Bu eser Jackson Laboratuvarı Kanser Merkezi Pilot Hibe ve Maine Kanseri Vakfı tarafından desteklenmektedir.

1. Protokol <ol><li> 0.1 mg ketamin ve vücut ağırlığı başına 1 g xylazine, 0.01 mg arasında bir dozda ketamin ve ksilazin ile fare anestetize. Carprofen (vücut ağırlığının 1 g başına 0.005 mg) analjezi için kullanılır ve ameliyat öncesi uygulanır. </li><li> Diş matkap gibi cerrahi aletler, her otoklavda buharla sterilize vardır. Toplu ameliyatlar yapılacak ise, cerrahi aletlerin ipuçları sonraki her ameliyattan önce bir cam boncuk sterilizatör (Güzel Bilim Araçları FST 250) ile yeniden sterilize edilmelidir. </li><li> Fare ayak tutam yanıt yokluğu ile değerlendirilen anestezi cerrahi bir düzlem, ulaştığında, o zaman ~ 37 ° C arasında bir vücut sıcaklığını korumak için ısıtılmış pad üzerinde yerleştirilen bir pamuk ped üzerine yerleştirilir Anestezi derinliği ameliyat sırasında sıklıkla izlenir. </li><li> Kürk kabaca üçgen alanda dorsal kafa ~ burun için kaudal 3 mm kaldırılır ve ce kaudal uzananrvical omurları. Oftalmik merhem dehidratasyon ve tahrişe karşı onları korumak için gözlere uygulanır. </li><li> Fare karın recumbancy yerleştirilir ve deri cerrahi iyot,% 70 etanol, ve steril çubuklar ile dezenfekte edilir. Kafatasının frontal ve parietal kemiklerin dorsal kapsayan bir deri 0.8 x 1.0 cm flep ince makas kullanılarak kaldırılır. </li><li> Bir topikal analjezik,% 0.5 lidokain, yaranın periferinde periost ve maruz dokulara lokal uygulanır. Periost hafifçe bir neşter bıçağı ile kafatası kazıyarak kaldırılır, bu kemiğe yapışma siyanoakrilat yapıştırıcı yardımcı olacaktır. </li><li> Ilgi kortikal alan bir işaretleyici ile kafatası üzerinde belirtilmiştir. Ilgi alanı yatan büyük damarlara zarar görmesini önlemek için, kafatasının dikiş hatları üzerinde yer olmamalıdır. </li><li> Siyanoakrilat yapıştırıcı ince bir tabaka halinde dışında serosanguinous sıvı sızıntı önlemek için, yara kenar uygulanır ve kafatası için birİlgi alanı. </li><li> Işık aktive diş çimento kafatası sızdırmazlık için protokol kullanılır. Diş çimentosu, kullanımından önce inceltme amaçlı alan hariç tüm maruz kafatası primerler ile ve daha sonra ışık ile aktive olan diş çimento kiti ile bağlayıcı madde ile muamele edilir. Bağlayıcı madde kuruduktan sonra, ışıkla aktive olan diş çimentosu kafatası kapak tatbik edilir. Sonraki cerrahi ve görüntüleme için fare başı sabitlemek için, steril bir # 00-90 altıgen somunu inceltilmesi alanından uzakta diş çimento içine yerleştirilmiştir. Işık aktif diş çimento kullanımı bize tüm prosedürü tamamlamak için acele etmeden kafatası hazırlamanızı sağlar. Kafatası üzerinde diş çimento hazırlık tamamlandıktan sonra, diş çimento görünür ışık ile tedavi edilir. </li><li> Diş çimento tedavi edildikten sonra, stereotaktik cihaz bir başlık tutucu bir # 00-90 vida kullanarak fare kafasına altıgen somunu monte edilir. </li><li> Bir droda sıcaklığında op,% 0.9 steril salin inceltilmesi kafatası bölgeye uygulanır. Bir stereomikroskop yardımı ile, bir yüksek-hızlı mikro-matkap ilgi bölgesi üzerinde (çapı tipik olarak ~ 4-5 mm) kafatasının dairesel bir alanda inceltmek için kullanılır. Sondaj ve delinen bölgeye salin uygulaması yatan serebral dokuya termal yaralanmalardan kaçınmak için inceltme işlemleri sırasında zaman zaman yapılmaktadır. Tuzlu ısı emer ve aynı zamanda kemik yumuşatmak yardımcı olur. </li><li> Fare kafatası süngerimsi kemiğin kalın bir tabaka sandviç, kompakt kemiğin ince iki katmandan oluşmaktadır. Kompakt ve kemik süngersi kemiğin en dış tabaka matkap kullanılarak kaldırılır. </li><li> Süngerimsi kemik çoğunluğu kaldırıldıktan sonra, süngerimsi kemik içinde kalan boşluklar sondaj iç kompakt kemik tabakası yaklaştığını belirten bir diseksiyon mikroskop altında görülebilir. Bu aşamada, hala kafatası kalınlık fazla 50 um olmalıdır. Kafatası inceltme olmalıdırçok ince (~ 20 mikron) ve düzgün hazırlanması elde etmek için dikkatli devam. </li><li> Kafatasının istenilen kalınlıkta (~ 20 mikron) sağlandıktan sonra, kafatası ilk yaklaşık 10 dakika boyunca elmas pasta ile ısmarlama silikon kamçı (6-15 mikron) kullanılarak parlatılır. Elmas pasta cila iki amaca hizmet eder. Birincisi, daha böylece alttaki beyin dokusuna kazara hasar kaçınarak, inceltilmiş kafatası üzerinde baskı uygulamadan kafatası incelir. Ince taneli kalay oksit daha kafatası parlatma için kullanılır önce İkincisi, inceltilmiş kafatası için bir başlangıç ​​parlatma adım olarak hizmet vermektedir. </li><li> Elmas macun parlatma ardından, inceltilmiş kafatası yaklaşık 10 dakika boyunca kalay oksit ile parlatılır. Kafatası cilalı kez inceltilmiş kafatası temiz görünene kadar, kalay oksit salin ile uzak temizlendi. </li><li> Kranyal pencere in vivo görüntüleme uzunlamasına için kullanılacak ise, bu aşamada, temizlenmiş ince kafatası alan kurutulur. Berrak küçük bir damlasiyanoakrilat yapıştırıcı kafatası pencere mühürlemek için uygulanır. Inceltilmiş kafatası ve lamel arasında siyanoakrilat yapıştırıcı tabaka mümkün olduğu kadar ince olmalıdır. </li><li> Bir enjeksiyon bu aşamada, bir bağlantı noktaları kafatası pencere oluşturulduktan sonra yapılacak ise, bir 26-gauge iğne enjektör cilalı ince pencere kafatası bir tarafında küçük bir açıklık oluşturmak için kullanılır. Bu açılış GBM hücre enjeksiyon için kullanılır. </li><li> Çapı yaklaşık 50 mikron açarak ucu olan bir steril cam pipet pipet çektirmesi kullanılarak çekilir. Bu pipet GBM hücre enjekte etmek için kullanılabilir, ve bir micromanipulator üzerine yüklenir. Pipet GBM hücre enjeksiyon yerinde nihai görüntüleme sitesinden uzak olacak şekilde 30 derecelik bir açıyla yüklenir. Pipet ucu bir teşrih mikroskopu altında uzaklaştırılır. GBM hücre süspansiyonu bir şırınga pompası ile emme ile pipeti içine önden yüklemeli olduğunu. </li><li> Enjeksiyon pipet GBM hücreleri ile yüklendikten sonra, fare inci altında geri hareket ettirilire mikroskop. Enjeksiyon pipet kafatası pencere içinde küçük açıklığa doğru indirilir ve son olarak bir micromanipulator kullanılarak açıklıktan beyin içine yerleştirilir. GBM bir hücre süspansiyonu 1 ul beyin yüzeyinden beyin 