Bayan Bonnie Phetteplace, RN Biz İİAB işlemi gösteri grafik video sırasında yardım için teşekkür ederim.

Giriş Sistemik amiloidoz toplu amiloid olarak adlandırılan çeşitli proteinler hücre dışı birikimi anlamına gelir son derece değişken bir hastalıktır. , Beta pilili yapılandırma ile bu amiloid fibrillerinin birikimi ilgili organlara bağlı olarak çeşitli klinik sunumlar yol açar. Kalp, karaciğer ve / veya böbrek gibi önemli organların tutulumu olduğu zaman sistemik amiloidozun en önemli klinik belirtileri kaydetti. Tarihsel olarak, bu tutulan organlar amiloid varlığını göstermek için biyopsi olacaktır. Bu orta derecede invaziv işlemler kanama da dahil olmak üzere önemli bir risk taşıyordu. Fat pad aspirasyonu beri sistemik amiloidoz 1 amiloid tespiti için güvenilir ve noninvaziv bir yöntem sağlamak için kanıtlanmıştır . Bu prosedür, küçük kan damarı duvarlarının 2 yetersizdir amiloid birikimi değerlendirmek için fibroadipose doku almak için lokal anestezi altında karın ön duvarında cilt altı yağ liposuction aslında karşılaştırılabilir . Dokusunda amiloid tanımlanması için en sık kullanılan yöntem, Kongo kırmızı lekeli bölümleri, polarize ışık mikroskobu 3 altında görselleştirildiği zaman görülen karakteristik elma yeşil birefringence desen kalır. Yağ yastığı aspirasyon yapıldığında, Kongo kırmızı lekeler, doğrudan lekeli slayt veya aspire edilen yağ dokusunun hücre blok hazırlıkları yapılabilir. Ancak, amiloidoz erken evrelerinde hastalar kıt amiloid mevduat, büyük 4,5 Kongo kırmızı lekeli hücre bloklarına hassasiyetini azaltır. Elektron mikroskobu ile yağ yastığı aspiratlar ultrastrüktürel değerlendirme daha iyi tekrarlanabilirlik ve gelişmiş hassasiyet 4 vardır. Bu nedenle, bir hücre bloğu iki hazırlık ve elektron mikroskobu 2 gerçekleştirmek için tüm yağ yastığı aspiratlar göndermek için tavsiye edilir. Fat pad aspirasyon sistemik amiloidoz tanısı için doku elde etmek için nispeten düşük maliyetli ve noninvaziv bir yöntemdir. Bu makale, elektron mikroskobu Kongo kırmızısı boyama ve ultrastrüktürel değerlendirme için numune göndermek için, numune işleme hakkında ayrıntılı bilgi ile birlikte yağ yastığı aspirasyon prosedürü anlatılmaktadır. Bu video, en iyi tanı malzeme almak için bu tekrarlanabilir ve basit bir prosedür ortaya koymaktadır. 1. Anterior Fat Pad FNA Sahne A. yerel Anesthetization (Şekil 1 ve 2) <ol><li> Alkol çubuklar veya belirli bir kurum tarafından tercih edilen cilt temizleme aracı kullanarak, orta hatta yan karın alt kadranda ve göbek (Şekil 1) altında cilt temizleyin. </li><li> Işaretleme kalemi ile Şekil 1&#39;de gösterildiği gibi 2 x 2 inç hakkında rhomboid şeklinde bir alanı işaretleyin. </li><li> 18G iğne ile% 1 aspire yaklaşık 10 ml lidokain. 25G 1 ½ inç iğne şırıngaya takın. Sıvı dağıtılır ve herhangi bir hava kabarcığı kadar piston basarken dik şırınga dokunarak sıkışan havayı çıkarın. </li><li> Şekil 2&#39;de gösterildiği gibi, daha önceden işaretlenmiş rhomboid alan sınırları boyunca anestezisi. A noktası sadece deri altında 25G iğne takarak başlayın ve X şırınga pistonu geri çekin bir gemi içinde olduğundan emin olmak için dikkatlice işaret deri altına iğne itin. Sonra yavaş yavaş iğne iğne ucu A (Şekil 2A3) cilt çıkıp izin vermeden bir noktaya kadar geri çekilirken, 2.5 mL lidokain (10 ml şırınga lidokain ¼ hakkında) kadar sızmak pistonu itin. Deri altına iğne ile hala noktası Y (Şekil 2A4) doğru yönünü değiştirmek ve iğne noktası Y (Şekil 2B1) subkutan itmek. Daha önce olduğu gibi yavaş yavaş noktası üzerinden iğne geri çekilirken, iğne, bir kap içinde olduğunu teyit ve yaklaşık 2,5 mL lidokain dağıtmak (2b4 yoluyla 2b3 Şekil). Noktaları B, X ve Y B (Şekil 2d4 yoluyla 2C1) B noktası ve dağıtım lidokain subkutan itibaren benzer adımları tekrarlayın. Azabı kanamayı önlemek A ve B steril göstergesi parçasının sağlam uygulama. </li><li> Şimdi hafifçe komşu unanesthetized deri ile karşılaştırarak, pamuk gazlı bez parçasının uç / köşe anestezi rhomboid içinde cilde temas alanı anestezi olduğunu kontrol edebilirsiniz. </li></ol> B. yağ yastığı aspirasyonu (Şekil 