AEvD Hollanda Kalp Vakfı (DHF-2007B103) tarafından desteklenmiştir. Yazarlar Amsterdam Doğum Çocuk ve Geliştirme (ABCD) çalışmaya tüm annelere ve çocuklara teşekkür ve Enstrümantasyon için Bölümünde VU-AMS sisteminin tüm geliştirme ve bakım ekibi olur - Psikofizyoloji Bölümü (VU Üniversitesi, Amsterdam, Hollanda).

1. Hazırlık: Başlatma <ol><li> İhtiyacınız: <ul><li> Bir VU-AMS5fs ayaktan kayıt cihazı (bir PC RS232 seri port veya USB bağlantı noktasına bağlanan bir kızılötesi arabirim kablosu dahil). </li><li> 7 elektrotlar (biz ConMed 1690-003 kullanılır). </li><li> 2 adet AA-pil şarj. </li><li> boş bir CompactFlash bellek kartı (VU-AMS5fs yaygın (TS1GCF80) Transcend gelen 1GB 80x CF kart ile test edilmiştir, ancak diğer CF kartları çok çalışması gerekir). </li><li> flash kart okuyucu ve Veri Analizi Yönetim Yazılımı (BARAJLAR) paketi ile bir dizüstü bilgisayar veya PC yüklü. </li><li> bir kronometre. </li><li> çocuk hikayeleri ve kulaklık ve küçük kendini şişme hava yatağı ile müzik çalar isteğe bağlıdır. </li></ul></li><li> Bu dosyalarınız üzerinde meta olarak kaydedilecektir yana, dizüstü / PC üzerinde saat ve tarih ayarlarını kontrol edin. (Başarılı yerleştirme bir tripl tarafından bildirilir VU-AMS cihaz boş hafıza kartı ve tam pil koymake bip). Cihaz bekleme modundayken, yeşil ışık iki kez her on saniye yanıp söner. Bu kayıt hazır değil, gösterir. Şimdi verilen kablosunu kullanarak dizüstü bilgisayara bağlamak ve BARAJLAR programını başlatın. Cihazı (sekme &#39;alet&#39; seçin ve uygun bağlantı modu, kızılötesi kablo veya bluetooth seçin) ile iletişim kurmaya. </li><li> Katılımcı onun / onu üst vücut giyim çıkarmak var. Elektrotlar yerleştirilir yerlerde, alkol mendil ile cilt temizleyin ve göğüs ve sırt (Şekil 1) yedi elektrotlar yerleştirin. Daha sonra renk düzeni takip eden kurşun teller takın ve cihaza bağlayın. </li><li> Pil tipi ve akü voltajı göstergesi (bu şarj edilebilir NiMH piller için alkali ve 2.4 V 3.4 V olmalıdır) kontrol edin. Kimlik alanını doldurun. Tipik bir örnekleme frekansı gibi şekil (Şekil 2) de gösterilmiştir. </li><li> Mesafe b ölçünetween iki göğüs milimetre cinsinden elektrotlar ve alan &#39;ICG-V mesafe&#39; bu doldurun. Daha sonra cihaza geçerli ayarları / ID göndermek için &#39;ayarları gönderebilir tıklayın. </li><li> Şimdi, programın &#39;Online&#39; seçeneğini EKG, ΔZ (bu solunum) ve dZ / dt (bu ICG olan) görüntülemek için kullanılmalıdır. ΔZ sinyali uygun filtreleme sonra yüksek sadakat 7 ile solunum sinyali ayıklamak için kullanılabilir toraks genelinde baz empedans, yansıtır. DZ / dt sinyal zaman içinde farklılaşan ΔZ ve aort içine ventrikülden kan ejeksiyon bağlantılı ΔZ hızlı değişiklikleri yansıtır. <ol><li> Net bir QRST-kompleksi EKG&#39;de tespit olmalıdır. R dalgası yukarı olmalı ve her iki yönde en büyük (mutlak) genlik ile zirve olmalıdır. </li><li> ΔZ -1 ile +1 arasında zaman ve dZ / dt en Ω -0.5 ve +0.5 içinde olmalıdır Ω / sn. </li><li> Z 0 alwa gerekirys bir 8 ila 20 Ω aralığında kalmak. Bu değişim göğüs empedans sinyal çocuğun yüksekliğinin bir fonksiyonudur Ölçüm elektrotları ve Ölçüm elektrotları tarafından kapalı toraks sütunun &#39;ıslaklık&#39;, vücut kompozisyonu farklılıkları (örneğin VKİ) arasındaki mesafeye bağlı olduğu gerçeğini yansıtmaktadır dZ / dt sinyal (yağ kitlesi kas daha az su içeren) genliği etkileyebilir. Z 0 mutlak genliği olarak bireysel farklılıklar aynı zamanda ΔZ sinyal yansıtılır ancak bu genlik bağımsız sistolik zaman aralıkları, belirlenmesi etkilemez. </li><li> ΔZ sinyal açıkça konunun derin nefes alma (çocuğun yavaş derin bir nefes almak için talimat ve yavaş yavaş nefes verin) yansıtmalıdır. </li><li> Olarak kardiyak ejeksiyon faz yansıtan tipik yukarı dalga ICG açıkça tespit olmalıdır. Konunun ışık hareketi dZ / dt sinyal deforme olmamalıdır. Bu kriterler, r karşılanmazsacilt E-temiz ve tatmin edici sinyaller elde edinceye kadar elektrotlar yeniden takın. </li></ol></li><li> Iyi sinyal elde edildiğinde, &#39;start&#39; düğmesine basarak veri kayıt başlar. Bu kaydın başlangıç ​​ve yeşil ışık her üç saniyede bir yanıp sönmeye başlar kabul bir bip sesi duyacaksınız. Kayıt şimdi başlamıştır. VU-BARAJLAR programı kapatın. Artık arabirim kablosunu cihazın bağlantısını kesebilirsiniz. </li></ol> 2. Kayıt Dönemi <ol><li> Kayıt başladıktan sonra, çocuğun ilk deneysel durum için yatmak istiyoruz. Çocuğun iki dakika yatar pozisyonda (head-up tilt olmadan) olmuştur zaman, kısa bir süre (&lt;2 sn) cihazın üstündeki küçük siyah düğmesine basın. Bu düğmeye basıldığında özel bir olay işaretleri, ve daha sonra size veri bu durumun başlangıç ​​belirlemenize yardımcı olacaktır. </li><li> Dört dakika sonra tekrar olay düğmesine basın. Bu yatarken sonunda sinyalleridurumu. Şimdi çocuğun oturup bu ikinci durum için prosedürü tekrarlayın var. Düğmesine basın, dört dakika bekleyin ve tekrar düğmesine basın. Çocuklar bu koşullarında sessizce dinlenmek için talimat vardır. </li><li> Ölçümü durdurmak için, basın ve en az 3 saniye düğmesini basılı tutun. Işık durdu ve modu &#39;stand by&#39; olduğunu gösterdiğinden her 10 saniye yanıp söner. Cihaz durduktan sonra, elektrotlar gelen konektörü ve kurşun teller kurşun tel fiş kesebilir. </li><li> Pil ve flash kart formu VU-AMS cihazı çıkarın ve okuyucu ünitesinde flash kart yerleştirin. Belirli bir dizin (genellikle dizinin adını kimlik alanında kullanılan konu tanımlayıcı aynı olacaktır) için alınan dosyaları taşıyın. </li></ol> 3. Veri İşleme <ol><li> VU-BARAJLAR programını kullanarak veri açıldığında, verileri otomatik olarak ham veri formatı (uzantısı. 