Yazarlar, işleme ve akış odaları aracılığıyla görüntü hücrelere teknikleri konusunda yardımcı olmak için Leica Microsystems akışını odası parçaları ve Matt Maudsley montaj onun yorulmak bilmeyen çabaları için Biyomedikal Alet ve Makine Dükkanı Joe Owen teşekkür etmek istiyorum. Biz Duke Perfüzyon Hizmetler Kevin Collins ve akış devre tasarımı yararlı önerileri için Biyomedikal Mühendisliği Bölümü Dr. Steve Wallace borçluyuz. Ayrıca, RC1HL099863-01 &quot;Otolog EPC astar dolaşım, biyouyumluluk yardımcı cihazlar geliştirmek için&quot; Hibe yoluyla verdikleri destek için Alexandra Jantzen ve NIH Ulusal Bilim Vakfı Lisansüstü Araştırma Burs Programı teşekkür etmek istiyorum.

<ol>
	<li>Bhat, V. D., Truskey, G. A., Reichert, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibronectin+and+avidin-biotin+as+a+heterogeneous+ligand+system+for+enhanced+endothelial+cell+adhesion.">Fibronectin and avidin-biotin as a heterogeneous ligand system for enhanced endothelial cell adhesion.</a> J. Biomed. Mater. Res. 41, 377-385 (1998).</li><li>Broxmeyer, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cord+blood+stem+and+progenitor+cells.">Cord blood stem and progenitor cells.</a> Methods Enzymol. 419, 439-473 (2006).</li><li>Achneck, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> American Heart Association Scientific Sessions, Abstract Oral Sessions, Medical Aspects End Stage Heart Failure: Transplantation and Device Therapies. , (2010).</li><li>Brown, M. A., Wallace, C. S., Angelos, M., Truskey, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+umbilical+cord+blood-derived+late+outgrowth+endothelial+progenitor+cells+exposed+to+laminar+shear+stress.">Characterization of umbilical cord blood-derived late outgrowth endothelial progenitor cells exposed to laminar shear stress.</a> Tissue. Eng. Part. A. 15, 3575-3587 (2009).</li><li>Achneck, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regenerating+titanium+ventricular+assist+device+surfaces+after+gold/palladium+coating+for+scanning+electron+microscopy.">Regenerating titanium ventricular assist device surfaces after gold/palladium coating for scanning electron microscopy.</a> Microsc. Res. Tech. 73, 71-76 (2010).</li><li>Achneck, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biocompatibility+of+titanium+cardiovascular+devices+seeded+with+autologous+blood-derived+endothelial+progenitor+cells:+EPC-seeded+antithrombotic+Ti+Implants.">The biocompatibility of titanium cardiovascular devices seeded with autologous blood-derived endothelial progenitor cells: EPC-seeded antithrombotic Ti Implants.</a> Biomaterials. 32, 10-18 (2011).</li><li>Rinker, K. D., Prabhakar, V., Truskey, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+contact+time+and+force+on+monocyte+adhesion+to+vascular+endothelium.">Effect of contact time and force on monocyte adhesion to vascular endothelium.</a> Biophys. J. 80, 1722-1732 (2001).</li><li>Truskey, G. A., Yuan, F., Katz, D. F., Horton, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+2.">Ch. 2.</a> Transport Phenomena in Biological Systems. , (2004).</li><li>Truskey, G. A., Yuan, F., Katz, D. F., Horton, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+2.">Ch. 2.</a> Transport Phenomena in Biological Systems. , (2009).</li><li>Allen, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+nitrite+response+and+arterial+reactivity+differentiate+vascular+health+and+performance.">Plasma nitrite response and arterial reactivity differentiate vascular health and performance.</a> Nitric Oxide. 20, 231-237 (2009).</li><li>Xiao, Y., Truskey, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+receptor-ligand+affinity+on+the+strength+of+endothelial+cell+adhesion.">Effect of receptor-ligand affinity on the strength of endothelial cell adhesion.</a> Biophys. J. 71, 2869-2884 (1996).</li><li>Conant, C. G., Schwartz, M. A., Nevill, T., Ionescu-Zanetti, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet+Adhesion+and+Aggregation+Under+Flow+using+Microfluidic+Flow+Cells.">Platelet Adhesion and Aggregation Under Flow using Microfluidic Flow Cells.</a> J. Vis. Exp. (32), e1644-e1644 (2009).</li><li>Conant, C. G., Schwartz, M. A., Ionescu-Zanetti, C. W. e. l. l. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=plate-coupled+microfluidic+devices+designed+for+facile+image-based+cell+adhesion+and+transmigration+assays.">plate-coupled microfluidic devices designed for facile image-based cell adhesion and transmigration assays.</a> J. Biomol. Screen. 15, 102-106 (2010).</li><li>Conant, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+well-plate+microfluidic+devices+to+conduct+shear-based+thrombosis+assays.">Using well-plate microfluidic devices to conduct shear-based thrombosis assays.</a> J. Lab. Autom. 16, 148-152 (2011).</li><li>Metaxa, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide-dependent+stimulation+of+endothelial+cell+proliferation+by+sustained+high+flow.">Nitric oxide-dependent stimulation of endothelial cell proliferation by sustained high flow.</a> Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 295, H736-H742 (2008).</li><li>Radel, C., Carlile-Klusacek, M., Rizzo, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Participation+of+caveolae+in+beta1+integrin-mediated+mechanotransduction.">Participation of caveolae in beta1 integrin-mediated mechanotransduction.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 358, 626-631 (2007).</li><li>Wang, X. L., Fu, A., Spiro, C., Lee, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+Analysis+of+Vascular+Endothelial+Cells-Effects+of+Laminar+Shear+Stress+and+High+Glucose.">Proteomic Analysis of Vascular Endothelial Cells-Effects of Laminar Shear Stress and High Glucose.</a> J. Proteomics. Bioinform. 2, 445-445 (2009).</li><li>Elfervig, M. K., Minchew, J. T., Francke, E., Tsuzaki, M., Banes, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-1beta+sensitizes+intervertebral+disc+annulus+cells+to+fluid-induced+shear+stress.">IL-1beta sensitizes intervertebral disc annulus cells to fluid-induced shear stress.</a> J. Cell. Biochem. 82, 290-298 (2001).</li><li>Archambault, J. M., Elfervig-Wall, M. K., Tsuzaki, M., Herzog, W., Banes, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabbit+tendon+cells+produce+MMP-3+in+response+to+fluid+flow+without+significant+calcium+transients.">Rabbit tendon cells produce MMP-3 in response to fluid flow without significant calcium transients.</a> J. Biomech. 35, 303-309 (2002).</li><li>Patton, J. T., Menter, D. G., Benson, D. M., Nicolson, G. L., McIntire, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computerized+analysis+of+tumor+cells+flowing+in+a+parallel+plate+chamber+to+determine+their+adhesion+stabilization+lag+time.">Computerized analysis of tumor cells flowing in a parallel plate chamber to determine their adhesion stabilization lag time.</a> Cell. Motil. Cytoskeleton. 26, 88-98 (1993).</li><li>Wiese, G., Barthel, S. R., Dimitroff, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+Physiologic+E-Selectin-Mediated+Leukocyte+Rolling+on+Microvascular+Endothelium.">Analysis of Physiologic E-Selectin-Mediated Leukocyte Rolling on Microvascular Endothelium.</a> J. Vis. Exp. (24), e1009-e1009 (2009).</li><li>Kaper, H. J., Busscher, H. J., Norde, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+poly(ethylene+oxide)+brushes+on+glass+surfaces+and+adhesion+of+Staphylococcus+epidermidis.">Characterization of poly(ethylene oxide) brushes on glass surfaces and adhesion of Staphylococcus epidermidis.</a> J. Biomater. Sci. Polym. Ed. 14, 313-324 (2003).</li><li>Bakker, D. P., Plaats, A. v. a. n. d. e. r., Verkerke, G. J., Busscher, H. J., van der Mei, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+velocity+profiles+for+different+flow+chamber+designs+used+in+studies+of+microbial+adhesion+to+surfaces.">Comparison of velocity profiles for different flow chamber designs used in studies of microbial adhesion to surfaces.</a> Appl. Environ. Microbiol. 69, 6280-6287 (2003).</li><li>Angelos, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+adhesion+of+umbilical+cord+blood+endothelial+progenitor+cells+under+laminar+shear+stress.">Dynamic adhesion of umbilical cord blood endothelial progenitor cells under laminar shear stress.</a> Biophys. J. 99, 3545-3554 (2010).</li><li>Baker, G. R., Sullam, P. M., Levin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple,+fluorescent+method+to+internally+label+platelets+suitable+for+physiological+measurements.">A simple, fluorescent method to internally label platelets suitable for physiological measurements.</a> Am. J. Hematol. 56, 17-25 (1997).</li></ol>