3) (Yağ yastığı aspirasyon performansı için önce lokal anestezi uygulanması, bölgesel ve bireysel tercihlerine göre, bypass olabilir. Anterior yağ yastığı aspirasyon Düzgün yapılan İİAB prosedürü tek dikmek içinde tamamlanabilir. Ancak, her hastanın ağrı eşiği bağlı , cilt altı yağ dokusu, ileri ve geri 18G iğne manevra nispeten distresşarkı. Anesthetization yöntemi burada sadece 25G iğne ile iki azabı etkiyi ve prosedürü geliştirilmiş hoşgörü ile ağrı kaçırır nitelendirdi.) <ol><li> 10 ml şırınga üzerine 18G 1 ½ inç iğne birleştirin. Düzgün uygulama ve vakum serbest bırakılması için şırınga kavrama (&quot;İİAB kavrama / silah&quot;) şırınga-iğne düzeneğini monte. </li><li> Derialtı yağ içine temizlenmiş ve anestezi rhomboid alanı (Şekil 3a) içinde iğne ucu takın. </li><li> Tam vakum (Şekil 3b) subkutan doku oluşturmak için takılan iğne şırınga pistonu geri çekin. </li><li> Vakum korumak ve derialtı yağ (Şekil 3c 3i yoluyla) çeşitli yönlerde iğne ileri ve geri manevra. Her vuruş iğne iğne cilt çıkıp izin vermeden seçilen süresini mümkün olduğunca uzun olmalıdır. Maksimum örnekleme her inme (Şekil 3i) yön değiştirerek elde edilir. Iğne, seroza teğet ve periton boşluğuna delinmesiyle önlemek için deri yüzeyine paralel yönde tutmak için önemlidir. </li><li> Fibroadipose doku şırınga içinde birikir. Bir kez yeterli fibroadipose doku parçaları (parçaları zengin kan karışık örnek 1 ml kadar) alınır, vakum tamamen serbest bırakılması ve iğne çıkarın (Şekil 3k). </li><li> Hasta veya yardımcısı, kan ekstravazasyonu önlemek için gazlı bez bir ped ile usul alanda sağlam bir baskı uygulamak. </li></ol> 2. Örnek İşleme <ol><li> Elektron mikroskobu (Şekil 4B) glutaraldehid çözümü en az 5-6 fibroadipose doku parçaları yerleştirin. </li><li> Fibroadipose doku parçaları birkaç smear kurumsal protokolüne bağlı olarak, iki slayt (Şekil 4A) arasında yayarak hazırlanmış olabilir. </li><li> Kalan malzemeyi şırınga içinde pıhtı (pıhtılaşma zamanı bağlı olarak, 5-7 dakika sürebilir) (Şekil 4C) izin verilir. </li><li> Pıhtılaşmış fibroadipose doku malzemesi, şırınga ve serbest dalgalı (Şekil 4C2) duvardan yerinden böylece şırınga içinde% 10 formalin aspire. (Şekil 4C3) şırınga pistonu çıkarın ve meme ucunu şırınga (Şekil 4C4) karşısında açık sonundan itibaren% 10 formalin kap içine pıhtılaşmış fibroadipose doku transferi. </li><li> Uygun kaplarda Etiket ve elektron mikroskobu için glutaraldehit ve H &amp; E bölümünde ve Kongo kırmızısı polarize mikroskobu altında değerlendirilmesi için leke formalin gönderin. Smear hazırsanız, onlar bireysel laboratuvar protokole göre işleme tabi tutulabilir. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1. Anterior yağ yastığı İİAB için anestezi alan. <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig2.jpg" alt="Şekil 2" /> Şekil 2. Yerel Anesthetization. <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig3.jpg" alt="Şekil 3" /> Şekil 3. Anterior yağ yastığı İİAB Sahne. <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig4.jpg" alt="Şekil 4" /> Şekil 4. Anterior yağ yastığı İşleme aspire amiloid birikimi tespit için laboratuvara teslim edilecek. 3. Temsilcisi Sonuçlar <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig5.jpg" alt="Şekil 5" /> Şekil 5. Fibroadipose doku parçaları, küçük kan damarlarının duvar amiloid. Fibroadipose doku formalin ile işlenmiş, parafin Kongo kırmızısı ile boyanmış, gömülü ve ışık mikroskobu polarize tarafından incelenir. Küçük kan damarlarının duvarında amiloid yeşil elma birefringence (beyaz ok) gösterir. <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig6.jpg" alt="Şekil 6" /> Şekil 6. Doku amiloidoz eksik. Elma yeşil birefringence yok amiloidoz olmadan farklı bir hasta dokular. Kollajen lifleri Blue birefringence (beyaz ok), hemen hemen tüm örneklerinde genellikle mevcuttur. <img src="/files/ftp_upload/1747/1747fig7.jpg" alt="Şekil 7" /> Şekil 7. Kan damar duvarında amiloid ile uyumlu fibrillerin düz, non-dallanma Elektron mikrografı, 8-10 mil çapı fibriller, kan damar duvarında amiloid oluşan rastgele saçılan .

