Başlamak için, mutant ve X134 bitkilerinin tohumlarını hasat edin ve nem içeriği yaklaşık% 13 ila 15'e ulaşana kadar oda sıcaklığında doğal olarak kurumasına izin verin. Soyma makinesini etkinleştirdikten sonra, yapışkan kabuğu verimli bir şekilde çıkarmak için besleyiciye 10 g pirinç tanesi ekleyin. Soyulmuş pirinç tohumlarını pirinç değirmenine aktarın ve cilalı pirinç veren aleurone tabakasını ortadan kaldırmak için makineyi 60 saniye çalıştırın. Ardından, cilalı pirinci doku öğütücüye yerleştirin.
Öğütme frekansını 60 Hz'e ayarlayın ve pirinç tozu üretmek için öğütücüyü iki döngü boyunca 15 saniye çalıştırın. Öğütülmüş pirinç tozunu bir Petri kabına koyun ve 12 saat boyunca 37 C'ye ayarlanmış önceden ısıtılmış bir fırına koyun. Daha sonra 2 mL'lik bir mikrosantrifüj tüpüne 100 mg pirinç tozu ekleyin ve tüpe hafifçe vurun.
Tüpe 180 L arıtılmış su ekleyin ve numuneyi bir su banyosunda 20 dakika kaynatın. Numune soğuduktan sonra, tüpe pankreatik alfa amilaz içeren 4 mL AMG ekleyin. Daha sonra, içeriği bir girdap osilatörü üzerinde karıştırın ve tüpü sürekli çalkalama ile 16 saat boyunca 37 ° C'de inkübe edin.
Şimdi, 4 mL etanol ekleyin ve numuneyi bir girdap kullanarak karıştırın. Daha sonra tüpü 10 dakika boyunca 1.500 G'de santrifüjleyin. Süpernatanı boşalttıktan sonra, tüpe 2 mL %50 etanol, ardından 6 mL %50 IMS ekleyin ve karıştırın.
Tüpü santrifüjledikten sonra, süpernatanı dikkatlice dökün ve fazla sıvıyı boşaltmak için tüpü ters çevirin. Tüpü bir buz banyosuna yerleştirin, üzerine 2 mL 2 molar potasyum hidroksit ekleyin ve flok yeniden süspanse etmek ve dirençli nişastayı çözmek için numuneyi 20 dakika karıştırın. Tüpe pH 3.8'e ayarlanmış 8 mL 1.2 molar sodyum asetat tamponu ekleyin ve manyetik bir karıştırıcı kullanarak karıştırın.
Ardından hemen karışıma 0,1 mL AMG ekleyin ve iyice karıştırın. Numuneyi, bir girdap kullanarak aralıklı karıştırma ile bir su banyosunda 50 ° C'de 30 dakika inkübe edin. İnkübasyondan sonra, tüpü 10 dakika boyunca 1.500 G'de santrifüjleyin.
Şimdi süpernatanın 0.1 mL'sini taze bir cam tüpe aktarın. 3 mL glikoz oksidaz peroksidaz reaktifi ekleyin ve numuneyi 50 ° C'de 20 dakika inkübe edin. Her bir boş numune çözeltisinden ve standart çözeltiden 200 L'yi 96 oyuklu bir plakaya dikkatlice pipetleyin.
Her bir numunenin boş çözeltiye karşı 510 nm'de emilimini ölçün ve formülü kullanarak dirençli nişasta içeriğini hesaplayın. Son olarak, katılımcılara 200 mL su ile 50 g hazırlanmış pirinç sunun. Yemekten sonra, kan şekeri analizi yapmak için çeşitli zaman noktalarında venöz kan örnekleri toplayın.
Dirençli nişasta içeriği, SBEIIb mutantında yabani tipe göre %5.2 ile anlamlı derecede yüksekti. Hazırlanan pirincin tüketimi, sırasıyla% 9.7 ve% 3.7'lik azalmalarla 15 ve 30 dakikada daha yavaş ve azaltılmış bir glikoz tepkisine yol açtı.