Culture of bEnd.3 Cells and Cell Viability After CoCl2 Treatment

Başlamak için, FBS, penisilin ve streptomisin içeren DMEM hücre kültürü ortamını hazırlayın. Ayrıca, 100 mikrolitre DMSO'ya 1.30 miligram kobalt klorür ekleyerek 100 milimolar kobalt klorür stok çözeltisi hazırlayın. Daha sonra, DMEM ortamı içeren 100 mililitrelik bir kültür kabına bir mililitre BEND3 hücresi ekin ve nemlendirilmiş bir atmosferde 37 santigrat derecede %5 karbondioksit kültürü yapın.

Ortamı her iki ila üç günde bir değiştirin ve hücreleri haftada iki kez alt kültürleyin. BEND3 hücreleri% 80 birleşme noktasına geldikten sonra, hücreleri 30 saniye boyunca% 0.25 tripsin ile sindirin. Bir hücre sayacı kullanarak hücreleri sayın ve mililitre başına yedi kez 10 ila dördüncü hücreler arasında bir yoğunluk süspansiyonu yapın.

Daha sonra, hücre yapışması için 96 oyuklu bir plakada bu hücre süspansiyonunun 100 mikrolitresini tohumlayın. Daha sonra hücreleri PBS ile yıkayın ve kobalt klorür içeren 100 mikrolitre kültür ortamı ekleyin. Hücreleri 24 saat boyunca kültürleyin.

İnkübasyondan sonra, ortamı çıkarın ve PBS ile yıkayın. Ardından, 100 mikrolitre CCK-8 çözeltisi ekleyin. Plakaları bir saat boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin, ardından bir mikroplaka okuyucu kullanarak 450 nanometrede absorbansı ölçün.

Bu formüle göre kobalt klorürün neden olduğu hücre canlılığını hesaplayın. Kontrol grubuna kıyasla hücre canlılığında azalmada önemli bir fark olan konsantrasyonu seçin. Farklı konsantrasyonlarda kobalt klorür ile muamele edilen BEND3 hücrelerinin canlılığı CoCl2 ile analiz edildi.

Sonuçlar, 300 mikromolar kobalt klorürün önemli in vitro sitotoksisite gösterdiğini gösterdi.