Tavşan gözünün transkonjonktival enükleasyonundan sonra, hemen 50 mililitre% 4 paraformaldehit ve PBS'yi buz üzerine yerleştirin. 15 dakika sonra, gözü 100 milimetrelik bir diseksiyon kabına aktarın ve gözün kurumasını önlemek için kabı PBS ile doldurun. Diseksiyon mikroskobu altında, cerrahi bir bıçak kullanarak, iris düzlemine paralel tutarak limbusun bir milimetre önünde bir kesi yapmaya başlayın.
İlk kesiğe kavisli makas yerleştirin ve limbustan bir milimetre mesafeyi koruyarak çevresel olarak kesmeye devam edin. Ardından korneayı forseps ile çıkarın ve PBS'yi bir laboratuvar mendili ile nazikçe silin. Kriyoproteksiyon için korneayı oda sıcaklığında% 30 sükroz çözeltisine yerleştirin.
İris boyunca kavisli makasla ilk kesimi yapın. Daha sonra, irisi dokunun geri kalanından ayırmak için korneanın çıkarılmasına benzer şekilde göz çevresini çevresel olarak kesin. İrisi forseps ile çıkarın ve fazla PBS'yi laboratuvar mendili ile nazikçe silin.
Kriyoproteksiyon için irisi oda sıcaklığında% 30 sükroz çözeltisine yerleştirin. Kornea ve irisi çıkardıktan sonra, gözü 50 mililitre% 4 paraformaldehit içine yerleştirin ve hafif çalkalama için bir çalkalayıcıya koyun. Gözü gece boyunca dört santigrat derecede% 4 paraformaldehit içinde bırakın.
Ertesi gün, gözü bir diseksiyon kabına yerleştirin ve tabağı PBS ile doldurun. Diseksiyon mikroskobu altında, ön lens kapsülünü dikkatlice kavramak için forseps kullanın. Ardından makası dikkatlice arka odaya yerleştirin ve bıçakları lens boyunca arkaya doğru yönlendirin.
Kavisli makasla lens zonüllerinden ilk kesimi yapın. Lens zonülleri boyunca çevresel bir düzende küçük kesimler yapmaya devam edin. Lensin çıkarılmasını onaylamak için ön lens kapsülünü forseps ile nazikçe kavrayın ve kaldırmaya çalışın.
Ayrıldıktan sonra, kriyoproteksiyon için lensi oda sıcaklığında% 30 sükroz çözeltisine yerleştirin. Kriyoproteksiyon için gözü 50 mililitre% 30 sükroz ve PBS'ye 24 ila 48 saat boyunca dört santigrat derecede yerleştirin. Kriyoproteksiyonu hızlandırmak için, ilk sükroz solüsyonunu sekiz ila 12 saat sonra yenisiyle değiştirin.
