Kakali Sarkar, PhD, Joani Christensen, BS, Kate Buretta, BS, Nance Yuan, BS, William Lehao, MD, Johanna Grahammer, Georg Furtmüller, MD, Erin Rada: Biz bu projeye katkılarından için aşağıdaki kişilere teşekkür eder MD, Mohammed Al-Rakan MD, Karim Sarhane MD, Saami Khalifian, BS, Mao Qi, MD, ve Angelo Leto Barone MD, VCA Laboratuarı, Plastik ve Rekonstrüktif Cerrahi Anabilim Dalı, Tıp, Janis Taube, MD Johns Hopkins Üniversitesi, Mark Fischer, MD, Dermatoloji ve Patoloji, Tıp Johns Hopkins Üniversitesi, Sue Eller, Minimal İnvaziv Cerrahi Eğitim Merkezi, Tıp Johns Hopkins Üniversitesi ve Cheng-Hung Lin, MD Chang Gung Memorial Hastanesi, Linkou, Tayvan Bölümler. Finansman kaynağı: Rejeneratif Tıp Silahlı Kuvvetleri Enstitüsü (DoD W81XWH-08-2-0032)

Bu Video yayında, tüm hayvan prosedürleri Johns Hopkins Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmış bir hayvan protokolüne uygun olarak yapılmıştır. 1.. Preoperatif Planlama <ol><li> Biz MGH bir erkek donör iki bayan alıcılar için uzuvları (Şekil 1) temin eder uzuv allotransplantasyon için çeviri çalışmalarında minyatür domuz (15-20 kg) akrabası MHC-tanımlı kullanmaktadır. Ameliyat öncesinde, verici ve alıcı hayvanlar bir veteriner hekim tarafından ayrıntılı bir klinik değerlendirme. </li><li> Anestezi ve iskemi süresini en aza indirmek amacıyla, donör ve alıcı prosedürleri, bir adanmış büyük hayvan ameliyathanede üç faaliyet masalarda aynı anda yapılmaktadır. Cerrahi ekibin yanı sıra veteriner personel arasında ekip çalışması ve koordinasyon bu prosedürün genel başarısı için kritik öneme sahiptir. Cerrahi planı resmi bir toplantıda 1 veteriner ekibi ile tartışılacakÖnce cerrahi güne -2 hafta. </li><li> Bir tünelli santral venöz kateter (7 Fr çift lümen Hickman kateter) önce immünsüpresif ilaç düzeyi izleme ve immunsupresif ve / veya bağışıklık ilaçların intravenöz uygulama için nakli için alıcı her hayvanın bir harici veya dahili jugular ven yerleştirilir. Bu kateterler venöz cut-down tekniği ile direkt görüş altında yerleştirilir ve dorsal boyun ve yüksek çıkmak için posterior tünelli olan monofilament emilemeyen sütürler ve boynuna yapışkanlı bandaj sargı kullanarak güvenli. </li><li> Ameliyattan önce en az 12 saat NPO (hiçbir katı gıda ama su reklam lib izin verilir) hayvanları tutun. </li><li> Ameliyat gününde, ketamin 20 mg / kg ksilazin ve 2 mg / kg ile IM oturaklı hayvanlar. </li><li> Uygun büyüklükte bir endotrakeal tüp yerleştirin ve anestezi makine ve ventilatöre bağlamak (izofluran% 0.5-3 üzerinde muhafaza) </li><li> Marjinal kulak damar damardan kateter koyun ve yönetmekağırlığı prosedür süresince% 0.9 salin göre. </li><li> Rüçhan analjezi (buprenorfin 0.02 mg / kg IV) yönetmek. </li><li> Öncesinde donör ve alıcı hayvanların hem ilk kesi profilaktik antibiyotik (sefazolin 20-25 mg / kg IV) yönetmek. </li><li> Alıcıların ve donörlerin hem de tüm işlemlerde steril tekniği kullanın. Bu otoklava veya gaz steril aletleri, maskeler, baş kapaklar, steril cerrahi önlük ve steril eldiven kullanımını içerir. Rp ile kesi alanı tıraş ve Betadinede çözüm ve alkol alternatif ile dezenfekte edin. </li></ol> İntraoperatif İzleme: <ol><li> Indüksiyon ve entübasyon sonrası, oksijen bir soluma karışımı% 0.5-3 izofluran ile anestezi korumak. </li><li> Kalp hızı, pulse oksimetre, EKG, end-tidal CO 2 ve devamlı rektal sıcaklığını izlemek ve her 15 dakika kayıt. </li><li> Bir Bair Hugger sıcak zorla hava battaniye ile hipotermi önlemek. </li></ol><ol><li> Ameliyat masası üzerine sırt üstü yatırıldı, donör hayvan koyun ve steril bir şekilde asmak. </li><li> Anteromedial cilde delme gemileri belirlemek için yakın-kızılötesi lazer anjiyografi kullanın. Periferal vasküler erişim yoluyla normal tuzlu su içinde 2-5 ml seyreltilmiş indosiyanin yeşili, yaklaşık 0.06 mg / kg enjekte edilir. Yaklaşık 10 saniye sonra, kızıl ötesine yakın kayıtların 30 sec-2 dk gerçekleştirin. Delgi tanımlamak için bu kayıtlar videoyu kullanın. Deliciler göre, izleme için bir deri alanına (yaklaşık 100 cm2) işaretleyin. </li><li> Cilt kürek için işaretler ile süreklilik içinde bir kasık cilt kesisi (Şekil 2) yapmak için bir neşter kullanın. </li><li> Femoral damarları belirlemek ve suprageniculate şube seviyesine ve proksimalde inguinal ligament seviyesinde distaline onları tecrit. </li><li> Preservin ise deri ve deri altı dokusu dissekeg deri raket alanı. Flep hasat sırasında kasılmasını önlemek