Bu çalışma tjw Moleküler Tıp HHMI / Vanderbilt Üniversitesi Sertifika Programı aracılığıyla Howard Hughes Tıp Enstitüsü (HHMI) (GRDOT56006779), gelen SSH Sağlık (NIH) National Institutes hibe (R01-DK078640) tarafından desteklenmiştir Vanderbilt Diyabet Araştırma ve Eğitim Merkezi (P30-DK020593) ve Vanderbilt Sindirim Hastalıkları Araştırma Merkezi (P30-DK058404) Çekirdek Hizmetleri sağlamak.

1. Kanül hazırlayın <ol><li> Parmak uçlarınızla PE10 boru, 1 inç uzunluğunda bölüm Isınma ve tüp ince olur böylece germek. Not: kanül için gemi veya kanalının boyutu gerekli germe derecesini belirlemektedir. Kanül koledok atmalarını için iyi gerilmiş olması gerekir ama sadece orta büyük portal ven sığacak şekilde uzatılır gerekebilir. </li><li> Eğimli bir uç oluşturmak için bir çapraz de uzatılmış tüp kesin. </li><li> 5-6 inç segment yaratmak için Tüpün diğer kenarını kesin. </li><li> Boru olmayan eğimli kenar içine ½ inç derialtı iğne 32 göstergesi takın. </li></ol> 2. PBS ile Şırınga hazırlayın <ol><li> PBS ile 3 ml şırınga doldurun. </li><li> Ekli ile derialtı iğne üzerine şırınga vidalayın PE10 boru önceden hazırlanmış çekti. </li><li> Bu PBS sağlamak için Flick şırınga ve şırınga itme pistonu iğne ve tüp ve doldurduşırınga içinde hava kabarcıkları vardır. </li><li> Kil modelleme üzerinden şekillenen bir şırınga tutucu içine PBS ile hazırlanmış şırınga yerleştirin. Boru, kanal içine yerleştirilir iken bu tutucu şırınga sabit tutacak. </li></ol> 3. Diğer Set-up <ol><li> Küçük bir kap, örneğin, bir 24 oyuklu plaka arasında iyi bir katalizör 0.1 g tartılır. </li><li> 3 ml şırınga içine 1 ml reçine çekin. Not: katalizör ve reçine nispi miktarları sertleşme süresi değiştirmek için ayarlanabilir. Katalizör mayıs miktarını azaltmak, ancak, çekme döküm ve daha az arzu döküm yol artar. Not: reçine tutarken, reçine duman reçine veya inhalasyon ile temas önlemek için gerekli tedbirleri almak. Her zaman eldiven giymek ve böyle bir kimyasal davlumbaz gibi iyi havalandırılan bir alanda reçine içeren adımları gerçekleştirin </li><li> Bir bağ olarak kullanılmak üzere yaklaşık olarak 5 inç 5.0 ipek dikiş bir parça keser. </li></ol> 4. Fare hazırlayın <ol&gt; <li> Yetişkin fare Kurban. Sırtında fare yatırın ve karın boşluğunun açılması. </li><li> Kapsamı platformu diseksiyon fare yatırın. Karaciğer görünürlük ve erişilebilirliği arttırmak için fare altında dik bir 15 ml konik tüp yerleştirin. </li><li> PBS ile bir pamuklu çubukla ıslatın ve yukarı doğru ve sizden uzağa ekstrahepatik portal ven veya koledok ile birlikte karaciğerin dorsal görünümü ortaya çıkarmak için karaciğer çevirmek için kullanabilirsiniz. </li><li> Portal ven atmalarını için, oda sıcaklığında PBS ile ven kızarma kanın pıhtılaşmasını önleyebilir. PBS ile dolu bir 3 ml şırınga bir iğne takınız ve kadarıyla yapabilirsiniz gibi karaciğer ekstrahepatik portal ven içine iğne takın. Yavaşça portal ven içine aracılığıyla PBS itin. Kan akıtmak için ortak kardinal ven bir nick olun. Kan drenaj artırılması, masaj karaciğer için ıslak bir pamuklu çubuk kullanın. Bu adım, safra kanalı için tavsiye edilmez ve tüm vasküler sistemler için gerekli olmayabilir. Not: Bu adım aynı zamanda perfo olabiliryerine PBS% 4 paraformaldehid rmed. % 4 paraformaldehid kullanımı, özellikle daha küçük vasküler yapı, daha kesin bir döküm damar bütünlüğünün ve sonuç artırabilir. </li></ol> 5. Ekstrahepatik Portal ven veya Koledok kanüle <ol><li> Karaciğer yaklaşık ¼ inç, portal ven veya safra kanalı altında cerrahi sütür geçmesine kavisli bir forseps kullanın. </li><li> Gevşek bir ortak düğüm haline dikiş bağla. Düğüm SIKMAYIN. </li><li> Eğer açık uçlu bir sistem ile çalışıyorsanız, bu sistemin diğer ucunda bir bağ bağlayıp sıkın yardımcı olabilir. Eğer portal ven kanı boşaltmak için ortak kardinal ven açtıysanız, portal ven içindeki basıncı artırır ve santral hepatik vene reçine sızmasını önlemek için etrafında bir bağ kravat. </li><li> Yaklaşık ¼ inç dikiş düğüm aşağıdaki portal ven ya da safra kanalı küçük bir kesi yapmak için makas makas kullanın. Bu cut yarıya portal ven ya da koledok çapı sayesinde daha fazla nüfuz etmelidir. </li><li> # 5 forseps kullanarak, kesme site portal ven ya da safra yolları tutun ve safra kanalı içine Hortumun ucunu eğimli. </li><li> Öncesi gibi duran ligatür geçmiş ve karaciğer doğru hortumun ucu itin. </li><li> Kanül aracılığı ile PBS enjekte ederek ve portal ven ya da safra kanalı girerse görmek için izliyor tarafından kanülasyon doğruluğunu test edin. </li><li> Yerinde tutmak için kanül bağ sıkıştırın. </li></ol> 6. Reçine Portal Ven veya intrahepatik safra Cast <ol><li> Önceden ölçülmüş 0,1 g katalizör öncesi ölçülen 1 ml reçine ekleyin ve iyice karıştırın. Hava kabarcıkları oluşmasını önleyin. </li><li> 3 ml şırınga içine geri reçine katalizör karışımı çizin. Yavaşça şırınga Flicking ve kabarcıklar kovma tarafından herhangi bir hava kabarcıklarını çıkarın. Not: küçük yapılar döküm için, bu inci çok küçük hava kabarcıklarını çıkarmak için bir vakum odasında kullanmak faydalı olabilirE reçine ve döküm kalitesini artırmak. Bu adımı gerçekleştirmek için zaman izin vermek için, bu reçine kür yavaşlatmak için yukarıda önerilen bundan katalizör / reçine oranı azaltmak