Bu araştırma NIH / NIAAA (AA11852 ve AA007471) hibe tarafından desteklenmiştir.

1. Stereotaksik Cerrahi <ol><li> Tüm prosedürler Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı için NIH Kılavuzu izleyin ve Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından onaylanmıştır. </li><li> Bir stereotaksik aparat kullanarak, Long-Evans izofluran ile anestezi fareler, faiz beyin bölgesi üzerinde bir 21-gauge kanül (daha sonra microdilaysis prob yerleştirme için) (Plastik biri, Roanoke, VA) ile implante edilir ve bir ip iyi ele cıvata kafa sahne (mikrodiyaliz cihazları desteklemek için kullanılan) içine inşa edilmiştir. </li><li> Ameliyat sırasında ve sonrasında dikkatle sıçanlarda izleyin. Tüm hayvanlar ameliyat sonrası bakım ve iyileşme en az bir hafta alır ve aşağıdaki işlemleri başlamadan önce sağlıklı olduğundan emin olun. Stereotaksik cerrahi yöntemin Jüpiter Video kullanılabilir. 1 </li></ol> 2. Edimsel Eğitim <ol><li> Ameliyat sonrası iyileşme bir hafta sonra, hayvanların% 10 sakkaroz eriyik için kolu basın için eğitilmişlerdirn lickometer, geri çekilebilir kolu, ve sipper tüp (daha önce Howard ve ark., 2009&#39;da tarif edildiği gibi) ile donatılmış bir Med Associates operant bölmesinin (MedAssociates, Inc, Vermont, ABD). MedAssociates 2 Software tüm tasarlamak için kullanılmıştır edimsel programları (MedAssociates, Inc, Vermont, USA). </li><li> Bir kere, sakaroz için yanıt etanol kademeli birden içme oturumları çözeltisine eklenir sırasında uygun bir eğitim programı üzerinde sıçanlar başlamak için eğitilmiştir. </li><li> Örneğin, bizim laboratuvar anda etanol% 10 etanol /% 10 sakaroz içme çözeltisi sonuçlanan çözüm içine soluk bir 8 günlük bir eğitim programı kullanmaktadır. Kontrol hayvanlarına sadece% 10 sakkaroz veya içme çözüm alırsınız. Kullanılmak için operant programı belli tür yaygın olarak değişebilir, fakat mikro-diyaliz numune için aşağıda tarif edilen genel prosedürler yine de gerçekleştirilebilir. 3 </li></ol> 3. Ön mikrodiyaliz Prosedürleri: Bağ <ol&gt; <li> Geçen eğitim oturumu (bizim örneğimizde bu 7. eğitim oturumu) için ikinci bir gece önce, hayvanların baş sahnede tether cıvata takılır tether bahar alışmışsındır. Bahar hayvan kafesi içinde serbestçe hareket böylece bir halka standı ve kelepçeler ile kafesi yanında askıya mikrodiyaliz döner ve karşı denge kol, bağlanır. Gergin hayvanlar tethering onları set-up alıştırmak için, ad libitum gıda ve su ile evlerinde kafeste, edimsel odasında gece geçirmek. </li><li> Ertesi gün, sıçan davranışsal görevleri yerine getirirken halata hissi hayvan alıştırmak için, bir yerde ip ile edimsel programını tamamlar. Edimsel odasının tavanının ortasına yukarıdaki halata ve döner askıya izin üstüne yakın edimsel odasının duvarına bağlanıyor aparatı monte edin. Tüm bu ses zayıflatma odasına yerleştirilir. After oturumu microdiaysis prob yerleştirilmesi beklemek edimsel odasında onun ev kafesine sıçan dönün. </li></ol> 4. Ön mikrodiyaliz Prosedürleri: sıçan gün için davranışsal eğitim tamamlandıktan sonra mikrodiyaliz prob, mikrodiyaliz deneyinin bir gün önce eklenir <ol><li> Gergin ise, izofluran ile sıçan uyutmak ve kılavuz kanül gelen obturator kaldırmak mikrodiyaliz deneyden önce gün, sıçan sonra edimsel oturumu tamamlandı. Yavaşça (5 ~ üzerinde dak) faiz beyin bölgeye kranial kılavuz kanül aracılığıyla yapay beyin omurilik sıvısı (ACSF) ile perfüze bir mikrodiyaliz prob, takın. Biz laboratuvar inşa probları ve Doyon ve ark., 2003 ve Pettit ve Adalet, 1991&#39;den sonra modellenmiş mikrodiyaliz yordamları kullanın. 3, 4 </li><li> Hayvan Yukarıdaki prob giriş ve çıkış hatları askıya önce tartışılan tethering aparatı kullanın. </li><li> P çevirinrobe debisi 0.2 ul / dak aşağı. Bir kez daha, sıçan edimsel odasında gece geçirir. </li></ol> 5. Mikrodivaliz Prosedürler: numuneleri ayrılmış iştahlı ve consummatory evreleri ile öz-yönetim oturumu sırasında <ol><li> Deney başlamadan en az 2 saat önce, çalışma akış oranına prob kadar açmak. Biz 1.0 veya 2.0 ul / beyin bölgesine bağlı olarak min kullanabilirsiniz. Sonda akış oranı tutarlı olduğunu kontrol edin, ve zaman içinde hacim ölçmek için bir Hamilton şırıngası kullanılarak grubu akış oranının en az% 90 olmalıdır. </li><li> Diyaliz örnekleri (5 veya 7 dakika) sırasında ve edimsel seanstan sonra, önce alınır. Numune aralığı beyin bölgesinde bağlıdır, nörotransmiter analiz edilen, analit konsantrasyonunun ve analiz için kullanılacak analitik kimya ekipman duyarlılık diyaliz. Davranışsal aşamaları aşağıdaki gibidir: <ol><li> Baseline: Denemenin başında,hayvanın evi kafesi (4 örnek) diyaliz örnekleri toplamak. </li><li> Transferi: evde kafes temel örnekleri toplandıktan sonra, edimsel odasına sıçan aktarın. Tethered sıçan Transferi aşırı dikkat mikrodiyaliz akışkan transfer hattı karışık hale gelir ve sıçan sakin kalmasını etmediğinden emin olmak için gereklidir. Eğer ilk beklemek örnek taban / transferi örneği değiştirmek gibi hemen transferinden sonra, edimsel programını etkinleştirin. </li><li> Bekle: sıçan odası (beyin bölgeye göre 3-4 numune) içine uzatmak için kolu bekler gibi örnekleri toplamak için devam edin. </li><li> Alkol: kolu sunulmuştur ve basıldıktan sonra, içme çözeltisi (% 10 sucrose/10% etanol veya% 10 sukroz), bir şişe yaklaşık 20 dakika (3-4 numunelerde) sıçan için uygun hale getirilir. </li><li> Post-içecek: içecek süresinden sonra, şişe geri çeker, ama fare kalır in yaklaşık 20 dakika (3-4 numune) için edimsel odası. </li></ol></li></ol> 6. Mikrodivaliz Prosedürler: etanol analiz için numune hazırlanması mikrodiyaliz <ol><li> , Etanol konsantrasyonu açısından değerlendirilmiştir sonra hayvanlara daha önce iki numune etil alkol çözeltisi, ve tüm örnekler kendi kendilerine uygulamaktadır. Pipet ya da 2 ml&#39;lik cam şişe içine ilgi örnek bir 1 ya da 2 ul alikot. Sonra bir hava geçirmez septum (9 mm Kırmızı Poly Vida Kapağı, PTFE / Sil Bölme, Agilent Technologies) ile flakon mühür. Etanol analiz kısım (1 