için kasları altta yatan derinin kenarlarını dikin. </li><li> Sadece bir pistonlu testere (Elektrik Pen Drive, Synthes, West Chester PA) kullanarak tarsus üzerinde bir osteotomi gerçekleştirin. </li><li> Elektrokoter kullanarak uyluk proksimal kasları bölün. </li><li> Vasküler pedikül üzerinde bir osteomyocutaneous kanadı bırakarak orta şaftının femur bölün. Flep cilt kürek, altta yatan uyluk kasları, diz eklemi, distal femur ve eşsiz immünolojik özellikleri ile sağlam vaskülarize kemik iliği içeren proksimal tibia içerir. </li><li> Kemik iliği mekanlarda Hemostaz sağlamak için, kemik mumu kullanın. Düzgün kemik alıcı için hazırlık ronjeurs kullanarak kenarları. </li><li> Alıcının femoral damarlar (Şekil 3) hazırlanıncaya kadar kendi vasküler pedikül perfüzyon greft tutun. </li><li> Alıcı diseksiyon tamamlandıktan sonra, mümkün olduğu kadar proksimal verici femoral damarları ligatend transplantasyon öncesinde histidin-triptofan-ketoglutarat (HTK, Custodiol, Newtown PA) ile greft demlenmeye. NOT: donör ekstremite alıcının sol tarafı için alıcı ve verici sağ bacak) sağ tarafı için sol bacak donör yani alıcının karşı tarafta naklediliyor. </li><li> Şimdi 100 mg / kg IV sodyum pentobarbital kullanılarak ikinci arka uzuv hasat sonrasında donör domuz Euthanize. Ölüm kurulan protokol başına veteriner personeli tarafından teyit edilir. </li></ol> 4. Alıcı Prosedürü (Hind Ekstremite doku yaması) <ol><li> Donör uzuv hasat edilirken alıcı damar hazırlanmasını sağlamak için hemen ilk verici insizyon sonra alıcı uyarılmasını ve entübasyon başlatın. Bu gereksiz bekleme süresini ortadan kaldırır ve donör ve alıcılar için toplam anestezi süresini azaltır. </li><li> Allo işletim tarafında 30 ° rotasyon ile hayvan sırtüstü pozisyondadorsolateral tarafında w maruz kalma. </li><li> Bir kasık kesi yapmak ve femoral damarların ortaya çıkarılması; suprageniculate şube seviyesine ve proksimalde inguinal ligament seviyesinde distaline onları tecrit. </li><li> Greft içerlek için dorsolateral karın duvarı (Şekil 4) kasık bir deri altı cebe oluşturun. </li><li> Donör damarları bağlanır ve HTK ile greft yıkayın. </li><li> Ters bir şekilde greft iç metnini gerçekleştirin: cilt kürek kolay bağışıklık ayakta pozisyonda izleme ve (damarlarda herhangi bir gerginlik olmadan uçtan uca vasküler anastomoz izin caudally bakan femoral damarların kesilmiş uçlara izin dorsolateral bakan mı Şekil 5). </li><li> Varsa, (boyutu 2.5-3.5 10-20 kg hayvanlar için uygun) venöz anastomoz için bir damar bağlama cihazı (Synovis, St Paul, MN) kullanın. Geleneksel yöntemler ile karşılaştırıldığında önemli ölçüde bu iskemi süresini azaltır. </li><li> Arteriyel ANAST gerçekleştirin9-0 sütür (Synovis, St Paul, MN) ile geleneksel bir dikiş tekniği kullanılarak omoses </li><li> Damar açıklığı onaylandıktan sonra, 3-0 PDS sütür (Şekil 5) ile yerde greft sabitleyin. Greft kasları karın duvarı kaslarının dikilir. Bu zararlı olabilir çünkü zaman kafesin etrafında hayvan hareket. Greft kaslar alıcı uyluk kasları dikildi edilmemelidir </li><li> Bağışıklık takibi için dorsolateral tarafına (Şekil 6) üzerinde deri kürek Exteriorize ve 3-0 Vicryl deri altı ve 4-0 monofilament dikiş emilebilir sütürler kesintiye uğramış deri ile bitişik deri için dikiş. </li><li> 3-0 Vicryl deri altı sütür ve 4-0 monofilament emilebilir kesintiye cilt suturlerle katmanları kasık cilt kapatın. </li><li> Post-operatif analjezi için bir 50-100 mcg / saat fentanil yama yerleştirin. </li><li> Arka bacak organ transplantasyonu sonra, onun kalem kez uyanık ve kendi rahatça nefes için hayvan dönün.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Barth, R. N., Rodriguez, E. D., Mundinger, G. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascularized+bone+marrow-based+immunosuppression+inhibits+rejection+of+vascularized+composite+allografts+in+nonhuman+primates.">Vascularized bone marrow-based immunosuppression inhibits rejection of vascularized composite allografts in nonhuman primates.</a> Am. J. Transplant. 11 (7), 1407-1416 (2011).</li><li>Brandacher, G., Gorantla, V. S., Schneeberger, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hand/Forearm+transplantation+using+a+novel+cell-based+immunomodulatory+protocol-experience+with+five+patients.">Hand/Forearm transplantation using a novel cell-based immunomodulatory protocol-experience with five patients.</a> Am. J. Transplant. 11, 190 (2011).