Başlamak için, diseke edilmiş fare dokusunu %5 FBS içeren bir soğuk hücre kültürü ortamına yerleştirin. Keskin diseksiyon makası kullanarak, dokuyu yaklaşık beş milimetre parçalar elde edilene kadar kesin. Kıyılmış parçaları bir C-tüpüne aktarın ve bir mililitre hücre kültürü ortamı ekleyin.
C-boruyu motorlu cihaza yükleyin ve boru tutucu plakayı D-şekilli boru tabanlarının üzerine takın. Boruları motor plakasına sabitlemek için gergi kollarını akrilik plakaya sabitleyin. Ana menüden motorlu cihazda özel bir program ayarlamak için, özel modu seçmek için mavi düğmeye basın.
İlk özel mod menüsünde, ileri dönüş süresini 30 saniye olarak belirtmek için yeşil düğmeye basın. Ardından ekrandaki değeri seçmek için mavi düğmeye basın. İkinci özel mod menüsünde, ters dönüş süresini 10 saniye olarak belirtmek için yeşil düğmeye basın.
Ardından ekrandaki değeri seçmek için mavi düğmeye basın. Üçüncü özel mod menüsünde, seçim döngülerini dört kez belirtmek için kırmızı düğmeye basın. Ardından ekrandaki değeri seçmek için mavi düğmeye basın.
Voltaj kontrol kadranını 200 RPM'ye ayarlayın ve özel programı başlatın. Daha sonra, diseke dokular içeren dört mililitre soğuk kültür ortamına sindirim enzimi ekleyin. Yine, C-tüpünü cihaza yükleyin ve daha önce gösterildiği gibi özel programı tekrarlayın.
Çalıştırmadan sonra, cihazı yüklü tüplerle birlikte 45 dakika boyunca 37 santigrat derece inkübatöre aktarın. Ardından, C-tüpünü cihaza yükleyin ve özel programı ileri dönüşle 50 saniyeye 270 RPM'ye ayarlayın. Döndürmeyi 30 saniyeye ters çevirin ve dokuz kez döngü yapın.
Numuneye beş milimolar son konsantrasyona EDTA ekleyin. Özel programı ileri döndürme ile 100 RPM'de 30 saniyeye ayarlayın. Döndürmeyi 10 saniyeye ters çevirin ve iki kez döngüye alın.
Daha sonra, hücre süspansiyonunu 70 mikrometrelik bir hücre süzgecinden geçirin ve süzüntüyü 50 veya 15 mililitrelik bir tüpte toplayın. Toplanan hücre süspansiyonunu 300 G'de dört santigrat derecede beş dakika santrifüjleyin ve süpernatanı atın. Peletleri bir mililitre kırmızı kan hücresi lizis tamponunda tekrar süspanse edin ve bir dakika inkübe edin.
Lizis tamponunu dokuz mililitre soğuk PBS ile nötralize edin. Yine, hücreleri santrifüjleyin ve peleti istenen tampon veya ortamda yeniden süspanse edin. Motorlu cihaz ve manuel ayrışma ile hazırlanan hücre süspansiyonu, fare akciğeri, böbreği ve kalp dokuları arasında karşılaştırılabilir hücre canlılığı ve verimleri sergiledi.
T hücreleri ve dendritik hücreler gibi bağışıklık hücresi popülasyonları, izolasyon protokolünden önemli ölçüde etkilenmedi. Yüzey marker ekspresyonu ayrıca, manuel ve cihaz izolasyonu arasında dendritik hücrelerde antijen sunum markörü MHC II için ortalama floresan yoğunluğunda izole edilmiş T hücrelerinin benzer frekanslarını gösterdi.
