Yazarlar laboratuarımızda onun daha önceki çalışmaları için Dr Biagio Pietra teşekkür etmek istiyorum.

Tüm hayvanlar IACUC onayı altında Colorado Barbara Davis Center Hayvan Tesisi Üniversitesi&#39;nde patojen içermeyen koşullar altında muhafaza ve NIH talimatlarına göre bakım için. Prosedür başladıktan sonra anestezi derinliği başlangıçta ayak tutam tarafından ve solunum hızı uyulması tarafından değerlendirilir. 1.. Donör Kalp Hasat <ol><li> (60 mg / kg IP) pentobarbital enjekte edilerek verici fare anestezisi. </li><li> 4-yollu koltuk ile fare hareketsiz ve kürk klibi. Alkol ile cildinizi silin. </li><li> Cilt uzak diseksiyon sonra, diyaframa bir enine kesi sadece aşağı yaparak karın boşluğu açmak. </li><li> Kot yerleştirilmesinden diyafram posterior kesin ve anterior ve süperior kalbi açığa ön göğüs duvarını kaldırın. </li><li> Göğüs, sol ve sağ tarafta arka yan göğüs boşluğuna kadar kesilmiş tam bir kalınlığa uzatın. </li><li> Yalıtmakinferior vena kava (IVC) ve sağ atrium içine yerleştirilmesi bitişik IVC&#39;da etrafına gevşek 5-0 ipek sütür koyun. </li><li> IVC içine, 4 ° C, heparinize edilmiş tuzlu su (200 U / cc) 1.0 cc enjekte edilir, daha sonra 5-0 ipek dikiş ile bölmek ve damar ligate. </li><li> Benzer şekilde sağ superior vena kava (rSVC) izole ve 5-0 ipek sütür ve bölmek ile ligasyonu. </li><li> Yavaşça hayvanların sağ tarafına doğru kalp rulo ve sol superior vena kava (lSVC) izole, bir 5-0 ipek sütür ile bağlanır ve sol pulmoner arter açığa bölün. </li><li> Timüs uzakta ana pulmoner arter (PA) ve sol ve sağ PA şubelerinden disseke ve aort arkı artan küt iken ıslak bir gazlı bez altında kalp sabitleyin. </li><li> Çevreleyen dokuların aort arkı ücretsiz teşrih künt. Mikro-makas sağ brakiyal-cephalic arterin aorta proksimalinde bölmek için kullanılan, yani kalp ve bölünme arasındaki hiçbir dal olmamalıdırAort noktası. </li><li> Arkus Bu bölümde implant işlemi için arteriyel manşeti oluşturur. </li><li> PA gövde ve PA sağ ve sol dalları maruz inferiorda aort manşet yansıtacak. </li><li> Uzakta mümkün olduğunca kalpten çevre dokulardan sağ ve sol PA dalları teşrih künt. Bu çevre dokulardan PA gövde kolay diseksiyon sağlar. </li><li> Olarak distal onun çatallanmaya mümkün, sadece proksimal olarak PA gövde bölün. Pulmoner arter Bu bölümde implant işlemi için venöz manşeti oluşturur. </li><li> Kalp ve kravat tabanı etrafında bir 5-0 ipek sütür yerleştirin. Bundan sonra, kalp tabanında serbest kesilmiş ve 4 ° C tuzlu su içine yerleştirilir. Toplam hasat süresi yaklaşık. 10-15 dk. </li></ol> 2.. Kalp İmplant Tekniği <ol><li> Pentobarbital ile alıcı fareler anestezi (60 mg / kg IP başlangıç ​​dozu, / kg IP ek doz 25 mg gerekirse). </li><li> Kürk Klip ve4-yollu koltuk ile fare hareketsiz ve steril bir şekilde povidon-iyot ve drape ile cildi hazırla. </li><li> 2 cm orta hat dikey karın kesi yapmak ve karın boşluğuna girin. </li><li> Superiorda bağırsak geri çekin ve göğüs üzerinde dışsallaşmış. Dava boyunca steril Nemli gazlı bez (steril serum fizyolojik) sarılı tutun. </li><li> Böbrek damarlarının altındaki abdominal aorta ve vena kava (IVC) izole ve 4-0 pamuk aort etrafındaki bağları ve anastomoz için VKİ üstün sonra aşağı yerleştirin. </li><li> Alanında herhangi bir lomber gemileri tespit ve 10-0 naylon sütür ile lige. </li><li> Pamuk bağları düğüm, birinci alt üstün izledi. Bu şekilde, bir kan aortotomy daha kolay hale aort içinde tutulmaktadır. </li><li> Aort lümeni girmek için bir 30 G iğne ile aortotomy Form. Yaklaşık 2 mm&#39;lik bir uzunluğa ince mikro makas ile kesi uzatın. Bu kesi uzun boyunca düz bir çizgi yapılırGeminin uzanımının oluşturduğu ekseni. </li><li> Aşağıdaki şekilde alıcı aorta verici aort yan anastomoz