</li><li>Brandacher, G., Grahammer, J., Sucher, R., Lee, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+basic+and+translational+research+in+reconstructive+transplantation.">Animal models for basic and translational research in reconstructive transplantation.</a> Birth Defects Res. C Embryo Today. 96 (1), 39-50 (2012).</li><li>Brandacher, G., Lee, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hand+transplantation.">Hand transplantation.</a> Hand Clin. 27, xiii-xiv (2011).</li><li>Hettiaratchy, S., Mendely, E., Randolph, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tolerance+to+composite+tissue+allografts+across+a+major+histocompatibility+barrier+in+miniature+swine.">Tolerance to composite tissue allografts across a major histocompatibility barrier in miniature swine.</a> Transplantation. 27, 514-521 (2004).</li><li>Ibrahim, Z., Busch, J., Awwad, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selected+physiologic+compatibilities+and+incompatibilities+between+human+and+porcine+organ+systems.">Selected physiologic compatibilities and incompatibilities between human and porcine organ systems.</a> Xenotransplantation. 13 (6), 488-499 (2005).</li><li>Kirk, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crossing+the+bridge:+large+animal+models+in+translational+transplantation+research.">Crossing the bridge: large animal models in translational transplantation research.</a> Immunol. Rev. 19, 176-196 (2003).</li><li>Lee, W. P., Rubin, J. P., Cober, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+swine+model+in+transplantation+of+vascularized+skeletal+tissue+allografts.">Use of swine model in transplantation of vascularized skeletal tissue allografts.</a> Transplant Proc. 30, 2743-2745 (1998).</li><li>Mathes, D. W., Hwang, B., Graves, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tolerance+to+vascularized+composite+allografts+in+canine+mixed+hematopoietic+chimeras.">Tolerance to vascularized composite allografts in canine mixed hematopoietic chimeras.</a> Transplantation. 92 (12), 1301-1308 (2011).</li><li>Mathes, D. W., Randolph, M. A., Solari, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Split+tolerance+to+a+composite+tissue+allotransplant+in+a+swine+model.">Split tolerance to a composite tissue allotransplant in a swine model.</a> Transplantation. 75 (1), 25-31 (2003).</li><li>Mezrich, J. D., Haller, G. W., Arn, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histocompatible+miniature+swine:+an+inbred+largeanimal+model.">Histocompatible miniature swine: an inbred largeanimal model.</a> Transplantation. 75 (6), 904-907 (2003).</li><li>Petruzzo, P., Lanzetta, M., Dubernard, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+International+Registry+on+Hand+and+Composite+Tissue+Transplantation.">The International Registry on Hand and Composite Tissue Transplantation.</a> Transplantation. 90, 1590-1594 (2010).</li><li>Sucher, R., Lin, C., Zanoun, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+hind+limb+transplantation:+a+new+composite+tissue+allotransplantation+model+using+nonsuture+supermicrosurgery.">Mouse hind limb transplantation: a new composite tissue allotransplantation model using nonsuture supermicrosurgery.</a> Transplantation. 90, 1374-1380 (2010).</li><li>Ust&#252;ner, E. T., Majzob, R. K., Ren, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Swine+composite+tissue+allotransplant+model+for+preclinical+hand+transplant+studies.">Swine composite tissue allotransplant model for preclinical hand transplant studies.</a> Microsurgery. 20, 400-406 (2000).</li><li>Ust&#252;ner, E. T., Zdichavsky, M., Ren, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+composite+tissue+allograft+survival+in+a+porcine+model+with+cyclosporine/mycophenolate+mofetil+therapy.">Long-term composite tissue allograft survival in a porcine model with cyclosporine/mycophenolate mofetil therapy.</a> Transplantation. 661, 581-587 (1998).</li><li>Wachtman, G. S., Wimmers, E. G., Gorantla, V. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biologicals+and+donor+bone+marrow+cells+for+targeted+immunomodulation+in+vascularized+composite+allotransplantation:+a+translational+trial+in+swine.">Biologicals and donor bone marrow cells for targeted immunomodulation in vascularized composite allotransplantation: a translational trial in swine.</a> Transplant Proc. 43, 3541-3544 (2011).</li></ol>