100-200 mikron (: 0.1 ul / dk, uzun süre 10 dakika hızı) içine enjekte edilir. </li><li> Kafatası kurutulur, berrak siyanoakrilat yapıştırıcı küçük bir damla kuru kafatası ile uygulanır, ve 3 mm boyutu # 1 lamel bir parça ince ve parlak kafatası alanına yapıştırılır. Lamel ve komşu diş çimento arasındaki boşluk siyanoakrilat yapıştırıcı ile mühürlenir. </li><li> Ameliyattan sonra, fare 1 ml ılık steril serum fizyolojik ile cilt altına enjekte edilir ve tam anestezi kurtarıldı kadar vücut ısısını korumak için ek bir ısı ile sağlanır. </li><li> Görüntüleme için, fareler 0.1 mg ketamin ve vücut ağırlığı başına 1 g xylazine, 0.01 mg arasında bir dozda ketamin ve ksilazin ile anestezi uygulanmıştır. Fare özel stereotaktik çerçeve kullanılarak immobilize edilmiştirmikroskop altında. In vivo görüntüleme tekrarlanan günlük bazda yapılırsa farelerin ketamin tekrarlanan kullanımı ile bağımlılık belirtileri gösteriyor gibi, isofluorane, daha iyi bir seçenek olacaktır. </li></ol> 2. Temsilcisi Sonuçlar Başarılı Limanlar kraniyal pencere ameliyat kraniyal pencere haftalar veya aylar için açık kalmasını sağlar. Backscattered ışık kullanılarak görselleştirilmiş olarak Şekil 1 Limanlar kranial penceresinin altındaki damar gösterir. Bu damar görüntüleri tekrarlanan görüntüleme için aynı beyin bölgeleri bulmak için simgesel olarak kullanılmıştır. Damar endotel hücreleri ve GBM hücreleri hem görselleştirmek için, B6.Cg-Gt (ROSA) 26Sor tm9 (CAG-tdTomato ile vasküler endotel hücreleri etiketler B6.Cg-Tg (Tek-CRE) 1Ywa / J fare geçti ) Hze / J fare ve kırmızı floresan proteini tdTomato etiketli vasküler endotel hücreleri ile oluşturulan fareler. Biz o zaman bu mil üzerinde portları kraniotomi işlem gerçekleştirildice ve kraniyal pencere tarafında küçük bir açıklıktan beyinlerinin içine GFP etiketli GBM hücreleri enjekte. Daha sonra enjekte edilen fareler üzerinde boylamasına iki-fotonlu görüntüleme in vivo olarak gerçekleştirildi. Lazer dalgaboyu GFP ve tdTomato hem uyarma sonuçlandı 910 nm olarak belirlenmiştir. İki foton görüntüleme eşzamanlı yeşil / kırmızı floresans saptama yeteneği için iki dedektör ile özel yapılmış iki foton lazer tarama mikroskop üzerinde yapıldı. Şekil 2 damar yakınındaki enjekte GBM hücreleri ait glioma inisiyasyon vivo örnek gösterir. Limanlar kraniyal pencere de in vivo görüntüleme time-lapse kronik için mükemmel bir seçimdir. Şekil 3 Limanlar ameliyat olmadan bir fare kortikal bölümden GFAP boyama, Limanlar cerrahisi sonrası bir fare 7 gün ve bir fare 7 gün Limanlar cerrahisi sonrası ve gösterir salin enjeksiyonu. Bu görüntülerden fare olduğunu por cerrahi ve fare olmadan bellidirTS cerrahi beyin penetrasyonu ve salin enjeksiyonu Pipeti nedeniyle, salin enjeksiyonu takiben ise, gliozis fare beyin dokusunda görülür, gliozis yok. Bu sonuç, gliozis kraniyal pencere burada açıklanan bağlantı noktaları genelde bir &quot;açık kafatası&quot; kronik kraniyal pencere ile ilişkili gliozis yol olmadığını bağımsız doğrulama sağlayan, Limanlar kraniyal pencere altında oluşmaz göstermektedir. Şekil 4 yüksek çözünürlüklü gösterir Limanlar pencere de in vivo görüntüleme yüksek çözünürlüklü için mükemmel bir seçim olduğunu gösteren dendritik ameliyat günü aynı fare (Gün 0) dan dikenleri ve Limanlar pencere oluşturulduktan sonra 32 gün (Gün 32), görüntüleme. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/4201/4201fig1.jpg" /> Şekil 1. Backscattered ışık kullanılarak parlatılmış ve güçlendirilmiş inceltilmiş kafatası kraniyal pencere altında vaskülatürün Görselleştirme. Gün t temsil<html> Ameliyattan sonra gün o sayı; resimler hemen GBM hücre enjeksiyonu tamamlandıktan sonra ameliyat günü başlayan alınmıştır. Ölçek çubuğu:. 0.5 mm <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/4201/4201fig1large.jpg" target="_blank">büyük bir rakam görmek için buraya tıklayın</a> . <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/4201/4201fig2.jpg" /> Şekil 2. In vivo olarak enjekte GBM hücreleri ve damar Görselleştirme. Tek-Cre ve ROSA26 CAG-tdTomato hem taşıma Fareler GBM hücre enjeksiyon için kullanılmıştır. Vasküler endotel hücreleri tdTomato (kırmızı) ile işaretlendi ve GBM hücreleri GFP (yeşil) ile işaretlendi. Görüntüleri GBM hücre enjeksiyonundan sonra 24 saat başlayarak elde edildi. Bakış 10-12 bitişik alanların toplam alındı ​​ve nihai görüntüleri üretmek için, toplam alanının merkezinde tanımlanan enjekte GBM hücreleri ile, birbirlerine bitişik monte edilmiştir. Gün cerrahi sonrası gün sayısını temsil eder. Ölçek çubuğu: 100 mikron.href = &quot;http://www.jove.com/files/ftp_upload/4201/4201fig2large.jpg&quot; target = &quot;_blank&quot;&gt; büyük bir rakam görmek için buraya tıklayın. <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/4201/4201fig3.jpg" /> Şekil 3. Gliozis Limanlar kraniyal pencere ameliyat sonrasında meydana gelmez. Üst paneller: Düşük büyütme altında Fare beynin koronal bölümünde. Sol panel: Herhangi kraniyal pencere ameliyat olmadan bir fare, hiç GFAP aktivasyonu beyin dokusunda görülmektedir. Orta paneli: beynin sağ tarafında oluşturulan bir Limanlar kraniyal pencere ile bir fare, hiç GFAP aktivasyonu beyin dokusunda görülmektedir. Sağ panel: PORTS pencere kenarındaki bir Limanlar kraniyal pencere ve salin enjeksiyonu ile bir fare. GFAP etkinleştirme bağlantı noktaları penceresinin tarafında görülmüştür, ama sağlam beyin dokusunun yan edilir. Ölçek çubuğu: 1 mm. Alt panel: Üst panel görüntülerin beyaz kutu içinde belirtildiği gibi alanlarda beyin dokularında daha yüksek güç görüntüler. Ölçek çubuğu: 100 mikron. <ahref = &quot;http://www.jove.com/files/ftp_upload/4201/4201fig3large.jpg&quot; target = &quot;_blank&quot;&gt; büyük bir rakam görmek için buraya tıklayın. <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/4201/4201fig4.jpg" /> Şekil 4. Yüksek çözünürlüklü Thy-1 YFPH farelerden alınan dendritik diken görüntüleme. Görüntüleri Limanlar ameliyat gününde alınan ve 32 gün Limanlar ameliyat sonrası alındı. Çoğu dikenler gününde sunduğumuz görüntülerden 0 Limanlar ameliyatı takiben açıkça görülebilir 32 gün vardır açıktır. Ölçek çubuğu: 2 mikron.