<ol>
	<li>Westermark, P., Stenkvist, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+for+the+diagnosis+of+systemic+amyloidosis.">A new method for the diagnosis of systemic amyloidosis.</a> Arch Intern Med. 132, 522-523 (1973).</li><li>Devata, S., Hari, P., Markelova, N., Li, R., Shidham, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detecting+AL+Amyloid+in+Abdominal+fat+pad+aspirates:+Is+Congo+red+sufficient?.">Detecting AL Amyloid in Abdominal fat pad aspirates: Is Congo red sufficient?.</a> Amyloid. , .</li><li>Merlini, G., Bellotti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+Mechanisms+of+Amyloidosis.">Molecular Mechanisms of Amyloidosis.</a> New Engl J Med. 349 (6), 583-596 (2003).</li><li>Shidham, V. B., Kumar, N., Cihlar, K., Varsegi, G., Markelova, N., Li, R., Hari, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fine+needle+aspiration+of+abdominal+fat+pad+for+diagnosis+of+early+amyloidosis:+How+can+the+clinical+role+of+the+test+be+improved?.">Fine needle aspiration of abdominal fat pad for diagnosis of early amyloidosis: How can the clinical role of the test be improved?.</a> Mod Pathol. 20, 1A-380A (2007).</li><li>Halloush, R., Lavrovskaya, E., Mody, D., Lager, D., Truong, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+typing+of+systemic+amyloidosis:+The+role+of+abdominal+fat+pad+fine+needle+aspiration.">Diagnosis and typing of systemic amyloidosis: The role of abdominal fat pad fine needle aspiration.</a> Cytojournal. 6, 24-24 (2010).</li><li>Hazenberg, I. I., Rijswijk, C. V. a. n., H, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+Accuracy+of+Subcutaneous+Abdominal+Fat+Tissue+Aspiration+for+Detecting+Systemic+Amyloidosis+and+Its+Utility+in+Clinical+Practice.">Diagnostic Accuracy of Subcutaneous Abdominal Fat Tissue Aspiration for Detecting Systemic Amyloidosis and Its Utility in Clinical Practice.</a> Arthritis Rheum. , 54-546 (2006).</li><li>Guy, C. D., Jones, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abdominal+fat+pad+aspiration+biopsy+for+tissue+confirmation+of+systemic+amyloidosis:+specificity,+positive+predictive+value,+and+diagnostic+pitfalls.">Abdominal fat pad aspiration biopsy for tissue confirmation of systemic amyloidosis: specificity, positive predictive value, and diagnostic pitfalls.</a> Diagn Cytopathol. 24, 181-185 (2001).</li><li>Westermark, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosing+Amyloidosis.">Diagnosing Amyloidosis.</a> Scand J Rheumatol Suppl. 24, 327-329 (1995).</li><li>Linke, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+Sensitive+Diagnosis+of+Amyloid+and+Various+Amyloid+Syndromes+Using+Congo+Red+Fluorescence.">Highly Sensitive Diagnosis of Amyloid and Various Amyloid Syndromes Using Congo Red Fluorescence.</a> Virchow Arch. 436, 439-448 (2000).</li><li>Giorgadze, T. A., Shiina, N., Baloch, Z. W., Tomaszewski, J. E., Gupta, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+detection+of+amyloid+in+fat+pad+aspiration:+an+evaluation+of+Congo+red+stain+by+fluorescent+microscopy.">Improved detection of amyloid in fat pad aspiration: an evaluation of Congo red stain by fluorescent microscopy.</a> Diagn Cytopathol. 31, 300-306 (2004).</li><li>DeMay, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fine+Needle+Aspiration+Biopsy.">Fine Needle Aspiration Biopsy.</a> The Art &#38; Science of Cytopathology. , 465-46 (1996).</li><li>Arbustini, E., Vrga, L., Concardi, M., Pallandini, G., Obici, L., Merlini, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electron+and+Immuno-electron+Microscopy+of+Abdominal+Fat+Identifies+and+Characterizes+Amyloid+Fibrils+in+Suspected+Cardiac+Amyloidosis.">Electron and Immuno-electron Microscopy of Abdominal Fat Identifies and Characterizes Amyloid Fibrils in Suspected Cardiac Amyloidosis.</a> Amyloid. 9, 108-114 (2002).</li></ol>