Yazarlar, hiçbir rakip mali çıkarlarını olmadığını beyan ederim.

Tarihsel, heterotopik arka bacak nakli protokol ventral karın duvarına bir cilt raket dışsallaştırdığını dahil ve damarları uç-yan bir şekilde (Hettiarachty 2004) anastomoz edildi. Ancak, modifiye edilmiş bir yöntemde, bir ters kanat insetting ve uç-uca anastomoz daha fazla yanal olarak cilt kürek getirmek ve dolayısıyla hayvanın bir ayakta durma konumunda bağışıklık izlenmesini kolaylaştırır. Daha yakın kızılötesi lazer anjiyografi ile sural arter belirlenmesi ve en yüksek perfüzyon b?...

El ve yüz nakli gibi Vaskülarize Kompozit doku yaması (VCA) artık dünya çapında 12 Gerçekleştirilen sayıda el ve yüz nakli ile klinik bir gerçeklik vardır. Erken ve ara sonuçlar uygun ve son derece 2 teşvik olduğu gerçeğine rağmen, birden fazla ilaca kronik bağışıklık gereksinimi yaygın klinik uygulama sınırlamaya devam etmektedir. Süper mikrocerrahi anastomoz ve nonsuture manşet teknikleri 13 dahil VCA kemirgen modellerinde gelişmeler, 3 VCA alloimmun yanıtları daha iyi anlaşılmasına yol açmıştır. Immunomodülatör protokolleri onbinlerce VCA immün mekanizmaların daha iyi anlaşılmasına dayalı klinik uygulamalar için önerilmiştir ancak insanlarda 7 performansları oldukça öngörü olurdu bir büyük hayvan modelinde doğrulanmış olması gerekir. Insan ve domuz organ sistemleri arasındaki fizyolojik ve immünolojik benzerlikler dayalı <sup&gt; 6, domuz VCA modelleri 9 Canin güvenilir ve maliyet-etkin alternatifler olarak kabul edilir ve insan olmayan primat modelleri 1. edilebilir. Bu makale VCA immün toleransını uyaran ve dolayısıyla klinik uygulamayı genişletmeyi amaçlayan mevcut ve gelecekteki immünomodülatör stratejileri için zemin olarak hizmet eden MHC-tanımlı domuz heterotopik arka bacak nakli modelinde, kullanılan yöntemlerin ayrıntılı bir bakış sağlar. Biz özellikle transplant ile ilgili araştırma 11 kendi kullanımı için domuz lökosit antijen lokusuna homozigosite için yetiştirilen iyi karakterize edilmiş inbred domuz kullanmaktadır. Biz femoral damarlar dayalı bir vaskülarize osteomyocutaneous flep yükseltmek. Flep distal femur ve proksimal tibia bozulmamış vaskülarize kemik iliği içerir. Anteromedial uyluk deri de greft dahildir ve en immünojenik bileşen, O bağışıklık takibi için alıcı hayvanın dorsolateral yönüne dışarıya alınırf VCA. Dorsolateral konumlandırma pozisyonları ayakta ve otururken klinik muayene kolaylaştırır ve ayrıca nispeten temiz allogreft cildi tutar. Ustener vd. Outbred çiftlik domuzlarda 15 radyal ön ayakları osteomyocutaneous flep nakli ile VCA ilk büyük hayvan öteleme modellerinden birini tanıttı. Grup, bağışıklık kazandırma özelliği yüksek cilt bileşen dahil VCA akut reddi önemli ilaca özgü komplikasyonlar ve yan etkiler olmaksızın gecikmeli ve klinik olarak anlamlı bir strateji ile tedavi edilebilir ki ilk kez göstermek için bu modeli kullanılmıştır. Bu çalışmada elde edilen olumlu sonuçlar sonradan insan rekonstrüktif nakli için ilaç rejimlerinin tasarımında temel bir adım inşa etti. Bu erken domuz VCA modelleri deri, kas, kemik, sinir ve bu tür eklem cartilag gibi özel yapıları yoksun damarlarının reddini önlemek için protokol geliştirmek için de uygun olmasına rağmene ve eklem sinovyal zarlar. Daha sonraki çabaları greft çıkmasını önlemek için 14 tam uzunlukta döküm yerleştirme gerektirdiği hayvanın medial hanesi dahil üzerinde duruldu. Uzuv nakli tüm önemli bileşenler reddini araştırmak için uygun olsa da, bu modelin önemli sınırlamalar bir yerleşim döküm nedeniyle nakil sonrası ayaktan zorluk oldu. Böylece, heterotopik domuz uzuv alotransplantasyon modelleri, tibia oluşan, fibula, diz eklemi, distal femur, çevresindeki kas ve deri kürek, hayvan serbestçe minimal morbidit 8 ile postoperatif yürümelerine izin verirken öncelikle VCA immünolojik yönlerini incelemek için oluşturulan . Dr David H. Sachs öncü çalışmaları ile iyi karakterize SLA-tanımlı kendilenmiş domuz gelişmesi öteleme VCA araştırma yeni bir çığır açmıştır. Küçük bir antijen uyumsuzluğu ortamda, Mat bir heterotopik arka bacak nakli modeli kullanılarakhes ve diğ. 10. siklosporin tedavisinin kısa bir ders ile kas iskelet bileşenlerin belirsiz sağkalım göstermiştir. Hiçbir tedavi kontroller ile karşılaştırıldığında hayatta kalma Cilt bileşeni, ancak, sadece uzun süreli edildi. Greft cilt bileşeninin kaybı epidermise, özellikle bir izole edilmiş ve son derece güçlü bir immün yanıt, atfedilmiştir. Benzer şekilde, T-hücresi azalması, siklosporin ve sadece kas-iskelet sistemi bileşenlerinin ve deri bileşene tolerans sebep olduğu sitokin harekete donor periferal kan tek-çekirdekli hücrelerinin kısa süreli tamamen uyumsuz domuzlar kullanılarak hala 5 reddedildi. &#39;Split hoşgörü&#39; olarak adlandırılan bu olgu, bugüne kadar yapılan rekonstrüktif nakli çoğunluğunun ayrılmaz bir bileşeni olan yüksek immünojenik cilt bileşen, üzerinde daha büyük bir odaklanma ile VCA araştırma bir paradigma değişikliği getirdi. Bu şekilde değiştirilmiş bir modelde, ligatin ile uç-uca anastomoz kullanmaktadırg alıcı femoral arter ve dönen o (Şekil 1) sefalad. Bu, geleneksel bir birleştirme cihazının kullanımına izin vererek, iskemi süresini kısaltır hem de anastomoz başarısızlık şansını azaltır değil. Biz, kollateral dolaşım yerel bacak damarlanma sağlamak için yeterli olduğunu göstermektedir bizim alıcılarında femoral arter ligasyonu, aşağıdaki herhangi bir iskemik olay görülmez. Buna ek olarak, bu değiştirilmiş yöntemde, dışa deri bileşeni temel gemiler delme göre harekete ve geleneksel modeli 10 içinde bir kasık ventral pozisyonda aksine (Şekil 1) yanal olarak yerleştirilir. Bu, ayakta veya hayvanın oturma pozisyonunda bağışıklık takibi için greft kolayca görüntülenmesini sağlar. Bu nedenle, güvenilir ve yeniden üretilebilir bir hayvan modeli büyük VCA cilt bileşeni karşı tolerans indüksiyonu stratejiler araştırmak ve yeni N geliştirmek için gereklidirgreft sağ kalımı daha iyi tahmininde oninvasive bağışıklık izleme stratejileri.