için gerekli olacaktır. </li><li> Dikkatle kanül bağlı 32 gauge iğne bırakarak, reçine içeren şırınga ile PBS içeren şırınga değiştirin. </li><li> Direnci artar ve karaciğer dolana kadar yavaşça ve nazikçe portal ven ya da safra yolları içine reçine itin. </li><li> Hafifçe karaciğer masaj ve hatta dolgu teşvik ıslak pamuklu bir bez kullanın. </li><li> Yapısından kanülü çıkarın ve hızlı reçine sızmasını önlemek için bağ yeniden sıkın. </li><li> Reçine tedavileri, daha sonra karaciğer kaldırmak iken farenin 20 dakika için oda sıcaklığında düz bırakmaya izin verir. </li><li> Ya karaciğer temizledikten ya macerating ile devam edin. </li></ol> 7. In situ Görselleştirme için Clear Karaciğer <ol><li> 4 ° C, sallanan bir gece boyunca% 4 paraformaldehit içinde karaciğer düzeltildi. </li><li> Karaciğer yıkayınen az dört saat, sallanan için PBS içinde. İsterseniz bu noktada, karaciğer lobları ayrışabilir. </li><li> Oda sıcaklığında sallanan, en azından dört saat her biri için en az% 50 metanol ve daha sonra da% 100 metanol içinde kurutmak. </li><li> En az 24 saat, sallanan için benzil alkol ve benzil benzoat (Babb) ve 1:2 çözelti içinde karaciğer temizleyin. Daha uzun yıkama kez gerekli olabilir. Karaciğer tamamen 2-3 gün sonra belli değilse, geri 24 saat süreyle% 100 metanol taşımak ve Babb takas tekrarlayın. </li><li> In situ görüntüleme için bir cam Petri kabındaki Babb batığın karaciğer. </li></ol> 8. Karaciğer Doku ıslatarak yumuşatmak <ol><li> Fare karaciğer çıkarın ve 50 ml konik tüp su ile konur. Tam reçine kür için 1 saat bekleyin. Eğer ayrı karaciğer lobları istenen. </li><li> Kapalı su dökün ve bir cam şişe karaciğer taşıyın. % 15 KOH kaba daldırın. Gece boyunca oda sıcaklığında bırakın. Sallamayın. </li><li> Dikkatlice KOH kapalı dökün ve distile su dökme yıkayın. Not: döküm ver olduğuy kırılgan ve son derece dikkatli ele alınmalıdır. Tüpünden sıvı ekleyerek veya çıkartırken döküm kesintiye kaçının. </li><li> Reçine döküm temiz olduğunda, yavaşça kurulayın bir Kimwipe üzerinde yatıyordu, sonra depolanmak üzere bir kaba aktarınız. </li></ol> 9. Temsilcisi Sonuçlar Portal ven ve safra kanalının başarılı bir döküm hilusu gelen karaciğer perifere uzanan giderek küçük şube sürekli ağ gösterecektir. Şekil 1 bir portal ven Babb takas. Şekil 1A tüm karaciğer sol lob döküm ve döküm şeklini ve boyutunu gösterir sonra da in situ görüntülenmiştir olarak döküm. Şekil 1B aynı döküm bir yakın görünümünü gösterir gösteren göstermektedir Karaciğer periferinde küçük portal ven dalları içine reçine penetrasyonu. Şekil 2 KOH ma geçirmiş olan bir portal ven dökme gösterirceration. Şekil 2A tüm sol karaciğer lob ve Şekil 2B küçük periferik dallarının kadar yakın olduğunu gösterir. Bu teknik aynı zamanda başarılı bir intrahepatik safra uygulanan ve Babb takas ve KOH maserasyon teknikleri 1,2,7 kullanarak hem yayımlanmıştır. Genel sorunlar dolgular eksik içerir, çevreleyen sistemleri ya da doku içine reçine, ve taşma halinde kabarcıklar. Şekil 3 için portal damar arasından, tamamlanmamış bir dolgu (Şekil 3A), kabarcıklar (Şekil 3A), ve reçine bir taşma tanımak için gösterilmiştir santral ven (Şekil 3B). Tüm resimler Leica MZ 16 FA stereoskop kullanarak ve RETIGA 4000R kamera QImaging alınır. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/4272/4272fig1.jpg" /> Şekil 1Hepatik. Babb-temizlenmiş reçine döküm lob portal ven bıraktı. A. Reçine döküm hilusu dan karaciğer çevresine kadar uzanan bir dallanma hiyerarşik yapısını göstermektedir. Reçine döküm mavi renkli karaciğer lob içinde sarı renkte görünür. B. kadar yakın reçine dolgu karaciğer periferinde küçük dallar uzanır göstermektedir. Reçine temizlenir karaciğer yoluyla beyazımsı. Ölçek bar = 1 mm. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/4272/4272fig2.jpg" /> Şekil 2. Hepatik doku-macerated reçine döküm lob portal ven bıraktı. Bütün karaciğerin ise dökme A. Reçine büyüklü küçüklü birçok dalları gösterir. B. Close-up karaciğer periferinde küçük dalları gösterir. Küçük şube görünümünü Feathering sinüzoidal boşluk doldurma reçine temsil ve veya reçine görünür olmayabilir atmalarını ve eğer varsa görünür şube yoğunluğu artacaktır. Reçine beyaz renklidir. Ölçek bar = 1 mm. Şekil 3. Reçine atmalarını ile ortak sorunlar. A. sol lob portal ven Tamamlanmamış bir dolgu karaciğer çevre genişletmek için başarısız bazı veya tüm döküm dalları ile belirgindir. Bu döküm, aynı zamanda sürekli döküm (ok) molaları gibi görünür, kabarcıklar görüntüler. Bazı yerlerde portal ven ve santral ven dallarının yakınlığı nedeniyle B., portal ven reçine genellikle girin ve santral ven dolduracaktır. Iki ayrı hiler dalları (oklar) ve farklı desen ve örtüşme sahip iki dallanma yapıları olduğunda bu kabul edilebilir. Teknik hatalar ve gerçek morfolojik değişiklikler arasında ayrım iki şekilde yapılabilir. İlk olarak, döküm yapı 2-boyutlu analiz ya da diğer metotlara göre beklenen yapı ile karşılaştırılması gerekmektedir. İkincisi, birkaç çoğaltır gerçekleştirmek için önemlidir ve mümkün olduğunda, struct ölçmekure ve uyarlık belirlemek için istatistiksel analizler gerçekleştirmek ve arasında ve farklı deney ve kontrol kolları içinde istatistiksel olarak anlamlı bir morfolojik değişiklik varsa.