ya da 2 ul) ve hacim toplam örnek hacminin, ve herhangi bir ek analizler için gerekli numune hacmine bağlıdır. </li><li> Örnekleri daha sonra nörokimyasal analiz için kullanılacak ise, uygun etanol tayini için tablet pipetleme sonra numune saklamak. </li><li> Örneğin, bizim laboratuvar dopamin için örnekleri inceliyor. Bunu gerçekleştirmek için, deney sırasında kuru buz örnekleri yerve daha sonra, deney sonra -80 ° C de örnekleri saklayın. Biz, 2.0 ul / nucleus accumbens yerleştirilen problar için dak &#39;lık bir akış oranı ile bir araya toplanan numune 5 dakika etanol analiz için 2 ul hacimde kullanılır. Bu elektrokimyasal algılama ile yüksek performanslı sıvı kromatografisi ile dopamin sonra analiz için kalan en az 7 ul sağlar. </li><li> Çok daha düşük konsantrasyonlarda hücre dışı dopamin sahip prefrontal korteks, alınan numuneler için, 1.0 ul / dak &#39;lık bir akış oranı kullanılarak bir min 7-numune alınmıştır etanol analizi için 1 ul alikot kullanır. </li></ol> 7. Post-mikrodiyaliz prosedürleri <ol><li> Mikrodiyaliz Deneyin tamamlanmasından sonra, sıçan uyutmak ve prob çıkarın. Hayvan hemen ötenazi değilse, tıkayıcı değiştirin. Deneme üç gün içinde beyin toplayın. Aksi takdirde, sonda yolu görüntüleme mümkün olmayabilir. </li><li> Beyin i kaldırılması gerekironaylanmış hayvan kullanımını protokolleri n uygun. Biz tuzlu tuzlu ve sonra formalin ile kardiyak perfüzyon ardından sodyum pentobarbital (150 mg / kg, ip) dozda kullanın. Kesit önce en az 12 saat boyunca bir formalin-tuzlu su çözeltisine daldırın beyin. </li><li> Koronal bölümünde 100 mikron dilimler halinde beyin. Cresyl mor dilimleri Leke ve doğru prob yerleştirme için inceleyin. 5, 6 </li></ol> 8. Etanol konsantrasyonu için numune analizi <ol><li> Toplanan örnekler yanı sıra harici standartlar (0,3125-20 mM etanol) alev iyonizasyon algılama sistemi ile gaz kromatografisi üzerinde çalıştırılır. Bu sistem, bir alev iyonizasyon detektörü ile bir Varian CP 3800 gaz kromatografı oluşur, bir Bruker (Varian) 8400 tepe boşluğunun, otomatik örnekleyici ° C, ve bir HP Innowax kılcal sütun (30 mx 0.53 mm x 1.0 um kalınlığındaki film,), 50 ile ısıtıldı mobil faz olarak helyum. </li><li> Kromatogramlar kromatografl ile birlikte kaydedilir ve analiz edilirBöyle burada özellikle ele alınacak Varian Yıldız Kromatografi Workstation yazılımı olarak aphy yazılımı. </li><li> Etanol analizi için sistem hazırlamak için, bir çevrimli su banyosu kullanılarak Otosampler plaka ısı ve iki ek gaz tankları (hava ve hidrojen, helyum daima balmumu sütun korumak için çalışan sol) açın. </li><li> Septum, basınç gaz tankı, hem de Eğer fiber septum ve bunlar, uygun olduğunda (lif-500 enjeksiyonlar değiştirilebilir, böylece kullanılmış olan kez sayısı sayısı tutmak, böylece olcam numune sayısını kaydedin -100 delikler). </li><li> Örnekleri (Tablo 2 program parametreleri) çalıştırmak için sistemi hazırlar start-up yöntemi başlatın. O &quot;hazır&quot; olduğunu bildirmek için sistem için bekleyin. </li><li> 20 dakika herhangi o emmiş kirlenmektedir desorb için yüksek bir sıcaklığa tabi tutarak analiz için numune elyaf hazırlar, &quot;yanma&quot; başlatma hareketsiz iken. </li><li> Standartlarına göre yapılırKimyasal bir çeker ocak içinde bir balon jojeye ile 100 mL &#39;lik bir son hacim su ile% 95 etanol ve 238 ul seyreltmek. Bu, bir 40 mM etanol çözeltisi oluşturur. Biz 20, 10 oluşturmak için bir 1:1 seri seyreltme, 5, 2.5, 1.25, 0.625, 0.3125 mM standartları kullanıyor. Standart her bir konsantrasyonu için, diyaliz örnekler alınacak aynı birimde tablet kullanılır. 2 ml bir cam şişe içine tablet pipet, ve daha sonra bir hava geçirmez septum ile şişe sızdırmaz. </li><li> Tüm sıvı kısım buharlaştırılır kadar tüm örnekler etanol otomatik numune alıcı içinde ısıtılır. Biz yaklaşık 30 dakika bizim örnekleri ısıtmak. </li><li> Bu bölümde bizim gaz kromatografisi ile kullandığınız Yıldız Workstation yazılımı anlatılmaktadır. Başka yazılım kullanılabilir, ancak aşağıda açıklaması uygulanabilir olmayabilir. </li><li> Örnekleri çalıştırmak için, örnek hangi Otosampler yuvasında olduğu belirterek örnek bir liste oluşturmak ve örnek kaç kez delinmiş olmalıdır. Seçtiğiniz kat rota veri dosyaları emin oluner. Ardından, örnekleri için tercih edilen yöntemi seçin ve çalışma başlar. Biz Tablo 2&#39;de belirtildiği çalışan parametrelerini kullanın. </li><li> Bizim diyalizat etanol programı 3 dakika boyunca örnek emer ve 1 dakika boyunca, balmumu sütuna besleyen helyum akışı içine desorbs. Ancak, programların belirli ihtiyaçlarınızı karşılamak için yazılmış olabilir. </li><li> Sonra balmumu sütunda ayrı ve örnek bileşenleri alev iyonizasyon dedektörü ile nereye örneğin etanol, yanma ve serbest iyonlar gibi bileşikler içeren karbon. Dedektörün anot gelen voltaj ile dönüştürülmüş ve (Şekil 1) aşağıda gösterildiği gibi kromatogramları ile sonuçlanan kayıtlı olduğu, bir akım yaratmak için artan bir katot elektron akım elde edilir. Voltaj değişim time.7 karşısında detektör içinden geçen karbon miktarı ile orantılıdır </li><li> Sistem numune çalışması bittikten sonra, her tepe entegrasyonu kontrol etmek gerekir. Yıldız Workstation yazılımı için,araç çubuğunda mavi tepe simgesine tıklayın. Her pikin renk üzerine tıklayın ve taban ayarlamak için okları sürükleyin. Piklerinin sonraki grup üzerine geçmeden önce her pik yeniden entegre. Pik analiz yazılımı herhangi bir genel kromatografisi yazılımı olabilir. </li><li> Yıldız Workstation yazılımı için, araç çubuğunda toplu rapor simgesine tıklayın. Sizin belirttiğiniz klasördeki örnek raporları yazdırmak için toplu rapora her örnek sürükleyin. Raporlama yazılımı en yaygın kromatografisi yazılım sistemleri ile özelleştirilebilir. </li><li> Raporlar seçtiğiniz bilgileri göstermek için programlanmış olabilir. Şu anda pik yüksekliği kullanabilirsiniz, ancak raporları da pik alanı kullanmak için programlanmış olabilir. </li><li> Sistemi kapatmak için kapatma yöntemi (parametreler