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td>Name of the Reagent</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalogue Number</td>
			<td>Comments (optional)</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>REAGENTS</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>HTK</td>
			<td>Custodial</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>EQUIPMENT</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Electric Pen Drive</td>
			<td>Synthes, Westchester PA </td>
			<td>05.001.011 </td>
			<td>Reciprocating saw</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Vascular Coupling device</td>
			<td>Synovis, Newtown PA</td>
			<td>21003B</td>
			<td></td>
		 </tr>
		</tbody>
 </table>

a modified heterotopic swine hind limb transplant model for translational vascularized composite allotransplantation (vca) research

El ve yüz nakli gibi Vaskülarize Kompozit doku yaması (VCA) kompleks iskelet travma ve yıkıcı doku kaybı için uygun bir tedavi seçeneği temsil eder. Olumlu ve son derece cesaret verici erken ve orta fonksiyonel sonuçlara rağmen, bir VCA son derece immünojenik cilt bileşeni ve kronik çoklu ilaç immünosupresyonun potansiyel yan etkileri reddi VCA yaygın klinik uygulama engellemeye devam. Bu nedenle, bu yeni alandaki araştırmalar VCA benzersiz immünolojik özellikleri ile ilgili öteleme çalışmalara odaklanmak ve uzun süreli bağışıklık için gerek kalmadan VCA aşağıdaki immünomodülasyon ve toleransın için yeni immunomodulator stratejiler geliştirmek gerekiyor. Bu makalede, bir MHC-tanımlı domuz heterotopik arka uzuv doku yamasında bir osteomyocutaneous kanat oluşur VCA güvenilir ve yeniden üretilebilir bir translasyon büyük bir hayvan modeli açıklar. BriEFLY, iyi vaskülarize cilt kürek yakın kızılötesi lazer anjiyografi kullanılarak anteromedialinde uyluk bölgesinde tanımlanır. Altta yatan kasları, diz eklemi, distal femur ve proksimal tibia femoral vasküler pedikül üzerinde hasat edilir. Bu, allograft bir VCA ve kendine özgü bir bağışıklık imtiyazlı özelliklere sahip bir vaskülarize kemik iliği nakli hem de kabul edilebilir. Greft bağışıklık takibi için dorsolateral bölgeye ucu dışarıya bir deri bileşeni ile alıcı hayvanda bir deri altı cep abdominal transplante edilir. Üç cerrahi ekipler, böylece bu modelin etkinliğinin artırılmasında ve deneysel protokolleri potansiyel zorlukları azaltarak, anestezi ve iskemi süresini azaltmak için iyi koordineli bir şekilde aynı anda çalışır. Bu model potansiyel olarak azaltmak ve VCA kronik çoklu ilaç bağışıklık ihtiyacını ortadan kaldırmayı amaçlayan gelecekte tedavi stratejileri için zemin olarak hizmet etmektedir.

Yirmi dört SLA tanımlanmış domuz heterotopik arka uzuv transplantasyonu 78 dakika boyunca (: 62-94 dakika Kademe) bir ortalama iskemi süresi ile modifiye edilmiş tekniği kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Greft İçerlek ve dorsolateral cilt kürek pozisyonu tüm hayvanlarda zorlanmadan elde edildi. Yakın kızılötesi lazer anjiyografi tüm alıcılara mükemmel greft perfüzyon gösterdi. Son on iki venöz anastomoz vasküler bir birleştirme cihazı kullanılarak yapıldı ise ilk oniki venöz anastomoz k...

Watch this Scientific Journal Video about A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation VCA Research at JoVE.com

A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation VCA Research

Vaskülarize Kompozit allotrans (VCA) klinik bir gerçeklik haline gelmiştir. Bununla birlikte, VCA geniş klinik uygulama kronik çoklu ilaç bağışıklık bastırılması ile sınırlıdır. Yazarlar, en aza indirmek veya potansiyel olarak VCA bağışıklık ihtiyacı ortadan kaldırabilir, yeni bağışıklık stratejileri çevirmek için güvenilir ve yeniden üretilebilir bir büyük hayvan modeli sunar.

Translational Vaskülarize Kompozit allotransplantasyon (VCA) Araştırma için Modifiye heterotopik Domuz Hind Ekstremite nakli Modeli

Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) such as hand and face transplants represent a viable treatment option for complex musculoskeletal trauma ...

a-modified-heterotopic-swine-hind-limb-transplant-model-for

Research

JoVE Journal

Medicine

A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) Research

12.4K Görüntüleme.  Johns Hopkins University School of Medicine.  Vaskülarize Kompozit allotrans (VCA) klinik bir gerçeklik haline gelmiştir. Bununla birlikte, VCA geniş klinik uygulama kronik çoklu ilaç bağışıklık bastırılması ile sınırlıdır. Yazarlar, en aza indirmek veya potansiyel olarak VCA bağışıklık ihtiyacı ortadan kaldırabilir, yeni bağışıklık stratejileri çevirmek için güvenilir ve yeniden üretilebilir bir büyük hayvan modeli sunar. 

Video: A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation VCA Research

A Modified Method for Heterotopic Mouse Heart Transplantion

Mice are often used as heart transplant donors and recipients in studies of transplant immunology due to the wide range of transgenic mice and reagents available. A difficulty is presented due to the small size of the animal and the considerable technical challenges of the microsurgery involved in heart transplantation. In particular, a high rate of technical failure early after transplantation may result from recipient death and post-operative complications such as hind limb paralysis or a non-beating heart. Here, the complete technique for heterotopic mouse heart transplantation is demonstrated, involving harvesting the donor heart and its subsequent implantation into a recipient mouse. The donor heart is harvested immediately following in situ perfusion with cold heparinized saline and transection of the ascending aorta and pulmonary artery. The recipient operation involves preparation of the abdominal aorta and inferior vena cava (IVC), followed by end-to-side anastomosis of the donor aorta with the recipient aorta using a single running 10-0 microsuture and a similar anastomosis of the donor pulmonary artery with the recipient IVC. Following the operation the animal is injected with 0.6 ml normal saline subcutaneously and allowed to recover on a 37&#160;&#176;C heating pad. The results from 227 mouse heart transplants are summarized with a success rate at 48 hr of 86.8%. Of the 13.2% failures within 48 hr, 5 (2.2%) experienced hind limb paralysis, 10 (4.4%) had a non-beating heart due to graft ischemic injury and/or thrombosis, while 15 (6.6%) died within 48 hr.

