Yazarlar, bu tekniklerin geliştirilmesi sırasında paha biçilmez tartışmalar için planarian nakli hakkında faydalı öneriler yanı sıra Sánchez laboratuarının eski ve yeni üyeleri için Chiyoko Kobayashi ve Kiyokazu Agata teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma OCG ve ASA NIH R37GM057260 NIH Eğitim Grant (5T32 HD0791) tarafından desteklenmiştir. ASA, bir Howard Hughes Tıp Enstitüsü Araştırmacısı olduğunu.

Not: Bu protokol potansiyel olarak tehlikeli maddelerin kullanımı (kurşun ve chloretone) öneriyor. Acquire, okumak ve tüm potansiyel olarak tehlikeli maddeler için MSDS izleyin. 1. Hayvan Kültür, Seçimi ve Hazırlama <ol><li> Hayvan yetiştiriciliği ve işleme kullanımı planarian su (1X Montjuïc tuzları 9) ve plastik transferi pipetler için. </li><li> Normal kültürü koşulları altında 10 laboratuarda yükseltilmiş olduğunda cinsel biyotip Schmidtea mediterranea kullanılabilir. Gerekli boyutta aseksüel örnekleri üretmek için, S. mediterranea 9 kullanımdan önce 1-2 ay süreyle üçlü normal bir frekansta (2-3 haftada) için çift de beslenen edilmelidir normal koşullar altında, oda sıcaklığında, yükseltilmiş. Alternatif olarak, normal frekans üzerinden beslenen aseksüel hayvanların ortalama büyüklüğü artırmak için süresiz olarak 10 santigrat derecede muhafaza edilebilir. </li><li> 1 ila 2 cm arasında olan hayvanları seçinuzunluk ve 2 mm &#39;den daha geniş sonra hayvanlar kullanılmadan önce, 3-7 gün açlık. </li><li> Tasarlanan konaklar, donörler, kısmen veya ışınlanmış hayvanlar üzerinde herhangi bir farmakolojik veya radyolojik tedavi yapılması halinde, bu noktada tedavi (ler) gerçekleştirmek. </li><li> Farmakolojik tedavilerin hayvan besleme gerekli olduğu takdirde yapıldı, hayvanlar kullanımdan önce ilave bir 3-7 gün açlık. </li></ol> 2. Çözümler ve Malzeme Hazırlanması <ol><li> Planarian su içinde% 0.1-0.2 w / v chloretone eriterek ve buz üzerinde bir çözüm soğutma ile chloretone çözeltisi, hafif bir lokal anestezik, hazırlayın. </li><li> Kısmi ışınlama yapıldığı takdirde sadece 2.7 adıma geçin. Doku nakli için 2.3 adıma geçin. </li><li> Bir Bunsen beki kullanarak, 1-2 cm greft, 90 kapiler tüpler ° açı alacaksınız konak bir delik oluşturmak için kullanılan greft doku kesmek için kullanılan 0.75 mm iç çap, ve 0.7 mm dış çapı, viraj adet bitiminden itibarench tüp. Malzeme tasarrufu için, her kılcal tüpün her iki ucu bükülür ve iki araç üretmek için yarım onları kırmak. Alev tüplerin uçları çok dikkat edin. </li><li> Belirtilen boyutları için aşağıdaki belgeleri Cut: <ul><li> Siyah filtre kağıdı (. 2.5 cm x 1.5 cm dikdörtgenler yaklaşık şeklinde kesilmiş) </li><li> Whatman # 3 filtre kağıdı (. 2 cm x 0.5 cm dikdörtgenler yaklaşık şeklinde kesilmiş) </li><li> Kimwipe (katlanıp wads yaklaşık oyulmuş. 3 cm x 0.5 cm x 4 kat) </li><li> Sigara haddeleme kağıt (sakız bandını çıkarın ve dikdörtgenler yaklaşık oyulmuş. 3 cm x 2 cm) </li></ul></li><li> Modifiye Holtfreter en çözeltisi (3.5 g / L NaCl, 0.2 g / L NaHCO 3, 0.05 g / L KCI, 0.2 g / L MgSO 4, 0.1 g / L CaCl2, pH 7.0-7.5) hazırlanması ve en kazein Holtfreter çözeltisi ve soğuk doymuş Her iki ila 4 ° C. </li><li> Peltier soğutucusu plakası veya bir mikroskop altında bulunan diğer soğutma cihazı bir parafilm kare ile yere katlanmış bir Kimwipe takın. Soğutulmuş Holtf ile Kimwipe Doymuşreter çözümü ve yer Kimwipe iki siyah filtre kağıdı dikdörtgenler. </li><li> Whatman # 2 filtre kağıdı ile hat Petri. Holtfreter çözümü ile filtre kağıdı ıslatın ve buz üzerinde yemekleri soğutun. Kısmi ışınlanması için daha büyük bir çanak ve filtre kağıdı astar kullanılabilir. </li></ol> 3. Anesthetization ve immobilizasyon <ol><li> Çanak içine soğutulmuş chloretone çözüm ve pipetle solucanlar ile Petri doldurun. Nakli için sadece bir bilgisayar ve bir seferde bir donör uyutmak. Kısmi ışınlanması için çoğu (n&gt; 10) hayvanlar anda anestezi olabilir. </li><li> Onlar hareketsiz hale kadar solucanlar chloretone solüsyonda bekletilebilir izin ver (5-10 dk). </li><li> Soğutulmuş Holtfreter çözümü ile dolu bir çanak içine pipetleme tarafından solucanlar durulayın. </li><li> Soğutulmuş Holtfreter çözümü ve forseps ile yönlendirmek onları ventral yüzü aşağı doymuş siyah filtre kağıdı üzerine onları pipetleme hayvanların hareketsiz. Hayvanlar loc atabiliyorsanızOmote, aşırı Holtfreter çözümü kadar emmek, hafifçe Peltier veya soğuk plaka sıcaklığı azaltmak veya chloretone tedavi uzunluğunu artırmak. </li></ol> 4. Kısmi Işınlama Not: kısmi ışınlanması için hayvanları hazırlamak için aşağıdaki adımları izleyin. Yerine nakli yapılması durumunda, bölüm 5 geçin. <ol><li> X-ray irradiator bir üst kaynak, içine