Tablo 2&#39;de belirtildiği gibi) başlatmak, su banyosu kapatın ve kolon fırını sıcaklığı 30 ° C&#39;ye ulaştığında, hidrojen ve hava tankları kapatın </li></ol> 9. Etanol Veri <ol><li> Pik yüksekliği olarak çizilirbilinen her dış standart etanol konsantrasyonunun bir fonksiyonu (Şekil 2A). Her diyalizat örneği tarafından verilen pik yüksekliği gelen etanol konsantrasyonu hesaplamak için bu noktaları tarafından verilen lineer işlevini kullanın. </li><li> Saat boyunca diyaliz etanol konsantrasyonu grafiğini çizerek, bizim davranış oturum sırasında ilgi beyin bölgesi içinde etanol seviyesinin kalıp görebilir. (Şekil 2B) aşağıda gösterilen örnek veriler, kendi kendine uygulama oturum sırasında zaman karşısında diyaliz etanol konsantrasyonu olarak gösterilir. </li></ol> 10. Genel Bakım: Fiber her 500 delikler ve septum değiştirilmesi gerektiğini her 100 delikler Lif değiştirmek için <ol><li> Gaz kromatografisi tuş takımı Menü düğmesine basın, seçim 8400, enter tuşuna basın; değişim şırınga seçin, Enter tuşuna basın. Otosampler izin kendini konumlandırmak olacaktır lif (SPME Fiber Meclisi, 75 mikron Carboxen-PDMS, Supelco Analitik, Bellefonte, PA) kaldırılacak. </li><li> Fiber kaplama kapağını açın. Kontra somunu, ve elyaf montaj kaldırılması için izin vermek için hareket mandalı. Lif takımını çıkarın. Sökün sonra montaj fiber tutar ve somun lif sökün. </li><li> Yenisi ile eski lif değiştirin ve fiber montaj yenilemek. , Otomatik örnekleyici derleme değiştirin tekrar kilitlemeli ve yerine montajı vidalama. İşiniz bittiğinde, tuş takımındaki &quot;değiştirmek done&quot; tuşuna basın ve otomatik örnekleyici kullanımı için kendisini hazır olacak. </li></ol> Septum değiştirmek için <ol><li> Birincisi, sökün sonra septum (Hi-Temp 0,450 Dia. Jenerik Şartlanmış Bölme, Varian) kapsayan kapağı ve eski septum çıkarın. Uydurma aşağı Seat yeni septum. Kapağı tekrar vidalayın ve anahtarı ile sıkın. Lif septumun delinmiş ilk kez kırmak olmaz, böylece Ardından, delinme septumun bir enjeksiyon iğnesi kullanın. </li></ol&gt; 11. Temsilcisi Sonuçlar Şekil 1, etanol standartların konsantrasyonu için üç ve etanol kendi kendine uygulama oturum sonunda bir araya toplanan diyalizat sıçan numune için örnek kromatogramları göstermektedir. Etanol zirveleri, nispeten simetrik olması tutarlı tutma süreleri var ve gürültü oranı&gt; 10 için bir sinyal olmalıdır. Bu kriterlere uyulmaması sistem bakım gerektirir anlamına gelir. Kalite kromatografisi ve düzgün hazırlanmış standartlar doğrusal bir standart eğri (R2 ≥ 0.99; Şekil 2A) üretmek etanol toplanan diyalizat örneklerinin etanol konsantrasyonu hesaplamak için kullanılan öz idare kendi öz-yönetim oturumu sırasında (Şekil 2B) fazla hayvan . <img src="/files/ftp_upload/4142/4142fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> 1. Örnek kromatogramları Şekil. Etanol standart ya da numune diyalizat bir mikrolitrelik bir gaz c içine yüklendişişeye hromatograph ve metin içinde anlatıldığı gibi analiz edilmiştir. 2.5, 5.0 ve 10 mM etanol standartları elde edilen tepe noktalarının A) Kaplama. B) Tepe kendi kontrolünde etanol olan bir sıçan bir diyalizat örneği oluşturulur. <img src="/files/ftp_upload/4142/4142fig2.jpg" alt="Şekil 2," /> Şekil 2,. Şekil 1&#39;de gösterilen örnek deney grafiksel sonuçlanır. A) Etanol standart eğri. Bir etanol kendinden-yönetim oturumu boyunca diyalizat etanol konsantrasyonu B) Zaman kursu. <table border="1"><tbody><tr><td> Donanım </td><td> Parametre </td><td> Start-up ayarı </td><td> Ayarı Koşu </td><td> Dinlenme ayarı </td></tr><tr><td colspan="5"> 8400 Bruker (Varian) Autosampler </td></tr><tr><td></td><td> Enjeksiyon modu </td><td> SPME </td><td> SPME </td><td> n / a </td></tr> &lt;tr&gt; <td></td><td> Solvent nüfuz derinliği </td><td> 0% </td><td> % 20 </td><td> n / a </td></tr><tr><td></td><td> Örnek penetrasyon derinliği </td><td> % 20 </td><td> % 20 </td><td> n / a </td></tr><tr><td></td><td> Emme zamanı </td><td> 0.01 dk </td><td> 3 dk </td><td> n / a </td></tr><tr><td></td><td> Desorpsiyon zamanı </td><td> 19 dk </td><td> 1 dakika </td><td> n / a </td></tr><tr><td></td><td> Modu çözücü kaynağı temizleyin </td><td> Ben </td><td> Ben </td><td> n / a </td></tr><tr><td></td><td> Temiz modu adsorpsiyon ve desorpsiyon zamanı </td><td> 0.01 dk </td><td> 0.01 dk </td><td> n / a </td></tr><tr><td></td><td> Su banyosu (Otosampler ısıtır) * </td><td> 50 ° C </td><td> 50 ° C </td><td> Kapalı </td></tr><tr><td colspan="5"> CP-3800 Varian Gaz Kromatografi </td></tr><tr><td> Enjektör Fırın </td&gt; <td> Fırın gücü </td><td> Üzerinde </td><td> Üzerinde </td><td> Üzerinde </td></tr><tr><td></td><td> Fırın sıcaklığı </td><td> 250 ° C </td><td> 220 ° C </td><td> 30 ° C </td></tr><tr><td> Kolon Fırını </td><td> Stabilizasyon süresi </td><td> 0.10 dk </td><td> 0.10 dk </td><td> 0.10min </td></tr><tr><td></td><td> Sıcaklık </td><td> 65 ° C </td><td> 65 ° C </td><td> 30 ° C </td></tr><tr><td> Sütun </td><td> Mobil faz akış hızı </td><td> 8.5 ml / dak </td><td> 8.5 ml / dak </td><td> n / a </td></tr><tr><td></td><td> Sütun basmalı </td><td> ~ 6 psi </td><td> ~ 6 psi </td><td> ≥ 0.1 psi </td></tr><tr><td> FID dedektörü </td><td> Fırın gücü </td><td> Üzerinde </td><td> Üzerinde </td><td> Üzerinde </td></tr><tr><td></td><td> Sıcaklık </td><td> 220 ° C </td><td> 220 ° C </td><td> 120 ° C </td></tr&gt; <tr><td></td><td> Elektronik </td><td> Üzerinde </td><td> Üzerinde </td><td> Kapalı </td></tr><tr><td></td><td> Zaman sabiti </td><td> Hızlı </td><td> Hızlı </td><td> Hızlı </td></tr><tr><td></td><td> Menzil </td><td> 11 </td><td> 11 </td><td> 11 </td></tr><tr><td></td><td> Autozero </td><td> Evet </td><td> Evet </td><td> Evet </td></tr></tbody></table> Alev iyonizasyon algılama sistemi parametreleri Tablo 2. Gaz kromatograf. Bu tablo hazırlamak için kullanılan üç program için parametreler (start-up ayarları), run (ayarlar çalıştıran) gösterir ve sistemi korumak değil kullanmak (istirahat ayarları) iken.