<ol>
	<li>Paulino, A. C., Teh, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+brain+tumors.">Treatment of brain tumors.</a> N. Engl. J. Med. 352, 2350-2353 (2005).</li><li>Stupp, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiotherapy+plus+concomitant+and+adjuvant+temozolomide+for+glioblastoma.">Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma.</a> N. Engl. J. Med. 352, 987-996 (2005).</li><li>Singh, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+human+brain+tumour+initiating+cells.">Identification of human brain tumour initiating cells.</a> Nature. 432, 396-401 (2004).</li><li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hallmarks+of+cancer:+the+next+generation.">Hallmarks of cancer: the next generation.</a> Cell. 144, 646-674 (2011).</li><li>Cheng, L., Bao, S., Rich, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+therapeutic+implications+of+cancer+stem+cells+in+glioblastoma.">Potential therapeutic implications of cancer stem cells in glioblastoma.</a> Biochem. Pharmacol. 80, 654-665 (2010).</li><li>Cheng, L., Ramesh, A. V., Flesken-Nikitin, A., Choi, J., Nikitin, A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+for+cancer+stem+cell+research.">Mouse models for cancer stem cell research.</a> Toxicol. Pathol. 38, 62-71 (2010).</li><li>Dirks, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+tumor+stem+cells:+the+cancer+stem+cell+hypothesis+writ+large.">Brain tumor stem cells: the cancer stem cell hypothesis writ large.</a> Mol. Oncol. 4, 420-430 (2010).</li><li>Ebben, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cancer+stem+cell+paradigm:+a+new+understanding+of+tumor+development+and+treatment.">The cancer stem cell paradigm: a new understanding of tumor development and treatment.</a> Expert Opin. Ther. Targets. 14, 621-632 (2010).</li><li>Germano, I., Swiss, V., Casaccia, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+brain+tumors,+neural+stem+cell,+and+brain+tumor+cancer+cells:+where+is+the+link.">Primary brain tumors, neural stem cell, and brain tumor cancer cells: where is the link.</a> Neuropharmacology. 58, 903-910 (2010).</li><li>Park, D. M., Rich, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biology+of+glioma+cancer+stem+cells.">Biology of glioma cancer stem cells.</a> Mol. Cells. 28, 7-12 (2009).</li><li>Bao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell-like+glioma+cells+promote+tumor+angiogenesis+through+vascular+endothelial+growth+factor.">Stem cell-like glioma cells promote tumor angiogenesis through vascular endothelial growth factor.</a> Cancer Res. 66, 7843-7848 (2006).</li><li>Calabrese, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+perivascular+niche+for+brain+tumor+stem+cells.">A perivascular niche for brain tumor stem cells.</a> Cancer Cell. 11, 69-82 (2007).</li><li>Barami, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+of+neural+stem+cells+with+their+vascular+niche:+implications+in+the+malignant+progression+of+gliomas.">Relationship of neural stem cells with their vascular niche: implications in the malignant progression of gliomas.</a> J. Clin. Neurosci. 15, 1193-1197 (2008).</li><li>Gilbertson, R. J., Rich, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Making+a+tumour's+bed:+glioblastoma+stem+cells+and+the+vascular+niche.">Making a tumour's bed: glioblastoma stem cells and the vascular niche.</a> Nat. Rev. Cancer. 7, 733-736 (2007).</li><li>Cho, R. W., Clarke, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+cancer+stem+cells.">Recent advances in cancer stem cells.</a> Curr. Opin. Genet. Dev. 18, 48-53 (2008).</li><li>Drew, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+optical+access+through+a+polished+and+reinforced+thinned+skull.">Chronic optical access through a polished and reinforced thinned skull.</a> Nat. Methods. 7, 981-984 (2010).</li></ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Başarılı Limanlar kraniyal pencere anahtarı inceltme ve parlatma olduğunu. Incelme ilk hızlı yapılabilir iken, bakım geniş bir alana kafatası incelmesi homojen sağlamak için alınmalıdır. Biz genellikle serum fizyolojik mikrotur kez kafatasının geçti kısa bir süre sonra buharlaşır böyle, kafatasına salin ince bir tabaka uygulayın ve ardından ince kafatası tek geçişte bir anda. Bu kafatası bize yavaş fakat homojen daha ince sağlar. Mikroskop altında Kararlı bir yandan da anahtarıdır. K...