yerleştirilen bir buz kovasının içinde buz üzerinde adım 2.7 bir soğutulmuş Petri yerleştirin. </li><li> Onlar immobilize edildiği siyah filtre kağıdı hareket ettirerek bir Petri kabındaki vanlarda düzenleyin. Doğrudan anestezi solucanlar taşımak için forseps kullanarak onları yaralayabilir. </li><li> Nakliye X-ışını irradiator bir üst kaynak hayvanlar düzenlenir ve hayvanlar için katod tüpten mesafenin en aza olduğu gibi buz kovası yerleştirmek, ve böylece etkili doz oranı maksimize edilmesidir. </li><li> Hayvanlar ve katot t arasında pozisyon kurşun kalkanı (ler) (Şekil 1)Ube istediğiniz gibi. Shields bir 325kV X-ışını 11 97% 99 zayıflama sağlamak için kalın 4.5 ila 6 mm olmalıdır. </li><li> X-ışını doz sunun. Olmayan korumalı bölgelerden tam kök hücre ablasyon isteniyorsa, bir X-ışını irradiator kullanılarak 30 Gy veya daha sunuyor. Başvuru için, 30 Gy 320 kilovolt az 3.6 dakika ve 30 santimetrelik bir alan için kaynak mesafe ile Hassas Röntgen A.Ş. XRAD320 10 miliamper eşdeğerdir. </li><li> Hemen uygulamadan sonra soğutulmuş planarian suya siyah filtre kağıdı, transfer hayvanlar tarafından solucan işleme, tamamlandı. Planarian su siyah filtre kağıdı kendilerini çıkarmak için oda sıcaklığı ve hayvanlara ısınmasını bekleyin. Kısmi ışınlama işlemi tamamlandı. </li></ol> 5.. Doku Nakli <ol><li> Bir transfer pipet ve forseps kullanarak Pelti üzerine soğutulmuş Kimwipe siyah filtre kağıdı ayrı diktörtgenlere anestezi host ve donör solucanlar düzenlemekdiseksiyon mikroskobu altında er veya soğutucu plaka. </li><li> 0,75 mm iç çapı kılcal tüp kullanarak donörden greft fiş kesip, forseps kullanarak, ana yol bölümünün dışında bir üzerine yerleştirin. Greft materyali kılcal tüp içinde sıkışırsa, forseps ile çıkarmak. </li><li> Bir 0.7 mm dış çaplı kılcal tüp ana bir fişi kullanımı ve geride deliğe forseps pozisyonu greft kullanarak. </li><li> Adım 2.7 hazırlanmış petri içine onun siyah filtre kağıdı dikdörtgen nakledilen ana aktarın. </li><li> Kazein doymuş Holtfreter çözümü ile inişli çıkışlı bir kağıt parçası ıslatın ve Şekil 2A diagramed olarak nakledilen ana üstüne yerleştirin. </li><li> Kazein doymuş Holtfreter çözümü ve Şekil 2B diagramed olarak nakledilen ana örten filtre kağıdı dört adet bekletin. </li><li> Kazein doymuş Holtfreter çözümü içinde kesme Kimwipe dört wads daldırın ve onlar üzerinde yatıyorduAdım 5.6 den filtre kağıdı (Şekil 2B). Kapağı değiştirin ve buz üzerinde Petri koydu. </li><li> Planarian su, kurtarmak, iyileşmek ve yenilenmesine halinde bağış solucan aktarın. </li><li> Tüm nakli tamamlandığında, bir gecede 10 ° C inkübatör içine nakledilen solucanlar yerleştirin. </li><li> Ertesi sabah, bakımı, greft rahatsız solucan ortaya çıkarmak ve planaria su dolu bir petri için (onun siyah filtre kağıdı üzerinde) aktarmak değil. </li><li> Ya solucan filtre kağıdı kendisini çıkarmak veya hafifçe forseps ile temizlemesine izin verin. </li><li> 2-3 günde bir kez planarian su değiştirin. </li></ol> 6. Temsilcisi Sonuçlar Hemen kısmi ışınlama planaria sonrasında normal ve etkilenmemiş görünecektir. Teslim dozu ve kullanılan kalkan geometri bağlı olarak, ışınlanmış doku geriler ve hatta 7 parçalanır olabilir. Korumalı dokusu bozulmadan kalmalıdır. Follnedeniyle doku regresyon ve doku bütünlüğünün kaybı, bir blastem oluşturacak ve eksik yapılar (Şekil 3A) yeniden oluşturulur. Amputasyon kısmen ışınlanan bölgede yapılıyorsa, ışınlanmış doku (Şekil 3B) (yani gerileme veya dağılmakta engellenebilir) kurtarılmış olacaktır. Yaralanmamış ve ampute olmayan ışınlanmış planaria (Şekil 3C) göre kesilmiş durumda rejenerasyon gecikecektir. Hem de 30 Gy bir X-ışını doz teslim ve kısmen ışınlanmış hayvan kullanılan kurşun kalkan ile ilgili kök hücre için in situ hibridizasyon tarafından kısmi irradyasyonu takiben 2 ila 3 gün teyit edilebilir bir desen yaralanmamış, başarılı kök hücre ablasyon oldu ise belirteç SMED-Piwi-1 12 (aka smedwi-1) (Şekil 4). Nakli, nakledilen doku başarılı bir aşılama sonrası sabah bariz w olmalıev sahibi (Şekil 5A) dorsal ve ventral yüzeyleri hem uyulması olan, konak doku ithin. Bazen greft sadece ventral veya dorsal yüzeyine yapışır. Nakli tamamen başarısız olduysa, greft hiçbir işaret konak (Şekil 5B) birini dorsal veya ventral yüzeyleri görünür olacaktır. Kısa bir süre SMED-Piwi-1 (Şekil 5C öncelikle greft içinde kök hücreler var olduğunu ortaya koyacaktır için in situ hibridizasyon ölümcül radyasyon 13,14, kök hücrelerin ablazeydi olan bir konak haline ışınlanmamış dokusu başarılı bir greft takip ). Ayrıca, ölümcül ışınlanmış hosts içine ışınlanmamış doku başarılı greft konak doku ve ev sahibi 15 uzun süreli sağkalım kurtarma neden olacaktır. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/4015/4015fig1.jpg" /> Şekil 1.. Temel bileşen genel düzenlemeKısmi ışınlanması için s. bir üst konumlandırılmış X-ışını kaynağı ile bir X-ray irradiator yılında (katot tüpü) anestezi planarian ışınlama alanında doğrudan X-ışını kaynağı altına yerleştirilir. X-ışını doz oranı maksimize etmek için, planarian ve X-ışını kaynağından arasındaki mesafenin en aza edilmelidir. Bir kurşun kalkanı katot tüpü ve pratik olarak solucan olarak yakın anestezi solucanı arasında yerleştirilmelidir. Kurşun kalkanı tasarlanan, üretilen ve yerleştirilmelidir böylece kalkanlar istenilen doku olduğunu ama tamamen solucanın kalanı gösterir. Birçok ticari sizin basit tasarım diyagramda özel kurşun kalkanlar üretecek üretmektedir; başarıyla Alpha Systems Corp (Bluffdale, UT) kullandık. Kurşun koruyucu istenen miktarda olanak sağlamak için yeterli kalınlıkta olacaktır. 320 kV X-ışını demetinin koruyucu tam yanında istenirse Örneğin, kurşun kalınlığı 4.5 ila 6 mm olmalıdır. Planarian ve kalkan konumlandırılırBir Holtfreter Kullanıcı batırılmış filtre kağıdı bir buz kovası dinleniyor Petri dizildi. Yeterince büyük bir X-ışını radyasyon alan ve aynı kurşun kalkan bir dizi göz önüne alındığında, pek çok örnekler kısmen bir kez (Resim mevcut değil) az ışınlanmış olabilir. <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/4015/4015fig2.jpg" /> Şekil 2. Kurtarma odası Bina. Doku nakli kurtarma odası (A) Bir patladı görünümü, kazein doymuş Holtfreter Çözümü batırılmış sonra birbiri üstüne katmanlı tüm bileşenleri gösteriyor. (B) whatman ile iç içe yerleşim gösteren bir bitmek kurtarma odası, # 3 filtre kağıdı dikdörtgenler hangi rahatça anestezi planarian örtmek, iyileşme sırasında hareketinin önlenmesi. Kurtarma odasının dikkatli inşaat doku nakli hızlı iyileşme ve daha fazla etkinlik teşvik, hayvan hareketleri ve kuruma önler. <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/4015/4015fig3.jpg" /> Şekil 3. Basit posterior kısmi ışınlama Temsilcisi sonuçları. Dubois 7 açıklandığı gibi, (A) Planaryalar posterior yarısında kurşun ile korumalı ve daha sonra x-ışınlarıyla maruz kalan zaman ön doku ışınlanmış ve korumalı arasındaki sınır geri gerileme gözlendi doku noktayı unpigmented blastemas oluşan ve hayvanların yeniden başladı. (B), diğer yandan, hayvanlar (A), doku regresyon gözlenmemiştir ve kalan ışınlanmış ön doku kurtarıldı gerçekleştirilir aynı kısmi irradyasyonu takiben başları kesilir üç gruba ayrılmıştır. Işınlanmamış Decapitated kontroller (C) ile karşılaştırıldığında, hayvanlarda kısmen ışınlanmış rejenere kafaları (B) başları kesilir, bununla birlikte, rejenerasyon önemli ölçüde gecikmiştir. <img alt="Şekil 4" src="/files/ftp_upload/4015/4015fig4.jpg" /> Şekil 4. Temsilcisi outcokısmi kök hücre ablasyon bana kısmi ışınlama sonrasında. kök hücre belirleyicisi SMED-Piwi-1 in situ hibridizasyon (DİLERİZ) In Tüm montaj olduğunu vahşi tip planaria ortaya kök hücre için ön doku hariç vücutlarının boyunca dağıttık fotoreseptör (ok) ve yutak uygun (yıldız) 14. (A) ışınlanmış ama tam korumalı kontrol SMED-Piwi-1 için DİLERİZ planaria ışınlama izleyen üç gün vahşi tip planaria farksız bir kök hücre dağılımı gösterir düzeltildi. (B), diğer yandan, ön ve arka maruz bırakarak, sadece kısmen korumalı edildi hayvanlarda SMED-Piwi-1 arzu değil, aynı zamanda kök hücre dışı korumalı bölgelerden ablazeydi olduğunu gösterir irradyasyonu takip eden üç gün tespit edildi . Ölçek çubukları 500 mikron vardır. <img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/4015/4015fig5.jpg" /> Şekil 5. Exabaşarılı ve başarısız doku nakli mples. (A) üç gün Transplantasyon sonrası başarıyla transplante planarian dorsal ve ventral görüş görüntüleri yaşayın. Greft (belirtilen) dorsal ve ventral yüzeyleri hem de açıkça görülebilir ve greft-host arayüzü de karakteristik unpigmented doku ile çevrilidir. (B) Buna karşılık, başarısız nakilleri nakli sitesi (belirtilen) hiç görünür greft dokusu görüntülemek ve yerine nakli başarısız bir iyileşmiş, unpigmented, lateral yara göstermektedir. Sadece dorsal veya ventral yüzeyi yapışır A graft (A), diğer taraftan bakıldığında bir yan ve başarısız bir nakil (B) bakıldığında, başarılı bir nakil benzer olabilir. (C) vahşi tip (wt) doku ikamet kök hücre ve nakledilen kök hücrelerin ablazeydi edilmiş ışınlanmış bir konak haline aşılı zaman sonra nakli sonrası SMED-Piwi-1 iki gün, arzu tarafından vahyedilmiştirekiminin başarısını açıkça sadece greft konumu (ok başları) veya etrafında kök hücrelerin özel varlığı ile görüntülenir. Ölçek çubukları 500 mikron vardır.