<ol>
	<li>Geiger, B. M., Frank, L. E., Caldera-Siu, A. D., Pothos, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survivable+stereotaxic+surgery+in+rodents.">Survivable stereotaxic surgery in rodents.</a> J. Vis. Exp. (20), e880 (2008).</li><li>Howard, E. C., Schier, C. J., Wetzel, J. S., Gonzales, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dopamine+response+in+the+nucleus+accumbens+core-shell+border+differs+from+that+in+the+core+and+shell+during+operant+ethanol+self-administration.">The dopamine response in the nucleus accumbens core-shell border differs from that in the core and shell during operant ethanol self-administration.</a> Alcohol Clin. Exp. Res. 33, 1355-1365 (2009).</li><li>Doyon, W. M., York, J. L., Diaz, L. M., Samson, H. H., Czachowski, C. L., Gonzales, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine+activity+in+the+nucleus+accumbens+during+consummatory+phases+of+oral+ethanol+self-administration.">Dopamine activity in the nucleus accumbens during consummatory phases of oral ethanol self-administration.</a> Alcohol Clin. Exp. Res. 27, 1573-1582 (2003).</li><li>Pettit, H. O., Justice, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+dose+on+cocaine+self-administration+behavior+and+dopamine+levels+in+the+nucleus+accumbens.">Effect of dose on cocaine self-administration behavior and dopamine levels in the nucleus accumbens.</a> Brain Res. 539, 94-102 (1991).</li><li>Paxinos, G., Kus, L., Ashwell, K. W. S., Watson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Chemoarchitectonic Atlas of The Rat Forebrain. , (1998).</li><li>Paxinos, G., Watson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates. , (1986).</li><li>Skoog, D. A., Holler, F. J., Nieman, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Principles of Instrumental Analysis. , (1998).</li><li>Doyon, W. M., Anders, S. K., Ramachandra, V. S., Czachowski, C. L., Gonzales, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+operant+self-administration+of+10%+ethanol+plus+10%+sucrose+on+dopamine+and+ethanol+concentrations+in+the+nucleus+accumbens.">Effect of operant self-administration of 10% ethanol plus 10% sucrose on dopamine and ethanol concentrations in the nucleus accumbens.</a> J Neurochem. 93, 1469-1481 (2005).</li><li>Carrillo, J., Gonzales, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+single+exposure+to+voluntary+ethanol+self-administration+produces+adaptations+in+ethanol+consumption+and+accumbal+dopamine+signaling.">A single exposure to voluntary ethanol self-administration produces adaptations in ethanol consumption and accumbal dopamine signaling.</a> Alcohol. 45, 559-5566 (2011).</li><li>Howard, E. C., Schier, C. J., Wetzel, J. S., Duvauchelle, C. L., Gonzales, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+shell+of+the+nucleus+accumbens+has+a+higher+dopamine+response+compared+with+the+core+after+non-contingent+intravenous+ethanol+administration.">The shell of the nucleus accumbens has a higher dopamine response compared with the core after non-contingent intravenous ethanol administration.</a> Neuroscience. 154, 1042-1053 (2008).</li><li>Robinson, D. L., Lara, J. A., Brunner, L. J., Gonzales, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+Ethanol+Concentrations+in+the+Extracellular+Fluid+of+the+Rat+Brain.">Quantification of Ethanol Concentrations in the Extracellular Fluid of the Rat Brain.</a> J. Neurochem. 75, 1685-1693 (2000).</li><li>Gonzales, R. A., McNabb, J., Yim, H. J., Ripley, T., Bungay, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+Microdialysis+of+Ethanol+in+Rat+Striatum.">Quantitative Microdialysis of Ethanol in Rat Striatum.</a> Alcohol Clin. Exp. Res. 22, 858-867 (1998).</li></ol>