<ol>
	<li>Sparks, E. E., Perrien, D. S., Huppert, K. A., Peterson, T. E., Huppert, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defects+in+hepatic+Notch+signaling+result+in+disruption+of+the+communicating+intrahepatic+bile+duct+network+in+mice.">Defects in hepatic Notch signaling result in disruption of the communicating intrahepatic bile duct network in mice.</a> Dis. Model Mech. 4, 359-367 (2011).</li><li>Vanderpool, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+interactions+between+hepatocyte+nuclear+factor-6+and+notch+signaling+regulate+mouse+intrahepatic+bile+duct+development+in+vivo.">Genetic interactions between hepatocyte nuclear factor-6 and notch signaling regulate mouse intrahepatic bile duct development in vivo.</a> Hepatology. 55, 233-243 (2012).</li><li>Meyer, E. P., Ulmann-Schuler, A., Staufenbiel, M., Krucker, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+morphology+and+3D+architecture+of+brain+vasculature+in+a+mouse+model+for+Alzheimer's+disease.">Altered morphology and 3D architecture of brain vasculature in a mouse model for Alzheimer's disease.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105, 3587-3592 (2008).</li><li>Van Steenkiste, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+corrosion+casting:+analyzing+wall+shear+stress+in+the+portal+vein+and+vascular+abnormalities+in+portal+hypertensive+and+cirrhotic+rodents.">Vascular corrosion casting: analyzing wall shear stress in the portal vein and vascular abnormalities in portal hypertensive and cirrhotic rodents.</a> Lab Invest. 90, 1558-1572 (2010).</li><li>Dickie, R., Cormack, M., Semmler-Behnke, M., Kreyling, W. G., Tsuda, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep+pulmonary+lymphatics+in+immature+lungs.">Deep pulmonary lymphatics in immature lungs.</a> Journal of Applied Physiology. 107, 859-863 (2009).</li><li>Kelly, D. M., McEntee, G. P., McGeenery, K. F., Fitzpatrick, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microvasculature+of+the+pancreas,+liver,+and+kidney+in+cerulein-induced+pancreatitis.">Microvasculature of the pancreas, liver, and kidney in cerulein-induced pancreatitis.</a> Archives of Surgery. 128, 293-295 (1993).</li><li>Sparks, E. E., Huppert, K. A., Brown, M. A., Washington, M. K., Huppert, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch+signaling+regulates+formation+of+the+three-dimensional+architecture+of+intrahepatic+bile+ducts+in+mice.">Notch signaling regulates formation of the three-dimensional architecture of intrahepatic bile ducts in mice.</a> Hepatology. 51, 1391-1400 (2010).</li><li>Carlson, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+expression+of+constitutively+active+Notch4+elicits+reversible+arteriovenous+malformations+in+adult+mice.">Endothelial expression of constitutively active Notch4 elicits reversible arteriovenous malformations in adult mice.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102, 9884-9889 (2005).</li><li>Hemmeryckx, B., Emmerechts, J., Bovill, E. G., Hoylaerts, M. F., Lijnen, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+ageing+on+the+murine+venous+circulation.">Effect of ageing on the murine venous circulation.</a> Histochem. Cell Biol. , (2012).</li><li>Hossler, F. E., Olson, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microvasculature+of+the+nasal+salt+gland+of+the+duckling,+Anas+platyrhynchos:+quantitative+responses+to+osmotic+adaptation+and+deadaptation+studied+with+vascular+corrosion+casting.">Microvasculature of the nasal salt gland of the duckling, Anas platyrhynchos: quantitative responses to osmotic adaptation and deadaptation studied with vascular corrosion casting.</a> J. Exp. Zool. 254, 237-247 (1990).</li><li>Hossler, F. E., West, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Venous+valve+anatomy+and+morphometry:+studies+on+the+duckling+using+vascular+corrosion+casting.">Venous valve anatomy and morphometry: studies on the duckling using vascular corrosion casting.</a> Am. J. Anat. 181, 425-432 (1988).</li><li>Hossler, F. E., Monson, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+blood+supply+of+intrinsic+lymph+nodes+in+the+wall+of+the+rabbit+urinary+bladder--studies+with+light+microscopy,+electron+microscopy,+and+vascular+corrosion+casting.">Structure and blood supply of intrinsic lymph nodes in the wall of the rabbit urinary bladder--studies with light microscopy, electron microscopy, and vascular corrosion casting.</a> Anat. Rec. 252, 477-484 (1998).</li><li>Hossler, F. E., Monson, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+a+unique+elastic+sheath+surrounding+the+vesicular+arteries+of+the+rabbit+urinary+bladder--studies+of+the+microvasculature+with+microscopy+and+vascular+corrosion+casting.">Evidence for a unique elastic sheath surrounding the vesicular arteries of the rabbit urinary bladder--studies of the microvasculature with microscopy and vascular corrosion casting.</a> Anat. Rec. 252, 472-476 (1998).</li><li>Hossler, F. E., Kao, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microvasculature+of+the+urinary+bladder+of+the+dog:+a+study+using+vascular+corrosion+casting.">Microvasculature of the urinary bladder of the dog: a study using vascular corrosion casting.</a> Microsc. Microanal. 13, 220-227 (2007).</li><li>Wischgoll, T., Choy, J. S., Kassab, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+of+morphometry+and+branching+angles+of+porcine+coronary+arterial+tree+from+CT+images.">Extraction of morphometry and branching angles of porcine coronary arterial tree from CT images.</a> Am J Physiol. Heart. Circ. Physiol. 297, H1949-H1955 (2009).</li><li>Hossler, F. E., Douglas, J. E., Douglas, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomy+and+morphometry+of+myocardial+capillaries+studied+with+vascular+corrosion+casting+and+scanning+electron+microscopy:+a+method+for+rat+heart.">Anatomy and morphometry of myocardial capillaries studied with vascular corrosion casting and scanning electron microscopy: a method for rat heart.</a> Scan Electron Microsc. , 1469-1475 (1986).</li><li>Hossler, F. E., Douglas, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+Corrosion+Casting:+Review+of+Advantages+and+Limitations+in+the+Application+of+Some+Simple+Quantitative+Methods.">Vascular Corrosion Casting: Review of Advantages and Limitations in the Application of Some Simple Quantitative Methods.</a> Microsc. Microanal. 7, 253-264 (2001).</li><li>Mondy, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micro-CT+of+corrosion+casts+for+use+in+the+computer-aided+design+of+microvasculature.">Micro-CT of corrosion casts for use in the computer-aided design of microvasculature.</a> Tissue Eng. Part C Methods. 15, 729-738 (2009).</li><li>Masyuk, T. V., Ritman, E. L., LaRusso, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+Assessment+of+the+Rat+Intrahepatic+Biliary+System+by+Three-Dimensional+Reconstruction.">Quantitative Assessment of the Rat Intrahepatic Biliary System by Three-Dimensional Reconstruction.</a> The American Journal of Pathology. 158, 2079-2088 (2001).</li><li>Masyuk, T. V., Ritman, E. L., LaRusso, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+Artery+and+Portal+Vein+Remodeling+in+Rat+Liver:+Vascular+Response+to+Selective+Cholangiocyte+Proliferation.">Hepatic Artery and Portal Vein Remodeling in Rat Liver: Vascular Response to Selective Cholangiocyte Proliferation.</a> The American Journal of Pathology. 162, 1175-1182 (2003).</li></ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Biz, portal damar ve karaciğer intrahepatik safra kanalı sistemlerinde döküm nasıl için belirli örnekler tarif, ancak bu teknik hafif adaptasyonlar ile hemen hemen herhangi bir başka duktal ya da damar sistemine uygulanabilir. Önceki iş 10,11 yavrusu fare 1,2,7-9 dahil çoklu türler, tavşan 12,13, köpek 14, ve domuz 15, ve burun bezi 14 dahil olmak üzere birçok organ, bu tekniğin fizibilite göstermiştir Kalp 16, mesane 12...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> PE10 polietilen boru </td><td> Fisher Scientific </td><td> 1417012P </td><td></td></tr><tr><td> 5-0 cerrahi siyah örgülü ipek </td><td> Roboz Cerrahi </td><td> SUT-15-1 </td><td></td></tr><tr><td> Steriject 32 G x 13 mm iğne </td><td> Hava-tite </td><td> TSK3213 </td><td></td></tr><tr><td> Bahar makas </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 15000-08 </td><td></td></tr><tr><td> Sayı 5 forseps </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 91150-20 </td><td></td></tr><tr><td> Mercox II kiti </td><td> Ladd Araştırma </td><td> 21247 </td><td></td></tr><tr><td> Benzil alkol </td><td> Fisher Scientific </td><td> 1816-1804 </td><td> Only Babb temizleme için gerekli </td></tr><tr><td> Benzil benzoat </td><td> MP Biomedicals, LLC </td><td> 154839 </td><td> Sadece Babb temizleme için gerekli </td></tr><tr><td> Fosfat tamponlu tuz (PBS) </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Modelleme kil </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Ölçek </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Laboratuvar makası </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 15 ml kap polipropilen tüpler </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> % 4 paraformaldahyde </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> % 15 potasyum hidroksit (KOH) </td><td></td><td></td><td> Sadece maserasyon için gereken </td></tr><tr><td> Jilet </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> % 100 metanol </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 3 ml luer lock şırınga </td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