A technique is demonstrated for the microsurgical procedure for heterotopic transplantation of hearts in mice, including simplified methods for donor harvesting and recipient vessel anastomosis.

Heterotopik Fare Kalp NAKLİ için Modifiye Yöntem

Mice are often used as heart transplant donors and recipients in studies of transplant immunology due to the wide range of transgenic mice and reagents ...

Tıp

Murine Heterotopic Heart Transplant Technique

It is now over forty years since this technique was first reported by Corry, Wynn and Russell. Although it took some years for other labs to become proficient in and utilize this technique, it is now widely used by many laboratories around the world. A significant refinement to the original technique was developed and reported in 2001 by Niimi. Described here are the techniques that have evolved over more than a decade in the hands of three surgeons (Plenter, Grazia, Pietra) in our center. These techniques are now being passed on to a younger generation of surgeons and researchers.
Based largely on the Niimi experience, the procedures used have evolved in the fine details - details which we will endeavor to relate here in such a way that others may be able to use this very useful model. Like Niimi, we have found that a video aid to learning is a priceless resource for the beginner.

The manuscript describes the steps required to perform the heterotopic heart transplant in the mouse.

Mürin Heterotopik Kalp Nakli Tekniği

It is now over forty years since this technique was first reported by Corry, Wynn and Russell. Although it took some years for other labs to become ...

A Novel Microsurgical Model for Heterotopic, En Bloc Chest Wall, Thymus, and Heart Transplantation in Mice

Exploration of novel strategies in organ transplantation to prolong allograft survival and minimizing the need for long-term maintenance immunosuppression must be pursued. Employing vascularized bone marrow transplantation and co-transplantation of the thymus have shown promise in this regard in various animal models.1-11 Vascularized bone marrow transplantation allows for the uninterrupted transfer of donor bone marrow cells within the preserved donor microenvironment, and the incorporation of thymus tissue with vascularized bone marrow transplantation has shown to increase T-cell chimerism ultimately playing a supportive role in the induction of immune regulation. The combination of solid organ and vascularized composite allotransplantation can uniquely combine these strategies in the form of a novel transplant model. Murine models serve as an excellent paradigm to explore the mechanisms of acute and chronic rejection, chimerism, and tolerance induction, thus providing the foundation to propagate superior allograft survival strategies for larger animal models and future clinical application. Herein, we developed a novel heterotopic en bloc chest wall, thymus, and heart transplant model in mice using a cervical non-suture cuff technique. The experience in syngeneic and allogeneic transplant settings is described for future broader immunological investigations via an instructional manuscript and video supplement.

To study combined solid organ and vascularized composite allotransplantation, we describe a novel heterotopic en bloc chest wall, thymus, and heart transplant model in mice using a cervical non-suture cuff technique.

Farelerde A Novel Mikrocerrahi Heterotopik Modeli, En Bloku Göğüs Duvarı, Thymus ve Kalp Nakli

Exploration of novel strategies in organ transplantation to prolong allograft survival and minimizing the need for long-term maintenance immunosuppression ...

Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and translational research in the field of transplantation medicine. A vast array of reagents is available exclusively in this setting, including mono- and polyclonal antibodies for both diagnostic and interventional applications. In addition, a vast number of genotyped, inbred, transgenic, and knock out strains allow detailed investigation of the individual contributions of humoral and cellular components to the complex interplay of an immune response and make the mouse the gold standard for immunological research. 
Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) delineates a novel field of transplantation using allografts to replace "like with like" in patients suffering traumatic or congenital tissue loss. This surgical methodological protocol shows the use of a non-suture cuff technique for super-microvascular anastomosis in an orthotopic mouse hind limb transplantation model. The model specifically allows for comparison between established paradigms in solid organ transplantation with a novel form of transplants consisting of various different tissue components. Uniquely, this model allows for the transplantation of a viable vascularized bone marrow compartment and niche that have the potential to exert a beneficial effect on the balance of immune acceptance and rejection. This technique provides a tool to investigate alloantigen recognition and allograft rejection and acceptance, as well as enables the pursuit of functional nerve regeneration studies to further advance this novel field of transplantation.

This novel model for orthotopic hind limb transplantation in the mouse, applying a non-suture cuff technique for super-microvascular anastomosis, provides a powerful tool for in&#160;vivo mechanistic immunological research related to vascularized composite allotransplantation (VCA).

Fare Ortotopik Hind Ekstremite nakli

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and ...

Mouse Model for Pancreas Transplantation Using a Modified Cuff Technique

Mouse models have several advantages in transplantation research, including easy handling, a variety of genetically well-defined strains, and the availability of the widest range of molecular probes and reagents to perform in vivo as well as in vitro studies. Based on our experience with various murine transplantation models, we developed a heterotopic pancreas transplantation model in mice with the intent to analyze mechanisms underlying severe ischemia reperfusion injury-associated early graft damage. In contrast to previously described techniques using suture techniques, herein we describe a new procedure using a non-suture cuff technique. 
In recent years, we have performed more than 300 pancreas transplantations in mice with an overall success rate of &gt;90%, a success rate never described before in mouse pancreas transplantation. The backbone of this non-suture cuff technique for graft revascularization consists of two major steps: (I) pulling the recipient vessel over a polyethylene/polyamide cuff and fixing it with a circumferential ligature, and (II) placing the donor vessel over the everted recipient vessel and fixing it with a second circumferential ligature. The resultant continuity of the endothelial layer results in less thrombogenic lesions with high patency rates and, finally, high success rates.
In this model, arterial anastomosis is achieved by pulling the abdominal aorta of the donor graft over the everted common carotid artery of the recipient animal. Venous drainage of the graft is achieved by pulling the portal vein of the graft over the everted external jugular vein of the recipient. This manuscript provides details and crucial steps of the organ recovery and organ implantation procedures, which will allow researchers with microsurgical skills to perform the transplantation successfully in their laboratories.