Bu makale Med Associates, Inc tarafından finanse edilmiştir

Uygulamalar ve sınırlamalar İlaç öz-yönetim modeli uyuşturucu bağımlılığı kemirgenler kullanılır. Bu şekilde modellenmiştir kötüye Birçok ilaç, ilaç merkezi bölme doğrudan teslim edildiği, intravenöz olarak tatbik edilebilmektedir. Bu bir öz-yönetim oturumu üzerinden dozunun yakından takip edebilmeleri sağlanmaktadır. Etanol sözlü genellikle kendi kontrolünde olduğundan, emilim ve metabolizmaları bireysel farklılıklar nedeniyle ilaç düzeylerini izlemek için çok daha zordur. Ilgi beyin bölgesinden örnek mikrodiyaliz kullanarak, biz sadece bölgede ulaşan etanol desen izlememiz mümkün değildir, ama biz de aynı anda her öz-yönetim aşamasında zamanla aynı bölgede nörotransmitter değişiklikleri takip edebiliyoruz. Beyin nörokimyasal değişiklikler ve ilaç kaynaklı tepkiler ilaç kötüye kullanımı ve bağımlılığı ile ilişkilidir, bu yüzden aynı anda mea yeteneğiBelirli kendinden-yönetim aşamalarında emin nörokimyasal ve ilaç konsantrasyonları çok güçlü ve benzersiz bir araç sağlar. Davranışı ile analitlerin diyalizat konsantrasyonları arasında ilişki için akılda tutulması gereken bir konu mikrodiyaliz tesisat fiziksel özellikleridir. Özellikle, toplama tüpüne mikrodiyaliz prob lümeni aktarılacak sıvısı için gereken süreyi önemli olduğunu, ve daha kısa sürelerde daha iyi. Süresi 90 saniyedir böylece bizim laboratuvar, biz probları inşa. Bu koşullar kullanılarak, diyalizat etanol konsantrasyonu arttıkça içecek ve sonrası içecek süreler boyunca azalır etanol tüketimi, başlangıcındaki bir accumbal dopamin artış olduğunu bulduk. 2,3,8,9 Bu deneyler , farmakolojik çalışmalardan elde edilen veriler ile kombine edildiğinde, bize ch etanol ve öz-yönetim ilişkili çevresel ipuçlarının kesinlikle farmakolojik etkilerini ayrıştırmak için izinnörotransmitter konsantrasyonlarda anges. Bu, kombine davranış-mikrodiyaliz teknikleri bu özel uygulaması, laboratuar mevcut araştırma alanları için uygun olduğunu belirtmek gerekir. Biz senkron kendi kendine uygulama davranışları için bu önlemler ilgili olabilir, böylece, aynı bölgede nörotransmitter değişiklikleri modeline göre beyin ulaşan etanol geçici olarak ortaya değerlendirmek için tasarlanmıştır. Türetilmiş diyalizat etanol konsantrasyonları vivo prob kurtarma için düzeltilmiş ve beyin etanol doku konsantrasyonu sadece bir kısmını temsil ediyor değil. Etanol kantitatif mikrodiyaliz gerekirse, sonda içine diffüze hücre dışı alanından ki etanol çıkarma fraksiyonu deneysel olarak tespit edilmelidir. Yöntemleri ve daha fazla tartışma için bizim laboratuvardan önceki yayınların bakın. 10,11,12 Bu protokol gaz ch kullanımını gösterir rağmenMikrodiyaliz numunelerin tepe boşluğu etanol katı faz mikro ile birlikte romatography, mikrodiyaliz örneğin etanol oranı analizi için diğer yöntemler de kullanılabilir. Ancak, alternatif yöntemlerin bazı dezavantajları muzdarip olabilir. Örneğin, daha az hassas analitik yöntemlerin Burada gösterilen 5-7 dk daha örnekleme kat daha gerektiren daha büyük bir örnek hacmi gerekebilir. Burada tartışılan sistemin tipi şişe üst kısmında yerleştirilmiş elyaf için emme izin vererek, mühürlü örnek şişesine içinde buhar fazı içinde etanol konsantre bir katı faz mikro kullanır. Bu, tipik olarak buhar, 50-100 mikrolitre enjekte edilmesini sağlar doğrudan tepe boşluğunun, örnekleme ile karşılaştırıldığında, tespit limiti geliştirir. Tepe boşluğunun, yöntemin diğer bir önemli avantajı analiz için enjekte edilen örnek, son derece temiz ve tuzları serbest olmasıdır. Mikrodiyaliz sıvı numune direkt enjeksiyonu aynı zamanda daha yüksek bir sensit ile birlikte kullanılabilirivity, ancak bu enjekte tuzları temizleme için gerekli düzenli bakım nedeniyle zaman aşağı fazla enstrüman gerektirir. Sorun giderme ve diğer notlar <ol><li> Denemeniz başlamadan önce, mikrodiyaliz set-up düzgün çalışıp çalışmadığını kontrol etmek ve herhangi bir sorun sorun-ateş kendinize bol zaman verin. Sizinle dışarı atlamaya hazır ACSF ile perfüze, set-up ekstra olduğunu göstermektedir bir çok edimsel oturumları her gün belirli bir saatte meydana eğilimi gibi, kendinizi zaman kazanmak için set-up arızalı. </li><li> Mikrodiyaliz probları, prob olarak beyine doku kesme tarafından üretilen doku hasarı en aza indirmek için, yaklaşık 5 dakikalık bir süre boyunca takılı olduğundan emin olun. </li><li> Operant odasına sıçan aktarırken, ikinci bir kişi operant programı init böylece transfer hattı (mikrodiyaliz kurulum parçası) Dolaşmasını vermez, böylece destek, ve faydalı olacaktırzamanında iated. </li><li> Eğer uygun sıcaklığa ulaşması için zaman Otosampler su banyosu bol vermek emin olun. Bizim sistemimiz genellikle iki saat 50 ° C&#39;ye ulaşması gerekir Ayrıca, örneklerin tam örnekleri analiz etmeden önce buharlaşmış olduğunu temin ederim. Biz genellikle görsel olarak bu örnek analiz başlamadan önce meydana geldiğini onaylayın. </li><li> Standart iyi analitik kimya uygulamaları takip edilmelidir. Bunlar arasında, ancak kişiler, ekipman ve prosedürler doğrulama, bunlarla sınırlı değildir. Kısacası, biz aşağıdaki yönergeleri istihdam: Bireysel kullanıcılar birden fazla gün boyunca standart konsantrasyonları ve doğrusal standart eğrileri (R2 ≥ 0.99) için tekrarlanabilir pik yükseklik değerleri oluşturmak için yeteneğini göstermelidir. GC-FID sisteminin düzgün çalıştığını doğrulamak için, standartlar herhangi bir diyalizat örneklerinde enjekte edilmeden önce analiz her zaman olmalıdır. Oluşturulan standart eğri bir R2 ≥ 0,99 olmalıdır. </li><li> Kullandığımız ekipman çoğu2010 yılında Agilent Technologies tarafından satın alındı ​​Varian, Inc aracılığıyla satın alınmıştır. Şu anda, Bruker Scientific Instruments Varian laboratuvar gaz kromatografi cihazları iş elde. Gelecekte alımları için, ya şirketinize danışın. </li><li> İşbu Protokol sıçanlar ile edimsel davranış gösterir, ancak izleyici davranışlarının daha bozulması küçük fare modeli ile meydana gelme olasılığı olduğunu farkında olmalıdır. Farkında olmak başka konu medial prefrontal korteks veya nükleus akumbens burada gösterilenden daha büyük derecede edimsel davranış bozabilir dışında beyin bölgeleri içine bir mikrodiyaliz prob yerleştirme uygulaması olduğunu. Yakından prob yerleşimi nedeniyle hasar davranış ciddi değişiklikler yaratır olmadığını belirlemek için çok sayıda davranış parametrelerini incelemek önemlidir. </li></ol>

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> % 95 Etanol </td><td> AAPER Alkol ve Chemical Co, Shelbyville, KY </td><td> E190, 111000190 </td></tr><tr><td> Ultra Saf Sakaroz </td><td> MP Biomedicals, LLC, Solon, OH </td><td> 821721 </td></tr><tr><td> Ultra Yüksek Saflıkta Helyum </td><td> Hava Gazı </td><td> HE UHP300 </td></tr><tr><td> Hava </td><td> Hava Gazı </td><td> AIZ300 </td></tr><tr><td> Hidrojen </td><td> Hava Gazı </td><td> AIZ300 </td></tr><tr><td> GC 2 ml şişe </td><td> Agilent </td><td> # 8010-0015 </td></tr><tr><td> PTFE / silikon septa ile GC flakon kapaklar </td><td> Agilent </td><td> # 8010-0084 </td></tr></tbody></table> Tablo 1. Özgül reaktifler

microdialysis of ethanol during operant ethanol self-administration and ethanol determination by gas chromatography

