Bu çalışma, Sağlık Grants R01 AI067548, R01 GM081520, R01 GM086200, R01 AI049194 ve P01 GM066521 GJJ National Institutes gibi Howard Hughes Tıp Enstitüsü, Beckman Caltech&#39;te Enstitüsü&#39;nün, ve, Caltech hediye tarafından kısmen desteklenmiştir. Gordon ve Betty Moore Vakfı ve Agouron Enstitüsü. MSL Pamela S. Björkman NIH hibe 2R37-A1041239-06A1 tarafından desteklenmektedir. Leica Microsystems Inc lütfen cryosection toplama video içeriği sağladı. Treponema primitia temsilcisi sonuçları toplanır ve Gavin E. Murphy tarafından işlenmiş ve Moleküler Mikrobiyoloji &quot;Roman ultrastructures Treponema primitia ve motilite üzerindeki etkileri&quot; başlığı ile yayınlandı. (Murphy, G. ve ark. Mol. Microbiol. 67, 1184-1195, 2008).

<ol>
	<li>Jensen, G. J., Briegel, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+electron+cryotomography+is+opening+a+new+window+onto+prokaryotic+ultrastructure.">How electron cryotomography is opening a new window onto prokaryotic ultrastructure.</a> Curr. Opin. Struct. Biol. 17, 260-267 (2007).</li><li>Li, Z., Jensen, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electron+cryotomography:+a+new+view+into+microbial+ultrastructure.">Electron cryotomography: a new view into microbial ultrastructure.</a> Curr. Opin. Microbiol. 12, 333-340 (2009).</li><li>Frank, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+imaging+of+biological+complexity.">Three-dimensional imaging of biological complexity.</a> J. Struct. Biol. 138, 85-91 (2002).</li><li>Iancu, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electron+cryotomography+sample+preparation+using+the+Vitrobot.">Electron cryotomography sample preparation using the Vitrobot.</a> Nat. Protocols. 1, 2813-2819 (2007).</li><li>Studer, D., Graber, W., Al-Amoudi, A., Eggli, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+approach+for+cryofixation+by+high-pressure+freezing.">A new approach for cryofixation by high-pressure freezing.</a> J. Microsc. 203, 285-294 (2001).</li><li>Ladinsky, M. S., Pierson, J., McIntosh, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vitreous+cryosectioning+of+cells,+facilitated+by+a+micromanipulator.">Vitreous cryosectioning of cells, facilitated by a micromanipulator.</a> J. Microsc. 224, 129-134 (2006).</li><li>Pierson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+the+technique+of+vitreous+cryo-sectioning+for+cryo-electron+tomography:+Electrostatic+charging+for+section+attachment+and+implementation+of+an+anti-contamination+glove+box.">Improving the technique of vitreous cryo-sectioning for cryo-electron tomography: Electrostatic charging for section attachment and implementation of an anti-contamination glove box.</a> J. Struct. Biol. 169, (2009).</li><li>Suloway, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fully+automated,+sequential+tilt-series+acquisition+with+Leginon.">Fully automated, sequential tilt-series acquisition with Leginon.</a> J. Struct. Biol. 167, 11-18 (2009).</li><li>Fernando, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Markov+random+field+based+automatic+image+alignment+for+electron+tomography.">Markov random field based automatic image alignment for electron tomography.</a> J. Struct. Biol. 161, 260-275 (2008).</li><li>Kremer, J. R., Mastronarde, D. N., McIntosh, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computer+visualization+of+three-dimensional+image+data+using+IMOD.">Computer visualization of three-dimensional image data using IMOD.</a> J. Struct. Biol. 116, 71-76 (1996).</li><li>Mastronarde, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual-axis+tomography:+an+approach+with+alignment+methods+that+preserve+resolution.">Dual-axis tomography: an approach with alignment methods that preserve resolution.</a> J. Struct. Biol. 120, 343-352 (1997).</li></ol>