Amiloidoz tanısı genellikle etkilenen organlar böbrek, karaciğer, ve / veya kalp gibi bir doku biyopsisi ile elde edilir. Bu yaklaşım yüksek tanısal Ancak, invaziv olan ve kanama 2 gibi komplikasyonlar ile ilişkili olabilir. Rektal, dişeti ve kemik iliği biyopsileri 1960&#39;ların 6,7,8 nispeten daha az invaziv bir yaklaşım olarak tanı için tercih edilmiştir. Karın yağ yastığı aspirasyon sistemik amiloidoz 1 doku tanısı için güvenli, minimal invaziv, basit ve daha az pahalı bir prosedür olarak 1973 yılında rapor edilmiştir . Ancak, alınan numune işleme usul ve yaklaşımın detayları tutarlı değildir. Bu video ve makale prosedürü adım adım açıklanmaktadır. Yağ yastığı aspirasyon amiloid tespit etmek için yaklaşım, benzer şekilde, aynı zamanda iyi bir kaç çalışmada, karşılaştırma ve 1,5,6,7,8 çeşitli yaklaşımların değerlendirilmesi standart değildir . Kongo kırmızısı boyası ile anterior yağ yastığı aspiratlar değerlendirilmesi, özellikle kıt amiloid mevduat 5 amiloidoz erken durumlarda daha düşük gözlemciler arası tekrarlanabilirlik ile daha az duyarlıdır. İmmünohistokimya formalin sabit parafine gömülü hücre bloku bölümleri üzerinde yapılan ve sitoloji smear üzerinde yapılan Kongo kırmızı floresan tanı duyarlılığı artırmak 9,10 bildirilmiştir. Elektron mikroskobu, yağ pad aspiratlarda 4, 5 fibroadipose dokusunda küçük kan damarı duvarlarının kıt amiloid fibriller tespiti ve kimlik geliştirir . Bu bilgiye dayanarak, bu makale hazırlamak için hücre bloklarının (tanısal yeşil elma birefringence için polarize mikroskop altında Kongo kırmızı lekeli hücre bloklarına değerlendirme için ve ayrıca belirtilir immünohistokimya gibi) ve elektron mikroskobu için numune işlenmesi açıklamaktadır. Ancak, amiloid için örnek değerlendirme için seçilen yaklaşım bağlı olarak, sitoloji yayma hazırlanması, hücre blok hazırlanması ve elektron mikroskobu için işleme tabi olabilir. Bazı laboratuvarlar aspire fibroadipose doku parçaları hazırlanan ve Kongo kırmızısı ile boyanarak floresan 10 çalışma smear testleri. Genellikle geç amiloidoz, Kongo kırmızısı polarizasyon mikroskobu ile ışık mikroskobu yeterli olabilir, ancak Kongo kırmızısı boyama hücre bloklarına mikroskobu polarize ile hastalığın erken aşamalarında yağ pedi aspiratlarda 4,5,11 için daha az hassas ve güvenilir . Benzer kısıtlamaları Thioflavin T dahil olmak üzere diğer özel boyalar kullanılıyor olabilir. Amiloid algılamak için diğer yaklaşımlar, Kongo kırmızısı polarize mikroskopi ve floresan 10 ile amiloid aspirat smear değerlendirilmesi içerir . Bizim tecrübelerimize göre bu yöntem daha az tekrarlanabilir. Elektron mikroskobu ile amiloid için yağ ped kan damarlarının değerlendirilmesi bu sınırlamalar 4,11 üstesinden gelir. Amiloid ileri karakterizasyonu immunoelectron mikroskopi 12 tarafından rapor edilmiştir, ancak, bu yöntemler yaygın olarak olmayan bir üçüncü basamak ortamda kullanılabilir olmayabilir . Aspirasyon prosedürleri gerçekleştirmek için kullanılan iğneler göstergesi ince içine boyutları (21-25G), orta (18-20G) ve büyük (örneğin-14G) 11 göre kategorize olabilir. Anterior yağ yastığı özlemlerini ara (18 20G) ince (21 22G) 2,10 arasında değişen değişken göstergeleri kullanılarak yapılması bildirilmiştir. Kitle lezyonları En iyi sitoloji smear hücre bloklarının için ek numune almak için daha geniş bir iğne (18G) ile ek geçiş ile birlikte elde etmek için, ince göstergesi iğneler (25G) ile aspire edilir. Anterior yağ yastığı aspirasyon sırasında, yapışkan fibroadipose dokusu ince iğneler ile iyi aspire değildir. Hücre blok hazırlanması ve elektron mikroskobu, yağ aspiratlar fibroadipose doku parçaları küçük kan damarı duvarlarının değerlendirilmesi için önemlidir. Daha geniş ölçü iğneler (18G), tanı yeterli malzeme 2,10 verim tavsiye edilir . Prosedürü geleneksel İİAB karşılaştırılabilir olduğu gibi, daha geniş insülin iğnesi yağ yastığı aspirasyon bu 5 gerçekleştirmek için kullanılacak olsa bile İİAB olarak anılacaktır .

A correction was made to <a href="http://www.jove.com/index/details.stp?id=1747">Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid</a>. There was an error with an author's name. The author's last name had a typo and was corrected to:
Safwan S. Jaradeh
instead of:
Safwan S. Jardeh

Erratum: Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid

Alkol çubuklar, gazlı bez, işaretleme kalemi, 10 ml şırınga x2,% 1 lidokain (lokal anestezik varsa lidokain tek başına kullanıldığında, instilasyon sonra bir ilk yanma hissi neden olur.% 1 1:1 karışım kullanılarak önlenebilir lidokain ve% 1 sodyum bi karbonat), 18 gauge (G) 1 ½ inç iğne x2 (İİAB gerçekleştirmek için), 25G 1 ½ inç iğne (lokal anestezik enjekte etmek için), ince iğne aspirasyon biyopsisi şırınga sahibinin (&quot;gun&quot;), bandaj, glutaraldehid flakon (elektron mikroskobu) ve% 10 formalin biyopsi konteyner.

performing and processing fna of anterior fat pad for amyloid

Tarihsel olarak, kalp, karaciğer ve böbrek biyopsileri amiloidoz amiloid mevduat göstermek için yapıldı. Bu hastalığın klinik bulguları çok değişken ve non-spesifik olduğundan, bu biyopsilerin ilişkili riskleri tanısal değeri çok büyük. Gibi deri ya da dişeti gibi düşük bir biyopsi riski, diğer siteler de nispeten invaziv ve pahalı. Buna ek olarak, bu biyopsileri her zaman bir tanı koymak için yeterli amiloid mevduat sahip olmayabilir. Fat pad aspirasyon, düşük maliyetli ve minimal morbidite ile iyi klinik korelasyon göstermiştir. Ancak, bu işlemi gerçekleştirmeden veya değişken ve nonreproducible sonuçlar yol açar aspire örnek işleme için standardize protokoller vardır. Dokuda amiloid tespit için en sık kullanılan yöntemidir polarize mikroskop kullanılarak Kongo kırmızı lekeli bölümleri bir elma yeşil birefringence. Bu teknik, aspire edilen materyal hücre blok hazırlık gerektirir. Ne yazık ki, erken evre amiloidoz başvuran hastalarda, en az miktarda yağ yastığı aspiratlar Kongo kırmızı lekeli hücre bloklarına duyarlılığını büyük ölçüde azaltır amiloid var. Bu nedenle, elektron mikroskobu ile yağ yastığı aspiratlar ultrastrüktürel değerlendirme amiloid tespiti için artmış duyarlılık göz önüne alındığında, kullanılan olmalıdır. Bu makale, Kongo kırmızısı, hücre blok bölümden boyama ve ultrastrüktürel tanımlanması için elektron mikroskobu kullanan amiloid tespiti için ön yağ yastığı aspirasyon yapmak için basit ve tekrarlanabilir bir işlem göstermektedir.

Watch this Scientific Journal Video about Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid at JoVE.com

Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid

Fat pad aspirasyon gibi sistemik amiloidoz tanısı için amiloid algılamak için diğer yöntemlerle karşılaştırıldığında çok tercih edilen, minimal invazif ve düşük maliyetli bir yaklaşımdır. Bu video makale numunenin optimal tanı sonucu için uygun bir işleme ile yağ yastığı aspirasyonu gerçekleştirmek için bir usul anahat göstermektedir.

Amiloid için Anterior Fat Pad FNA Sahne ve İşleme

Historically, heart, liver, and kidney biopsies were performed to demonstrate amyloid deposits in amyloidosis.  Since the clinical presentation of this ...

performing-and-processing-fna-of-anterior-fat-pad-for-amyloid

Research

JoVE Journal

Medicine

54.9K Görüntüleme.  Medical College of Wisconsin. Fat pad aspirasyon gibi sistemik amiloidoz tanısı için amiloid algılamak için diğer yöntemlerle karşılaştırıldığında çok tercih edilen, minimal invazif ve düşük maliyetli bir yaklaşımdır. Bu video makale numunenin optimal tanı sonucu için uygun bir işleme ile yağ yastığı aspirasyonu gerçekleştirmek için bir usul anahat göstermektedir.

Video: Performing and Processing FNA of Anterior Fat Pad for Amyloid

Purification and Aggregation of the Amyloid Precursor Protein Intracellular Domain

Amyloid precursor protein (APP) is a type I transmembrane protein associated with the pathogenesis of Alzheimer's disease (AD). APP is characterized by a large extracellular domain and a short cytosolic domain termed the APP intracellular domain (AICD). During maturation through the secretory pathway, APP can be cleaved by proteases termed &alpha;, &beta;, and &gamma;-secretases1. Sequential proteolytic cleavage of APP with &beta; and &gamma;-secretases leads to the production of a small proteolytic peptide, termed A&beta;, which is amyloidogenic and the core constituent of senile plaques. The AICD is also liberated from the membrane after secretase processing, and through interactions with Fe65 and Tip60, can translocate to the nucleus to participate in transcription regulation of multiple target genes2,3. Protein-protein interactions involving the AICD may affect trafficking, processing, and cellular functions of holo-APP and its C-terminal fragments. We have recently shown that AICD can aggregate in vitro, and this process is inhibited by the AD-implicated molecular chaperone ubiquilin-14. Consistent with these findings, the AICD has exposed hydrophobic domains and is intrinsically disordered in vitro5,6, however it obtains stable secondary structure when bound to Fe657. We have proposed that ubiquilin-1 prevents inappropriate inter- and intramolecular interactions of AICD, preventing aggregation in vitro and in intact cells4. While most studies focus on the role of APP in the pathogenesis of AD, the role of AICD in this process is not clear. Expression of AICD has been shown to induce apoptosis8, to modulate signaling pathways9, and to regulate calcium signaling10. Over-expression of AICD and Fe65 in a transgenic mouse model induces Alzheimer's like pathology11, and recently AICD has been detected in brain lysates by western blotting when using appropriate antigen retrieval techniques12. To facilitate structural, biochemical, and biophysical studies of the AICD, we have developed a procedure to produce recombinantly large amounts of highly pure AICD protein. We further describe a method for inducing the in vitro thermal aggregation of AICD and analysis by atomic force microscopy. The methods described are useful for biochemical, biophysical, and structural characterization of the AICD and the effects of molecular chaperones on AICD aggregation.

A method for large-scale purification of the APP intracellular domain (AICD) is described. We also describe methodology to induce in vitro AICD aggregation and visualization by atomic force microscopy. The methods described are useful for biochemical/structural characterization of the AICD and the effects of molecular chaperones on its aggregation.

Amiloid prekürsör protein intrasellüler Domain saflaştırılması ve toplama

Amyloid precursor protein (APP) is a type I transmembrane protein associated with the pathogenesis of Alzheimer's disease (AD). APP is characterized by a ...