<ol>
	<li>Morgan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+studies+of+the+regeneration+of+Planaria+maculata.">Experimental studies of the regeneration of Planaria maculata.</a> Arch. Entw. Mech. Org. 7, 364-397 .</li><li>Reddien, P. W., Sanchez Alvarado, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fundamentals+of+planarian+regeneration.">Fundamentals of planarian regeneration.</a> Annu Rev Cell Dev Biol. 20, 725-757 (2004).</li><li>Randolph, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+regeneration+of+the+tail+in+lumbriculus.">The regeneration of the tail in lumbriculus.</a> J. Morphol. 7, 317-344 .</li><li>Wagner, D. E., Wang, I. E., Reddien, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonogenic+neoblasts+are+pluripotent+adult+stem+cells+that+underlie+planarian+regeneration.">Clonogenic neoblasts are pluripotent adult stem cells that underlie planarian regeneration.</a> Science. 332, 811-816 (2011).</li><li>Santos, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+transplantation+in+planaria.">Studies on transplantation in planaria.</a> Biological Bulletin. 57, 188-197 (1929).</li><li>Morgan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+grafted+pieces+of+planarians.">Regeneration of grafted pieces of planarians.</a> J. Exp. Zo&#246;l. 3, 269-294 (1906).</li><li>Dubois, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+&#225;+l+'&#232;tude+de+la+migration+des+cellules+de+règènèration+chez+les+Planaires+dulcicoles.">Contribution &#225; l '&#232;tude de la migration des cellules de règènèration chez les Planaires dulcicoles.</a> Bull. Biol. Fr. Belg. 83, 213-283 (1949).</li><li>Purton, L. E., Scadden, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limiting+factors+in+murine+hematopoietic+stem+cell+assays.">Limiting factors in murine hematopoietic stem cell assays.</a> Cell Stem Cell. 1, 263-270 (2007).</li><li>Cebria, F., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Planarian+homologs+of+netrin+and+netrin+receptor+are+required+for+proper+regeneration+of+the+central+nervous+system+and+the+maintenance+of+nervous+system+architecture.">Planarian homologs of netrin and netrin receptor are required for proper regeneration of the central nervous system and the maintenance of nervous system architecture.</a> Development. , 132-3691 (2005).</li><li>Newmark, P. A., S&#225;nchez Alvarado, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bromodeoxyuridine+specifically+labels+the+regenerative+stem+cells+of+planarians.">Bromodeoxyuridine specifically labels the regenerative stem cells of planarians.</a> Dev. Biol. 220, 142-153 (2000).</li><li>Miller, W., Kennedy, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=X-ray+attenuation+in+lead,+aluminum,+and+concrete+in+the+range+275+to+525+kilovolts.">X-ray attenuation in lead, aluminum, and concrete in the range 275 to 525 kilovolts.</a> Radiology. 65, 920-925 (1955).</li><li>Pearson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formaldehyde-based+whole-mount+in+situ+hybridization+method+for+planarians.">Formaldehyde-based whole-mount in situ hybridization method for planarians.</a> Dev. Dyn. 238, 443-450 (2009).</li><li>Hayashi, T., Asami, M., Higuchi, S., Shibata, N., Agata, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+planarian+X-ray-sensitive+stem+cells+by+fluorescence-activated+cell+sorting.">Isolation of planarian X-ray-sensitive stem cells by fluorescence-activated cell sorting.</a> Dev. Growth Differ. 48, 371-380 (2006).</li><li>Reddien, P. W., Oviedo, N. J., Jennings, J. R., Jenkin, J. C., S&#225;nchez Alvarado, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SMEDWI-2+is+a+PIWI-like+protein+that+regulates+planarian+stem+cells.">SMEDWI-2 is a PIWI-like protein that regulates planarian stem cells.</a> Science. 310, 1327-1330 (2005).</li><li>St&#233;phan-Dubois, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Les+cellules+de+r&#233;g&#233;n&#233;ration+chez+la+planaire+Dendrocoleum+lacteum.">Les cellules de r&#233;g&#233;n&#233;ration chez la planaire Dendrocoleum lacteum.</a> Bulletin de la Société Zooologique de France. 86, 172-185 (1961).</li><li>Gurley, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+secreted+Wnt+pathway+components+reveals+unexpected+complexity+of+the+planarian+amputation+response.">Expression of secreted Wnt pathway components reveals unexpected complexity of the planarian amputation response.</a> Dev. Biol. 347, 24-39 (2010).</li><li>Salvetti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+stem+cell+plasticity:+neoblast+repopulation+in+non-lethally+irradiated+planarians.">Adult stem cell plasticity: neoblast repopulation in non-lethally irradiated planarians.</a> Dev. Biol. 328, 305-314 (2009).</li></ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Immobilizasyon Önemi İmmobilizasyon tarafından bugüne kadar bu işlemlerin herhangi birinin başarıyla tamamlanması için en kritik adımdır. Planaria yanlış kısmi ışınlama öncesi immobilize edilirse, tutarsız ve kafa karıştırıcı sonuçlar üreten, kurşun kalkanı altında hareket edebilir. Hayvanlar yeterince transplantasyonundan sonra immobilize edilir, ayrıca, ev sahibi solucan olasılıkla ana düzgün iyileşmek için greft bir başarısızlıkla sonuçlanan, greft do...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> Genel Amaçlı Transferi Pipet </td><td> Samco </td><td> 691 </td></tr><tr><td> Kapiler tüpler (ID 0.75 mm) </td><td> FHC </td><td> 30-30-0 </td></tr><tr><td> Kapiler tüpler (OD 0,7 mm) </td><td> FHC </td><td> 30-50-08 </td></tr><tr><td> Parafilm M </td><td> VWR </td><td> 52858-076 </td></tr><tr><td> Kimwipes 34.155 </td><td> VWR </td><td> 500029-891 </td></tr><tr><td> Siyah filtre kağıdı </td><td> Schleicher &amp; Schuell </td><td> 10310809 </td></tr><tr><td> Whatman # 2 filtre kağıdı 1002-055 </td><td> Fisher Scientific </td><td> 09-810B </td></tr><tr><td> Whatman # 3 filtre kağıdı 1003-185 </td><td> Fisher Scientific </td><td> 09-820E </td></tr><tr><td> Sigara haddeleme kağıt </td><td> Zig-Zag, orijinal </td><td> NA </td></tr><tr><td> Petribulaşık </td><td> VWR </td><td> 82050-544 </td></tr><tr><td> Forseps DUMONT, INOX # 5 </td><td> FST </td><td> 11251-20 </td></tr><tr><td> Chloretone </td><td> Sigma Aldrich </td><td> 112054 </td></tr><tr><td> Kazein </td><td> Sigma Aldrich </td><td> C3400 </td></tr><tr><td> Shields Kurşun </td><td> Alpha Systems Corp, Bluffdale, UT </td><td> Özel tasarım </td></tr><tr><td> XRAD-320 Biyolojik Irradiator </td><td> Hassas X-Ray, Kuzey Branford, CT </td><td> NA </td></tr></tbody></table>

