Başlamak için, 24 oyuklu plakanın üst odasını PBS ile durulayın. Bir süspansiyon yapmak için bir vorteks karıştırıcı kullanarak BEND3 hücrelerini DMEM ortamı ile karıştırın. Daha sonra, 24 oyuklu bir plakanın üst odasındaki PET membran üzerine 200 mikrolitre BEND3 hücre süspansiyonu tohumlayın.
Üst ve alt odaların ozmotik basıncını stabilize etmek için plakanın alt odasına 1.200 mikrolitre tam ortam ekleyin. Sıvı değişimi sırasında eski ortamı bir taraftan negatif basınçlı bir pipetle yavaşça çıkararak ve duvar boyunca yeni bir ortam ekleyerek ortamı değiştirin. TEER'i ölçmeden önce direnci, %5 sodyum hipoklorit çözeltisini, %75 etanolü ve çift damıtılmış suyu ultra temiz bir masaya yerleştirin.
Artık bakteri ve patojenleri ortadan kaldırmak için UV ışınlamasını 30 dakika boyunca açın. Elektrotları% 5 sodyum hipoklorit çözeltisine üç ila beş saniye boyunca yavaşça çalkalayarak yerleştirin. Daha sonra 15 dakika boyunca% 75 etanole daldırın.
Son olarak, kullanana kadar PBS'ye veya çift damıtılmış suya aktarın. Ardından, hücre direnç ölçerin arkasındaki anahtarı açın. Plaka Seç'e tıklayın ve 24 kuyulu plakayı seçin.
İşleme göre uygun algılama sırasını seçin. Cihazı kalibre etmek için sağ fişe bir kilo ohm direnç takın. Kalibrasyon sonucu 1000 artı eksi 5 ohm ise, cihazın doğru olduğunu düşünün.
Değilse, Ohm'u seçmek için ana arayüzde Mod Birimleri'ne tıklayın ve ardından Kalibre Et'e tıklayın. Ardından, kilo ohm direncini çıkarın ve bir bağlantı kablosu kullanarak ölçüm elektroduyla değiştirin. Elektrotu yalnızca orta içeren 24 oyuklu plakaya dikey olarak yerleştirin ve cihaz üzerinde Boş Kullanım'a tıklayın.
Oturmuş hücreler olmadan plaka direncinin arka plan değeri yaklaşık 134.4 ohm olmalıdır. Daha sonra, iki elektrotu, hücre tabakası aralarında olacak şekilde, oturmuş plakanın üst ve alt odalarına yerleştirin. Pedala hafifçe basarak direnç değerini kaydedin.
Elektrotun üst bölmedeki ve alt bölmenin altındaki hücrelere temas etmediğinden emin olun. Denklemde gösterildiği gibi elektrik direnç değerlerini üst haznenin alt alanı ile çarparak TEER değerlerini elde edin. TEER'in gün cinsinden zamana karşı bir çizgi grafiği çizin.
Direnç değeri zamanla artmadığında, hücreler bir bariyer oluşturmuştur. BEND3 hücreleri için zamana karşı çizilen direnç değerleri, hücre TEER değerlerinin beşinci günde stabilize olmaya başladığını gösterdi.