Üretim ve bu video makale Ücretsiz Erişim Cole-Parmer Instrument Co tarafından desteklenen

Akım devresi ve akış odası tanımlanan sıvı kayma gerilmeleri yapışık hücreleri, örneğin EPC, bize konu ile izin verir. Odanın alt ve üst şeffaf, hücre yapışması ve morfolojisi, odanın kendisi aracılığıyla ya da gerçek zamanlı olarak değerlendirilir ya da demontaj akış odasının bir akış deney ve sonra olabilir. Bu noktada, hücreler steril koşullar altında hasat edilebilir ve yeniden kaplama ya, ya da daha fazla analiz için DNA veya RNA, vb. Toplamak için kullanılıyor. Laminar akım elde etmek için, odasının tasarımı, çeşitli koşulların yerine getirildiğinden emin olmalıdır. İlk olarak, akış, laminer, atalet kuvvetlerini viskoz kuvvetlere oranı Reynolds sayısı (Re), hesaplanmak suretiyle kontrol edilebilir olmalıdır. (Viskoz kuvvetler baskın olursa, Yeniden küçük ve akış laminer ya da &#39;tam gelişmiş&#39; - genellikle Re &lt;2300 için.Biz, atalet kuvvetlerini egemen çalkantılı kadar, akış daha fazla rastgele olur, Re&gt; 4000 için geçerlidir.) Denklemi 3 8 göre Ynt hesaplamak <img alt="Denklem 3" src="/files/ftp_upload/3349/3349eq3.jpg" /> Ρ akışkan yoğunluğu, Q debisi, μ viskozite, w ve h sırasıyla odanın genişliği ve yüksekliği, ve D h denklemi 4 8 göre tanımlanan hidrolik çapı <img alt="Denklem 4" src="/files/ftp_upload/3349/3349eq4.jpg" /> Reynolds sayısı 166 arasında değişen yükseklikleri ile üç akış odaları, - 267 mm aralığı 13,9 - 34,6 c akış hızlarında15 dynes / cm 2 kayma gerilmesi elde etmek alculated. 234 - 100 dynes / cm 2 bir kayma gerilmesi için hesaplanan akış hızlarında, odaları Reynolds sayısı 90.4 arasında değişmektedir. Bütün bu Reynolds sayıları 2300 den çok daha düşük olduğu ve laminer akış için kriterleri karşılamadığı. İkincisi, hız alanı ve kayma gerilmesi için, (yani tam gelişmiş), akış kanalı girişinde uzunluğu, L e daha uzun olmalıdır slayt akışkan giriş uzaklık boyunca mesafe bağımsız olması . Bu denklem 5 9 göre, girişinde uzunluğu hesaplanırken memnun olabilirler. <img alt="Denklem 5" src="/files/ftp_upload/3349/3349eq5.jpg" /> Yukarıda sıralanan değerleri için, giriş uzunluğu 0.01 &#39;den 0.25 cm arasında değişmektedir. Üçüncü olarak, lateral yönde hız ve kayma gerilmesi farklılık olmadığını sağlamak amacıylatek boyutlu kanal akışı için önemli değeri (Δ Ph / 2L), h / w oranı 1 den daha az olmalıdır. H / w, tek boyutlu akış altında duvar kayma gerilmesi% 95 için iki boyutlu akış koşulları altında ortalama duvar kayma gerilmesi için, 0,10 eşit olması gerekir, ve iki boyutlu akış koşulları altında duvar kayma gerilmesi için % 97,5 &#39;tek boyutlu akış altında duvar kayma gerilmesi, h / w 0.05 eşit olması gerekir. Tasarlanmış akış haznesi 1,7 cm genişliğinde ve 166 boyutları ile yüksekliği 267 mm, bu kriterleri yerine. Girişinde herhangi bir yanal basınç farkları varsa, basınç, akış yönü değişecektir. Bu akış yolu boyalar veya parçacıklar kullanılarak değerlendirilebilir. Ayrıca, sürekli akış deneyleri için, bir darbe dampener akım devresi eklenir. Darbe dampener darbe alıratility devrede roller pompa ile neden ve bize sürekli akış yaklaşık varsayımı sağlar. Notu, etkin roller pompa belirli frekanslar için çıkış akım titreşimlerle ortadan kaldırmak, böylece kullanılan darbe tav devresinde kullanılan pompa ve boru ile uyumlu olmalıdır. I / P 26 tüp herhangi bir Masterflex L / S serisi pompası (600 RPM&#39;ler 0) ile deşarj hattı üzerinde kullanılan gösteriye Masterflex L / S darbe dampener laminar akım elde. Pulsatil akış için, programlanabilir bir pompa çeşitli dalga şekilleri oluşturmak için kullanılabilir. Pulsatil akış için, programlanabilir bir pompa çeşitli dalga şekilleri oluşturmak için kullanılabilir. Ayrıca, devre perfüzat gibi bu örnekleri tasarlanmıştır kolayca hücreleri veya akış ortamı bulaşma riski olmadan farklı zaman noktalarında toplanabilir. Bizim örneğimizde, NO 2 konsantrasyonu ile chemiluminescence ile ölçüldüiyonlar / Sievers Nitrik Oksit Analyzer (NOA 280, Sievers Aletleri, Boulder, CO), daha önce açıklanan 10. Nitrit analizi için kullanılan indirgeyici NO nitrit dönüştürmek için azaltma potansiyeline sahiptir, ancak herhangi bir yüksek nitrat gibi azot oksitler azaltmak için yeterli asetik asit (14.5 M asetik asit ve 0.05 M KI) potasyum iyodür ve böylece nispeten nitrit için özel. Örnekleri 6 alırken kayıp hacmi için düzeltme sırasında üretilen toplam miktarın nitrit konsantrasyon ve devrenin toplam hacmi üretilen ürün olarak hesaplandı. Aşağıdaki adımları akış deneylerin başarılı bir şekilde yürütülmesi için kritik öneme sahiptir: <ol class="lroman"><li> Kabarcıkları, yüzey hücreleri yırtma potansiyele sahip çünkü akış set-up sırasında kabarcık oluşumunu önlemek için arzu edilen bir durumdur. Bu akış odasının üst kısmında en iyi alt kısmı, üstüne yerleştirirken dikkatli alarak önlenebilirher ikisi de birbirine paralel tutulması ve yeniden düzenlemeler olmadan bir hareket üzerine en alt düşürücü tarafından gerçekleştirilir. Bunu yaparken, akış kanalı mevcut ve / veya kayan küçük hava kabarcıkları, alüminyum gövdesi iki ucundaki balonu tuzaklar içine yönlendirilir olacak. </li><li> Rezervuar rezervuar alt çıkış hortumu aşağı ulaştığı sağlamak için önemlidir. Aksi takdirde, hava perfüzat seviyesi hortumun ucuna hafifçe altına düşerse rezervuar odasına açar tüp içine çekilir. </li><li> Araştırmacı, yanlışlıkla devre ve odasına emilir hava akış başlaması, pompa üzerine ters yönde çalışmaz böylece pompa akış yönü ile bilgi sahibi olması gerekir. </li><li> (Denatüre serum içerdiği proteinler nedeniyle) köpük oluşumunu önlemek için, biz perfusa üzerinde yaklaşık bir inç odasından rezervuar yol açan boru düşürücü tavsiye ederizrezervuar içinde te seviyesi. Ancak, akış orta seviyesinin üzerinde tutarak deney sırasında rezervuar içine akışını kontrol etmek için izin verir. </li><li> Odası parçaları bir araya vidalama, elektrikli tornavida çalışırken diğer elinizle sıkıca bir yandan konut kavramak önemlidir. Hareket elektrikli tornavida, vida sıkılır sonra &#39;etrafında odasına fırlatmak&#39; potansiyeline sahiptir tork çevrilen unutmayın. </li><li> Devre şekillendirme ve kendi yüzeyinden hücrelerin kaldırma herhangi bir basınç dalgaları önlemek için, tüm stopcocks akışı başlamadan önce açık olduğundan emin olun. </li><li> Özellikle, uzun vadeli akış çalışmalar için (&gt; 48 saat) hortumun kırılmasını önlemek için pompa kafası eklenecek daha sert ve daha esnek bir boru kullanmanızı öneririz. </li><li> Tüp kötü ayarlanmış pompa kafası dişleri nedeniyle pompa kafası içinde &#39;göç&#39; mümkündür. Bu nedenle, nasıl küvet yakından ilgilenerek öneririzing pompa kafası güvenli ve boru, boru &#39;çekti&#39; veya deney sırasında yerinden ise kolayca fark edebilirsiniz böyle bir işaretleme kalemi ile her iki ucunda işaretleme. </li><li> Hatalı bir bağlantı nedeniyle bir deney sırasında perfüzat kaçağı önlemek için her zaman dikkatli bir şekilde perfüzyon başlamadan önce, devre ve odasının her tek bağlayıcı kontrol edin. Bu darbe dampeners giriş ve çıkış konnektörleri için özellikle önemlidir! </li><li> Floresan etiketleri kullanmayın ışık maruz kalma sınırı unutmayın. </li></ol> Akış odasının olası bir sınırlama alüminyum içine işlenmiş kanal yükseklik yükseklik sabit olmasıdır. Ancak, bu her bir deney için önce kanal yüksekliği doğrulamak ve ayarlamak için bir avantaja sahiptir ve bu nedenle pompa akış istenen değere ayarlayarak sadece kayma gerilmesi hesaplamaları kolaylaştırır. Araştırma hedeflerine bağlı olarak istenebilirartan pompa hızını olmadan kayma gerilmesi artar. Bu durumda biz perfüzat viskozite arttırıcı öneririz, örneğin orta 11 dekstran ekleyerek. Akım devresi, çok küçük konsantrasyonlarda hücre metabolitleri ölçmek için çalışırken sorunlu olabilir kullanılan orta büyük hacimli, olası bir sınırlama. Burada gösterilen olmasa da, büyük ölçüde, küçük bir rezervuar ve nabız tav