planarian immobilization, partial irradiation, and tissue transplantation

Planarian, bir tatlı su yassı solucan, metazoan rejenerasyonu ve kök hücre biyolojisi 1,2 diseksiyon için güçlü bir sistem olduğu kanıtlanmıştır. Herhangi bir eksik veya hasarlı dokuların Planarian rejenerasyon neoblasts 3 olarak adlandırılan yetişkin kök hücreler sayesinde mümkün olmaktadır. Bu kök hücreler kesin pluripotent ve bütün bir hayvan 4 yeniden yapılandırılması ve tek başına sahip olduğu gösterilmiş olsa da, kök hücre sayısı ve hücresel davranışları dinamikleri içinde heterojenite büyük ölçüde hâlâ çözülememiştir. Sayıda ve planarian vücut planı boyunca kök hücrelerin geniş dağılımı nedeniyle, in vivo moleküler ve işlevsel çalışması için kök hücre subpopülasyonunun işlenmesi için gelişmiş yöntemlere ihtiyaç vardır. Doku nakli ve kısmi ışınlama planarian kök hücrelerin bir alt daha fazla çalışma için izole edilebilir hangi iki yöntem bulunmaktadır. Her tekniğin avantajları vardır. Tsorun nakli ya doğal genetik olarak farklı olan veya daha önce farmakolojik tedavi edilmiştir naif bir konak, içine, kök hücrelerin giriş için izin verir. Alternatif olarak, kısmi ışınlama bir yara getirilmesi veya doku bütünlüğünün herhangi bir makat olmayan, kök hücrelerin yoksun doku bitişik bir ev sahibi, içindeki kök hücrelerin izolasyonu sağlar. Bu iki yöntem kullanarak, tek bir hücrenin özerk ve özerk olmayan faktörleri araştırmak için böyle çoğalma, farklılaşma ve göç kontrolü kök hücre fonksiyonları. Doku nakli 5,6 ve kısmi ışınlama 7 ikisi de bugün çalışmanın altında kalması planarian rejenerasyon ilgili soruların çoğunu tanımlamada tarihsel olarak kullanılmıştır. Ancak, bu teknikler önceki yöntemlerin zahmetli ve tutarsız doğası gereği az kullanıldığı kaldı. Burada sunulan protokolleri bir zaman azalan ileriye atılmış büyük bir adımı temsilnd tekrarlanabilir yüzde 100 yaklaşırken etkinliği ile aşılanmış hayvanlardan ya da kısmen ışınlanmış sayıda üretmek için gerekli olan efor. Biz büyük hayvanların kültür, immobilizasyon, kısmi ışınlama, doku nakli için hazırlık ve hayvan kurtarma optimizasyonu kapsar. Bundan başka, burada açıklanan çalışma en geniş bir şekilde araştırılmıştır planarian, Schmidtea mediterranea ile kullanım için kısmi irradyasyonu yöntemin birinci uygulamasını göstermektedir. Ayrıca, planaria uygulanan aşılama etkili doku uzun memeliler 8 erişkin kök hücre potansiyelini test edilmesinden ve altın standart yöntem olmuştur yeniden çoğalması tayinlerde naif ya da tedavi edilen kök hücrelerin altgrupları, fonksiyonel test için kapıyı açar. Bu tekniklerin yaygın olarak benimsenmesi hiçbir doku homeostazında ve rejenerasyon sırasında erişkin kök hücrelerin hücresel davranışları daha iyi anlayabilmek için kurşun kuşkusuz olacaktır.

Watch this Scientific Journal Video about Planarian Immobilization, Partial Irradiation, and Tissue Transplantation at JoVE.com

Planarian Immobilization, Partial Irradiation, and Tissue Transplantation

Planaria arasında tanımlanmış ve tutarlı bir büyüklükte doku aşılama için etkili bir yöntem tarif edilmiştir. Ayrıca nakli için kullanılan immobilizasyon tekniği canlı hayvanların kısmi ışınlanması için kurşun kalkanlar, ile birlikte, nasıl uyarlanabileceğini bir açıklama dahildir.

Planarian İmmobilizasyon, Kısmi Işınlama, ve Doku Nakli

The planarian, a freshwater flatworm, has proven to be a powerful system for dissecting metazoan regeneration and stem cell biology1,2. Planarian ...

planarian-immobilization-partial-irradiation-tissue

Research

JoVE Journal

Biology

19.4K Görüntüleme.  University of Utah School of Medicine. Planaria arasında tanımlanmış ve tutarlı bir büyüklükte doku aşılama için etkili bir yöntem tarif edilmiştir. Ayrıca nakli için kullanılan immobilizasyon tekniği canlı hayvanların kısmi ışınlanması için kurşun kalkanlar, ile birlikte, nasıl uyarlanabileceğini bir açıklama dahildir.