3-dimensional resin casting and imaging of mouse portal vein or intrahepatic bile duct system

Organlarda, vasküler ve duktal yapıların doğru mimarisi düzgün fizyolojik fonksiyonu için vazgeçilmez olduğunu ve bu yapıların oluşumu ve bakımı son derece düzenlenir süreçtir. Bu kompleks, 3-boyutlu yapıların analiz çok bölüm halinde ya da enjeksiyon boya çalışmalar, hem 2-boyutlu inceleme bağlı gelmiştir. Bu teknikler, ancak onlar aydınlatmak amaçlanmıştır duktal veya vasküler yapıların tam ve ölçülebilir temsilini sağlamak mümkün değildir. Alternatif olarak, 3-boyutlu plastik reçine kalıplara doğası sisteminin bir sürekli anlık oluşturur ve 3-boyutlu yapı ve ağ görselleştirilmesi ve hesaplamak için bir yeni ve çok kullanışlı bir yöntemdir. Reçine döküm sisteminin çok önemli bir avantajı bir kan damarı ya da kanal intakt ve bağlı veya iletişim, yapısını belirlemek için yeteneğidir. Damar ve duc yapısıtal ağlar organ fonksiyonları için çok önemlidir ve bu tekniğin çeşitli şekillerde vasküler ve duktal ağların çalışma yardımcı olma potansiyeline sahiptir. Reçine döküm, bir lümen yapı normal morfoloji ve fonksiyonel mimari analiz gelişimsel morfogenetik değişiklikleri tespit etmek ve normal ve hastalık durumları arasında doku mimari içinde morfolojik farklılıklar ortaya çıkarmak için de kullanılabilir. Önceki çalışmalar, örneğin çalışma döküm reçine kullanmıştır, yapının 1,2 2 boyutlu analiz yansıtılmamıştır fare intrahepatik safra sistemi içerisinde mimari ve işlevsel kusurları, bir Alzheimer hastalığı fare modelinde 3 beyin damarlarında değişiklikler , portal hipertansif ve sirotik fare 4, olgunlaşmamış ve yetişkin akciğerler arasındaki sıçan lenf olgunlaşma gelişim basamaklarına 5, kimyasal yaralanma için yanıt sıçan karaciğer, pankreas, böbrek ve hemen mikrovasküler değişiklikler portal ven anormallikleri6. Burada portal ven ve intrahepatik safra odaklanıyor, bir fare vasküler veya duktal ağının bir 3 boyutlu reçine döküm üreten bir yöntem sunmaktır. Bu yayınları doku temizleyerek veya macerating ile görülmesi ve daha sonra analiz edilebilir. Bu teknik hemen her vasküler veya duktal sistemin uygulanabilir ve 3 boyutlu duktal veya vasküler yapısının gelişimi, fonksiyonu, bakım, ya da yaralanma sorguladıktan herhangi bir çalışmaya doğrudan uygulanabilir olacaktır.

Watch this Scientific Journal Video about 3-Dimensional Resin Casting and Imaging of Mouse Portal Vein or Intrahepatic Bile Duct System at JoVE.com

3-Dimensional Resin Casting and Imaging of Mouse Portal Vein or Intrahepatic Bile Duct System

Görselleştirilmesi ve fare hepatik ven veya intrahepatik safra kanalı 3-boyutlu yapısının nicel bir yöntem tarif edilmektedir. Bu reçine döküm yöntemiyle aynı zamanda diğer duktal ya da damar sistemlerine uygulanabilir ve olanak edilebilir<em&gt; In situ</em&gt; Bir sistemin sağlam iletişim mimarisinin görselleştirme veya miktar.

3-Boyutlu Reçine Döküm ve Fare Portal Ven veya intrahepatik safra Sisteminin Görüntüleme

In  organs, the correct architecture of vascular and ductal structures is  indispensable for proper physiological function, and the formation and  ...

3-dimensional-resin-casting-imaging-mouse-portal-vein-or-intrahepatic

Research

JoVE Journal

Medicine

17.1K Görüntüleme.  Vanderbilt University. Görselleştirilmesi ve fare hepatik ven veya intrahepatik safra kanalı 3-boyutlu yapısının nicel bir yöntem tarif edilmektedir. Bu reçine döküm yöntemiyle aynı zamanda diğer duktal ya da damar sistemlerine uygulanabilir ve olanak edilebilir In situ Bir sistemin sağlam iletişim mimarisinin görselleştirme veya miktar.

Video: 3-Dimensional Resin Casting and Imaging of Mouse Portal Vein or Intrahepatic Bile Duct System

Modeling and Imaging 3-Dimensional Collective Cell Invasion

A defining characteristic of cancer malignancy is invasion and metastasis 1. In some cancers (e.g. glioma 2), local invasion into surrounding healthy tissue is the root cause of disease and death. For other cancers (e.g. breast, lung, etc.), it is the process of metastasis, in which tumor cells move from a primary tumor mass, colonize distal sites and ultimately contribute to organ failure, that eventually leads to morbidity and mortality 3. It has been estimated that invasion and metastasis are responsible for 90&#37; of cancer deaths 4. As a result, there has been intense interest in identifying the molecular processes and critical protein mediators of invasion and metastasis for the purposes of improving diagnosis and treatment 5.
A challenge for cancer scientists is to develop invasion assays that sufficiently resemble the in vivo situation to enable accurate disease modeling 6. Two-dimensional cell motility assays are only informative about one aspect of invasion and do not take into account extracellular matrix (ECM) protein remodeling which is also a critical element. Recently, research has refined our understanding of tumor cell invasion and revealed that individual cells may move by elongated or rounded modes 7. In addition, there has been greater appreciation of the contribution of collective invasion, in which cells invade in strands, sheets and clusters, particularly in highly differentiated tumors that maintain epithelial characteristics, to the spread of cancer 8.
We present a refined method 9 for examining the contributions of candidate proteins to collective invasion 10. In particular, by engineering separate pools of cells to express different fluorescent proteins, it is possible to molecularly dissect the activities and proteins required in leading cells versus those required in following cells. The use of RNAi provides the molecular tool to experimentally disassemble the processes involved in individual cell invasion as well as in different positions of collective invasion. In this procedure, mixtures of fluorescently-labeled cells are plated on the bottom of a Transwell insert previously filled with Matrigel ECM protein, then allowed to invade "upwards" through the filter and into the Matrigel. Reconstruction of z-series image stacks, obtained by confocal imaging, into three-dimensional representations allows for visualization of collectively invading strands and analysis of the representation of fluorescently-labeled cells in leading versus following positions.