kullanarak devre hacmi azaltmak ve boru uzunluğu ve çapı azaltmak mümkündür. Ayrıca, kültür hücrelere sıvı kayma gerilmesi uygulamak için kullanılabilecek birkaç piyasada mevcut diğer sistemler vardır. Mikroakışkan tabanlı sistemler, hücre eş zamanlı analizler 12,13,14 bu kanallar için giriş ve çıkış rezervuarlar gibi davranan iyi tabak içine çözüm yüklü farklı mikroakışkan akış kanalları etkinleştirmek Fluxion BioFlux sistemi örneğin. Bununla birlikte, bu ve diğer mikroakışkan sistemlerinin standart mikroskop lamı ile uyumlu değildir ve RT-PCR ve Western Blot gibi başka deneyler, hücrelerin yeterli sayıda kurtarma için izin vermez. Ayrıca, daha az kullanıcı dostu 40.000 $ minimum maliyet ve aksesuar ekipmanları bağlı olarak, toplam 100.000 $ &#39;dan fazla ulaşabilirsiniz. Tıkla FlexCell International Corporation, Tıkla FlexCell Çıtası ve FlexFlow sistemleri İki macrofluidic sistemleri, başarıyla, endotel hücreleri 15,16,17, sıvı akışını koşullar altında insan annulus hücreleri 18 ve fibroblastlarının 19 çalışma kullanılmaktadır . GlycoTech yoluyla üçüncü bir sistem, tümör hücre adezyon 20 ve endotel mono tabakaları lökosit adezyonu 21 çalışma kullanılmıştır. Çıtası sistemi birkaç slayt tek seferde aynı kayma stres koşulları altında çalışmasına olanak sağlar, fakat bizim farklı bir görüntüleme penceresi ve yoksuntasarım - akış altında hücrelerin gerçek zamanlı görselleştirme için izin vermiyor. FlexFlow sistem bir görüntüleme penceresi var, ama dik bir mikroskop, çoğu laboratuvarlarda kullanılan standart bir mikroskop olmayabilir gerektirir. Ayrıca, FlexFlow sistemi akış odasına yerleştirildiği zaman ters bir hücre kaplı bir kapak kayma gerektirir. Bu bizim çalışma göstermektedir titanyum kaplı cam gibi, donuk bir yüzey üzerinde floresan hücreleri, görselleştirme engellemektedir. Son olarak, özel kapak fişleri Tıkla FlexCell Çıtası sistemine benzer çok bin dolar fiyat aralığında FlexFlow sistemi, özellikle satın alınması gerekir. GlycoTech önemli ölçüde daha az pahalı, ama rahatlıkla Odamızın gibi otoklava kök olamaz akrilik döküm imal dairesel ve dikdörtgen plaka paralel akış odaları sunmaktadır. Not tarif edilmiştir diğer akış odaları otoklav içinmikroskobik özel lensler 22,23 gerektirdiğinden pratik görünür. GlycoTech sistemi tekrar kullanımı ile kalınlık değiştirmek ve bu nedenle zaman (üretici her on kullanımdan sonra yenilerini satın önerir) üzerinde oda yüksekliğini değiştirmek alt ve üst plakalar arasında yer silikon kauçuk contalar, kullanır. Dahili O-ring ile alüminyum odası, alt ve üst plakalar tam muhalefet sağlar ve deneyler arasında sürekli odası yüksekliği sağlar. Son olarak, vakum pompaları, tasarım gerekli değildir GlycoTech odaları da dahil olmak üzere birçok akış oda tasarımları sızdırmaz mühür, başarmak için gerekli. Oysa burada gösterilmemiştir, akış odası, hücre yapışması ve / veya davranış gerçek zamanlı görüntüleme için tüm akış deney sırasında mikroskop altında tutulmalıdır. Bu istenirse, biz 37 perfüzat ısısını korumak için odanın altında ısı lambaları veya ısıtılmış bir yastık kullanmanızı öneririz ° C Kürkhücreleri veya metabolitleri veya araştırılan ilaçlar veya ajanlar, ya hiç &#39;devridaim&#39; 24 isteniyorsa, orada roller pompa, bir şırınga pompası ile değiştirilir olabilir. Konfluent EPC bir katman üzerinde yapışık hücreler, örneğin flüoresan trombositler (trombosit tahlil kullanarak Achneck ve arkadaşları tarafından açıklanan 6,25) üzerinde sıvı kayma stres altında hücre-hücre etkileşimi değerlendirmek için farklı etiketli hücreleri akışı da mümkündür. Bizim akış odası gibi, bir perfüzat örnekleme liman ve bir görüntüleme penceresi gibi diğer akış odaları, değerli özelliklerini birleştiriyor ve ya ters ya da dik bir mikroskop ile uyumluluk önemli bir avantaja sahiptir. Otoklavlanabilir ve sızdırmaz bir sızdırmazlık elde etmek için sabit odası yüksekliği ve vakum pompaları gerek kalmadan tekrarlanan deneyler için izin verir.