Video: Planarian Immobilization, Partial Irradiation, and Tissue Transplantation

Murine Skin Transplantation

As one of the most stringent and least technically challenging models, skin transplantation is a standard method to assay host T cell responses to MHC-disparate donor antigens. The aim of this video-article is to provide the viewer with a step-by-step visual demonstration of skin transplantation using the mouse model. The protocol is divided into 5 main components: 1) harvesting donor skin; 2) preparing recipient for transplant; 3) skin transplant; 4) bandage removal and monitoring graft rejection; 5) helpful hints. Once proficient, the procedure itself should take &lt;10 min to perform.

Allogeneic skin transplantation is a standard model to assay host T cell responses to MHC-disparate donor antigens. This video-article provides a visual tutorial of each step involved in performing a BALB/c--&gt;C57BL/6 skin transplant.

Murin Deri nakli

As one of the most stringent and least technically challenging models, skin transplantation is a standard method to assay host T cell responses to ...

Biyoloji

Actin Co-Sedimentation Assay; for the Analysis of Protein Binding to F-Actin

The actin cytoskeleton within the cell is a network of actin filaments that allows the movement of cells and cellular processes, and that generates tension and helps maintains cellular shape.  Although the actin cytoskeleton is a rigid structure, it is a dynamic structure that is constantly remodeling.  A number of proteins can bind to the actin cytoskeleton.  The binding of a particular protein to F-actin is often desired to support cell biological observations or to further understand dynamic processes due to remodeling of the actin cytoskeleton. The actin co-sedimentation assay is an in vitro assay routinely used to analyze the binding of specific proteins or protein domains with F-actin.  The basic principles of the assay involve an incubation of the protein of interest (full length or domain of) with F-actin, ultracentrifugation step to pellet F-actin and analysis of the protein co-sedimenting with F-actin.  Actin co-sedimentation assays can be designed accordingly to measure actin binding affinities and in competition assays.

Proteins bind to filamentous actin (F-actin) through distinct actin binding modules. In this video we demonstrate the procedure of actin co-sedimentation, which is an in vitro assay routinely used to analyze proteins or specific domains that bind F-actin.

Aktin Co-Sedimantasyon Testi; F-Aktin Bağlayıcı Protein Analizi

The actin cytoskeleton within the cell is a network of actin filaments that allows the movement of cells and cellular processes, and that generates ...

Generation of Human CD40-activated B cells

CD40-activated B cells (CD40-B cells) have been identified as an alternative source of immuno-stimulatory antigen-presenting cells (APC) for cancer immunotherapy 1-3. Compared to Dendritic cells (DCs), the best characterized APC, CD40-B cells have several distinct biological and technical properties. Similar to DCs, B cells show an increased expression of MHC and co-stimulatory molecules (Fig.1b), exhibit a strong migratory capacity and present antigen presentation efficiently to T cells, after stimulation with interleukin-4 and CD40 ligand (CD40L). However, in contrast to immature or mature DCs, CD40-B cells express the full lymph node homing triad consisting of CD62L, CCR7/CXCR4, and leukocyte function antigen-1 (LFA1, CD11a/CD18), necessary for homing to secondary lymphoid organs (Fig.1a) 3. CD40-B cells can be generated without difficulties from very small amounts of peripheral blood which can be further expanded in vitro to very large amounts of highly-pure CD40-B cells (&gt;109 cells per patient) from healthy donors as well as cancer patients (Fig.1c,d) 1,4. 
In this protocol we demonstrate how to obtain fully activated CD40-B cells from human PBMC. Key molecules for the cell culture are CD40 ligand, interleukin-4 (IL-4) and cyclosporin A (CsA), which are replenished in a 3-4 day culture cycle. For laboratory purposes CD40-stimulation is provided by NIH/3T3 cells expressing recombinant human CD40 ligand (tCD40L NIH/3T3) 5. To avoid contamination with non-transfected cells, expression of the human CD40 ligand on the transfectants has to be checked regularly (Fig.2). 
After 14 days CD40-B cell cultures consist of more than 95% pure B cells and an expansion of CD40-B cells over 65 days is frequently possible without any loss of function 1, 4. CD40-B cells efficiently take up, process and present antigens to T cells 6. They do not only prime na&#970;ve, but also expand memory T cells 7,8. CD40-activated B cells can be used to study B-cell activation, differentiation and function. Moreover, they represent a promising tool for therapeutic or preventive vaccination against tumors 9.

In this video we present the ex vivo generation and expansion of human CD40-activated B cells (CD40-B) from peripheral blood mononuclear cells (PBMC) by stimulation with CD40 ligand and interleukin-4.

İnsan CD40 aktive B hücreleri üretilmesi

CD40-activated B cells (CD40-B cells) have been identified as an alternative source of immuno-stimulatory antigen-presenting cells (APC) for cancer ...

Tissue Targeted Embryonic Chimeras: Zebrafish Gastrula Cell Transplantation

Certain fundamental questions in the field of developmental biology can only be answered when cells are placed in novel environments or when small groups of cells in a larger context are altered.  Watching how one cell interacts with and behaves in a unique environment is essential to characterizing cell functions.  Determining how the localized misexpression of a specific protein influences surrounding cells provides insightful information on the roles that protein plays in a variety of developmental processes.  Our lab uses the zebrafish model system to uniquely combine genetic approaches with classical transplantation techniques to generate genotypic or phenotypic chimeras.  We study neuron-glial cell interactions during the formation of forebrain commissures in zebrafish. This video describes a method that allows our lab to investigate the role of astroglial populations in the diencephalon and the roles of specific guidance cues that influence projecting axons as they cross the midline. Due to their transparency zebrafish embryos are ideal models for this type of ectopic cell placement or localized gene misexpression. Tracking transplanted cells can be accomplished using a vital dye or a transgenic fish line expressing a fluorescent protein. We demonstrate here how to prepare donor embryos with a vital dye tracer for transplantation, as well as how to extract and transplant cells from one gastrula staged embryo to another.  We present data showing ectopic GFP+ transgenic cells within the forebrain of zebrafish embryos and characterize the location of these cells with respect to forebrain commissures.  In addition, we show laser scanning confocal timelapse microscopy of Alexa 594 labeled cells transplanted into a GFP+ transgenic host embryo.  These data provide evidence that gastrula staged transplantation enables the targeted positioning of ectopic cells to address a variety of questions in Developmental Biology.