Operant kendi kendine uygulama yöntemleri yaygın etanol de dahil olmak üzere pek çok ilaç kötüye kullanımı, ve davranışsal ve farmakolojik etkilerini incelemek için kullanılmıştır. Bununla birlikte, tipik olarak, etil alkol kötüye birçok başka ilaçlar gibi intravenöz göre, oral olarak kendini yönetilir. Oral ilaçların farmakokinetiği intravenöz ilaçlar daha karmaşıktır. Etanol farmakolojik ve davranışsal etkileri arasındaki ilişkiyi anlama içme esnasında ve sonrasında beyne ulaşmasını etanol zaman ders bilgi gerektirdiğinden, biz zamanla beyin diyalizat etanol konsantrasyonları izlemek için alev iyonizasyon dedektörü ile in vivo mikrodiyaliz ve gaz kromatografisi kullanın. Kombine mikrodiyaliz-davranışsal deneyler çeşitli teknikler kullanılmasını gerektirebilir. Öz-yönetim ve neu çok sayıda test etmek için adapte edilebilir Bu makalede, stereotaksik cerrahi, davranışsal eğitim ve mikrodiyaliz,rochemical merkezli hipotez, sadece örnek toplama ve diyalizat etanol analizi sonraki aşamalara nasıl ilişkili olduğunu göstermek için dahil edilmiştir. Etanol çalışmalar için özel olan alev iyonizasyon dedektörü, gaz kromatografisi yoluyla etanol konsantrasyonu analiz Diyalizat ayrıntılı olarak tarif edilmektedir. Bu yöntemler ile üretilen verileri kendi kendine uygulama işlemi sırasında beyin ulaşan etanol modeli sergileyen ve aynı diyalizat örneklerin nörokimyasal analizi ile eşleştirilmiş zaman, sonuçlar etanol farmakolojik ve davranışsal etkileri ile ilgili yapılmasına olanak tanır.

Watch this Scientific Journal Video about Microdialysis of Ethanol During Operant Ethanol Self-administration and Ethanol Determination by Gas Chromatography at JoVE.com

Microdialysis of Ethanol During Operant Ethanol Self-administration and Ethanol Determination by Gas Chromatography

Operant etanol sırasında sıçanların beyinlerinde etanol konsantrasyonu zaman ders belirlemek için bir yöntem olup kendi kendine uygulama tarif edilmektedir. , Oluşturulan küçük miktarlar için gerekli hassasiyete sahiptir çünkü alev iyonizasyon dedektörü ile Gaz kromatografisi, diyalizat örnekleri etanol ölçmek için kullanılır.

Gaz kromatografisi ile operant etanol kendi kendine uygulama ve etanol belirleme sırasında etanol mikrodivaliz

Operant self-administration methods are commonly used to study the behavioral and pharmacological effects of many drugs of abuse, including ethanol.  ...

microdialysis-ethanol-during-operant-ethanol-self-administration

Research

JoVE Journal

Neuroscience

17.5K Görüntüleme.  The University of Texas at Austin. Operant etanol sırasında sıçanların beyinlerinde etanol konsantrasyonu zaman ders belirlemek için bir yöntem olup kendi kendine uygulama tarif edilmektedir. , Oluşturulan küçük miktarlar için gerekli hassasiyete sahiptir çünkü alev iyonizasyon dedektörü ile Gaz kromatografisi, diyalizat örnekleri etanol ölçmek için kullanılır.

Video: Microdialysis of Ethanol During Operant Ethanol Self-administration and Ethanol Determination by Gas Chromatography

A Method for Evaluating the Reinforcing Properties of Ethanol in Rats without Water Deprivation, Saccharin Fading or Extended Access Training

Operant oral self-administration methods are commonly used to study the reinforcing properties of ethanol in animals. However, the standard methods require saccharin/sucrose fading, water deprivation and/or extended training to initiate operant responding in rats. This paper describes a novel and efficient method to quickly initiate operant responding for ethanol that is convenient for experimenters and does not require water deprivation or saccharin/sucrose fading, thus eliminating the potential confound of using sweeteners in ethanol operant self-administration studies. With this method, Wistar rats typically acquire and maintain self-administration of a 20% ethanol solution in less than two weeks of training. Furthermore, blood ethanol concentrations and rewards are positively correlated for a 30 min self-administration session. Moreover, naltrexone, an FDA-approved medication for alcohol dependence that has been shown to suppress ethanol self-administration in rodents, dose-dependently decreases alcohol intake and motivation to consume alcohol for rats self-administering 20% ethanol, thus validating the use of this new method to study the reinforcing properties of alcohol in rats.

This protocol describes a novel and efficient method to quickly initiate operant responding for ethanol in rats that, contrary to standard methods, does not require water deprivation or saccharin/sucrose fading to initiate responding.

Su Yoksunluk, Sakarin Fading veya Genişletilmiş Erişim Eğitim olmadan Sıçanlarda Etanol Güçlendirme Özelliklerinin Değerlendirilmesi Bir Yöntem

Operant oral self-administration methods are commonly used to study the reinforcing properties of ethanol in animals. However, the standard methods ...

Davranış

High-Throughput Method for Measuring Alcohol Sedation Time of Individual Drosophila melanogaster

Drosophila melanogaster provides an excellent model to study the genetic underpinnings of alcohol sensitivity. In contrast to studies in human populations, the Drosophila model allows strict control over genetic background, and virtually unlimited numbers of individuals of the same genotype can be reared rapidly under well-controlled environmental conditions without regulatory restrictions and at relatively low cost. Flies exposed to ethanol undergo physiological and behavioral changes that resemble human alcohol intoxication, including loss of postural control, sedation, and development of tolerance. Here, we describe a simple, low-cost, high-throughput assay for assessing alcohol sedation sensitivity in large numbers of single flies. The assay is based on video recording of single flies introduced without anesthesia in 24-well cell culture plates in a set-up that enables synchronous initiation of alcohol exposure. The system enables a single person to collect individual ethanol sedation data on as many as 2,000 flies within an 8 h work period. The assay can, in principle, be extended to assess the effects of exposure to any volatile substance and applied to measure effects of acute toxicity of volatiles on other insects, including other fly species.

High-Throughput Method for Measuring Alcohol Sedation Time of Individual Drosophila melanogaster

Current methods to measure alcohol sensitivity in Drosophila are designed to test groups of flies. We present a simple, low-cost, high-throughput assay for assessing alcohol sedation sensitivity in large numbers of single flies. The method does not require specialized tools and can be performed in any laboratory using common materials.

Bireysel Drosophila melanogaster Alkol Sedasyon Süresini Ölçmek için Yüksek İşLenme Yöntemi

Drosophila melanogaster provides an excellent model to study the genetic underpinnings of alcohol sensitivity. In contrast to studies in human ...