<table border="1"><tbody><tr><td> Ürünler / Reaktifler </td><td> Şirket </td><td> Ürün # </td></tr><tr><td> 10 ml Şırınga </td><td> Cole Parmer Instrument Co. </td><td> 07940-12 </td></tr><tr><td> 1-Way Stopcoks </td><td> Cole Parmer Instrument Co. </td><td> 30600-00 </td></tr><tr><td> 30 ml Şırınga </td><td> BD Tıp </td><td> 309650 </td></tr><tr><td> 4-Way Stopcocks </td><td> Cole Parmer Instrument Co. </td><td> 30600-04 </td></tr><tr><td> Alüminyum Alaşımlı </td><td> N / A </td><td> 6061 </td></tr><tr><td> Hücre Kültür Yemekleri (4-iyi, dikdörtgen) </td><td> Thermo Scientific; Nunc </td><td> 267061 </td></tr><tr><td> Hücre Tracker Orange </td><td> Invitrogen </td><td> C34551 </td></tr><tr><td> DMSO </td><td> Araştırma Organics </td><td> 2162D </td></tr><tr><td> DPBS (-/-)</td><td> Invitrogen </td><td> 14190-144 </td></tr><tr><td> EGM-2 Singlequots </td><td> Lonza </td><td> CC-4176 </td></tr><tr><td> Kadın Luer Adaptör </td><td> Cole Parmer Instrument Co. </td><td> SI-45500-04 </td></tr><tr><td> Fibronektin </td><td> Sigma </td><td> F0895-2MG </td></tr><tr><td> Kapaklı Cam Şişe (250ml) </td><td> Cole Parmer Instrument Co. </td><td> 34594-24 </td></tr><tr><td> Sabit Boru </td><td> Cole Parmer Instrument Co. </td><td> 06508-16 </td></tr><tr><td> HBSS </td><td> Sigma </td><td> H8264-500ML </td></tr><tr><td> Histopaque </td><td> Sigma </td><td> H8889-500ML </td></tr><tr><td> Hoechst Leke solüsyonu </td><td> Sigma </td><td> H6024 </td></tr><tr><td> Hyclone FBS </td><td> Thermo Scientific </td><td> SH30071.01 </td></tr><tr><td> L-glutamin </td><td> Lonza </td><td> 17-605E </td></tr><tr><td> Erkek Luer Adaptör </td><td> Cole Parmer Instrument Co. </td><td> EW-45.505-04 </td></tr><tr><td> MCDB-131, 1X Orta </td><td> Cellgro </td><td> 15-100-CV </td></tr><tr><td> Dikenli Polipropilen Rekorları </td><td> Cole Parmer Instrument Co. </td><td> 06365-90 </td></tr><tr><td> O-Ringler </td><td> N / A </td><td> AS568A </td></tr><tr><td> Darbe-Tav </td><td> Cole Parmer Instrument Co. </td><td> 07596-20 </td></tr><tr><td> Pompa-Drive (Masterflex L / S değişken hızlı ekonomisi sürücü) </td><td> Cole Parmer Instrument Co. </td><td> 7524-40 </td></tr><tr><td> Pompa-Head (Masterflex Kolay Yükleme Pompa Kafası) </td><td> Cole Parmer Instrument Co. </td><td> 07518-60 </td></tr><tr><td> Slayt </td><td> Cole Parmer Instrument Co. </td><td> 48500-00 </td></tr><tr><td> Yumuşak Boru </td><td> Cole Parmer Instrument Co. </td><td> 96400-16 </td> &lt;/ Tr&gt; <tr><td> Şırınga filtre </td><td> Cole Parmer Instrument Co. </td><td> 02915-12 </td></tr><tr><td> Sytox Turuncu Nükleik Acid Stain </td><td> Invitrogen </td><td> S-11.368 </td></tr><tr><td> Tripsin EDTA </td><td> Lonza </td><td> CC-5012 </td></tr><tr><td> Tripsin Nötralleştirme solüsyonu </td><td> Lonza </td><td> CC-5002 </td></tr></tbody></table>

parallel-plate flow chamber and continuous flow circuit to evaluate endothelial progenitor cells under laminar flow shear stress

Bu yöntemin genel amacı, yapışık hücrelere laminer akış koşullarına tabi ve iyi ölçülebilir sıvı kesme 1 vurguluyor tepki değerlendirmek için bir tekniği tanımlamaktır . Bizim akış odası tasarımı ve akış devresi (Şekil 1) (Şekil 11C) akış sırasında çeşitli zaman noktalarında (Şekil 11A, B) akış önce hemen hücre morfolojisi hücre yapışması ve görüntüleme testleri sağlayan şeffaf bir görüş bölgeyi içeren ve sonra akışı (Şekil 11D). Bu deneyler, insan göbek kordonu ile gösterilmiştir kan elde edilen endotelyal progenitör hücreleri (EPC) ve domuz EPC 2,3. Bu yöntem aynı zamanda diğer yapışık hücre tipleri, örneğin düz kas hücreleri (SMC&#39;lere) veya fibroblastlar için geçerli. Odası ve devrenin tüm parçaları kolayca buhar otoklav ile sterilize edilir. Buna karşılık diğerodaları, örneğin mikroakışkan odaları, hücreleri (hücre büyüklüğüne göre 1 milyon), çok sayıda, hücre kültürü veya diğer deneyler, örneğin, DNA veya RNA ekstraksiyonu, ya da immünhistokimya (Şekil 11E) steril koşullar altında akış deney sonucunda kurtarıldı. ya da tarama elektron mikroskobu 5 . Kayma gerilmesi perfüzat, akışkanın viskozite, veya kanal yükseklik ve genişlik debisi değişen ayarlanabilir. Tek boyutlu akış muhafaza edilmesini sağlarken ikincisi sıvı hacmi ya da hücrenin ihtiyacı azaltabilir. Odanın yüksekliği büyük ölçüde birden fazla deneyler kolaylığını artırır conta kullanımı, bağlı değildir, çünkü deneyler arasındaki oda yüksekliğini ölçmek için gerekli değildir. Ayrıca, devre tasarımı, kolayca analiz ve / veya sıvı kayma gerilmesi pozlama altında hücreleri tarafından salgılanan metabolitlerin ölçümü, örneğin nitrik oksit (Şekil 12) 6 perfüzat örneklerin toplanmasını sağlar </sup&gt;