5fs) dönüştürülmüş olacak &lt;Yeni bir biçim (uzantısı. Amsdata) için / em&gt;. Bu VU-BARAJLAR takip eden adımda kullanacağınız veri dosyasıdır. </li><li> İlk EKG sinyalinden Inter bitirin Aralığı zaman serisi ayıklayın. Algılama R-zirveleri sekmesini seçin. Otomatik bir algoritma EKG sinyali tüm R tepe tespit etmek ve (eğer varsa) çıkarılması için çok düşük bir EKG kalitesi ile dönemleri seçecektir. Sol üst köşesinde Mavi sayısı (doğru), Sarı (orta şüpheli) veya KIRMIZI (çok şüpheli) gösterilir. Tarafından basarak &#39;.&#39; (DOT) imleç bir sonraki şüpheli R-tepe taşınır ve kullanıcı elle silmek veya R-dalgaları için işaretleri ekleyebilirsiniz. En az tüm yüksek şüpheli atım görsel olarak kontrol tavsiye edilir. </li><li> Temel amacı, kalp hızı, preejeksiyon süresi (PEP) ve kullanılan deneysel koşullar arasında solunum sinüs aritmi (RSA, HF, RMSSD) ölçümleri için bir ortalama değer elde etmektir. Bu nedenle ham veri dönemlerine karşılık gelen belirterek devamBu koşullar. Bu işlem &#39;veri etiketleme&#39; olarak adlandırılır. Etiket Veri sekmesini seçin. İki panel kalp atış hızı sinyalini ve hareket sinyali, sırasıyla, hem de kaydın gerçek zamanı gösterir. </li><li> Bu &quot;tıklayın ve etiket eklemek için sürükleyin&quot; ilk durumun başlangıç ​​zamanı civarında ve bu durumun bitiş zamanı için fareyi sürükleyin diyor üst çubuğunda fare imleci yerleştirin. Bu kez ya başlangıç ​​bir yazılı kayıt elde edilen ve saatleri (veri toplama sırasında aşağı not aldığınız) durdurmak ya da dikey olan her durumun başlangıç ​​ve sonunda düğmeye basarak elde edilen başlangıç ​​ve bitiş işaretleri kullanabilirsiniz vardır İK ve hareket grafikler üzerinde çalışan hatları. </li><li> Her etiket belirli bir durumu işaret için (benzersiz) tanımlayıcı verilebilir. Deneysel durumu: Bizim durumumuzda bizim etiket için sadece bir kategori var. Yatarak ve oturarak: Bu kategorinin iki değeri vardır. </li><li> VU-DAMS deneysel haberdar olması gerekirBir sözde etiket yapılandırma dosyası (label.cfg) tarafından tal tasarım. Bu çoğu metin editörleri ile açıldı ve, örneğin, bu gibi görünüyor olabilir bir ASCII dosyasıdır: # Exp_condition 10 yatarak 11 kadar oturma </li><li> . Amsdata dosyaları dizinde label.cfg dosyası yerleştirerek, otomatik olarak VU-BARAJLAR program tarafından yüklenecektir. Bir etiket yapıldıktan sonra, ekran açılır label.cfg dosyasında listelenen kategoriler / değerleri ile görünür. Ilk etiket için &#39;yatarak&#39; ve ikinci etiket için &#39;oturup&#39; seçin. </li><li> Etiketleme sonra, empedans cardiogram içinde KEP puan için &#39;Empedans puanlama&#39; sekmesini seçin. Koşullarının her biri için bir topluluk dZ / dt dalga şekli görüntülenir ortalama, EKG R-tepe zaman kilitli. Bir topluluk EKG dZ / dt dalga aşağıda sunulmuştur ortalama. EKG S-dalgası başlangıçlı (elektriksel aktivite başlar), B-noktası ICG (ejeksiyon faz başlar), ICG dZ / dt-dakika (: doğru pozisyonlarda dört dikey imleçler yerleştirinmaksimum ejeksiyon hızı) ve ICG X-noktası (aort kapak kapatma - ejeksiyon faz sonu). </li><li> Daha sonra, tepe-vadi solunum kullanarak RSA ve EKG sinyallerini puan için &#39;Solunum Puanlama&#39; sekmesini seçin. Solunum aralığı ve ilham sırasında kısa interbeat aralığı ve ekspirasyon sırasında en uzun interbeat aralığının Otomatik nefes-to-nefes puanlama artık kontrol edilebilir. Genellikle otomatik algılama algoritması sapkın olarak nefes fazla 15% sınıflandırmak gerekir - aksi takdirde solunum sinyal incelemek ve gerektiği gibi algılama algoritması parametreleri ayarlamak. EKG, ICG ve solunum sinyalleri ve etkileşimli PEP ve RSA puanlama görsel muayene için rehber VU-AMS web sitesinde, bulunabilir <a href="http://www.vu-ams.nl" target="_blank">www.vu-ams.nl</a> . </li></ol><ol start="10"><li> Son olarak, etiket bilgisi sekmesini seçin. Sonuçları ile bir tablo hesaplama sonra görünür. Her satır av temsilHer etiketli bir süre için fizyolojik parametrelerin (kalp atım hızı, PEP, RSA, RR) bir dizi talaması değer. İlk sütun konu tanımlayıcı (Label_ID) sahiptir. Son sütun etiketleme sırasında kullanılan tüm kategoriler değerlerini gösterir (burada iki değeri sadece tek bir kategori &#39;deneysel durumu&#39;, &#39;oturup&#39; ve &#39;yatarak&#39;). Interbeat aralığı kez serinin spektral yetkileri sadece 4 dakika (aksi takdirde eksik kodu görüntülenir) en az süresini etiketler için verilmiştir. Bu ekranda tablo daha ileri istatistiksel analizler için ASCII veya EXCEL ihraç edilebilir. </li></ol>