Models of tumor cell invasion into three-dimensional extracellular matrix better reflect the in vivo situation than two-dimensional motility assays. Using matrix invasion assays combined with confocal imaging of fluorescently-labeled cells, detailed information on invasion modes and the distinct contributions of leading versus following cells can be obtained.

Modelleme ve Görüntüleme 3-Boyutlu Toplu Hücre Invasion

A defining characteristic of cancer malignancy is invasion and metastasis 1. In some cancers (e.g. glioma 2), local invasion into surrounding healthy ...

Tıp

Bile Duct Ligation in Mice: Induction of Inflammatory Liver Injury and Fibrosis by Obstructive Cholestasis

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well as to excrete bilirubin and other metabolic products. In the liver, the experimental obstruction of the extrahepatic biliary system initiates a complex cascade of pathological events that leads to cholestasis and inflammation resulting in a strong fibrotic reaction originating from the periportal fields. Therefore, surgical ligation of the common bile duct has become the most commonly used model to induce obstructive cholestatic injury in rodents and to study the molecular and cellular events that underlie these pathophysiological mechanisms induced by inappropriate bile flow. In recent years, different surgical techniques have been described that either allow reconnection or reanastomosis after bile duct ligation (BDL), e.g., partial BDL, or other microsurgical methods for specific research questions. However, the most frequently used model is the complete obstruction of the common bile duct that induces a strong fibrotic response after 21 to 28 days. The mortality rate can be high due to infectious complications or technical inaccuracies. Here we provide a detailed surgical procedure for the BDL model in mice that induce a highly reproducible fibrotic response in accordance to the 3R rule for animal welfare postulated by Russel and Burch in 1959.

Disruption of bile flow results in severe inflammatory cholestatic liver injury with a characteristic time-dependent sequence of morphological alterations. Here we present a protocol for the surgical ligation of the common bile duct in mice that allows to induce a strong fibrotic response after 21 to 28 days.

Farelerde Safra Kanalı ligasyonu: Obstrüktif Kolestaz tarafından İnflamatuar Karaciğer Hasarı ve Fibrozis indüksiyonu

In most vertebrates, the liver produces bile that is necessary to emulsify absorbed fats and enable the digestion of lipids in the small intestine as well ...

Using Multi-fluorinated Bile Acids and In Vivo Magnetic Resonance Imaging to Measure Bile Acid Transport

Along with their traditional role as detergents that facilitate fat absorption, emerging literature indicates that bile acids are potent signaling molecules that affect multiple organs; they modulate gut motility and hormone production, and alter vascular tone, glucose metabolism, lipid metabolism, and energy utilization. Changes in fecal bile acids may alter the gut microbiome and promote colon pathology including cholerrheic diarrhea and colon cancer. Key regulators of fecal bile acid composition are the small intestinal Apical Sodium-dependent Bile Acid Transporter (ASBT) and fibroblast growth factor-19 (FGF19). Reduced expression and function of ASBT decreases intestinal bile acid up-take. Moreover, in vitro data suggest that some FDA-approved drugs inhibit ASBT function. Deficient FGF19 release increases hepatic bile acid synthesis and release into the intestines to levels that overwhelm ASBT. Either ASBT dysfunction or FGF19 deficiency increases fecal bile acids and may cause chronic diarrhea and promote colon neoplasia. Regrettably, tools to measure bile acid malabsorption and the actions of drugs on bile acid transport in vivo are limited. To understand the complex actions of bile acids, techniques are required that permit simultaneous monitoring of bile acids in the gut and metabolic tissues. This led us to conceive an innovative method to measure bile acid transport in live animals using a combination of proton (1H) and fluorine (19F) magnetic resonance imaging (MRI). Novel tracers for fluorine (19F)-based live animal MRI were created and tested, both in vitro and in vivo. Strengths of this approach include the lack of exposure to ionizing radiation and translational potential for clinical research and practice.

Using Multi-fluorinated Bile Acids and In Vivo Magnetic Resonance Imaging to Measure Bile Acid Transport

Tools to diagnose bile acid malabsorption and measure bile acid transport in vivo are limited. An innovative approach in live animals is described that utilizes combined proton (1H) plus fluorine (19F) magnetic resonance imaging; this novel methodology has translational potential to screen for bile acid malabsorption in clinical practice.

Çok florlu Safra Asitler ve kullanma<em&gt; İn Vivo</em&gt; Manyetik Rezonans Görüntüleme Tedbir Safra Asit Ulaşım

Along with their traditional role as detergents that facilitate fat absorption, emerging literature indicates that bile acids are potent signaling ...