Watch this Scientific Journal Video about Parallel-plate Flow Chamber and Continuous Flow Circuit to Evaluate Endothelial Progenitor Cells under Laminar Flow Shear Stress at JoVE.com

Parallel-plate Flow Chamber and Continuous Flow Circuit to Evaluate Endothelial Progenitor Cells under Laminar Flow Shear Stress

Steril bir sürekli akış devresi, laminer akış kayma gerilmesi tabi yapışık hücrelere için bir yöntem tarif. Hücrelerin yapışma, morfoloji, şeffaf oda ile devre metaboliti analizi ve gelecek deneyler ya da kültür için kayma maruz kaldıktan sonra hasat hücreleri için alınan numuneler incelenmiştir olabilir.

Laminer Akış Kesme Stres altında endotel progenitör hücrelerin değerlendirin Paralel plakalı Akış Odası ve Sürekli Akış Devre

The overall goal of this method is to describe a technique to subject adherent cells to laminar flow conditions and evaluate their response to well ...

parallel-plate-flow-chamber-continuous-flow-circuit-to-evaluate

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Civil Engineering

Bioengineering

Unit 1

Differential Analysis of Fluid Flow

SCIENTISTS IN ACTION

43.2K Görüntüleme.  Duke University Medical Center. Steril bir sürekli akış devresi, laminer akış kayma gerilmesi tabi yapışık hücrelere için bir yöntem tarif. Hücrelerin yapışma, morfoloji, şeffaf oda ile devre metaboliti analizi ve gelecek deneyler ya da kültür için kayma maruz kaldıktan sonra hasat hücreleri için alınan numuneler incelenmiştir olabilir.