<ol>
	<li>de Geus, E. J., Willemsen, G. H., Klaver, C. H., van Doornen, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ambulatory+measurement+of+respiratory+sinus+arrhythmia+and+respiration+rate.">Ambulatory measurement of respiratory sinus arrhythmia and respiration rate.</a> Biol. Psychol. 41, 205-227 (1995).</li><li>Goedhart, A. D., van der, S. S., Houtveen, J. H., Willemsen, G., de Geus, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+time+and+frequency+domain+measures+of+RSA+in+ambulatory+recordings.">Comparison of time and frequency domain measures of RSA in ambulatory recordings.</a> Psychophysiology. 44, 203-215 (2007).</li><li>Goedhart, A. D., Kupper, N., Willemsen, G., Boomsma, D. I., de Geus, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+stability+of+ambulatory+stroke+volume+and+cardiac+output+measured+by+impedance+cardiography.">Temporal stability of ambulatory stroke volume and cardiac output measured by impedance cardiography.</a> Biol. Psychol. 72, 110-117 (2006).</li><li>Riese, H., Groot, P. F. C., van den Berg, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+ensemble+averaging+of+ambulatory+impedance+cardiograms.">Large-scale ensemble averaging of ambulatory impedance cardiograms.</a> Behavior Research Methods Instruments &amp; Computers. 35, 467-477 (2003).</li><li>Willemsen, G. H., de Geus, E. J., Klaver, C. H., van Doornen, L. J., Carroll, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ambulatory+monitoring+of+the+impedance+cardiogram.">Ambulatory monitoring of the impedance cardiogram.</a> Psychophysiology. 33, 184-193 (1996).</li><li>van Dijk, A. E., van Eijsden, M., Stronks, K., Gemke, R. J., Vrijkotte, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prenatal+stress+and+balance+of+the+child's+cardiac+autonomic+nervous+system+at+age+5-6+years.">Prenatal stress and balance of the child's cardiac autonomic nervous system at age 5-6 years.</a> PLoS ONE. 7, e30413 (2012).</li><li>Houtveen, J. H., de Groot, P. F., de Geus, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+variation+in+posture+and+respiration+on+RSA+and+pre-ejection+period.">Effects of variation in posture and respiration on RSA and pre-ejection period.</a> Psychophysiology. 42, 713-719 (2005).</li><li>Goedhart, A. D., Willemsen, G., Houtveen, J. H., Boomsma, D. I., De Geus, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparing+low+frequency+heart+rate+variability+and+preejection+period:+two+sides+of+a+different+coin.">Comparing low frequency heart rate variability and preejection period: two sides of a different coin.</a> Psychophysiology. 45, 1086-1090 (2008).</li><li>van Dijk, A. E., van Eijsden, M., Stronks, K., Gemke, R. J., Vrijkotte, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardio-metabolic+risk+in+5-year-old+children+prenatally+exposed+to+maternal+psychosocial+stress:+the+ABCD+study.">Cardio-metabolic risk in 5-year-old children prenatally exposed to maternal psychosocial stress: the ABCD study.</a> BMC Public Health. 10, 251 (2010).</li><li>van Lien, R., Goedhart, A., Kupper, N., Boomsma, D., Willemsen, G., de Geus, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Underestimation+of+cardiac+vagal+control+in+regular+exercisers+by+24-hour+heart+rate+variability+recordings.">Underestimation of cardiac vagal control in regular exercisers by 24-hour heart rate variability recordings.</a> Int. J. Psychophysiol. 81, 169-176 (2011).</li></ol>

<p class="jove_content"&gt; Biz ifşa hiçbir şey yok.</p

Biz 5 ve 7 yaş arasındaki 3097 çocuklarda kardiyak otonomik kontrolü, ölçmek için bir ayaktan kayıt cihazı kullanılır. Yedi elektrotlar kalp hızı, kalp hızı değişkenliği ve sistolik zaman aralıkları çıkarıldı hangi EKG ve ICG ölçmek için yeterli oldu. Solunum frekans bandında kalp hızı değişkenliği (RSA) kardiyak parasempatik aktivite geçerli bir göstergesidir. Kardiyak kontraktilite yansıtarak sistolik zaman aralığı, PEP, kardiyak sempatik aktivite geçerli bir göstergesidir. İK, PEP ve RSA için elde edilen ortalama değerler, duruş değişiklikleri ve kız ve erkek çocuklar arasındaki farkların etkilerini literatürde beklenen ne doğrultusunda idi. Ayakta izlemeyi bir laboratuvarda değerlendirmenin gerekliliği kaldırıldı olarak bizim kayıtları sinyal kayıt kalitesi farklılıklar olmadan çeşitli yerlerde (örneğin okul, spor merkezi, bilim müzesi) olarak yapılabilir. Bununla birlikte, bunun birafterload ve ön etkileri kalp sempatik sürücü 7 herhangi bir değişiklik olmadan PEP birlikte belirleyebilirsiniz gibi son derece önemli, duruş ve fiziksel yük için konu karşılaştırmalar içinde veya arasında standardize etmek. Biz EKG bu ayaktan kayıt sonucuna ve çocukların büyük örneklerinde ICG son derece mümkündür ve çocuklarda kardiyak otonom kontrol gelecekteki değerlendirmeler için yararlı bir şablon olarak geçerli standart çalışma tasarımı öneriyoruz.

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td>Name of Reagent/Material</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalogue Number</td>
			<td>Comments</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>VU-AMS5fs ambulatory recording device &amp; infrared interface cable</td>
			<td>VU University Amsterdam</td>
			<td>n/a</td>
			<td><a href="http://www.vu-ams.nl" target="_blank">http://www.vu-ams.nl</a></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Electrodes</td>
			<td>ConMed</td>
			<td>1690-003</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>AA-batteries</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>CompactFlash memory card</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Laptop/pc with flash card reader</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>VU-DAMS software suite</td>
			<td>VU University Amsterdam</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>free download, <a href="http://www.vu-ams.nl" target="_blank">http://www.vu-ams.nl</a></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Stopwatch</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Music player &amp; headphones</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>optional</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Self-inflatable air mattress</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>optional</td>
		 </tr>
		</tbody>
 </table>