Tıp

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the functions of proteins involved in oncogenic progression or help to discover new tumor suppressors. In addition, injecting cancer cells into mice with different genotypes might provide a better understanding of the importance of the stromal compartment. Many models may be useful to investigate certain aspects of disease progression but do not recapitulate the entire cancerous process. In contrast, breast cancer cells engraftment to the mammary fat pad of mice better recapitulates the location of the disease and presence of the proper stromal compartment and therefore better mimics human cancerous disease. In this article, we describe how to implant breast cancer cells into mice orthotopically and explain how to collect tissues to analyse the tumor milieu and metastasis to distant organs. Using this model, many aspects (growth, angiogenesis, and metastasis) of cancer can be investigated simply by providing a proper environment for tumor cells to grow.

Cancer is a complex disease that is influenced by the tissue surrounding the tumor as well as local pro- and anti-inflammatory mediators. Therefore, orthotropic injection models, rather than subcutaneous models may be useful to study cancer progression in a manner that better mimics human pathology.

Farelerin Meme Fat Pad içine Meme Kanseri Hücreleri Ortotopik Enjeksiyon Tümör Büyüme Eğitim için.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

Assessment of Viability of Human Fat Injection into Nude Mice with Micro-Computed Tomography

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft tissue filler as it is readily available, easily obtained, inexpensive, and inherently biocompatible.1 However, despite its burgeoning popularity, fat grafting is hampered by unpredictable results and variable graft survival, with published retention rates ranging anywhere from 10-80%. 1-3
To facilitate investigations on fat grafting, we have therefore developed an animal model that allows for real-time analysis of injected fat volume retention. Briefly, a small cut is made in the scalp of a CD-1 nude mouse and 200-400 &#181;l&#160;of processed lipoaspirate is placed over the skull. The scalp is chosen as the recipient site because of its absence of native subcutaneous fat, and because of the excellent background contrast provided by the calvarium, which aids in the analysis process. Micro-computed tomography (micro-CT) is used to scan the graft at baseline and every two weeks thereafter. The CT images are reconstructed, and an imaging software is used to quantify graft volumes.
Traditionally, techniques to assess fat graft volume have necessitated euthanizing the study animal to provide just a single assessment of graft weight and volume by physical measurement ex vivo. Biochemical and histological comparisons have likewise required the study animal to be euthanized. This described imaging technique offers the advantage of visualizing and objectively quantifying volume at multiple time points after initial grafting without having to sacrifice the study animal. The technique is limited by the size of the graft able to be injected as larger grafts risk skin and fat necrosis. This method has utility for all studies evaluating fat graft viability and volume retention. It is particularly well-suited to providing a visual representation of fat grafts and following changes in volume over time.

Fat grafting is an essential technique for reconstructing soft tissue deficits. However, it remains an unpredictable procedure characterized by variable graft survival. Our goal was to devise a mouse model that utilizes a novel imaging method to compare volume retention between differing techniques of fat graft preparation and delivery.

Mikro-Bilgisayarlı Tomografi ile Çıplak Fareler içine İnsan Yağ Enjeksiyonu Canlılığına Değerlendirilmesi

Lipotransfer is a vital tool in the surgeon&#8217;s armamentarium for the treatment of soft tissue deficits of throughout the body. Fat is the ideal soft ...

Transplantation Into the Mouse Ovarian Fat Pad

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic transplantation of ovarian surface and tubal epithelia include intraperitoneal and intrabursal administration of cells. The respective limitations of these methods include poorly defined location of injected cells and limited space volume. Furthermore, they are poorly suited for long-term structural preservation of transplanted organs. To address these challenges, we have developed an alternative approach, which is based on the introduction of cells and tissue fragments into the mouse fat pad. The mouse ovarian fat pad is located in the immediate vicinity of the ovary and uterine tube (aka oviduct, fallopian tube), and provides a familiar microenvironment for cells and tissues of these organs. In our approach fluorescence-labeled mouse and human cells, and fragments of the uterine tube are engrafted by using minimally traumatic dorsal incision surgery. Transplanted cells and their outgrowths are easily located in the ovarian fat pad for over 40 days. Long-term transplantation of the entire uterine tube allows correct preservation of all principle tissue components, and does not result in adverse side effects, such as fibrosis and inflammation. Our approach should be uniquely applicable for answering important biological questions such as differentiation, regenerative and neoplastic potential of specific cell populations. Furthermore, it should be suitable for studies of microenvironmental factors in normal development and cancer.

We describe an ovarian fad pad transplantation assay suitable for studies of normal and transformed epithelia of the female reproductive tract. The mouse fat pad allows transplantation of large tissue fragments, is easily accessible for surgery and imaging, and provides the most favorable native environment for tissues of M&#252;llerian origin.

Fare Yumurtalık Yağ Pad içine Transplantasyon

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic ...