<table border="1"><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar (isteğe bağlı) </td></tr><tr><td> Sodyum piruvat ile DMEM/F12 (1:1) </td><td> Termo Sci Hyclone </td><td> SH3026101 </td><td></td></tr><tr><td> B-27 Serum Ücretsiz Supplement (50x) </td><td> Invitrogen </td><td> 17504-044 </td><td></td></tr><tr><td> GlutaMax-1 Ek </td><td> Invitrogen </td><td> 35050061 </td><td></td></tr><tr><td> Penisilin-Streptomisin Çözümü </td><td> Termo Sci Hyclone </td><td> SV30010 </td><td></td></tr><tr><td> Accutase-Enzim Hücre Dekolmanı Orta </td><td> eBiosciences </td><td> 00-4555-56 </td><td></td></tr><tr><td> T25 matara-havalandırma kapağı yeşil </td><td> SARSTEDT </td><td> 83.1810.502 </td><td></td></tr><tr><td> % 70 alkol </td><td> JAX LAHS </td><td></td><td></td></tr><tr><td> % 10 povidon-iyot topikal çözüm </td><td> JAX LAHS </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Ketamin HCl </td><td> Butler Hayvan Sağlığı Kaynağı </td><td> NDC # 11695-0550-1 </td><td></td></tr><tr><td> Ksilazin </td><td> Akorn, Inc </td><td> NADA # 139-236 </td><td></td></tr><tr><td> Carprofen </td><td> JAX LAHS </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Oftalmik merhem </td><td> Dechra Veteriner Ürünleri </td><td> 17033-211-38 </td><td></td></tr><tr><td> % 0.5 lidokain HCl </td><td> REGENT, Inc </td><td> NDC 0517-0625-25 </td><td></td></tr><tr><td> Siyanoakrilat yapıştırıcı </td><td> Henkel A.Ş. </td><td> 46551 </td><td></td></tr><tr><td> Steril Swablar </td><td> Fisher Scientific </td><td> 23-400-114 </td><td></td></tr><tr><td> Elmas pasta </td><td> Widget Kaynağı </td><td> BBE60 </td><td></td></tr><tr><td> Kalay oksit </td><td> LORTONE, Inc </td><td> 591-038 </td><td></td></tr><tr><td> Liner Bond 2V </td><td> KURARAY Medikal A.Ş. </td><td> 1921-KA </td><td></td></tr><tr><td> Clearfil AP-X </td><td> KURARAY Medikal A.Ş. </td><td> 1721-KA </td><td></td></tr><tr><td> Tuzlu </td><td> JAX LAHS </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Cam Kapak </td><td> Warner Instruments </td><td> 64-0720 </td><td></td></tr><tr><td> Lokma </td><td> Küçük Parçalar, Inc </td><td> HNX-0090-C </td><td></td></tr><tr><td> Şırınga Pompası </td><td> Syringepump.com </td><td> KD-1000 </td><td></td></tr><tr><td> İki-Foton görüntüleme sistemi </td><td> Özel dahili (Herhangi bir ticari sistem olurçalışması) </td><td></td><td></td></tr></table>

imaging glioma initiation in vivo through a polished and reinforced thin-skull cranial window

Glioma insan kanser en öldürücü biçimlerinden biridir. Tarih-cerrahi en etkili glioma tedavisi arkasından radyoterapi çoğu hastada glioma relaps 1,2 nedeniyle tanıyı takiben beş yıldan fazla hayatta yok gibi, hastalar sadece mütevazı yararları tedavi sunmaktadır. Insan beyin tümörlerinde kanser kök hücrelerinin keşfi glioma 3 için yeni tedavi stratejilerinin geliştirilmesi üzerinde büyük bir etkiye sahip için umut vaat ediyor. Kanser kök hücrelerinin yeteneği-kendini yenilemek ve ayırt etmek her ikisi tarafından tanımlanır ve yeni tümörler 4 başlatmak için kapasiteye sahip bir tümör tek hücreler olduğu düşünülmektedir. Glioma nüks aşağıdaki radyoterapi tedavisine glioma kök hücrelerin direncini (GSCs) kaynaklandığı düşünülmektedir 5-10. İn vivo olarak, GSCs kendi kök hücre benzeri özellikler 11-14 korumak için önemli bir perivasküler niş ikamet gösterilir . Kuruluşlar için MerkezGSC niş kıymetleştirme 12 vasküler endotel hücreleri vardır. Mevcut kanıtlar vasküler endotel hücreleri ile GSCs ve etkileşim tümör gelişimi için önemlidir ve glioma için önemli terapötik hedefler olarak endotel hücreleri ile GSCs ve etkileşimi tanımlamak düşündürmektedir. GSCs varlığı ortotopik nakli 15 üzerine yeni tümörler başlatmak için kendi yeteneği ile deneysel olarak belirlenir. Bu durum, tipik insan tümör ciddi bağışıklık eksikliği olan farelerin beyin ya da congenic ev sahibi farelerin beyin içine fare GBM hücre içine izole GBM hücreleri, belirli bir sayıda enjekte edilerek elde edilir. Tümör büyümesi için Tahliller sonra enjekte GBM hücreleri arasındaki GSCs yeni tümörler-genellikle birkaç hafta veya ay çıkması için izin vermek için yeterli zamanı takip yapılmaktadır. Bu nedenle, mevcut testler in vivo tek GSCs tümör inisiyasyon önemli patolojik sürecin incelenmesi izin vermez. Sonuç olarak, temel iTümör inisiyasyon erken dönemlerinde vasküler endotel hücreleri ile GSCs ve etkileşim belirli rolleri nsights eksiktir. Bu tür anlayışlar glioma için yeni tedavi stratejilerinin geliştirilmesi için kritik önem taşımaktadır ve hastaların glioma nüksü önlemek için büyük etkileri olacaktır. Burada Limanlar kraniyal pencere yordamı 16 uyarladık ve in vivo iki foton mikroskopi canlı fare beynindeki enjekte GBM hücreleri tümör inisiyasyon görüntülenmesine izin verir. Bizim teknik glioma inisiyasyonu sırasında GSCs ve damar endotel hücreleri arasındaki önemli sinyal mekanizmaları aydınlatmak için gelecekteki çabalara yol açacaktır.