Among abdominal solid organ transplantation, pancreatic grafts are prone to develop severe ischemia reperfusion injury-associated graft damage, leading eventually to early graft loss. This protocol describes a model of murine pancreas transplantation using a non-suture cuff technique, ideally suited for analyzing these early, deleterious damages.

Fare modeli değiştirilmiş manşet tekniği kullanarak pankreas nakli için

Mouse models have several advantages in transplantation research, including easy handling, a variety of genetically well-defined strains, and the ...

Surgical Angiogenesis in Porcine Tibial Allotransplantation: A New Large Animal Bone Vascularized Composite Allotransplantation Model

Segmental bone loss resulting from trauma, infection malignancy and congenital anomaly remains a major reconstructive challenge. Current therapeutic options have significant risk of failure and substantial morbidity.
Use of bone vascularized composite allotransplantation (VCA) would offer both a close match of resected bone size and shape and the healing and remodeling potential of living bone. At present, life-long drug immunosuppression (IS) is required. Organ toxicity, opportunistic infection and neoplasm risks are of concern to treat such non-lethal indications.
We have previously demonstrated that bone and joint VCA viability may be maintained in rats and rabbits without the need of long-term-immunosuppression by implantation of recipient derived vessels within the VCA. It generates an autogenous, neoangiogenic circulation with measurable flow and active bone remodeling, requiring only 2 weeks of IS. As small animals differ from man substantially in anatomy, bone physiology and immunology, we have developed a porcine bone VCA model to evaluate this technique before clinical application is undertaken. Miniature swine are currently widely used for allotransplantation research, given their immunologic, anatomic, physiologic and size similarities to man. Here, we describe a new porcine orthotopic tibial bone VCA model to test the role of autogenous surgical angiogenesis to maintain VCA viability.
The model reconstructs segmental tibial bone defects using size- and shape-matched allogeneic tibial bone segments, transplanted across a major swine leukocyte antigen (SLA) mismatch in Yucatan miniature swine. Nutrient vessel repair and implantation of recipient derived autogenous vessels into the medullary canal of allogeneic tibial bone segments is performed in combination with simultaneous short-term IS. This permits a neoangiogenic autogenous circulation to develop from the implanted tissue, maintaining flow through the allogeneic nutrient vessels for a short time. Once established, the new autogenous circulation maintains bone viability following cessation of drug therapy and subsequent nutrient vessel thrombosis.

Currently any kind of vascularized composite allotransplantation depends on long-term-immunosuppression, difficult to support for non-life-critical indications. We present a new porcine tibial VCA model that can be used to study bone VCA and demonstrate the use of surgical angiogenesis to maintain bone viability without the need of long-term immune-modulation.

Domuz Tibial Allotransplantation cerrahi angiogenez: bileşik Allotransplantation Model yeni bir büyük hayvan kemik skarların

Segmental bone loss resulting from trauma, infection malignancy and congenital anomaly remains a major reconstructive challenge. Current therapeutic ...

Preclinical Model of Hind Limb Ischemia in Diabetic Rabbits

Peripheral vascular disease is a widespread clinical problem that affects millions of patients worldwide. A major consequence of peripheral vascular disease is the development of ischemia. In severe cases, patients can develop critical limb ischemia in which they experience constant pain and an increased risk of limb amputation. Current therapies for peripheral ischemia include bypass surgery or percutaneous interventions such as angioplasty with stenting or atherectomy to restore blood flow. However, these treatments often fail to the continued progression of vascular disease or restenosis or are contraindicated due to the overall poor health of the patient. A promising potential approach to treat peripheral ischemia involves the induction of therapeutic neovascularization to allow the patient to develop collateral vasculature. This newly formed network alleviates peripheral ischemia by restoring perfusion to the affected area. The most frequently employed preclinical model for peripheral ischemia utilizes the creation of hind limb ischemia in healthy rabbits through femoral artery ligation. In the past, however, there has been a strong disconnect between the success of preclinical studies and the failure of clinical trials regarding treatments for peripheral ischemia. Healthy animals typically have robust vascular regeneration in response to surgically induced ischemia, in contrast to the reduced vascularity and regeneration in patients with chronic peripheral ischemia. Here, we describe an optimized animal model for peripheral ischemia in rabbits that includes hyperlipidemia and diabetes. This model has reduced collateral formation and blood pressure recovery in comparison to a model with a higher cholesterol diet. Thus, the model may provide better correlation with human patients with compromised angiogenesis from the common co-morbidities that accompany peripheral vascular disease.

We describe a surgical procedure used to induce peripheral ischemia in rabbits with hyperlipidemia and diabetes. This surgery acts as a preclinical model for conditions experienced in peripheral artery disease in patients. Angiography is also described as a means to measure the extent of introduced ischemia and recovery of perfusion.

Diyabetik tavşanların arka ekstremite Iskemi preklinik modeli

Peripheral vascular disease is a widespread clinical problem that affects millions of patients worldwide. A major consequence of peripheral vascular ...