The Motivation for Alcohol Reward: Predictors of Progressive-Ratio Intravenous Alcohol Self-Administration in Humans

The Progressive Ratio (PR) self-administration paradigm is a common pre-clinical method used to examine the motivation for a drug attributed to a craving, reward, or the relief of negative affect. The Computer-assisted Alcohol Infusion System (CAIS) enables intravenous alcohol self-administration behavior in humans. This system provides the investigator with control over the trajectory of each incremental breath alcohol concentration (BrAC) reward and the maximum BrAC allowed in a session. This paradigm allows participants to earn these alcohol rewards using a sequence of button presses specified by the investigator. The system employs a physiologically-based pharmacokinetic model-based algorithm to achieve the same incremental BrAC exposure in every participant. Participants (n = 11) took part in two identical sessions to examine test-retest reliability, and an additional group (n = 73) completed a single session. Sessions began with a 25 min priming phase: participants were instructed to press a button an increasing number of times per reward, accumulating four standardized incremental BrAC trajectories. The second phase comprised an ad-lib, PR paradigm lasting 125 min. Each reward required an increasing number of button presses. Measures of self-administration included: average and peak BrAC, total rewards earned, total grams of ethanol consumed per unit of total body water, the total number of button presses, and the average rate of button pressing. Self-administration measures were highly correlated both between and within sessions, demonstrating test-retest reliability and internal consistency. Recent drinking history was strongly associated with self-administration measures; heavier drinkers chose greater alcohol self-administration. These results indicate the reliability and sensitivity of this progressive-ratio intravenous alcohol self-administration method for assessing the motivational properties of alcohol, with the potential for improved testing of the efficacy of new medications thought to reduce consumption of alcohol. This method can be used to understand the genetic and environmental determinants of alcohol self-administration in humans.

This study aims to show that the Progressive-Ratio Computer-assisted Alcohol-Infusion System (CAIS) paradigm is a reliable and sensitive method that can be used to examine the motivating properties associated with alcohol self-administration in humans.

Alkol Ödülü için Motivasyon: İnsanlarda Progresif Oranlı İntravenöz Alkol Öz Yönetiminin Öngörücüleri

The Progressive Ratio (PR) self-administration paradigm is a common pre-clinical method used to examine the motivation for a drug attributed to a craving, ...

Quantification of Ethanol Levels in Zebrafish Embryos Using Head Space Gas Chromatography

Fetal Alcohol Spectrum Disorders (FASD) describe a highly variable continuum of ethanol-induced developmental defects, including facial dysmorphologies and neurological impairments. With a complex pathology, FASD affects approximately 1 in 100 children born in the United States each year. Due to the highly variable nature of FASD, animal models have proven critical in our current mechanistic understanding of ethanol-induced development defects. An increasing number of laboratories has focused on using zebrafish to examine ethanol-induced developmental defects. Zebrafish produce large numbers of externally fertilized, genetically tractable, translucent embryos. This allows researchers to precisely control timing and dosage of ethanol exposure in multiple genetic contexts and quantify the impact of embryonic ethanol exposure through live imaging techniques. This, combined with the high degree of conservation of both genetics and development with humans, has proven zebrafish to be a powerful model in which to study the mechanistic basis of ethanol teratogenicity. However, ethanol exposure regimens have varied between different zebrafish studies, which has confounded the interpretation of zebrafish data across these studies. Here is a protocol to quantify ethanol concentrations in zebrafish embryos using head space gas chromatography.

This work describes a protocol to quantify ethanol levels in a zebrafish embryo using head space gas chromatography from proper exposure methods to embryo processing and ethanol analysis.

Kafa Uzayı Gaz Kromatografisi Kullanan ZebraBalığı Embriyolarında Etanol Düzeylerinin Ölçülmesi

Fetal Alcohol Spectrum Disorders (FASD) describe a highly variable continuum of ethanol-induced developmental defects, including facial dysmorphologies ...

Gelişim Biyolojisi

An Inexpensive, Scalable Behavioral Assay for Measuring Ethanol Sedation Sensitivity and Rapid Tolerance in Drosophila

Alcohol use disorder (AUD) is a serious health challenge. Despite a large hereditary component to AUD, few genes have been unambiguously implicated in their etiology. The fruit fly, Drosophila melanogaster, is a powerful model for exploring molecular-genetic mechanisms underlying alcohol-related behaviors and therefore holds great promise for identifying and understanding the function of genes that influence AUD. The use of the Drosophila model for these types of studies depends on the availability of assays that reliably measure behavioral responses to ethanol. This report describes an assay suitable for assessing ethanol sensitivity and rapid tolerance in flies. Ethanol sensitivity measured in this assay is influenced by the volume and concentration of ethanol used, a variety of previously reported genetic manipulations, and also the length of time the flies are housed without food immediately prior to testing. In contrast, ethanol sensitivity measured in this assay is not affected by the vigor of fly handling, sex of the flies, and supplementation of growth medium with antibiotics or live yeast. Three different methods for quantitating ethanol sensitivity are described, all leading to essentially indistinguishable ethanol sensitivity results. The scalable nature of this assay, combined with its overall simplicity to set-up and relatively low expense, make it suitable for small and large scale genetic analysis of ethanol sensitivity and rapid tolerance in Drosophila.

An Inexpensive, Scalable Behavioral Assay for Measuring Ethanol Sedation Sensitivity and Rapid Tolerance in Drosophila

Straightforward assays for measuring ethanol sensitivity and rapid tolerance in Drosophila facilitate the use of this model organism for investigating these important ethanol-related behaviors. Here, a relatively simple, scalable assay for measuring ethanol sensitivity and rapid tolerance in flies is described.

Etanol sedasyon Hassasiyet ve hızlı Hoşgörü Ölçüm Ucuz bir, Ölçeklenebilir Davranış Deneyi<em&gt; Drosophila</em

Alcohol use disorder (AUD) is a serious health challenge. Despite a large hereditary component to AUD, few genes have been unambiguously implicated in ...

Nörobilim

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We demonstrate a simple way to tap into the fly reward system, modify experiences related to natural reward, and use voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states. The approach serves as a relevant tool to study the neurons and genes that play a role in experience-mediated changes of internal state. The protocol is composed of two discrete parts: exposing the flies to rewarding and nonrewarding experiences, and assaying voluntary ethanol consumption as a measure of the motivation to obtain a drug reward. The two parts can be used independently to induce the modulation of experience as an initial step for further downstream assays or as an independent two-choice feeding assay, respectively. The protocol does not require a complicated setup and can therefore be applied in any laboratory with basic fly culture tools.

A Simple Way to Measure Alterations in Reward-seeking Behavior Using Drosophila melanogaster

We describe a protocol for inducing rewarding and nonrewarding experiences in fruit flies (Drosophila melanogaster) using voluntary ethanol consumption as a measure for changes in reward states.

Kullanımı Ödül arayan davranış değişiklikleri Tedbir Basit Yolu<em&gt; Drosophila melanogaster</em

We describe a protocol for measuring ethanol self-administration in fruit flies (Drosophila melanogaster) as a proxy for changes in reward states. We ...