Watch this Scientific Journal Video about Imaging Glioma Initiation In Vivo Through a Polished and Reinforced Thin-skull Cranial Window at JoVE.com

Imaging Glioma Initiation In Vivo Through a Polished and Reinforced Thin-skull Cranial Window

Cilalı ve takviyeli ince kafatası (portlar) kraniyal pencere ve glioblastoma (GBM) hücre enjeksiyonu birleştirerek, glioma inisiyasyon ve uzunlamasına bir canlı fare beynindeki enjekte GBM hücreleri büyüme gözlemleyebilirsiniz.

Görüntüleme Glioma Başlatma<em&gt; In Vivo</em&gt; Bir Parlak ve Takviyeli İnce kafatası Kranial Pencere arkası

Glioma is the one of the most lethal forms of human cancer. The most effective glioma therapy to date-surgery followed by radiation treatment-offers ...

imaging-glioma-initiation-vivo-through-polished-reinforced-thin-skull

Research

JoVE Journal

Medicine

Imaging Glioma Initiation In Vivo Through a Polished and Reinforced Thin-skull Cranial Window

13.0K Görüntüleme.  The Jackson Laboratory. Cilalı ve takviyeli ince kafatası (portlar) kraniyal pencere ve glioblastoma (GBM) hücre enjeksiyonu birleştirerek, glioma inisiyasyon ve uzunlamasına bir canlı fare beynindeki enjekte GBM hücreleri büyüme gözlemleyebilirsiniz.

Video: Imaging Glioma Initiation In Vivo Through a Polished and Reinforced Thin-skull Cranial Window

In vivo Near Infrared Fluorescence (NIRF) Intravascular Molecular Imaging of Inflammatory Plaque, a Multimodal Approach to Imaging of Atherosclerosis

The vascular response to injury is a well-orchestrated inflammatory response triggered by the accumulation of macrophages within the vessel wall leading to an accumulation of lipid-laden intra-luminal plaque, smooth muscle cell proliferation and progressive narrowing of the vessel lumen. The formation of such vulnerable plaques prone to rupture underlies the majority of cases of acute myocardial infarction. The complex molecular and cellular inflammatory cascade is orchestrated by the recruitment of T lymphocytes and macrophages and their paracrine effects on endothelial and smooth muscle cells.1
Molecular imaging in atherosclerosis has evolved into an important clinical and research tool that allows in vivo visualization of inflammation and other biological processes. Several recent examples demonstrate the ability to detect high-risk plaques in patients, and assess the effects of pharmacotherapeutics in atherosclerosis.4 While a number of molecular imaging approaches (in particular MRI and PET) can image biological aspects of large vessels such as the carotid arteries, scant options exist for imaging of coronary arteries.2 The advent of high-resolution optical imaging strategies, in particular near-infrared fluorescence (NIRF), coupled with activatable fluorescent probes, have enhanced sensitivity and led to the development of new intravascular strategies to improve biological imaging of human coronary atherosclerosis.
Near infrared fluorescence (NIRF) molecular imaging utilizes excitation light with a defined band width (650-900 nm) as a source of photons that, when delivered to an optical contrast agent or fluorescent probe, emits fluorescence in the NIR window that can be detected using an appropriate emission filter and a high sensitivity charge-coupled camera. As opposed to visible light, NIR light penetrates deeply into tissue, is markedly less attenuated by endogenous photon absorbers such as hemoglobin, lipid and water, and enables high target-to-background ratios due to reduced autofluorescence in the NIR window. Imaging within the NIR 'window' can substantially improve the potential for in vivo imaging.2,5
Inflammatory cysteine proteases have been well studied using activatable NIRF probes10, and play important roles in atherogenesis. Via degradation of the extracellular matrix, cysteine proteases contribute importantly to the progression and complications of atherosclerosis8. In particular, the cysteine protease, cathepsin B, is highly expressed and colocalizes with macrophages in experimental murine, rabbit, and human atheromata.3,6,7 In addition, cathepsin B activity in plaques can be sensed in vivo utilizing a previously described 1-D intravascular near-infrared fluorescence technology6, in conjunction with an injectable nanosensor agent that consists of a poly-lysine polymer backbone derivatized with multiple NIR fluorochromes (VM110/Prosense750, ex/em 750/780nm, VisEn Medical, Woburn, MA) that results in strong intramolecular quenching at baseline.10 Following targeted enzymatic cleavage by cysteine proteases such as cathepsin B (known to colocalize with plaque macrophages), the fluorochromes separate, resulting in substantial amplification of the NIRF signal. Intravascular detection of NIR fluorescence signal by the utilized novel 2D intravascular NIRF catheter now enables high-resolution, geometrically accurate in vivo detection of cathepsin B activity in inflamed plaque.
In vivo molecular imaging of atherosclerosis using catheter-based 2D NIRF imaging, as opposed to a prior 1-D spectroscopic approach,6 is a novel and promising tool that utilizes augmented protease activity in macrophage-rich plaque to detect vascular inflammation.11,12 The following research protocol describes the use of an intravascular 2-dimensional NIRF catheter to image and characterize plaque structure utilizing key aspects of plaque biology. It is a translatable platform that when integrated with existing clinical imaging technologies including angiography and intravascular ultrasound (IVUS), offers a unique and novel integrated multimodal molecular imaging technique that distinguishes inflammatory atheromata, and allows detection of intravascular NIRF signals in human-sized coronary arteries.