measuring cardiac autonomic nervous system (ans) activity in children

Otonom sinir sistemi (ANS) kalp hızı, sindirim, solunum hızı, tükürük, ter ve böbrek fonksiyonu gibi, homeostasis ilgileniyoruz ağırlıklı otomatik vücut fonksiyonları kontrol eder. Tehlike ve stres zamanlarında eylem için insan vücudu hazırlayan sempatik sinir sistemi, ve vücudun dinlenme durumuna düzenleyen parasempatik sinir sistemi,: ANS iki ana şubesi bulunmaktadır. Veya ANS aktivite yüzeysel sinirlerden radyotracer teknikleri veya mikroelektrot kayıt ile örneğin, invaziv ölçülebilir, ya da ter bezlerinin örneğin, ANS aktivite değişiklikleri için bir proxy olarak bir organ tepkisi değişiklikleri kullanarak non-invaziv ölçülebilir kalp. Invaziv ölçümler en yüksek geçerliliği var ama non-invaziv önlemler tercih edilen yaklaşım büyük ölçekli örneklerde çok kötü mümkün bulunmaktadır. Kalp üzerinde otonomik etkileri güvenilir kayıt ile belirlenebilirsolunum yanıt olarak toraks empedans değişiklikleri ve aort içine ventrikülden kan ejeksiyon yansıtan empedans cardiogram (ICG), ile birlikte elektrokardiyogram (EKG) değildir. Solunum ve EKG sinyalleri, solunum sinüs aritmi kalp parasempatik kontrolü bir ölçüsü olarak elde edilebilir. EKG ve sol ventrikül ejeksiyon sinyallerinden, preejeksiyon dönemde kardiyak sempatik bir kontrol önlemi olarak elde edilebilir. EKG ve ICG kayıt çoğunlukla laboratuvar ortamlarında yapılır. Ancak, laboratuvara konular raporu olan büyük ekolojik geçerlilik azaltır, her zaman büyük ölçekli epidemiyolojik çalışmalarda yapılabilir değildir ve küçük çocuklar için korkutucu olabilir. EKG ve ICG için ayakta cihazı aynı anda bu üç sorunları çözer. Burada, geçerli bir amb kullanarak, çocuklarda kardiyak otonom kontrol minimal invaziv ve hızlı değerlendirme için bir çalışma tasarımı mevcutulatory cihaz 1-5, VU Üniversitesi Gezici İzleme Sistemi (VU-AMS, Amsterdam, Hollanda, <a href="http://www.vu-ams.nl" target="_blank">www.vu-ams.nl</a> ).

Amsterdam doğumlu Çocuklar ve onların Geliştirme çalışması, Hollandalı bir prospektif, uzunlamasına doğum kohort olarak, ölçüm protokolü 3.097 çocuk 6 başladı. Onay Akademik Tıp Merkezi Tıbbi Etik Kurul, VU Üniversitesi Tıp Merkezi Tıbbi Etik Komitesi ve Amsterdam Tescil Komitesi elde edilmiştir. Katılan tüm anneler kendileri ve çocukları için yazılı bilgilendirilmiş onam verdi. Izler hafif ve göze batmayan olduğu için, çocuklar çok iyi bu ölçümler tolere. Biz reddetme oranı veri yok, ama deneyimi sadece birkaç çocuk elektrot yerleştirme ve böylece tıkalı daha fazla değerlendirme karşı öğretti. 3.097 kayıtların,% 0.7 nedeniyle ekipman yetersizliği veya dosya yanlış yere koyma ya kaybedildi. Sol 3.074 kayıt dışında, 98.7% tüm protokol (n = 3,056) tamamlanmış çocuk vardı. Adet içindeetiketli süreler (biz aslında dört süreler etiketli, ancak daha sonra iki bu özetlenmiştir) bir kanal, biz KEP tespit edilemeyen, yani belirsiz ICG sinyalleri karşılaştı. Bu dört etiketli dönem, ikinci% 2.4, üçüncü% 2,8 ve dördüncü dönemde% 4,1 &#39;lik ilk giren% 1.5 kaybına yol açtı. Tüm zamanların dönemlerde KEP tamamlandı veri 2.797 olguda (böylece% 91.5, net ICG sinyalleri nedeniyle 8.5% kayıp) sunulmuştu. Kalp atım hızı (KAH), ön-ejeksiyon süresi (PEP) ve solunum sinüs aritmisi (RSA), hem de cinsiyet ve yaş tam veri, 2.761 çocuklardan mevcut, bu son adımda,% 1.3 veri kaybı meydana, nedeniyle bilinmeyen nedenler. Genel olarak, ait kayıtların 89.2% tam konusu veri yol açtı. Çocukların yaş ortalaması 5.7 yıl (SD 0.5; çeyrekler arası aralık 5.0:6.5) idi, ve BMI 15.5 kg / m 2 (SD 1.5; çeyrekler arası aralık 13.9:17.2) oldu. Önemli sonuç değişkenleri HR, PEP ve RSA ar ortalama değerleriE Tablo 1&#39;de verilen ve grafiksel kız ve erkek çocuklar için ayrı ayrı Şekil 3, tasvir. HR (hem yatarak ve oturup) ve PEP (sadece oturup) erkek (her iki duruşlar) göre kızlarda daha yüksekti. RSA erkek (her iki duruşlar) daha kızlarda düşüktü. Kızlar İK için daha yüksek değerler alt vagal (parasempatik) kalp kontrolü neden olması muhtemeldir. Onların sempatik kalp kontrolü farklı ya da erkek (oturan) göre daha da düşük değildi. Oturup zaman RSA düşük iken, yatarak kıyasla otururken Her iki cinsiyette de İK yüksekti. Bu kadar oturan alt vagal kontrolü yansıtır. PEP sonra yatarak oturup kısaydı. Bu etki de beklendiği gibi oldu, ve ters süreçlerin sonucunu yansıtmaktadır: artış önyükleme (kısaltır KEP) 7 ile yatarken düşük sempatik aktivite (PEP uzatır). <table border="1" class="jove_content_small" fo:keep-together.within-page = &quot;her zaman&quot;&gt; <tbody><tr><td rowspan="3"></td><td colspan="6"> Boys </td><td colspan="5"> Kızlar </td></tr><tr><td colspan="3"> Yatarak </td><td colspan="3"> Kadar oturma </td><td colspan="2"> Yatarak </td><td colspan="3"> Kadar oturma </td></tr><tr><td> Ortalama </td><td colspan="2"> SD </td><td> Ortalama </td><td> SD </td><td></td><td> Ortalama </td><td> SD </td><td> Ortalama </td><td> SD </td><td></td></tr><tr><td> Kalp hızı (bpm) </td><td> 83.9 </td><td> 9.5 </td><td> * </td><td> 89.1 </td><td> 10 </td><td> * † </td><td> 86.9 </td><td> 10.1 </td><td> 92.4 </td><td> 10.4 </td><td> † </td></tr><tr><td> Ön ejeksiyon süresi (msn) </td><td>76.9 </td><td> 11.8 </td><td></td><td> 78.5 </td><td> 12.2 </td><td> * † </td><td> 77.7 </td><td> 10.3 </td><td> 81 </td><td> 11.7 </td><td> † </td></tr><tr><td> Solunum sinüs aritmi (msn) </td><td> 127.0 </td><td> 60.4 </td><td> * </td><td> 115.7 </td><td> 55.8 </td><td> * † </td><td> 121.7 </td><td> 56.8 </td><td> 108.7 </td><td> 51.9 </td><td> † </td></tr></tbody></table> Tablo 1. Duruş farkı duruş erkek ve kız kardiyak otonom sinir sistemi önlemler,. S bir örnek cinsiyet farkı T-test için &lt;0.05. † p eşleştirilmiş örnekler t-testi için &lt;0.05. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/50073/50073fig1.jpg" /> Şekil 1. Yedi elektrotlar katılımcının göğüs ve sırt konulmalıdır. Ilk EKG elektrodu (V-) yerd biraz sternum sağındaki doğru köprücük kemiği 4 cm altında. İkinci EKG elektrodu (V +) yaklaşık processus xiphodius düzeyinde göğsün sol yan kenarında dokuzuncu kaburga üzerinde kalbin tepesinde yer alır. Üçüncü EKG elektrodu (GND) bir toprak elektrot ve sağ karın de alt iki kaburga arasında, sağ tarafta yer alıyor. İlk ICG ölçüm elektrodu (V 1) yaka kemiklerin uçları arasında, sternum en sonunda yerleştirilir. İkinci ICG ölçüm elektrodu kaburga karşılamak sternum, bir kılıç şeklinde karmaşık yerleştirilir. Iki akım elektrot geri yerleştirilir: I-on servikal vertebra C4 üzerinde omurga, ICG üzerinde en az 3 cm (1) elektrodun V-ve I + torakal vertebra T8 ve T9 arasındaki omurga üzerinde ölçüm , elektrodun V 2 ölçüm ICG altında en az 3 cm (1 &quot;). ICG elektrot yerleştirme dikkate alır sol ventrikül driv en büyük bölümünütoraks empedans en değişiklik suprasternal çentik ve processus xiphoideus arasındaki sütun tarafından yakalanır. <img alt="Şekil 2," fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50073/50073fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50073/50073fig2.jpg" /> Şekil 2. VU-AMS5fs cihaza bağladıktan sonra BARAJLAR yazılımı tarafından görüntülenen bir kayıt için kullanılan tipik ayarlar. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50073/50073fig2large.jpg" target="_blank">büyük rakam görmek için buraya tıklayın</a> . <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/50073/50073fig3.jpg" fo:content-width="3.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50073/50073fig3highres.jpg"/> Şekil 3,. Kız ve erkek kardiyak otonom sinir sistemi önlemleri, duruş. * Bir örnek cinsiyet farkı T-testi için p &lt;0.05 gösterir. # Gösterirp eşleştirilmiş duruş fark T-test için &lt;0.05.