Ileectomy-induced Bile Overaccumulation in Mouse Intestine

Intestinal resection is a common therapeutic approach for human diseases such as obesity, inflammatory bowel disease, Crohn's disease, and colon cancer that often results in severe short bowel syndrome-like adverse effects including bile acid diarrhea, dehydration, electrolyte disturbances, and nutrient malabsorption. Here we introduce a murine ileal resection model, termed ileectomy, to evaluate tissue communication and the maintenance of systemic homeostasis. After ileal resection, circulating blood is permanently devoid of the ileum-specific endocrine hormone fibroblast growth factor 15 (FGF15), which releases its endocrinal inhibition of bile acid synthesis in the liver. In combination with the increased production and abolished reabsorption of bile acids after removing the ileum, mice that underwent surgery suffer from bile salt overaccumulation in the intestine and associated diarrhea, morbidity, and mortality. Novel usage of the surgery model introduced in this study may provide mechanistic and functional insights into ileal control of systemic metabolic regulation in physiology and disease.

Small intestine-dependent bile acid reabsorption and feedback inhibition of hepatic bile acid synthesis is important for systemic homeostasis and health. In this study, we describe a mouse model for ileal resection to evaluate ileectomy-induced bile malabsorption, overaccumulation, and toxicity in mouse intestine.

Fare bağırsak Ileectomy kaynaklı safra Overaccumulation

Intestinal resection is a common therapeutic approach for human diseases such as obesity, inflammatory bowel disease, Crohn's disease, and colon cancer ...

Rat Model of the Associating Liver Partition and Portal Vein Ligation for Staged Hepatectomy (ALPPS) Procedure

Recent clinical data support an aggressive surgical approach to both primary and metastatic liver tumors. For some indications, like colorectal liver metastases, the amount of liver tissue left behind after liver resection has become the main limiting factor of resectability of large or multiple liver tumors. A minimal amount of functional tissue is required to avoid the severe complication of post-hepatectomy liver failure, which has high morbidity and mortality. Inducing liver growth of the prospective remnant prior to resection has become more established in liver surgery, either in the form of portal vein embolization by interventional radiologists or in the form of portal vein ligation several weeks prior to resection. Recently, it was shown that liver regeneration is more extensive and rapid, when the parenchymal transection is added to portal vein ligation in a first stage and then, after only one week of waiting, resection performed in a second stage (Associating Liver Partition and Portal vein ligation for Staged hepatectomy = ALPPS). ALPPS has rapidly become popular across the world, but has been criticized for its high perioperative mortality. The mechanism of accelerated and extensive growth induced by this procedure has not been well understood. Animal models have been developed to explore both the physiological and molecular mechanisms of accelerated liver regeneration in ALPPS. This protocol presents a rat model that allows mechanistic exploration of accelerated regeneration.

Rat Model of the Associating Liver Partition and Portal Vein Ligation for Staged Hepatectomy ALPPS Procedure

Inducing rapid liver hypertrophy using Associating Liver Partition and Portal vein ligation for a Staged hepatectomy (ALPPS) has been proposed for resection of borderline resectable liver tumors. This model may elucidate mechanisms involved in rapid hypertrophy and allows testing of drugs that promote or block the acceleration of regeneration.

Karaciğer bölümü ilişkilendirme ve Portal ven ligasyonu hazırlanmış Hepatectomy (ALPPS) yordamı için fare modeli

Recent clinical data support an aggressive surgical approach to both primary and metastatic liver tumors. For some indications, like colorectal liver ...

Laser Doppler Perfusion Imaging in the Mouse Hindlimb

Blood flow recovery is a critical outcome measure after experimental hindlimb ischemia or ischemia-reperfusion. Laser Doppler perfusion imaging (LDPI) is a common, noninvasive, repeatable method for assessing blood flow recovery. The technique calculates overall blood flow in the sampled tissue from the Doppler shift in frequency caused when a laser hits moving red blood cells. Measurements are expressed in arbitrary perfusion units, so the contralateral non-intervened upon leg is usually used to help control measurements. Measurement depth is in the range of 0.3-1 mm; for hindlimb ischemia, this means that dermal perfusion is assessed. Dermal perfusion is dependent on several factors&#8212;most importantly skin temperature and anesthetic agent, which must be carefully controlled to result in reliable readings. Furthermore, hair and skin pigmentation can alter the ability of the laser to either reach or penetrate to the dermis. This article demonstrates the technique of LDPI in the mouse hindlimb.

Here, we present a protocol that demonstrates the technique and necessary controls for Laser Doppler perfusion imaging to measure blood flow in the mouse hindlimb.

Fare Hindlimb Lazer Doppler Perfüzyon Görüntüleme

Blood flow recovery is a critical outcome measure after experimental hindlimb ischemia or ischemia-reperfusion. Laser Doppler perfusion imaging (LDPI) is ...

A Mouse Model for Chronic Pancreatitis via Bile Duct TNBS Infusion

Chronic pancreatitis (CP) is a complex disease involving pancreatic inflammation and fibrosis, glandular atrophy, abdominal pain and other symptoms. Several rodent models have been developed to study CP, of which the bile duct 2,4,6 -trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS) infusion model replicates the features of neuropathic pain seen in CP. However, bile duct drug infusion in mice is technically challenging. This protocol demonstrates the procedure of bile duct TNBS infusion for generation of a CP mouse model. TNBS was infused into the pancreas through the ampulla of Vater in the duodenum. This protocol optimized drug volume, surgical techniques, and drug handling during the procedure. TNBS-treated mice showed features of CP as reflected by bodyweight and pancreas weight reductions, changes in pain-associated behaviors, and abnormal pancreatic morphology. With these improvements, mortality associated with TNBS injection was minimal. This procedure is not only critical in generating pancreatic disease models but is also useful in local pancreatic drug delivery.

Chronic pancreatitis (CP) is a disease characterized by inflammation and fibrosis of the pancreas, often associated with intractable abdominal pain. This article focuses on refining the technique to generate a mouse model of CP via bile duct infusion with 2,4,6 -trinitrobenzene sulfonic acid (TNBS).