In vivo Near Infrared Fluorescence NIRF Intravascular Molecular Imaging of Inflammatory Plaque, a Multimodal Approach to Imaging of Atherosclerosis

We detail a new near-infrared fluorescence (NIRF) catheter for 2-dimensional intravascular molecular imaging of plaque biology in vivo. The NIRF catheter can visualize key biological processes such as inflammation by reporting on the presence of plaque-avid activatable and targeted NIR fluorochromes. The catheter utilizes clinical engineering and power requirements and is targeted for application in human coronary arteries. The following research study describes a multimodal imaging strategy that utilizes a novel in vivo intravascular NIRF catheter to image and quantify inflammatory plaque in proteolytically active inflamed rabbit atheromata.

İnflamatuar Plak Kızılötesi Floresans (NIRF) İntravasküler Moleküler Görüntüleme, Multimodal Yaklaşım civarında in vivo Ateroskleroz Görüntüleme

The vascular response to injury is a well-orchestrated inflammatory response triggered by the accumulation of macrophages within the vessel wall leading ...

Tıp

In vivo Dual Substrate Bioluminescent Imaging

Our understanding of how and when breast cancer cells transit from established primary tumors to metastatic sites has increased at an exceptional rate since the advent of in vivo bioluminescent imaging technologies 1-3. Indeed, the ability to locate and quantify tumor growth longitudinally in a single cohort of animals to completion of the study as opposed to sacrificing individual groups of animals at specific assay times has revolutionized how researchers investigate breast cancer metastasis. Unfortunately, current methodologies preclude the real-time assessment of critical changes that transpire in cell signaling systems as breast cancer cells (i) evolve within primary tumors, (ii) disseminate throughout the body, and (iii) reinitiate proliferative programs at sites of a metastatic lesion. However, recent advancements in bioluminescent imaging now make it possible to simultaneously quantify specific spatiotemporal changes in gene expression as a function of tumor development and metastatic progression via the use of dual substrate luminescence reactions. To do so, researchers take advantage for two light-producing luciferase enzymes isolated from the firefly (Photinus pyralis) and sea pansy (Renilla reniformis), both of which react to mutually exclusive substrates that previously facilitated their wide-spread use in in vitro cell-based reporter gene assays 4. Here we demonstrate the in vivo utility of these two enzymes such that one luminescence reaction specifically marks the size and location of a developing tumor, while the second luminescent reaction serves as a means to visualize the activation status of specific signaling systems during distinct stages of tumor and metastasis development. Thus, the objectives of this study are two-fold. First, we will describe the steps necessary to construct dual bioluminescent reporter cell lines, as well as those needed to facilitate their use in visualizing the spatiotemporal regulation of gene expression during specific steps of the metastatic cascade. Using the 4T1 model of breast cancer metastasis, we show that the in vivo activity of a synthetic Smad Binding Element (SBE) promoter was decreased dramatically in pulmonary metastasis as compared to that measured in the primary tumor 4-6. Recently, breast cancer metastasis was shown to be regulated by changes within the primary tumor microenvironment and reactive stroma, including those occurring in fibroblasts and infiltrating immune cells 7-9. Thus, our second objective will be to demonstrate the utility of dual bioluminescent techniques in monitoring the growth and localization of two unique cell populations harbored within a single animal during breast cancer growth and metastasis.

In vivo Dual Substrate Bioluminescent Imaging

Herein we describe the methods to construct, visualize, and quantify the bioluminescent reactions of both firefly and renilla luciferase enzymes expressed in metastatic breast cancer cells during their growth and metastasis in vivo.

Vivo Çift Yüzey Bioluminescent Imaging&#39;de

Our understanding of how and when breast cancer cells transit from established primary tumors to metastatic sites has increased at an exceptional rate ...

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be performed in many locations overlying the rat cerebrum, but is most easily carried out by creating a craniectomy over the readily accessible frontal or parietal bones. Most frequently, we have used this technique in combination with the endothelin-1 middle cerebral artery occlusion model of ischemic stroke to quantify the changes in middle cerebral artery vessel diameter that occur with injection of endothelin-1 into the brain parenchyma adjacent to the proximal MCA4, 5. In order to visualize the proximal portion of the MCA during endothelin -1 induced MCAO, we use a technique to create a cranial window through the temporal bone on the lateral aspect of the rat skull (Figure 1). Cerebral arteries can be visualized either with the dura intact or with the dura incised and retracted. Most commonly, we leave the dura intact during visualization since endothelin-1 induced MCAO involves delivery of the vasoconstricting peptide into the brain parenchyma. This bypasses the need to incise the dura directly over the visualized vessels for drug delivery. This protocol will describe how to create a cranial window to visualize cerebral arteries in a step-wise fashion, as well as how to avoid many of the potential pitfalls pertaining to this method.

This article describes a method for visualizing rat cerebral arteries through a cranial window using temporal craniectomy in order to view proximal portions of the middle cerebral artery (Figure 1). This versatile method can be combined with various techniques of drug delivery to measure cerebral artery reactivity in vivo.

Endotelin-1 Bağlı Orta Serebral Arter Tıkanıklığı sırasında Orta Serebral Arter görselleştirin bir Kranial Pencere kullanmak

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

3D-Neuronavigation In Vivo Through a Patient's Brain During a Spontaneous Migraine Headache