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Cardiac Autonomic Nervous System ANS Activity in Children at JoVE.com

Measuring Cardiac Autonomic Nervous System ANS Activity in Children

Otonom sinir sistemi aktivitesi ölçümü genellikle sınırları çocuklara korkutucu bir ortam sağlayabilir laboratuar, için araştırmacı ve katılımcı. VU Üniversitesi Gezici İzleme Sistemi (VU-AMS) cihaz herhangi bir ortamda kardiyak otonomik kontrolü kaydedebilirsiniz. VU-AMS çocuklarda test için çok müsait olduğunu kanıtladı.

Çocuklarda Ölçme Kardiyak Otonom Sinir Sistemi (ANS) Faaliyet

The autonomic nervous system (ANS) controls mainly automatic bodily functions that are engaged in homeostasis, like heart rate, digestion, respiratory ...

measuring-cardiac-autonomic-nervous-system-ans-activity-in-children

Research

JoVE Journal

Medicine

Measuring Cardiac Autonomic Nervous System (ANS) Activity in Children

20.7K Görüntüleme.  Academic Medical Center - University of Amsterdam. Otonom sinir sistemi aktivitesi ölçümü genellikle sınırları çocuklara korkutucu bir ortam sağlayabilir laboratuar, için araştırmacı ve katılımcı. VU Üniversitesi Gezici İzleme Sistemi (VU-AMS) cihaz herhangi bir ortamda kardiyak otonomik kontrolü kaydedebilirsiniz. VU-AMS çocuklarda test için çok müsait olduğunu kanıtladı.

Video: Measuring Cardiac Autonomic Nervous System ANS Activity in Children

Quantitative Autonomic Testing

Disorders associated with dysfunction of autonomic nervous system are quite common yet frequently unrecognized. Quantitative autonomic testing can be invaluable tool for evaluation of these disorders, both in clinic and research. There are number of autonomic tests, however, only few were validated clinically or are quantitative. Here, fully quantitative and clinically validated protocol for testing of autonomic functions is presented. As a bare minimum the clinical autonomic laboratory should have a tilt table, ECG monitor, continuous noninvasive blood pressure monitor, respiratory monitor and a mean for evaluation of sudomotor domain. The software for recording and evaluation of autonomic tests is critical for correct evaluation of data. The presented protocol evaluates 3 major autonomic domains: cardiovagal, adrenergic and sudomotor. The tests include deep breathing, Valsalva maneuver, head-up tilt, and quantitative sudomotor axon test (QSART). The severity and distribution of dysautonomia is quantitated using Composite Autonomic Severity Scores (CASS). Detailed protocol is provided highlighting essential aspects of testing with emphasis on proper data acquisition, obtaining the relevant parameters and unbiased evaluation of autonomic signals. The normative data and CASS algorithm for interpretation of results are provided as well.

Standardized, comprehensive and fully quantitative testing of autonomic functions is described. The autonomic tests consist of evaluation of all three major autonomic domains including cardiovagal, adrenergic and sudomotor. The severity and distribution of dysautonomia is quantitated using Composite Autonomic Severity Scores.

Kantitatif Otonom Test

Disorders associated with dysfunction of autonomic nervous system are quite common yet frequently unrecognized. Quantitative autonomic testing can be ...