Modified Heterotopic Hindlimb Osteomyocutaneous Flap Model in the Rat for Translational Vascularized Composite Allotransplantation Research

Vascularized composite allotransplantation (VCA) is a relatively new field in the reconstructive surgery. Clinical achievements in human VCA include hand and face transplants and, more recently, abdominal wall, uterus, and urogenital transplants. Functional outcomes have exceeded initial expectations, and most recipients enjoy an improved quality of life. However, as clinical experience accumulates, chronic rejection and complications from the immunosuppression must be addressed. In many cases where grafts have failed, the causative pathology has been ischemic vasculopathy. <span style="font-size: 11pt; line-height: 115%; font-family: Arial, sans-serif; color: rgb(41, 43, 49); background-image: initial; background-position: initial; background-size: initial; background-repeat: initial; background-attachment: initial; background-origin: initial; background-clip: initial;">The biological mechanisms of the acute and chronic rejection associated with VCA, especially ischemic vasculopathy, are important areas of research. However, due to the very small number of VCA patients, the evaluation of proposed mechanisms is better addressed in an experimental model. Multiple groups have used animal models to address some of the relevant unsolved questions in VCA rejection and vasculopathy. Several model designs involving a variety of species are described in the literature. Here we present a reproducible model of VCA heterotopic hindlimb osteomyocutaneous flap in the rat that can be utilized for translational VCA research. This model allows for the serial evaluation of the graft, including biopsies and different imaging modalities, while maintaining a low level of morbidity.

Vascularized composite allograft offers life-altering benefits to transplant recipients, but the biological causes of graft rejection and vasculopathy remain poorly understood. The rodent surgical model presented here offers a reproducible, clinically relevant model of transplantation, allowing researchers to evaluate rejection events and potential therapeutic strategies to prevent their occurrence.

Translasyonel vaskülarize kompozit allotransplantasyon araştırmaları için Rat 'ta değiştirilmiş heterotopik Hindekstremite Osteomokutanöz Flap modeli

Vascularized composite allotransplantation (VCA) is a relatively new field in the reconstructive surgery. Clinical achievements in human VCA include hand ...

A Mouse Model of Vascularized Heterotopic Spleen Transplantation for Studying Spleen Cell Biology and Transplant Immunity

The spleen is a unique lymphoid organ that plays a critical role in the homeostasis of the immune and hematopoietic systems. Patients that have undergone splenectomy regardless of precipitating causes are prone to develop an overwhelming post-splenectomy infection and experience increased risks of deep venous thrombosis and malignancies. Recently, epidemiological studies indicated that splenectomy might be associated with the occurrence of cardiovascular diseases, suggesting that physiological functions of the spleen have not yet been fully recognized. Here, we introduce a mouse model of vascularized heterotopic spleen transplantation, which not only can be utilized to study the function and behavioral activity of splenic immune cell subsets in different biologic processes, but also can be a powerful tool to test the therapeutic potential of spleen transplantation in certain diseases. The main surgical steps of this model include donor spleen harvest, the removal of recipient native spleen, and spleen graft revascularization. Using congenic mouse strains (e.g., mice with CD45.1/CD45.2 backgrounds), we observed that after syngeneic transplantation, both donor-derived splenic lymphocytes and myeloid cells migrated out of the graft as early as post-operative day 1, concomitant with the influx of multiple types of recipient cells, thus generating a unique chimera. &#160;Despite relatively challenging techniques, this procedure can be performed with &#62;90% success rate. This model allows tracking the fate, longevity, and function of splenocytes during steady state and in a disease setting following a spleen transplantation, thereby offering a great opportunity to discover the distinct role for spleen-derived immune cells in different disease processes.

This protocol details the surgical steps of a mouse model of vascularized heterotopic spleen transplantation, a technically challenging model that can serve as a powerful tool in studying the fate and longevity of spleen cells, the mechanisms of distinct spleen cell populations in disease progression, and transplant immunity.

Dalak hücre biyoloji ve nakli bağışıklık eğitimi için vascularized heterotopik dalak transplantasyonunun fare modeli

The spleen is a unique lymphoid organ that plays a critical role in the homeostasis of the immune and hematopoietic systems. Patients that have undergone ...

Taking the Next Step: a Neural Coaptation Orthotopic Hind Limb Transplant Model to Maximize Functional Recovery in Rat

Limb transplant in particular and vascularized composite allotransplant (VCA) in general have wide therapeutic promise that have been stymied by current limitations in immunosuppression and functional neuromotor recovery. Many animal models have been developed for studying unique features of VCA, but here we present a robust reproducible model of orthotopic hind limb transplant in rats designed to simultaneously investigate both aspects of current VCA limitation: immunosuppression strategies and functional neuromotor recovery. At the core of the model rests a commitment to meticulous, time-tested microsurgical techniques such as hand sewn vascular anastomoses and hand sewn neural coaptation of the femoral nerve and the sciatic nerve. This approach yields durable limb reconstructions that allow for longer lived animals capable of rehabilitation, resumption of daily activities, and functional testing. With short-term treatment of conventional immunosuppressive agents, allotransplanted animals survived up to 70 days post-transplant, and isotransplanted animals provide long lived controls beyond 200 days post-operatively. Evidence of neurologic functional recovery is present by 30 days post operatively. This model not only provides a useful platform for interrogating immunological questions unique to VCA and nerve regeneration, but also allows for in vivo testing of new therapeutic strategies specifically tailored for VCA.

This protocol presents a robust, reproducible model of vascularized composite allotransplant (VCA) geared toward simultaneous study of immunology and functional recovery. The time invested in meticulous technique in a right mid-thigh hind limb orthotopic transplant with hand sewn vascular anastomoses and neural coaptation yields the ability to study functional recovery.

Sonraki Adım Taking: Bir Nöral Coaptation Ortotopic Hind Limb Transplant Modeli Sıçan Fonksiyonel Kurtarma Maksimize etmek

Limb transplant in particular and vascularized composite allotransplant (VCA) in general have wide therapeutic promise that have been stymied by current ...