A growing body of research, generated primarily from MRI-based studies, shows that migraine appears to occur, and possibly endure, due to the alteration of specific neural processes in the central nervous system. However, information is lacking on the molecular impact of these changes, especially on the endogenous opioid system during migraine headaches, and neuronavigation through these changes has never been done. This study aimed to investigate, using a novel 3D immersive and interactive neuronavigation (3D-IIN) approach, the endogenous &#181;-opioid transmission in the brain during a migraine headache attack in vivo. This is arguably one of the most central neuromechanisms associated with pain regulation, affecting multiple elements of the pain experience and analgesia. A 36 year-old female, who has been suffering with migraine for 10 years, was scanned in the typical headache (ictal) and nonheadache (interictal) migraine phases using Positron Emission Tomography (PET) with the selective radiotracer [11C]carfentanil, which allowed us to measure &#181;-opioid receptor availability in the brain (non-displaceable binding potential - &#181;OR BPND). The short-life radiotracer was produced by a cyclotron and chemical synthesis apparatus on campus located in close proximity to the imaging facility. Both PET scans, interictal and ictal, were scheduled during separate mid-late follicular phases of the patient's menstrual cycle. During the ictal PET session her spontaneous headache attack reached severe intensity levels; progressing to nausea and vomiting at the end of the scan session. There were reductions in &#181;OR BPND in the pain-modulatory regions of the endogenous &#181;-opioid system during the ictal phase, including the cingulate cortex, nucleus accumbens (NAcc), thalamus (Thal), and periaqueductal gray matter (PAG); indicating that &#181;ORs were already occupied by endogenous opioids released in response to the ongoing pain. To our knowledge, this is the first time that changes in &#181;OR BPND during a migraine headache attack have been neuronavigated using a novel 3D approach. This method allows for interactive research and educational exploration of a migraine attack in an actual patient's neuroimaging dataset.

3D-Neuronavigation In Vivo Through a Patient&#039;s Brain During a Spontaneous Migraine Headache

In this study, the authors report for the first time a novel 3D-Immersive &#38; Interactive Neuronavigation (3D-IIN) through the impact of a spontaneous migraine headache attack in the &#956;-opioid system of a patient's brain in vivo.

3D-nöronavigasyon<em&gt; In Vivo</em&gt; Bir Spontan migren sırasında Hasta Beyin sayesinde

A growing body of research, generated primarily from MRI-based studies, shows that migraine appears to occur, and possibly endure, due to the alteration ...

Sequential In vivo Imaging of Osteogenic Stem/Progenitor Cells During Fracture Repair

Bone turns over continuously and is highly regenerative following injury. Osteogenic stem/progenitor cells have long been hypothesized to exist, but in vivo demonstration of such cells has only recently been attained. Here, in vivo imaging techniques to investigate the role of endogenous osteogenic stem/progenitor cells (OSPCs) and their progeny in bone repair are provided. Using osteo-lineage cell tracing models and intravital imaging of induced microfractures in calvarial bone, OSPCs can be directly observed during the first few days after injury, in which critical events in the early repair process occur. Injury sites can be sequentially imaged revealing that OSPCs relocate to the injury, increase in number and differentiate into bone forming osteoblasts. These methods offer a means of investigating the role of stem cell-intrinsic and extrinsic molecular regulators for bone regeneration and repair.

Sequential In vivo Imaging of Osteogenic Stem/Progenitor Cells During Fracture Repair

Quantitative measurement of bone progenitor function in fracture healing requires high resolution serial imaging technology. Here, protocols are provided for using intravital microscopy and osteo-lineage tracking to sequentially image and quantify the migration, proliferation and differentiation of endogenous osteogenic stem/progenitor cells in the process of repairing bone fracture.

Ardışık<em&gt; In vivo</em&gt; Kırık Onarım sırasında Osteojenik Kök / Progenitör Hücrelerinin Görüntüleme

Bone turns over continuously and is highly regenerative following injury. Osteogenic stem/progenitor cells have long been hypothesized to exist, but in ...

Combined In vivo Optical and &#181;CT Imaging to Monitor Infection, Inflammation, and Bone Anatomy in an Orthopaedic Implant Infection in Mice

Multimodality imaging has emerged as a common technological approach used in both preclinical and clinical research. Advanced techniques that combine in vivo optical and &#956;CT imaging allow the visualization of biological phenomena in an anatomical context. These imaging modalities may be especially useful to study conditions that impact bone. In particular, orthopaedic implant infections are an important problem in clinical orthopaedic surgery. These infections are difficult to treat because bacterial biofilms form on the foreign surgically implanted materials, leading to persistent inflammation, osteomyelitis and eventual osteolysis of the bone surrounding the implant, which ultimately results in implant loosening and failure. Here, a mouse model of an infected orthopaedic prosthetic implant was used that involved the surgical placement of a Kirschner-wire implant into an intramedullary canal in the femur in such a way that the end of the implant extended into the knee joint. In this model, LysEGFP mice, a mouse strain that has EGFP-fluorescent neutrophils, were employed in conjunction with a bioluminescent Staphylococcus aureus strain, which naturally emits light. The bacteria were inoculated into the knee joints of the mice prior to closing the surgical site. In vivo bioluminescent and fluorescent imaging was used to quantify the bacterial burden and neutrophil inflammatory response, respectively. In addition, &#956;CT imaging was performed on the same mice so that the 3D location of the bioluminescent and fluorescent optical signals could be co-registered with the anatomical &#956;CT images. To quantify the changes in the bone over time, the outer bone volume of the distal femurs were measured at specific time points using a semi-automated contour based segmentation process. Taken together, the combination of in vivo bioluminescent/fluorescent imaging with &#956;CT imaging may be especially useful for the noninvasive monitoring of the infection, inflammatory response and anatomical changes in bone over time.

Combined In vivo Optical and  &amp;#181;CT Imaging to Monitor Infection, Inflammation, and Bone Anatomy in an Orthopaedic Implant Infection in Mice

Combined optical and &#956;CT imaging in a mouse model of orthopaedic implant infection, utilizing a bioluminescent engineered strain of Staphylococcus aureus, provided the capability to noninvasively and longitudinally monitor the dynamics of the bacterial infection, as well as the corresponding inflammatory response and anatomical changes in the bone.

Kombine<em&gt; In vivo</em&gt; Optik ve uCT Görüntüleme Farelerde bir Ortopedik İmplant Enfeksiyon Enfeksiyon, Enflamasyon ve Kemik Anatomisi Monitör

Multimodality imaging has emerged as a common technological approach used in both preclinical and clinical research. Advanced techniques that combine in ...