Tıp

Measuring Cardiac Autonomic Nervous System (ANS) Activity in Toddlers - Resting and Developmental Challenges

The autonomic nervous system (ANS) consists of two branches, the parasympathetic and sympathetic nervous systems, and controls the function of internal organs (e.g., heart rate, respiration, digestion) and responds to everyday and adverse experiences 1. ANS measures in children have been found to be related to behavior problems, emotion regulation, and health 2-7. Therefore, understanding the factors that affect ANS development during early childhood is important. Both branches of the ANS affect young children&#8217;s cardiovascular responses to stimuli and have been measured noninvasively, via external monitoring equipment, using valid and reliable measures of physiological change 8-11. However, there are few studies of very young children with simultaneous measures of the parasympathetic and sympathetic nervous systems, which limits understanding of the integrated functioning of the two systems. In addition, the majority of existing studies of young children report on infants&#8217; resting ANS measures or their reactivity to commonly used mother-child interaction paradigms, and less is known about ANS reactivity to other challenging conditions. We present a study design and standardized protocol for a non-invasive and rapid assessment of cardiac autonomic control in 18 month old children. We describe methods for continuous monitoring of the parasympathetic and sympathetic branches of the ANS under resting and challenge conditions during a home or laboratory visit and provide descriptive findings from our sample of 140 ethnically diverse toddlers using validated equipment and scoring software. Results revealed that this protocol can produce a range of&#160;physiological responses to both resting and developmentally challenging conditions, as indicated by changes in heart rate and indices of parasympathetic and sympathetic activity. Individuals demonstrated&#160;variability in resting levels, responses to challenges, and challenge reactivity, which provides additional evidence that this protocol is useful for the examination of ANS individual differences for toddlers.

Measuring Cardiac Autonomic Nervous System ANS Activity in Toddlers - Resting and Developmental Challenges

We describe the methods for continuous monitoring of the autonomic nervous system under resting and challenge conditions with 18 month old children. Results revealed that this protocol can produce meaningful physiological responses in both branches of the autonomic nervous system and elicit significant individual variability in patterns of responses.

Yeni yürümeye başlayan çocuklar Kalp Otonom Sinir Sistemi (ANS) Aktivite Ölçüm - Dinlenme ve Gelişim Zorluklar

The autonomic nervous system (ANS) consists of two branches, the parasympathetic and sympathetic nervous systems, and controls the function of internal ...

Nerve-sparing Mid-urethral Obstruction (NeMO) in Female Small Rodents

Partial bladder outlet obstruction (pBOO) has a high prevalence, causes significant patient burden, and immense health care costs. The most common animal model to investigate bladder remodeling in pBOO are female rodents undergoing partial obstruction at the proximal urethra. Variability in the degree of obstruction and animal mortality are major concerns with proximal obstruction. Furthermore, dissecting around the proximal urethra and bladder neck jeopardizes bladder innervation.
We developed a nerve-sparing mid-urethral obstruction (NeMO) model for pBOO avoiding the disadvantages of the traditional model. We approached the urethra just inferior to the pubic symphysis, which obviated the need for laparotomy as well as for dissection in this area; also, the striated urethral sphincter remained untouched. We performed NeMO in female Sprague-Dawley rats (12 obstructions, 6 sham animals) as well as in female C57/bl6 mice (20 obstructions, 18 sham animals). After two weeks, we evaluated bladder function, bladder mass, and body mass.
We had no mortalities among obstructed- or sham-operated female rats; as described for the traditional proximal pBOO-method, we tied the suture around the proximal urethra and a temporarily placed 0.9 mm metal rod. NeMO induced an 85% increase in bladder mass after two weeks, average residual urine volume was 0.4 mL in partially obstructed rats while only 0.03 mL in sham animals. In mice, we tested 3 sizes of cannulas that we placed along the urethra when tying the suture. We found that using a 27-gauge cannula resulted in over 50% animal mortality; placing the 25-gauge cannula did not yield the desired response in increasing bladder mass; utilizing a 26-gauge cannula yielded favorable results with minimal animal mortality (1/8) yet a significant 2-fold increase in bladder mass.

Nerve-sparing Mid-urethral Obstruction NeMO in Female Small Rodents

Traditional modeling of partial bladder outlet obstruction in rodents is fraught with animal mortality. A denervation injury from dissection around the proximal urethra and bladder neck is also of major concern. We developed and evaluated a safe and reliable mid-urethral obstruction model, avoiding the shortcomings of the traditional model.

Kadın Küçük Kemirgenler Sinir koruyucu Orta üretral Tıkanıklığı (Nemo)

Partial bladder outlet obstruction (pBOO) has a high prevalence, causes significant patient burden, and immense health care costs. The most common animal ...

A Drosophila In Vivo Injury Model for Studying Neuroregeneration in the Peripheral and Central Nervous System

The regrowth capacity of damaged neurons governs neuroregeneration and functional recovery after nervous system trauma. Over the past few decades, various intrinsic and extrinsic inhibitory factors involved in the restriction of axon regeneration have been identified. However, simply removing these inhibitory cues is insufficient for successful regeneration, indicating the existence of additional regulatory machinery. Drosophila melanogaster, the fruit fly, shares evolutionarily conserved genes and signaling pathways with vertebrates, including humans. Combining the powerful genetic toolbox of flies with two-photon laser axotomy/dendriotomy, we describe here the Drosophila sensory neuron &#8211; dendritic arborization (da) neuron injury model as a platform for systematically screening for novel regeneration regulators. Briefly, this paradigm includes a) the preparation of larvae, b) lesion induction to dendrite(s) or axon(s) using a two-photon laser, c) live confocal imaging post-injury and d) data analysis. Our model enables highly reproducible injury of single labeled neurons, axons, and dendrites of well-defined neuronal subtypes, in both the peripheral and central nervous system.

A Drosophila In Vivo Injury Model for Studying Neuroregeneration in the Peripheral and Central Nervous System

Here, we present a protocol using the Drosophila sensory neuron - dendritic arborization (da) neuron injury model, which combines in vivo live imaging, two-photon laser axotomy/dendriotomy, and the powerful fly genetic toolbox, as a platform for screening potential promoters and inhibitors of neuroregeneration.

Neuroregeneration periferik ve santral sinir sistemi çalışmak için bir Vivo Drosophila yaralanma modeli

The regrowth capacity of damaged neurons governs neuroregeneration and functional recovery after nervous system trauma. Over the past few decades, various ...

Impact of Intracardiac Neurons on Cardiac Electrophysiology and Arrhythmogenesis in an Ex Vivo Langendorff System

Since its invention in the late 19th century, the Langendorff ex vivo heart perfusion system continues to be a relevant tool for studying a broad spectrum of physiological, biochemical, morphological, and pharmacological parameters in centrally denervated hearts. Here, we describe a setup for the modulation of the intracardiac autonomic nervous system and the assessment of its influence on basic electrophysiology, arrhythmogenesis, and cyclic adenosine monophosphate (cAMP) dynamics. The intracardiac autonomic nervous system is modulated by the mechanical dissection of atrial fat pads-in which murine ganglia are located mainly&#8212;or by the usage of global as well as targeted pharmacological interventions. An octapolar electrophysiological catheter is introduced into the right atrium and the right ventricle, and epicardial-placed multi-electrode arrays (MEA) for high-resolution mapping are used to determine cardiac electrophysiology and arrhythmogenesis. F&#246;rster resonance energy transfer (FRET) imaging is performed for the real-time monitoring of cAMP levels in different cardiac regions. Neuromorphology is studied by means of antibody-based staining of whole hearts using neuronal markers to guide the identification and modulation of specific targets of the intracardiac autonomic nervous system in the performed studies. The ex vivo Langendorff setup allows for a high number of reproducible experiments in a short time. Nevertheless, the partly open nature of the setup (e.g., during MEA measurements) makes constant temperature control difficult and should be kept to a minimum. This described method makes it possible to analyze and modulate the intracardiac autonomic nervous system in decentralized hearts.

Impact of Intracardiac Neurons on Cardiac Electrophysiology and Arrhythmogenesis in an Ex Vivo Langendorff System

Here, we present a protocol for the modulation of the intracardiac autonomic nervous system and the assessment of its influence on basic electrophysiology, arrhythmogenesis, and cAMP dynamics using an ex vivo Langendorff setup.

Kardiyak Elektrofizyoloji ve Arrhythmogenesis bir Ex Vivo Langendorff sisteminde intrakardiyak nöronların etkisi

Since its invention in the late 19th century, the Langendorff ex vivo heart perfusion system continues to be a relevant tool for studying a broad spectrum ...

A Flow Cytometry-based Assay for Measuring Mitochondrial Membrane Potential in Cardiac Myocytes After Hypoxia/Reoxygenation

Timely and efficient reperfusion of the occluded coronary artery is the best strategy for decreasing myocardial infarct size in patients with a ST-segment elevated myocardial infarction. However, reperfusion per se can result in further cardiomyocyte death, a phenomenon known as reperfusion injury. The opening of the mitochondrial permeability transition pore (mPTP), with the decrease of the mitochondrial membrane potential (MMP), or mitochondrial depolarization, is universally recognized as the final step of reperfusion injury and is responsible for mitochondrial and cardiomyocyte death. JC-1 is a lipophilic cationic dye that accumulates in mitochondria depending on the value of MMP. The higher the MMP is, the more JC-1 accumulates in the mitochondria. The increasing amounts of JC-1 in mitochondria can be reflected by a fluorescence emission shift from green (~530 nm) to red (~590 nm). Therefore, the reduction of the red/green fluorescence intensity ratio can indicate the depolarization of mitochondria. Here, we take advantage of JC-1 to measure MMP, or the opening of mPTP in human cardiac myocytes after hypoxia/reoxygenation, detected by flow cytometry.

Here, we present a protocol that uses JC-1 dye to assess the mitochondrial membrane potential of cells after being exposed to hypoxia/reoxygenation with or without a protective agent.

Kardiyak miyositler mitokondrial membran potansiyeli hipoksi/Reoxygenation sonra ölçmek için akış sitometresi tabanlı tahlil

Timely and efficient reperfusion of the occluded coronary artery is the best strategy for decreasing myocardial infarct size in patients with a ST-segment ...

Semi-Minimal Invasive Method to Induce Myocardial Infarction in Rats and the Assessment of Cardiac Function by an Isolated Working Heart System

Myocardial infarction (MI) remains the main contributor to morbidity and mortality worldwide. Therefore, research on this topic is mandatory. An easily and highly reproducible MI induction procedure is required to obtain further insight and better understanding of the underlying pathological changes. This procedure can also be used to evaluate the effects or potency of new and promising treatments (as drugs or interventions) in acute MI, subsequent remodeling and heart failure (HF). After intubation and pre-operative preparation of the animal, an anesthetic protocol with isoflurane was performed, and the surgical procedure was conducted&#160;quickly. Using a minimally invasive approach, the left anterior descending artery (LAD) was located and occluded by a ligature. The occlusion can be performed acutely for subsequent reperfusion (ischemia/reperfusion injury). Alternatively, the vessel can be ligated permanently to investigate the development of chronic MI, remodeling or HF. Despite common pitfalls, the drop-out rates are minimal. Various treatments such as remote ischemic conditioning can be examined for their cardioprotective potential pre-, peri- and post-operatively. The post-operative recovery was quick as the anesthesia was precisely controlled and the duration of the operation was short. Post-operative analgesia was administered for three days. The minimally invasive procedure reduces the risk of infection and inflammation. Furthermore, it facilitates rapid recovery. The &#8220;working heart&#8221; measurements were performed ex vivo and enabled precise control of preload, afterload and flow. This procedure requires specific equipment and training for adequate performance. This manuscript provides a detailed step-by-step introduction for conducting these measurements.

This article presents an efficient method to perform myocardial ischemia and subsequent chronic reperfusion in rats using a minimally invasive approach. In addition, left ventricular hemodynamic function of rats is assessed by echocardiography and isolated working heart methods.&#160;

Sıçanlarda Miyokard İnfarktüsü İndükleyen Yarı-Minimal İnvaziv Yöntem ve İzole Çalışan Kalp Sistemi Ile Kardiyak Fonksiyonun Değerlendirilmesi

Myocardial infarction (MI) remains the main contributor to morbidity and mortality worldwide. Therefore, research on this topic is mandatory. An easily ...

How to Administer Near-Infrared Spectroscopy in Critically ill Neonates, Infants, and Children

Near infrared spectroscopy (NIRS) calculates regional tissue oxygenation (rSO2) using the different absorption spectra of oxygenated and deoxygenated hemoglobin molecules. A probe placed on the skin emits light that is absorbed, scattered, and reflected by the underlying tissue. Detectors in the probe sense the amount of reflected light: this reflects the organ-specific ratio of oxygen supply and consumption - independent of pulsatile flow. Modern devices enable the simultaneous monitoring at different body sites. A rise or dip in the rSO2 curve visualizes changes in oxygen supply or demand before vital signs indicate them. The evolution of rSO2 values in relation to the starting point is more important for interpretation than are absolute values.
A routine clinical application of NIRS is the surveillance of somatic and cerebral oxygenation during and after cardiac surgery. It is also administered in preterm infants at risk for necrotizing enterocolitis, newborns with hypoxic ischemic encephalopathy and a potential risk of impaired tissue oxygenation. In the future, NIRS could be increasingly used in multimodal neuromonitoring, or applied to monitor patients with other conditions (e.g., after resuscitation or traumatic brain injury).