Bu video makalesinde, bakteri hücrelerinin EKT nasıl göstermektedir. Uzay ve zaman ile sınırlı, sadece genel bir protokol göstermektedir. Daha fazla bilgi kağıtları, online ya da diğer bilgi, donanım ve yazılım geliştiricilerin üreten tarafından sağlanan ve EKT araştırma grupları bulunabilir. Okudu farklı bakteri türlerinin bağlı olarak, kullanılan ekipman ve hücrelerde yapısal faiz, protokol ve deneysel parametreleri test ve optimize edilmiş olması gerekir.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Poly-L-Lysine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma Aldrich</td>
<td>P8920</td>
<td>0.1% solution</td>
</tr>
<tr>
<td>MKIII Vitrobot</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>FEI</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Gold colloid solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>G1527-25ml</td>
<td>10 nm</td>
</tr>
<tr>
<td>Bovine serum Albumin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>P2489</td>
<td>10%</td>
</tr>
<tr>
<td>Nr 1 Filter paper</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Whatman</td>
<td>1001 055</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dextran</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>31389</td>
<td>15-25%, MW 39000</td>
</tr>
<tr>
<td>Brass-domed planchet</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Swiss Precision Company</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bal-Tec HPm 010 high pressure freezer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Leica Microsystems Inc.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cryo-ultra microtome UC6/FC6</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Leica Microsystems Inc.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Diamond cryo trim 45</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Diatome US Inc</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Static line II ioniser</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Diatome US Inc</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CX100 Dry shipper</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Taylor-Wharton-Cryogenics</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MSH loading station</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Gatan</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ti E/B inverted microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nikon</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Custom</td>
</tr>
<tr>
<td>Cryo LM stage</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>FEI</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Custom</td>
</tr>
<tr>
<td>TF30-polara</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>FEI</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>With UltraCam from Gatan</td>
</tr>
<tr>
<td>Amira</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Visage Imaging</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

electron cryotomography of bacterial cells

Bakteri hücrelerinin temel metabolizması hakkında çok önceden bilinmekle birlikte, pek çok temel sorular hala şaşırtıcı şekilde oluşturmak ve korumak, belirli bir hücre şekilleri, polarite kurmak, genomlarını ayırınız ve bölme nasıl dahil olmak üzere, örneğin cevapsız. Bu fenomenleri anlamak amacıyla, görüntüleme teknolojileri ihtiyaç vardır köprü, floresan ışık mikroskobu ve, X-ray kristalografisi ve NMR spektroskopisi gibi yüksek çözünürlüklü yöntemleri arasında çözünürlük boşluğu. Elektron cryotomography (EKT), sadece bu hücre ultrastrüktür &quot;makromoleküler&quot; çözünürlük (~ 4nm) ile, üç boyutlu (3D), yakın yerli bir devlet görüntülenebilmekte için izin gelişmekte olan bir teknoloji. 1, 2 EKT, hücreleri düşük ısıda cryo transmisyon elektron mikroskobu (cryoTEM) &quot;dondurulmuş sulu&quot; devlet, vitreus görüntülü (-180 ° C). Ince hücreler (kalınlığı 3 ~ 500 nm) için, sağlam hücreleri dalma, etan veya etan / propan karışımları gibi cryogens EM ızgaraları arasında medya içinde donmuş. Kalın hücreleri ve biyofilm sonra ilk &quot;yüksek basınçlı dondurma&quot; ve vitreus bir devlet görüntülü olabilir, onlara &quot;cryo-Kesit&quot;. Aşamalı olarak bir veya iki eksen boyunca hareket ettirildiğinde, iki boyutlu projeksiyon görüntüleri bir dizi örnek ile toplanır. Üç boyutlu rekonstrüksiyon veya &quot;tomogram&quot; sonra görüntüleri hesaplanabilir. EKT pahalı aletlerle ihtiyaç duyulurken, son yıllarda, çeşitli dış uzantıları yapıları ortaya çıkarmak için bir kaç laboratuvarlarında kullanılan olmuştur yapıları, farklı hücre zarflar, sitoskeletal filamentler ve yapıların konumları, yerleri ve büyük makromoleküler mimarileri flagellar motorlar, iç bölmeleri ve kemoreseptör dizileri gibi meclisleri 1, 2 Bu video makalede numune hazırlama süreçleri, veri toplama, tomogram yeniden yapılanma, ve segmentasyon ve ışık mikroskobu ile bazı durumlarda korelasyon sonuçların yorumlanması da dahil olmak üzere EKT ile görüntü hücreleri, nasıl çalıştığını göstermek.

Watch this Scientific Journal Video about Electron Cryotomography of Bacterial Cells at JoVE.com

Electron Cryotomography of Bacterial Cells

Yerli yakın eyalette bakteri hücrelerinin ultrastrüktür çalışma elektron cryotomography (EKT) nasıl kullanılacağı &quot;makromoleküler&quot; (~ 4 nm) çözünürlük, burada göstermektedir.

Bakteriyel Hücre Elektron Cryotomography

While much is already known about the basic metabolism of bacterial cells, many fundamental questions are still surprisingly unanswered, including for ...

electron-cryotomography-of-bacterial-cells

Research

JoVE Journal

Biology

25.2K Görüntüleme.  California Institute of Technology - Caltech. Yerli yakın eyalette bakteri hücrelerinin ultrastrüktür çalışma elektron cryotomography (EKT) nasıl kullanılacağı "makromoleküler" (~ 4 nm) çözünürlük, burada göstermektedir.