Microdialysis of Excitatory Amino Acids During EEG Recordings in Freely Moving Rats

Microdialysis is a well-established neuroscience technique that correlates the changes of neurologically active substances diffusing into the brain interstitial space with the behavior and/or with the specific outcome of a pathology (e.g., seizures for epilepsy). When studying epilepsy, the microdialysis technique is often combined with short-term or even long-term video-electroencephalography (EEG) monitoring to assess spontaneous seizure frequency, severity, progression and clustering. The combined microdialysis-EEG is based on the use of several methods and instruments. Here, we performed in vivo microdialysis and continuous video-EEG recording to monitor glutamate and aspartate outflow over time, in different phases of the natural history of epilepsy in a rat model. This combined approach allows the pairing of changes in the neurotransmitter release with specific stages of the disease development and progression. The amino acid concentration in the dialysate was determined by liquid chromatography. Here, we describe the methods and outline the principal precautionary measures one should take during in vivo microdialysis-EEG, with particular attention to the stereotaxic surgery, basal and high potassium stimulation during microdialysis, depth electrode EEG recording and high-performance liquid chromatography analysis of aspartate and glutamate in the dialysate. This approach may be adapted to test a variety of drug or disease induced changes of the physiological concentrations of aspartate and glutamate in the brain. Depending on the availability of an appropriate analytical assay, it may be further used to test different soluble molecules when employing EEG recording at the same time.

Here, we describe a method for in vivo microdialysis to analyze aspartate and glutamate release in the ventral hippocampus of epileptic and non-epileptic rats, in combination with EEG recordings. Extracellular concentrations of aspartate and glutamate may be correlated with the different phases of the disease.

Microdialysis fareler serbestçe hareket EEG kayıtları sırasında eksitatör Amino asit

Microdialysis is a well-established neuroscience technique that correlates the changes of neurologically active substances diffusing into the brain ...

Murine Drinking Models in the Development of Pharmacotherapies for Alcoholism: Drinking in the Dark and Two-bottle Choice

Alcohol Use Disorder (AUD) is a major problem with more than an estimated 76 million people worldwide meeting the diagnostic criteria. Current treatments are limited to three FDA-approved medications that are largely ineffective even when combined with psychosocial intervention, as is evident by the high relapse rate. As such, the search for more novel treatments represents an important public health goal. To this end, the following protocol utilizes two simple rodent drinking models to assess the preclinical efficacy of lead anti-alcohol compounds: two-bottle choice (TBC) and drinking in the dark (DID). The former allows mice to voluntary drink in moderation while the latter induces mice to voluntary consume a large amount of alcohol in a short period that mimics binge drinking. The simple and high throughput nature of both of these paradigms allow for rapid screening of pharmacological agents or for identifying strains of mice that exhibit certain voluntary drinking behavior.

Alcohol Use Disorder (AUD) is a major national health problem and the development of more effective treatments is&#160;required to offset the needs of this patient population. To this end, the following protocol utilizes two simple rodent drinking models to assess the preclinical efficacy of lead anti-alcohol compounds.

Fare modelleri sağaltımı geliştirme alkolizm için içme: karanlık ve iki şişe seçiminde içme

Alcohol Use Disorder (AUD) is a major problem with more than an estimated 76 million people worldwide meeting the diagnostic criteria. Current treatments ...

Tıp

Modeling Alcohol Use Disorder Using Chronic Intermittent Ethanol Vapor Exposure

Chronic Intermittent Ethanol Vapor Exposure Paired with Two-Bottle Choice to Model Alcohol Use Disorder

Alcohol use disorder (AUD) is a chronic alcohol-related disorder that typically presents as uncontrolled drinking and preoccupation with alcohol. A key component of AUD research is using translationally relevant preclinical models. Over the past several decades, a variety of animal models have been used to study AUD. One prominent model of AUD is the chronic intermittent ethanol vapor exposure (CIE) model, which is a well-established approach for inducing alcohol dependence in rodents through repeated cycles of ethanol exposure via inhalation. To model AUD in mice, the CIE exposure is paired with a voluntary two-bottle choice (2BC) of alcohol drinking and water to measure the escalation of alcohol drinking. The 2BC/CIE procedure involves alternating weeks of 2BC drinking and CIE, which repeat until the escalation of alcohol drinking is achieved. In the present study, we outline the procedures for performing 2BC/CIE, including the daily use of the CIE vapor chamber, and provide an example of escalated alcohol drinking in C57BL/6J mice using this approach.

Presented here is a protocol for the 2BC/CIE model of alcohol dependence in mice to study alcohol use disorder.

Alcohol use disorder (AUD) is a chronic alcohol-related disorder that typically presents as uncontrolled drinking and preoccupation with alcohol. A key ...

Intermittent-Access Two-Bottle Choice Drinking with Lick Detection in Rats

Modeling Alcohol Consumption in Rodents Using Two-Bottle Choice Home Cage Drinking and Microstructural Analysis

Two-bottle choice home cage drinking is one of the most widely used paradigms to study ethanol consumption in rodents. In its simplest form, animals are provided with access to two drinking bottles, one of which contains regular tap water and the other ethanol, with daily intake measured by change in bottle weight over the 24 h period. Consequently, this approach requires no specialized laboratory equipment. While such ease of implementation is likely the greatest contributor to its widespread adoption by preclinical alcohol researchers, the resolution of drinking data acquired using this approach is limited by the number of times the researcher measures bottle weight (e.g., once daily). However, the desire to examine drinking patterns in the context of overall intake, pharmacological interventions, and neuronal manipulations has prompted the development of home cage lick detection systems that can acquire data at the level of individual licks. Although a number of these systems have been developed recently, the open-source system, LIQ HD (Lick Instance Quantifier Home cage Device), has garnered significant attention in the field for its affordability and user friendliness. Although exciting, this system was designed for use in mice. Here, we review appropriate procedures for standard and lickometer-equipped two-bottle choice home cage drinking. We also introduce methods for adapting the LIQ HD system to rats including hardware modifications to accommodate larger cage size and a redesigned 3D printed bottle holder compatible with standard off-the-shelf drinking bottles. Using this approach, researchers can examine daily drinking patterns in addition to levels of intake in many rats in parallel thereby increasing the resolution of acquired data with minimal investment in additional resources. These methods provide researchers with the flexibility to use either standard bottles or a lickometer-equipped apparatus to interrogate the neurobiological mechanisms underlying alcohol drinking depending on their precise experimental needs.

This protocol describes a standard intermittent-access two-bottle choice home cage drinking paradigm to model alcohol consumption in rats. In addition, it provides step-by-step instructions to augment the standard protocol with a DIY lick detection system that enables microstructural analysis of drinking behavior.

Two-bottle choice home cage drinking is one of the most widely used paradigms to study ethanol consumption in rodents. In its simplest form, animals are ...

Gaz kromatografisi ile operant etanol kendi kendine uygulama ve etanol belirleme sırasında etanol mikrodivaliz

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler