reverse genetic technique to quickly and easily test the function of any gene during fin regeneration.
Morpholino oligonucleotides are widely used to study loss of specific proteins during zebrafish, Xenopus, chick, and mouse development17-19. Morpholinos basepair with a complementary RNA sequence to either block pre-mRNA splicing or mRNA translation. We describe a method to efficiently introduce fluorescein-tagged antisense morpholinos into regenerating zebrafish fins to knockdown expression of the target protein. The morpholino is micro-injected into each blastema of the regenerating zebrafish tail fin and electroporated into the surrounding cells. Fluorescein provides the charge to electroporate the morpholino and to visualize the morpholino in the fin tissue.
This protocol permits conditional protein knockdown to examine the role of specific proteins during regenerative fin outgrowth. In the Discussion, we describe how this approach can be adapted to study the role of specific proteins during wound healing or blastema formation, as well as a potential marker of cell migration during blastema formation.

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Regenerating Adult Zebrafish Tail Fin

We describe a method to conditionally knockdown the expression of a target protein during adult zebrafish fin regeneration. This technique involves micro-injecting and electroporating antisense oligonucleotide morpholinos into fin tissue, which allows testing the protein&#x2019;s role in various stages of fin regeneration, including wound healing, blastema formation, and regenerative outgrowth.

Yenileyici Yetişkin Zebra balığı Tail Fin içine Morpholinos in vivo olarak Elektroporasyon

Certain species of urodeles and teleost fish can regenerate their tissues. Zebrafish have become a widely used model to study the spontaneous regeneration ...

Gavaging Adult Zebrafish

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or agents in solutions for scientific research. Current methods for administering compounds orally to adult zebrafish are inaccurate due to variability in voluntary consumption by the fish. A gavage procedure was developed to deliver precise quantities of infectious agents to zebrafish for study in biomedical research. Adult zebrafish over 6 months of age were anesthetized with 150 mg/L of buffered MS-222 and gavaged with 5 &mu;l of solution using flexible catheter implantation tubing attached to a cut 22-G needle tip. The flexible tubing was lowered into the oral cavity of the zebrafish until the tip of the tubing extended past the gills (approximately 1 cm). The solution was then injected slowly into the intestinal tract. This method was effective 88% of the time, with fish recovering uneventfully. This procedure is also efficient as one person can gavage 20-30 fish in one hour. This method can be used to precisely administer agents for infectious diseases studies, or studies of other compounds in adult zebrafish.

The increasing use of zebrafish as an animal model requires the development of effective methods for the delivery of known quantities of compounds and solutions. The gavage procedure described below allows for the oral delivery of precise volumes of solution reliably, safely and efficiently to adult zebrafish.

Yetişkin Zebra balığı Gavaging

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or ...