Zebrafish cell transplantation enables the combination of genetics and embryology to generate tissue specific chimeras. This video demonstrates gastrula staged cell transplantations that have allowed our lab to investigate the roles of astroglial populations and specific guidance cues during commissure formation in the forebrain.

Doku Hedeflenen Embriyonik Chimeras: Zebra balığı Gastrula Hücre Nakli

Certain fundamental questions in the field of developmental biology can only be answered when cells are placed in novel environments or when small groups ...

Pharmacological and Functional Genetic Assays to Manipulate Regeneration of the Planarian Dugesia japonica

Free-living planarian flatworms have a long history of experimental usage owing to their remarkable regenerative abilities1. Small fragments excised from these animals reform the original body plan following regeneration of missing body structures. For example if a 'trunk' fragment is cut from an intact worm, a new 'head' will regenerate anteriorly and a 'tail' will regenerate posteriorly restoring the original 'head-to-tail' polarity of body structures prior to amputation (Figure 1A).
Regeneration is driven by planarian stem cells, known as 'neoblasts' which differentiate into ~30 different cell types during normal body homeostasis and enforced tissue regeneration. This regenerative process is robust and easy to demonstrate. Owing to the dedication of several pioneering labs, many tools and functional genetic methods have now been optimized for this model system. Consequently, considerable recent progress has been made in understanding and manipulating the molecular events underpinning planarian developmental plasticity2-9.
The planarian model system will be of interest to a broad range of scientists. For neuroscientists, the model affords the opportunity to study the regeneration of an entire nervous system, rather than simply the regrowth/repair of single nerve cell process that typically are the focus of study in many established models. Planarians express a plethora of neurotransmitters10, represent an important system for studying evolution of the central nervous system11, 12 and have behavioral screening potential13, 14. 
Regenerative outcomes are amenable to manipulation by pharmacological and genetic apparoaches. For example, drugs can be screened for effects on regeneration simply by placing body fragments in drug-containing solutions at different time points after amputation. The role of individual genes can be studied using knockdown methods (in vivo RNAi), which can be achieved either through cycles of microinjection or by feeding bacterially-expressed dsRNA constructs8, 9, 15. Both approaches can produce visually striking phenotypes at high penetrance- for example, regeneration of bipolar animals16-21. To facilitate adoption of this model and implementation of such methods, we showcase in this video article protocols for pharmacological and genetic assays (in vivo RNAi by feeding) using the planarian Dugesia japonica.

Pharmacological and Functional Genetic Assays to Manipulate Regeneration of the Planarian Dugesia japonica

An attractive model for studying stem cell differentiation within a live animal is the planarian flatworm. Regeneration is studied by simple amputation experiments that are easily performed in a basic laboratory and are amenable to pharmacological and genetic (in vivo RNAi) manipulation as detailed by protocols in this article.

Farmakolojik ve Fonksiyonel Genetik Tahliller Planarian Rejenerasyon işleyin<emJaponica> Dugesia</em

Free-living planarian flatworms have a long history of experimental usage owing to their remarkable regenerative abilities1. Small fragments excised from ...

Germ Cell Transplantation and Testis Tissue Xenografting in Mice

Germ cell transplantation was developed by Dr. Ralph Brinster and colleagues at the University of Pennsylvania in 19941,2. These ground-breaking studies showed that microinjection of germ cells from fertile donor mice into the seminiferous tubules of infertile recipient mice results in donor-derived spermatogenesis and sperm production by the recipient animal2. The use of donor males carrying the bacterial &beta;-galactosidase gene allowed identification of donor-derived spermatogenesis and transmission of the donor haplotype to the offspring by recipient animals1. Surprisingly, after transplantation into the lumen of the seminiferous tubules, transplanted germ cells were able to move from the luminal compartment to the basement membrane where spermatogonia are located3. It is generally accepted that only SSCs are able to colonize the niche and re-establish spermatogenesis in the recipient testis. Therefore, germ cell transplantation provides a functional approach to study the stem cell niche in the testis and to characterize putative spermatogonial stem cells. To date, germ cell transplantation is used to elucidate basic stem cell biology, to produce transgenic animals through genetic manipulation of germ cells prior to transplantation4,5, to study Sertoli cell-germ cell interaction6,7, SSC homing and colonization3,8, as well as SSC self-renewal and differentiation9,10.
Germ cell transplantation is also feasible in large species11. In these, the main applications are preservation of fertility, dissemination of elite genetics in animal populations, and generation of transgenic animals as the study of spermatogenesis and SSC biology with this technique is logistically more difficult and expensive than in rodents. Transplantation of germ cells from large species into the seminiferous tubules of mice results in colonization of donor cells and spermatogonial expansion, but not in their full differentiation presumably due to incompatibility of the recipient somatic cell compartment with the germ cells from phylogenetically distant species12. An alternative approach is transplantation of germ cells from large species together with their surrounding somatic compartment. We first reported in 2002, that small fragments of testis tissue from immature males transplanted under the dorsal skin of immunodeficient mice are able to survive and undergo full development with the production of fertilization competent sperm13. Since then testis tissue xenografting has been shown to be successful in many species and emerged as a valuable alternative to study testis development and spermatogenesis of large animals in mice14.

Protocols for germ cell transplantation and testis tissue xenografting are described. Germ cell transplantation results in donor-derived spermatogenesis in recipient testes and represents a functional reconstitution assay for identification of spermatogonial stem cells (SSCs). Testis tissue xenografting reproduces testis development and spermatogenesis of various donor species in recipient mice.

Germ Hücre Nakli ve Testis Dokusu Farelerde Xenografting

Germ cell transplantation was developed by Dr. Ralph Brinster and colleagues at the University of Pennsylvania in 19941,2. These ground-breaking studies ...