State of the Art Cranial Ultrasound Imaging in Neonates

Cranial ultrasound (CUS) is a reputable tool for brain imaging in critically ill neonates. It is safe, relatively cheap and easy to use, even when a patient is unstable. In addition it is radiation-free and allows serial imaging. CUS possibilities have steadily expanded. However, in many neonatal intensive care units, these possibilities are not optimally used. We present a comprehensive approach for neonatal CUS, focusing on optimal settings, different probes, multiple acoustic windows and Doppler techniques. This approach is suited for both routine clinical practice and research purposes. In a live demonstration, we show how this technique is performed in the neonatal intensive care unit. Using optimal settings and probes allows for better imaging quality and improves the diagnostic value of CUS in experienced hands. Traditionally, images are obtained through the anterior fontanel. Use of supplemental acoustic windows (lambdoid, mastoid, and lateral fontanels) improves detection of brain injury. Adding Doppler studies allows screening of patency of large intracranial arteries and veins. Flow velocities and indices can be obtained. Doppler CUS offers the possibility of detecting cerebral sinovenous thrombosis at an early stage, creating a window for therapeutic intervention prior to thrombosis-induced tissue damage. Equipment, data storage and safety aspects are also addressed.

Cranial ultrasound (CUS) is a valuable tool for brain imaging in critically ill neonates. This video shows a comprehensive approach for neonatal (Doppler) CUS for both clinical and research purposes, including a bedside demonstration of the technique.

Yenidoğan Sanat Kranial Ultrason Görüntüleme Devlet

Cranial ultrasound (CUS) is a reputable tool for brain imaging in critically ill neonates. It is safe, relatively cheap and easy to use, even when a ...

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. Despite the discovery of key regulators of uterine contractility, this process is still not fully understood. Transgenic mice provide an ideal model in which to study parturition. Previously, the only method to study uterine contractility in the mouse was ex vivo isometric tension recordings, which are suboptimal for several reasons. The uterus must be removed from its physiological environment, a limited time course of investigation is possible, and the mice must be sacrificed. The recent development of radiometric telemetry has allowed for longitudinal, real-time measurements of in vivo intrauterine pressure in mice. Here, the implantation of an intrauterine telemeter to measure pressure changes in the mouse uterus from mid-pregnancy until delivery is described. By comparing differences in pressures between wild type and transgenic mice, the physiological impact of a gene of interest can be elucidated. This technique should expedite the development of therapeutics used to treat myometrial disorders during pregnancy, including preterm labor.

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

This manuscript provides a protocol for implanting telemeters in the mouse for the purpose of measuring intrauterine pressures during pregnancy.

Rahim içi Telemetri Fare Kontraktil Basıncını Ölçmek<em&gt; İn Vivo</em

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. ...

In Vivo Imaging and Tracking of Technetium-99m Labeled Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells in Equine Tendinopathy

Recent advances in the application of bone marrow mesenchymal stem cells (BMMSC) for the treatment of tendon and ligament injuries in the horse suggest improved outcome measures in both experimental and clinical studies. Although the BMMSC are implanted into the tendon lesion in large numbers (usually 10 - 20 million cells), only a relatively small number survive (&#60;10%) although these can persist for up to 5 months after implantation. This appears to be a common observation in other species where BMMSC have been implanted into other tissues and it is important to understand when this loss occurs, how many survive the initial implantation process and whether the cells are cleared into other organs. Tracking the fate of the cells can be achieved by radiolabeling the BMMSC prior to implantation which allows non-invasive in vivo imaging of cell location and quantification of cell numbers.
This protocol describes a cell labeling procedure that uses Technetium-99m (Tc-99m), and tracking of these cells following implantation into injured flexor tendons in horses. Tc-99m is a short-lived (t1/2 of 6.01 hr) isotope that emits gamma rays and can be internalized by cells in the presence of the lipophilic compound hexamethylpropyleneamine oxime (HMPAO). These properties make it ideal for use in nuclear medicine clinics for the diagnosis of many different diseases. The fate of the labeled cells can be followed in the short term (up to 36 hr) by gamma scintigraphy to quantify both the number of cells retained in the lesion and distribution of the cells into lungs, thyroid and other organs. This technique is adapted from the labeling of blood leukocytes and could be utilized to image implanted BMMSC in other organs.

In Vivo Imaging and Tracking of Technetium-99m Labeled Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells in Equine Tendinopathy

This protocol describes the radiolabeling of equine mesenchymal stem cells and their implantation into tendon injuries in the horse in order to determine cell survival and tissue distribution using gamma scintigraphy.

Atçılık tendinopatisinde Kemik İliği Mezenkimal Kök Hücreler Etiketli Teknesyum- 99m Vivo Görüntüleme ve Takip

Recent advances in the application of bone marrow mesenchymal stem cells (BMMSC) for the treatment of tendon and ligament injuries in the horse suggest ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic patient tumors in different assays1. Human tumor xenografts represent the gold standard with respect to tumor biology, drug discovery, and metastasis research 2-4. Tumor xenografts can be derived from different types of material like tumor cell lines, tumor tissue from primary patient tumors4 or serially transplanted tumors. When propagated in vivo, xenografted tissue is infiltrated and vascularized by cells of mouse origin. Multiple factors such as the tumor entity, the origin of xenografted material, growth rate and region of transplantation influence the composition and the amount of mouse cells present in tumor xenografts. However, even when these factors are kept constant, the degree of mouse cell contamination is highly variable.
Contaminating mouse cells significantly impair downstream analyses of human tumor xenografts. As mouse fibroblasts show high plating efficacies and proliferation rates, they tend to overgrow cultures of human tumor cells, especially slowly proliferating subpopulations. Mouse cell derived DNA, mRNA, and protein components can bias downstream gene expression analysis, next-generation sequencing, as well as proteome analysis 5. To overcome these limitations, we have developed a fast and easy method to isolate untouched human tumor cells from xenografted tumor tissue. This procedure is based on the comprehensive depletion of cells of mouse origin by combining automated tissue dissociation with the benchtop tissue dissociator and magnetic cell sorting. Here, we demonstrate that human target cells can be can be obtained with purities higher than 96% within less than 20 min independent of the tumor type.

Human tumor xenografts are vascularized and infiltrated by cells of mouse origin during the growth phase in vivo. To circumvent the bias caused by these contaminating cells during downstream analysis, we developed a method allowing for comprehensive depletion of all mouse cells by magnetic cell sorting.

İnsan Tümör ksenogratflarının gelen Fare Hücrelerinin tükenmesi Anlamlı Hedef Hücre Alt Analizi geliştirir

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...