bir son yapın. Donör aort ve alıcı aort ve kravat kesi alt açısına 10-0 naylon dikiş kalmak dikiş yerleştirin. Donör aort ve abdominal aorta ve kravat kesi üstün köşesinde birinci karşısında ikinci 10-0 naylon yerleştirin. </li><li> Aort yan duvarında üstün inferior için çalışan bir dikiş hattı yapmak ve önceden yerleştirilmiş kalmak ilmek karşı kravat. Eğer dikiş olarak birlikte intimas (damar iç yüzeyi) getirmek için emin olun. Sonra bir koşu moda ve kravat medial tarafını dikin. Her iki tarafında birinci ve son dikiş mümkün kalmak dikiş kadar yakın yerleştirilmelidir. Sonra 5 dikiş yaparak toplamda bu ikisi arasında 3 eşit aralıklı dikiş hedefliyoruz. </li><li> Aşağıdaki şekilde alıcı IVC için verici pulmoner arter yan anastomoz bir son yapın. Puncture 30 G iğne ile IVC&#39;nin ve yakl kesi uzatmak. Ince mikro makas ile 2 mm. Bu kesi kabın uzunlamasına ekseni boyunca düz bir çizgi yapılır. </li><li> 10-0 naylon IVC&#39;da kesi alt köşesine donör pulmoner arter kravat. Donör arter ve IVC&#39;da ve kravat kesi üstün köşesinde birinci karşısında ikinci 10-0 naylon yerleştirin. </li><li> Pulmoner arter ve IVC&#39;da ve kravat arasında çalışan bir dikiş hattı yapmak. Her iki tarafında birinci ve son dikiş mümkün kalmak dikiş kadar yakın yerleştirilmelidir. Sonra 7 dikiş yaparak toplamda bu ikisi arasında 5 eşit aralıklı dikiş hedefliyoruz. </li><li> Distal 4-0 pamuk tie yeniden kurulması venöz akışını bırakın. </li><li> Venöz anastomoz hemostaz gözlenmiştir sonra yakın 4-0 pamuk tie yavaş yavaş gevşek ve arteriyel anastomoz hemostaz için görülmektedir. Her iki anastomozlar güvenli olarak kabul edilir zaman, c çıkarınotton fare bağlar. </li><li> Karın bağırsak dönün. Karın duvarı çalışan bir moda 5-0 İpek sütür kullanarak iki kat olarak kapalıdır. </li><li> Kapanması üzerine sıvı tedavisi gibi karın içine steril, ılık normal tuzlu bir 1.0 ml puşe ve normal tuzlu 0.8 ml operasyon sonrası deri altına enjekte edilir. Hiçbir diğer destekleyici tedbirler ameliyat sırasında gereklidir. Bir ısınma battaniye hayvan kurtarın. Toplam implant süresi yaklaşık. Yeni başlayanlar için 90-120 dakika, tecrübesi ile 45-60 dk. Buprenorfin analjezi, 0.05 mg / kg, SC, prosedürün başında 0.1-0.2 ml ve 72 saat sonrası-op için her 6-12 saat yönetmek. </li></ol> 3.. Greft değerlendirme <ol><li> Trans-abdominal palpasyonla günlük greft fonksiyonu değerlendirmek. </li><li> Bir intraperitoneal enjeksiyon verilecek sanki fare tutun. </li><li> Yavaşça karın duvarına karşı bir işaret parmağının ucuna basarak ve dayak str tespitgreft ength ve düzenlilik. </li><li> 0 palpasyon Kalitesi 4 arası bir puan (normal genlik ve frekans) Give (non-dayak greft reddetti). </li></ol> ÖNEMLİ NOTLAR: Tüm enstrümanlar, sterilize steril eldiven işlem boyunca giyilir ve steril bir alan korunur. Verici ve alıcı ameliyatları, bir operasyon mikroskopunun kullanılması ile gerçekleştirilir. Anastomozlar &quot;temiz&quot; olduğundan emin olun. Bu dikiş yerleştirirken arka duvarları yakalanmış değil olmasıdır. Bu önemli bir daralma felci-uzuv hind başarısız bir greft ve aşırı durumlarda bu olacak daha büyük olasılıkla sonuç akmasına neden olacaktır. Ayrıca tam kalınlıkta damar adventitianın ve dikiş iğnesinin intima elde edilir dahil geçer hayati önem taşımaktadır. Kenarlarının Evertion ayrıca sızdırmazlık ve anastomoz iyileşmesi yardımcıları intima-to-intimada temas, var olmasını sağlar. Bir diğer hayati önemli gerçekveya anastomoz dikiş hatlarının gerilimi de en uygun olduğunu garanti etmektedir. Çok gevşek ve geri döndürülemez sızıntı olacak, çok sıkı ve akış darlık neden olur. Venöz tarafında bir sıkışık kalp neden olur ise, arteriyel tarafında bu, greft düşük perfüzyon neden olacaktır.

