Başlamak için, PBS içeren 1.5 mililitrelik bir tüpte yüzey sterilize edilmiş sivrisinekler elde edin. Temizlenmiş bir sivrisineği mikroskop lamı üzerine yerleştirilmiş bir damla steril 1X PBS üzerine aktarın. Cımbız kullanarak, hareket etmesini önlemek için sivrisineğin göğsünü tutun.
Daha sonra boynuna başın hemen altına bir iğne yerleştirin ve sivrisineğin kafasını göğüsten ayırmak için yavaşça çekin. Bir iğne kullanarak tükürük bezlerini tükürük kanalı seviyesinde kesin. Bezleri iğne ile alın ve durulamak için yeni bir PBS damlasına yerleştirin.
Daha sonra, bir iğne kullanarak tükürük bezlerini alın. Yumurtalıkları incelemeye başlamak için sivrisinekleri sırtına yerleştirin. Forseps kullanarak, hareketi önlemek için sivrisinekleri göğüs kafesinden tutun ve alttan başlayarak üçüncü karın segmentini bir iğne ile delin.
Üçüncü karın segmentini delerken, açmak ve iç organları ortaya çıkarmak için karnı aşağı çekin. Organ salınımını kolaylaştırmak için sivrisinek dış iskeletinin kalan parçalarını çıkarın. Her iki yumurtalığı da sterilize edilmiş forseps ile alın ve durulamak için mikroskop lamı üzerinde yeni bir steril PBS damlasına yerleştirin.
Durulanmış yumurtalıkları 100 mikrolitre koruma tamponu içeren 1,5 mililitrelik bir tüpe aktarın. Daha sonra, steril bir iğne kullanarak, orta bağırsağı ön bağırsaktan ve arka bağırsaktan ayırın. Malpighian tübüllerini orta bağırsaktan çıkarın ve durulamak ve kontaminasyonu önlemek için orta bağırsağı yeni bir steril PBS damlasına yerleştirin.
Sonra orta bağırsağı başka bir steril PBS damlasına aktarın. Forseps ile bakterileri serbest bırakmak için orta bağırsağı açın. PBS içeren tüm bakterileri ve orta bağırsak dokusunu 100 mikrolitre koruma tamponu içeren yeni bir sterilize edilmiş 1,5 mililitrelik tüpe pipetleyin.
Orta bağırsağın daha önce yerleştirildiği mikroskop lamının aynı alanına beş mikrolitre PBS ekleyin. Slayta yapışmış olabilecek bakterileri almak için PBS'yi aynı 1,5 mililitrelik tüpe geri pipetleyin. Son olarak, sivrisinek karkasını kavramak için steril forseps kullanın ve 100 mikrolitre koruma tamponu içeren sterilize edilmiş 1,5 mililitrelik bir tüpte saklayın.