Confirmation of Myocardial Ischemia and Reperfusion Injury in Mice Using Surface Pad Electrocardiography

Many animal models have been established for the study of myocardial remodeling and heart failure due to its status as the number one cause of mortality worldwide. In humans, a pathologic occlusion forms in a coronary artery and reperfusion of that occluded artery is considered essential to maintain viability of the myocardium at risk. Although essential for myocardial recovery, reperfusion of the ischemic myocardium creates its own tissue injury. The physiologic response and healing of an ischemia/reperfusion injury is different from a chronic occlusion injury. Myocardial ischemia/reperfusion injury is gaining recognition as a clinically relevant model for myocardial infarction studies. For this reason, parallel animal models of ischemia/reperfusion are vital in advancing the knowledge base regarding myocardial injury. Typically, ischemia of the mouse heart after left anterior descending (LAD) coronary artery occlusion is confirmed by visible pallor of the myocardium below the occlusion (ligature). However, this offers only a subjective way of confirming correct or consistent ligature placement, as there are multiple major arteries that could cause pallor in different myocardial regions. A method of recording electrocardiographic changes to assess correct ligature placement and resultant ischemia as well as reperfusion, to supplement observed myocardial pallor, would help yield consistent infarct sizes in mouse models. In turn, this would help decrease the number of mice used. Additionally, electrocardiographic changes can continue to be recorded non-invasively in a time-dependent fashion after the surgery. This article will demonstrate a method of electrocardiographically confirming myocardial ischemia and reperfusion in real time.

During murine myocardial ischemia/reperfusion surgery, correct placement of the occluding ligature is typically confirmed by visible observation of myocardial pallor. Herein, a method of electrocardiographically confirming ischemia and reperfusion, to supplement observed myocardial pallor, is demonstrated in male C57Bl/6 mice.

Yüzey Pad Elektrokardiyografi kullanılması Farelerde Miyokard İskemi ve Reperfüzyon Hasarı Onayı

Many animal models have been established for the study of myocardial remodeling and heart failure due to its status as the number one cause of mortality ...

Stromal Vascular Fraction-enriched Fat Grafting for the Treatment of Symptomatic End-neuromata

The purpose of this study was to methodically illustrate and highlight the crucial steps of stromal vascular fraction (SVF)-enriched fat grafting as a novel treatment of symptomatic end-neuromata of peripheral sensory nerves, and in this study, specifically of the superficial branch of the radial nerve (SBRN). Despite a multitude of existing treatments, persistent postoperative pain and common pain relapse are still very common, independent of the procedure assessed. The neuroma is microsurgically excised accordingly to standardized protocol. Instead of the relocation of the regenerating nerve stump in neighboring anatomical structures, such as muscle or bone, a fat graft is applied perifocally and acts as a mechanical barrier. In order to reduce the fat resorption rate and boost the regenerative potential of the graft, the highly concentrated SVF is integrated in the grafting. The SVF is isolated from subcutaneous fat by enzymatic and mechanic separation of the lipoaspirate by a specific commercial isolation system. The SVF-enriched fat graft provides both a mechanical barrier and various biological effects at the cellular level, including improving angiogenesis, inflammation, and fibrosis. Both mechanical and biologic effects help to reduce the disorganized axonal outgrowth of the nerve stump during nerve regeneration and hence prevent the recurrence of painful end-neuromata.

The purpose of the study is to illustrate the technical procedure of stromal vascular fraction (SVF)-enriched fat grafting as a novel treatment of symptomatic end-neuromata. This technique provides advantages of both the mechanical barrier and the biological action at the cellular level by the processed and concentrated SVF.

Stromal vasküler kesir zenginleştirilmiş şişman semptomatik sonu-neuromata tedavisi için aşılama

The purpose of this study was to methodically illustrate and highlight the crucial steps of stromal vascular fraction (SVF)-enriched fat grafting as a ...

Methodology for Sputum Induction and Laboratory Processing

The technique of sputum induction and processing is a recognized non-invasive method allowing the collection and analysis of cells from the airways, which is interesting in various respiratory diseases like asthma, chronic obstructive pulmonary disease (COPD), chronic cough, or idiopathic pulmonary fibrosis. This technique is well tolerated, safe and non-invasive, but is currently limited to research services and specialized centers in clinical practice because it is technically demanding, time-consuming, and requires trained staff. The success rate of sputum induction and analysis is about 80%.
Here, we describe the induction and laboratory processing of sputum samples. Sputum is induced by inhalation of hypertonic or isotonic saline with salbutamol. For the processing, we use the whole sputum technique. Dithiothreitol (DTT) is used to allow mucolysis of sputum samples. The primary aim of sputum processing is to obtain a differential cell count to study the cell types present in the airway lumen. Additional analyses may also be performed on sputum supernatant and sputum cells, which may allow further investigation into inflammatory processes and immune mechanisms. Examples include studying mediators in sputum supernatant and performing a large spectrum of analysis on sputum cells such as flow cytometry, genomics, or proteomics.
Finally, representative results of sputum analysis in healthy controls, asthmatics, and COPD patients are presented.

Here we describe the technique of sputum induction. This protocol also explains the sputum processing to perform a differential cell count and to collect sputum supernatant and cells for further analysis.

Metodoloji balgam indüksiyon ve laboratuvar için

The technique of sputum induction and processing is a recognized non-invasive method allowing the collection and analysis of cells from the airways, which ...