Rapid Isolation And Purification Of Mitochondria For Transplantation By Tissue Dissociation And Differential Filtration

Previously described mitochondrial isolation methods using differential centrifugation and/or Ficoll gradient centrifugation require 60 to 100 min to complete. We describe a method for the rapid isolation of mitochondria from mammalian biopsies using a commercial tissue dissociator and differential filtration. In this protocol, manual homogenization is replaced with the tissue dissociator&#8217;s standardized homogenization cycle. This allows for uniform and consistent homogenization of tissue that is not easily achieved with manual homogenization. Following tissue dissociation, the homogenate is filtered through nylon mesh filters, which eliminate repetitive centrifugation steps. As a result, mitochondrial isolation can be performed in less than 30 min. This isolation protocol yields approximately 2 x 1010 viable and respiration competent mitochondria from 0.18 &#177; 0.04 g (wet weight) tissue sample.

A method for rapid isolation of mitochondria from mammalian tissue biopsies is described. Rat liver or skeletal muscle preparations were homogenized with a commercial tissue dissociator and mitochondria were isolated by differential filtration through nylon mesh filters. Mitochondrial isolation time is &#60;30 min compared to 60 - 100 min using alternative methods.

Doku Ayrışma Ve Diferansiyel süzülerek Nakli İçin Mitokondri Of Rapid İzolasyon ve saflaştırma

Previously described mitochondrial isolation methods using differential centrifugation and/or Ficoll gradient centrifugation require 60 to 100 min to ...

A Mouse Model of Intestinal Partial Obstruction

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including tumorous growths. However, the cellular remodeling mechanisms involved in, and caused by, intestinal obstructions are poorly understood. Several animal models of intestinal obstructions have been developed, but the mouse model is the most cost/time effective. The mouse model uses the surgical implantation of an intestinal partial obstruction (PO) that has a high mortality rate if it is not performed correctly. In addition, mice receiving PO surgery fail to develop hypertrophy if an appropriate blockade is not used or not properly placed. Here, we describe a detailed protocol for PO surgery which produces reliable and reproducible intestinal obstructions with a very low mortality rate. This protocol utilizes a surgically placed silicone ring that surrounds the ileum which partially blocks digestive movement in the small intestine. The partial blockage makes the intestine become dilated due to the halt of digestive movement. The dilation of the intestine induces smooth muscle hypertrophy on the oral side of the ring that progressively develops over 2 weeks until it causes death. The surgical PO mouse model offers an in vivo model of hypertrophic intestinal tissue useful for studying pathological changes of intestinal cells including smooth muscle cells (SMC), interstitial cells of Cajal (ICC), PDGFR&#945;+, and neuronal cells during the development of intestinal obstruction.

Intestinal obstructions are a partial or complete blockage of the intestine that can cause severe abdominal pain, nausea, vomiting, and preventing the passage of stool. This procedure for creating intestinal partial obsructions in mice is reliable in studying the mechanisms underlying pathological cell growth and death in the intestine.

Bağırsak kısmi tıkanıklık bir fare modeli

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including ...

Planarian Scrunching as a Quantitative Behavioral Readout for Noxious Stimuli Sensing

Freshwater planarians normally glide smoothly through ciliary propulsion on their ventral side. Certain environmental conditions, however, can induce musculature-driven forms of locomotion: peristalsis or scrunching. While peristalsis results from a ciliary defect, scrunching is independent of cilia function and is a specific response to certain stimuli, including amputation, noxious temperature, extreme pH, and ethanol. Thus, these two musculature-driven gaits are mechanistically distinct. However, they can be difficult to distinguish qualitatively. Here, we provide a protocol for inducing scrunching using various physical and chemical stimuli. We detail the quantitative characterization of scrunching, which can be used to distinguish it from peristalsis and gliding, using freely available software. Since scrunching is a universal planarian gait, albeit with characteristic species-specific differences, this protocol can be broadly applied to all species of planarians, when using appropriate considerations. To demonstrate this, we compare the response of the two most popular planarian species used in behavioral research, Dugesia japonica and Schmidtea mediterranea, to the same set of physical and chemical stimuli. Furthermore, the specificity of scrunching allows this protocol to be used in conjunction with RNA interference and/or pharmacological exposure to dissect the molecular targets and neuronal circuits involved, potentially providing mechanistic insight into important aspects of nociception and neuromuscular communication.

Freshwater planarians exhibit three gaits (gliding, peristalsis, and scrunching) that are distinguishable by quantitative behavioral analysis. We describe a method to induce scrunching using various noxious stimuli, quantification thereof, and distinction from peristalsis and gliding. Using gene knockdown, we demonstrate the specificity of scrunching as a quantitative phenotypic readout.

Zararlı Uyaranlar Algılama için Nicel Davranışsal Okuma olarak Planarian Scrunching

Freshwater planarians normally glide smoothly through ciliary propulsion on their ventral side. Certain environmental conditions, however, can induce ...

Dosimetry for Cell Irradiation using Orthovoltage (40-300 kV) X-Ray Facilities

The importance of dosimetry protocols and standards for radiobiological studies is self-evident. Several protocols have been proposed for dose determination using low energy X-ray facilities, but depending on the irradiation configurations, samples, materials or beam quality, it is sometimes difficult to know which protocol is the most appropriate to employ. We, therefore, propose a dosimetry protocol for cell irradiations using low energy X-ray facility. The aim of this method is to perform the dose estimation at the level of the cell monolayer to make it as close as possible to real cell irradiation conditions. The different steps of the protocol are as follows: determination of the irradiation parameters (high voltage, intensity, cell container etc.), determination of the beam quality index (high voltage-half value layer couple), dose rate measurement with ionization chamber calibrated in air kerma conditions, quantification of the attenuation and scattering of the cell culture medium with EBT3 radiochromic films, and determination of the dose rate at the cellular level. This methodology must be performed for each new cell irradiation configuration as the modification of only one parameter can strongly impact the real dose deposition at the level of the cell monolayer, particularly involving low energy X-rays.

Dosimetry for Cell Irradiation using Orthovoltage 40-300 kV X-Ray Facilities

This document describes a new dosimetry protocol for cell irradiations using low energy X-ray equipment. Measurements are performed in conditions simulating real cell irradiation conditions as much as possible.