Başlamak için, PDMS mikro kuyu kalıplarını, yapışma önleyici durulama solüsyonunu ve gerekli laboratuvar kıyafetini bir doku kültürü başlığına yerleştirin. PDMS mikro kuyu kalıplarını yıkamak için, her bir kuyucuğa 300 mikrolitre yapışma önleyici durulama solüsyonu eklemek için 1.000 mikrolitrelik bir pipet kullanın. Daha sonra plakayı santrifüjleyin, 1.620 G üç dakika boyunca.
Çözeltiyi aspire etmek için bir vakum pompası ve bir Pasteur pipeti kullanın. Daha sonra, mikrokuyucuklara istenen konsantrasyonda 500 mikrolitre hücre süspansiyonu yerleştirin ve plakayı üç dakika boyunca 1.620 G'de santrifüjleyin. Küresel oluşumuna izin vermek için plakayı nemlendirilmiş bir inkübatöre yerleştirin.
Sferoidleri hasat etmek için, 1.000 mikrolitrelik bir pipet kullanarak, her bir oyuğa sıkıca 500 mikrolitre tam ortam ekleyin. Speroidleri yerinden çıkarmak için eklenen ortamı her kadranda üç ila dört kez yukarı ve aşağı pipetleyin. Ardından, sferoidleri içeren ortamı bir mikrosantrifüj tüpüne nazikçe aspire etmek için pipeti kullanın.
50 mikrolitre steroid süspansiyonunu bir mikrosantrifüj tüpüne aktarın. Daha sonra sırayla içine 4 Kollu PEG akrilat ve PEG dithiol ekleyin. Elde edilen çözeltiyi yaklaşık 10 kez yukarı ve aşağı pipetleyerek karıştırın.
Hacimce %10 ağırlıkça 100 mikrolitre PEG hidrojel öncü çözeltisi elde etmek için, bir milimetre silikon ara parçalarla ayrılmış iki parafilm kaplı cam slayt arasına 20 mikrolitre jel öncü çözeltisi pipetleyin ve jelleşmeye izin vermek için slaytları jel öncü çözeltisi ile inkübe edin. Hidrojel jelleşmesi tamamlandıktan sonra, bir spatula kullanarak, jelleri ayrılmış cam slaytlardan nazikçe soyun. Kürecikleri içeren yüzeyin yukarı baktığından emin olacak şekilde 24 oyuklu bir plakaya bir jel yerleştirin.
Hidrojeli tamamen daldırmak için her kuyucuğa 500 mikrolitre tam ortam ekleyin. Hücreleri kültürlemek için çok kuyulu plakayı nemlendirilmiş bir inkübatöre yerleştirin. Mikrokuyu kalıpları kullanılarak tarif edilen teknik, küresel şekillere ve sıkı bir şekilde kontrol edilen polidispersiteye sahip sferoidlerin oluşumuyla sonuçlandı.
Mikrokuyu başına 3.300 hücreli sferoidler için, ortalama sferoid boyutu yaklaşık 250 mikrondu ve dairesellik, 1'in mükemmel bir küre olduğu düşünüldüğünde 0.8'den büyüktü. Sferoid çapları, mikrokuyu boyutuna ve mikrokuyu başına hücre sayısına bağlıydı.