Safra Kanalı TNBS infüzyonu ile Kronik Pankreatit için Bir Fare Modeli

Chronic pancreatitis (CP) is a complex disease involving pancreatic inflammation and fibrosis, glandular atrophy, abdominal pain and other symptoms. ...

Minimizing Post-Infusion Portal Vein Bleeding during Intrahepatic Islet Transplantation in Mice

Although the liver is currently accepted as the primary transplantation site for human islets in clinical settings, islets are transplanted under the kidney capsule in most rodent preclinical islet transplantation studies. This model is commonly used because murine intrahepatic islet transplantation is technically challenging, and a high percentage of mice could die from surgical complications, especially bleeding from the injection site post-transplantation. In this study, two procedures that can minimize the incidence of post-infusion portal vein bleeding are demonstrated. The first method applies an absorbable hemostatic gelatin sponge to the injection site, and the second method involves penetrating the islet injection needle through the fat tissue first and then into the portal vein by using the fat tissue as a physical barrier to stop bleeding. Both methods could effectively prevent bleeding-induced mouse death. The whole liver section showing islet distribution and evidence of islet thrombosis post-transplantation, a typical feature for intrahepatic islet transplantation, were presented. These improved protocols refine the intrahepatic islet transplantation procedures and may help laboratories set up the procedure to study islet survival and function in pre-clinical settings.

Here we present refined surgical procedures on successfully performing intraportal islet transplantation, a clinically relevant but technically challenging surgical procedure, in mice.

Farelerde İntrahepatik Adacık Transplantasyonu Sırasında İnfüzyon Sonrası Portal Ven Kanamasının En Aza İndirgenmesi

Although the liver is currently accepted as the primary transplantation site for human islets in clinical settings, islets are transplanted under the ...

DUCT: Double Resin Casting followed by Micro-Computed Tomography for 3D Liver Analysis

The liver is the biggest internal organ in humans and mice, and high auto-fluorescence presents a significant challenge for assessing the three-dimensional (3D) architecture of the organ at the whole-organ level. Liver architecture is characterized by multiple branching lumenized structures, which can be filled with resin, including vascular and biliary trees, establishing a highly stereotyped pattern in the otherwise hepatocyte-rich parenchyma. This protocol describes the pipeline for performing double resin casting micro-computed tomography, or &#34;DUCT&#34;. DUCT entails injecting the portal vein and common bile duct with two different radiopaque synthetic resins, followed by tissue fixation. Quality control by clearing one lobe, or the entire liver, with an optical clearing agent, allows for pre-screening of suitably injected samples. In the second part of the DUCT pipeline, a lobe or the whole liver can be used for micro-computed tomography (microCT) scanning, (semi-)automated segmentation, and 3D rendering of the portal venous and biliary networks. MicroCT results in 3D coordinate data for the two resins allowing for qualitative as well as quantitative analysis of the two systems and their spatial relationship. DUCT can be applied to postnatal and adult mouse liver and can be further extended to other tubular networks, for example, vascular networks and airways in the lungs.

Double resin casting micro-computed tomography, or DUCT, enables visualization, digitalization, and segmentation of two tubular systems simultaneously to facilitate 3D analysis of organ architecture. DUCT combines ex vivo injection of two radiopaque resins followed by micro-computed tomography scanning and segmentation of the tomographic data.

DUCT: Çift Reçine Dökümü ve ardından 3D Karaciğer Analizi için Mikro Bilgisayarlı Tomografi

The liver is the biggest internal organ in humans and mice, and high auto-fluorescence presents a significant challenge for assessing the ...

Extrahepatic Bile Duct and Gall Bladder Dissection in Nine-Day-Old Mouse Neonates

The dissection of murine neonatal bile ducts has been described as difficult. The main aim of the described standard operating procedure is the isolation of the extrahepatic bile duct (EBD) in mouse neonates without damaging the bile duct during preparation. Because of its exceptionally close preparation compared to the cholangiocytes cell line and harvesting of the entire extrahepatic bile duct system (EBDS), the described approach is extremely useful in researching animal models of newborn bile duct disorders, such as biliary atresia. After euthanasia, the peritoneal cavity was accessed, and the bile duct system, duodenum, and liver were extracted with the unique En-bloc-Resection (EbR). The extracted sample is placed on a foam mat, and the EBD is dissected from contaminating cells atraumatically without necessary touch. The dissection of the entire EBDS is a significant advantage of this method. Caution must be taken due to the small size and amount of bile duct tissue. Using the described technique, there is no damage to the cholangiocytes. Further, the purity of the technique is reproducible (n = 10). Therefore, optimally comparable samples can be harvested. Furthermore, no bile duct tissue is harmed, because any contact with the bile duct system can be avoided during preparation, leaving the bile fluid inside the gall bladder. Most importantly, while performing the final gall bladder and bile duct dissection, atraumatic microinstruments were used only slightly lateral of the bile duct without squeezing it. This is the key to a clean and intact sample, and essential for further histological investigation or the isolation of cholangiocytes. To summarize, the described innovative dissection technique enables especially inexperienced operators with the necessary equipment to isolate the EBDS as cleanly as possible.

For the observation of murine neonatal bile duct disorders, an intact bile duct and efficient preparation are required. Therefore, a new approach for isolating the entire extrahepatic bile duct system in murine neonates was successfully developed while maintaining the integrity of the bile duct.

Dokuz Günlük Fare Yenidoğanlarında Ekstrahepatik Safra Kanalı ve Safra Kesesi Diseksiyonu

The dissection of murine neonatal bile ducts has been described as difficult. The main aim of the described standard operating procedure is the isolation ...