This protocol is designed to assist clinicians to measure regional tissue oxygenation at different body sites in infants and children. It can be used in situations where tissue oxygenation is potentially compromised, particularly during cardiopulmonary bypass, when using non-pulsatile cardiac-assist devices, and in critically ill neonates, infants and children.

Kritik Hasta Neonatlarda, Bebeklerde ve Çocuklarda Yakın Kızılötesi Spektroskopi Nasıl Uygulanır?

Near infrared spectroscopy (NIRS) calculates regional tissue oxygenation (rSO2) using the different absorption spectra of oxygenated and deoxygenated ...

In vitro Assessment of Cardiac Reprogramming by Measuring Cardiac Specific Calcium Flux with a GCaMP3 Reporter

Cardiac reprogramming has become a potentially promising therapy to repair a damaged heart. By introducing multiple transcription factors, including Mef2c, Gata4, Tbx5 (MGT), fibroblasts can be reprogrammed into induced cardiomyocytes (iCMs). These iCMs, when generated in situ in an infarcted heart, integrate electrically and mechanically with the surrounding myocardium, leading to a reduction in scar size and an improvement in heart function. Because of the relatively low reprogramming efficiency, purity, and quality of the iCMs, characterization of iCMs remains a challenge. The currently used methods in this field, including flow cytometry, immunocytochemistry, and qPCR, mainly focus on cardiac-specific gene and protein expression but not on the functional maturation of iCMs. Triggered by action potentials, the opening of voltage-gated calcium channels in cardiomyocytes leads to a rapid influx of calcium into the cell. Therefore, quantifying the rate of calcium influx is a promising method to evaluate cardiomyocyte function. Here, the protocol introduces a method to evaluate iCM function by calcium (Ca2+) flux. An &#945;MHC-Cre/Rosa26A-Flox-Stop-Flox-GCaMP3 mouse strain was established by crossing Tg(Myh6-cre)1Jmk/J (referred to as Myh6-Cre below) with Gt(ROSA)26Sortm38(CAG-GCaMP3)Hze/J (referred to as Rosa26A-Flox-Stop-Flox-GCaMP3 below) mice. Neonatal cardiac fibroblasts (NCFs) from P0-P2 neonatal mice were isolated and cultured in vitro, and a polycistronic construction of MGT was introduced to NCFs, which led to their reprogramming to iCMs. Because only successfully reprogrammed iCMs will express GCaMP3 reporter, the functional maturation of iCMs can be visually assessed by Ca2+ flux with fluorescence microscopy. Compared with un-reprogrammed NCFs, NCF-iCMs showed significant calcium transient flux and spontaneous contraction, similar to CMs. This protocol describes in detail the mouse strain establishment, isolation and selection of neonatal mice hearts, NCF isolation, production of retrovirus for cardiac reprogramming, iCM induction, the evaluation of iCM Ca2+ flux using our reporter line, and related statistical analysis and data presentation. It is expected that the methods described here will provide a valuable platform to assess the functional maturation of iCMs for cardiac reprogramming studies.

We describe here, the establishment and application of an Tg(Myh6-cre)1Jmk/J /Gt(ROSA)26Sortm38(CAG-GCaMP3)Hze/J (referred to as &#945;MHC-Cre/Rosa26A-Flox-Stop-Flox-GCaMP3 below) mouse reporter line for cardiac reprogramming assessment. Neonatal cardiac fibroblasts (NCFs) isolated from the mouse strain are converted into induced cardiomyocytes (iCMs), allowing for convenient and efficient evaluation of reprogramming efficiency and functional maturation of iCMs via calcium (Ca2+) flux.

Bir GCaMP3 Muhabiri ile Kardiyak Spesifik Kalsiyum Akısını Ölçerek Kardiyak Yeniden Programlamanın İn vitro Değerlendirmesi

Cardiac reprogramming has become a potentially promising therapy to repair a damaged heart. By introducing multiple transcription factors, including ...

A Rodent Model of The Ross Operation: Syngeneic Pulmonary Artery Graft Implantation in A Systemic Position

The Ross operation for aortic valve disease has regained new interest due to its outstanding long-term results. Nonetheless, when employed as freestanding root replacement, the possible dilation of the pulmonary autograft and subsequent aortic regurgitation is described. Several animal models have been proposed. However, these are usually limited to ex-vivo models or in-vivo experiments with relatively expensive large animal models. In this study, we sought to establish a rodent model of pulmonary artery graft (PAG) implantation in a systemic position. A total of 39 adult Lewis rats were included. Immediately after euthanasia, the pulmonary root was harvested from a donor animal (n=17). Syngeneic recipient (n=17) and sham-operated (n=5) rats were sedated and ventilated. In the recipient group, the PAG was implanted with an end-to-end anastomosis in infra-renal abdominal aortic position. Sham-operated rats underwent only transection and re-anastomosis of the aorta. Animals were followed with serial ultrasound studies for two months and post-mortem histological analysis. The median PAG diameter in the native position was 3.20 mm (IQR=3.18-3.23). At follow-up, the median diameter of the PAG was 4.03 mm (IQR=3.74-4.13) at 1 week, 4.07 mm (IQR=3.80-4.28) at 1 month, and 4.27 mm (IQR=3.90-4.35) at 2 months (p&lt;0.01). Peak systolic velocity was 220.07 mm/s (IQR=210.43-246.41) at 1 week, 430.88 mm/s (IQR=375.28-495.56) at 1 month, and 373.68 mm/s (IQR=305.78-429.81) at 2 months (p=0.02) and did not differ from the sham-operated group at the end of the experiment (p=0.5). Histological analysis did not show any sign of endothelial thrombosis. This study showed that rodent models may allow for the evaluation of the long-term adaptation of the pulmonary root to a high-pressure system. A systemically placed syngeneic PAG implantation represents a simple and feasible platform for the development and evaluation of novel surgical techniques and drug therapies to further improve the outcomes of the Ross operation.

We demonstrate how to establish a murine model of pulmonary root implantation into the descending aorta to simulate the Ross procedure. This model enables the medium/long-term evaluation of pulmonary autograft remodeling in a systemic position, representing the basis of developing therapeutic strategies to promote its adaptation.

Ross Operasyonunun Kemirgen Modeli: Sistemik Pozisyonda Singeneik Pulmoner Arter Greft İmplantasyonu

The Ross operation for aortic valve disease has regained new interest due to its outstanding long-term results. Nonetheless, when employed as freestanding ...