Sampling Strategies and Processing of Biobank Tissue Samples from Porcine Biomedical Models

In translational medical research, porcine models have steadily become more popular. Considering the high value of individual animals, particularly of genetically modified pig models, and the often-limited number of available animals of these models, establishment of (biobank) collections of adequately processed tissue samples suited for a broad spectrum of subsequent analyses methods, including analyses not specified at the time point of sampling, represent meaningful approaches to take full advantage of the translational value of the model. With respect to the peculiarities of porcine anatomy, comprehensive guidelines have recently been established for standardized generation of representative, high-quality samples from different porcine organs and tissues. These guidelines are essential prerequisites for the reproducibility of results and their comparability between different studies and investigators. The recording of basic data, such as organ weights and volumes, the determination of the sampling locations and of the numbers of tissue samples to be generated, as well as their orientation, size, processing and trimming directions, are relevant factors determining the generalizability and usability of the specimen for molecular, qualitative, and quantitative morphological analyses. Here, an illustrative, practical, step-by-step demonstration of the most important techniques for generation of representative, multi-purpose biobank specimen from porcine tissues is presented. The methods described here include determination of organ/tissue volumes and densities, the application of a volume-weighted systematic random sampling procedure for parenchymal organs by point-counting, determination of the extent of tissue shrinkage related to histological embedding of samples, and generation of randomly oriented samples for quantitative stereological analyses, such as isotropic uniform random (IUR) sections generated by the &#34;Orientator&#34; and &#34;Isector&#34; methods, and vertical uniform random (VUR) sections.

The practical application and performance of methods for generation of representative tissue samples of porcine animal models for a broad spectrum of downstream analyses in biobank projects are demonstrated, including volumetry, systematic random sampling, and differential processing of tissue samples for qualitative and quantitative morphologic and molecular analyses types.

Örnekleme stratejileri ve Biobank doku örnekleri domuz Biyomedikal modellerinden işlenmesi

In translational medical research, porcine models have steadily become more popular. Considering the high value of individual animals, particularly of ...

A Training and Testing System for Performing Vascular Reconstruction In Vitro

Manual vascular reconstruction training is essential for a beginner surgeon. However, an optimal training system for vascular reconstruction in vitro has yet to be developed. In this study, we introduce an in vitro training and testing system using a magnetic anchoring technique with which a trainee can practice manual vascular reconstruction individually. Additionally, this system can also be used to test the quality of the reconstruction. The described system includes a vascular reconstruction training machine, magnetic tractors, and a magnetic suture puller. In this manuscript, we detail an end-to-end vein anastomosis using porcine right and left iliac veins. To identify the potential damage caused by a magnetic suture puller on the suture, we created three groups with six segments of 4-0 polypropylene sutures each: a control group with no intervention on the polypropylene suture, a group in which the polypropylene suture is manually pulled with sterile gloves 20x, and a magnetic puller group in which the magnetic puller pulled the polypropylene suture 20x. These groups were tested by light microscopy and breaking strength tests, and the effect of reconstruction was assessed. In the light microscopy test, the control group was less likely to be damaged (p &#60; 0.05) and the number of damaged points of the manual group and magnetic puller group were similar (p &#62; 0.05). The results of the breaking strength test were compared across groups and no significant difference was observed (p &#62; 0.05). The end-to-end anastomosis of the porcine iliac veins was successfully performed using this training system, and the reconstructed veins could undergo 2.0 kPa perfusion pressure. Using this training and testing system the trainee can practice manual vascular reconstruction in vitro individually with the aid of magnetic tractors and a magnetic suture puller, and the quality of the reconstruction can be tested.

Here we present a training and testing system where a trainee can complete manual vascular reconstruction in vitro individually using a magnetic anchoring technique. The system can also be used to test the quality of reconstruction.

Vasküler RekonstrüksiyonUn Tüp Bebek Tespini Için Eğitim ve Test Sistemi

Manual vascular reconstruction training is essential for a beginner surgeon. However, an optimal training system for vascular reconstruction in vitro has ...

Vinyl Chloride and High-Fat Diet as a Model of Environment and Obesity Interaction

Vinyl chloride (VC), an abundant environmental contaminant, causes steatohepatitis at high levels, but is considered safe at lower levels. Although several studies have investigated the role of VC as a direct hepatotoxicant, the concept that VC modifies sensitivity of the liver to other factors, such as nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) caused by high-fat diet (HFD) is novel. This protocol describes an exposure paradigm to evaluate the effects of chronic, low-level exposure to VC. Mice are acclimated to low-fat or high-fat diet one week prior to the beginning of the inhalation exposure and remain on these diets throughout the experiment. Mice are exposed to VC (sub-OSHA level: &#60;1 ppm) or room air in inhalation chambers for 6 hours/day, 5 days/week, for up to 12 weeks. Animals are monitored weekly for body weight gain and food consumption. This model of VC exposure causes no overt liver injury with VC inhalation alone. However, the combination of VC and HFD significantly enhances liver disease. A technical advantage of this co-exposure model is the whole-body exposure, without restraint. Moreover, the conditions more closely resemble a very common human situation of a combined exposure to VC with underlying nonalcoholic fatty liver disease and therefore support the novel hypothesis that VC is an environmental risk factor for the development of liver damage as a complication of obesity (i.e., NAFLD). This work challenges the paradigm that the current exposure limits of VC (occupational and environmental) are safe. The use of this model can shed new light and concern on the risks of VC exposure. This model of toxicant-induced liver injury can be used for other volatile organic compounds and to study other interactions that may impact the liver and other organ systems.

The goal of this protocol was to develop a murine model of low-level toxicant exposure that does not cause overt liver injury but rather exacerbates pre-existing liver damage. This paradigm better recapitulates human exposure and the subtle changes that occur upon exposure to toxicant concentrations that are considered safe.

Çevre ve Obezite Etkileşimi Modeli Olarak Vinil Klorür ve Yüksek Yağlı Diyet

Vinyl chloride (VC), an abundant environmental contaminant, causes steatohepatitis at high levels, but is considered safe at lower levels. Although ...