<ol>
	<li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+transplantation+in+congenic+strains+of+mice.">Heart transplantation in congenic strains of mice.</a> Transplant Proc. 5 (1), 733 (1973).</li><li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primarily+vascularized+allografts+of+hearts+in+mice.+The+role+of+H-2D,+H-2K,+and+non-H-2+antigens+in+rejection.">Primarily vascularized allografts of hearts in mice. The role of H-2D, H-2K, and non-H-2 antigens in rejection.</a> Transplantation. 16 (4), 343 (1973).</li><li>Niimi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+technique+for+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice:+experience+of+3,000+operations+by+one+surgeon.">The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: experience of 3,000 operations by one surgeon.</a> J Heart Lung Transplant. 20 (10), 1123 (2001).</li><li>Plenter, R. J., Zamora, M. R., Grazia, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Four+decades+of+vascularized+heterotopic+cardiac+transplantation+in+the+mouse.">Four decades of vascularized heterotopic cardiac transplantation in the mouse.</a> J Invest Surg. 26 (4), 223 (2013).</li><li>Su, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modified+suture+technique+in+a+mouse+heart+transplant+model.">Modified suture technique in a mouse heart transplant model.</a> Asian J Surg. 34 (2), 86 (2011).</li><li>Mao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+and+knotless+technique+for+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice.">A novel and knotless technique for heterotopic cardiac transplantation in mice.</a> J Heart Lung Transplant. 28 (10), 1102 (2009).</li><li>Csencsits, K. L., Bishop, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contrasting+alloreactive+CD4++and+CD8++T+cells:+there's+more+to+it+than+MHC+restriction.">Contrasting alloreactive CD4+ and CD8+ T cells: there's more to it than MHC restriction.</a> Am J Transplant. 3 (2), 107 (2003).</li><li>Hasegawa, T., Visovatti, S. H., Hyman, M. C., Hayasaki, T., Pinsky, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+vascularized+murine+cardiac+transplantation+to+study+graft+arteriopathy.">Heterotopic vascularized murine cardiac transplantation to study graft arteriopathy.</a> Nat Protoc. 2 (3), 471 (2007).</li><li>Linfert, D., Chowdhry, T., Rabb, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphocytes+and+ischemia-reperfusion+injury.">Lymphocytes and ischemia-reperfusion injury.</a> Transplant Rev. 23 (1), (2009).</li><li>Grazia, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+cardiac+allograft+rejection+by+directly+cytotoxic+CD4+T+cells:+parallel+requirements+for+Fas+and+perforin.">Acute cardiac allograft rejection by directly cytotoxic CD4 T cells: parallel requirements for Fas and perforin.</a> Transplantation. 89 (1), 33 (2010).</li><li>Liu, F., Kang, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+heart+transplantation+in+mice.">Heterotopic heart transplantation in mice.</a> J Vis Exp. (6), (2007).</li><li>Plenter, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+heart+transplantation+in+mice.">Heterotopic heart transplantation in mice.</a> European Society for Surgical Research. 45th Annual Congress. , (2010).</li></ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Bu cerrahi teknik usta kolay değil, ama bir kez hakim güçlü bir araştırma aracıdır. Araştırmacı / cerrah tekniği tutarlılık tarafından ve detaylara dikkat tarafından ödüllendirilir. Öğrenme aşamasında Sabır anahtarıdır. , Bu ilk başarılı prosedürü ve% 90 başarı oranı elde etmek için 78 girişimleri ulaşmak için 11 girişimleri ortalama alır video tabanlı öğrenme aracı yardımıyla Niimi 3 tarafından yayınlanmaktadır. Videolar cerrahi 11,12 önemli bir eğitim aracı haline gelmiştir. Sorun giderme Anastomozlar kanama meydana gelir ve bu durum sütür doğru gerginlik eksikliği, ya da çok az dikişler ya muhtemeldir olabilir. Böyle Gelfoam gibi ajan içeren bir pıhtılaşma kaçağının azaltılmasında yararlı olabilir, biz cerrah iyi bir teknik güvenmek gerektiğini öneriyoruz. Sıkışık olmayan kalpte nedeniyle özellikle venöz tarafında çok sıkı anastomoz, en yaygın olarak. A non-beating, perfüze olmayan greft genellikle koroner arterlerin birine gitti bir hava kabarcığı neden olur. Bu kaplara kabarcıkların girişini önlemek için, nemli-to-ıslak alanı korumak için önemlidir. Tekniğin Sınırlamalar Bir araştırmacı tam işleyen bir kalp üzerinde etkilerini araştırmak istiyorsa bu teknik uygun değildir. Yani bugüne kadar gerçekleştirmek imkansız kanıtlamıştır ortotopik nakli tekniği gerektirir. Varolan Yöntemleri Açısından Önemi Bir fare tam vaskülarize, solid organ nakli üzerine etkilerini incelemek isterse, o zaman kalp model muhtemelen master için basit olduğunu. Akciğer, böbrek ve karaciğer nakli fare modelleri var, ama çok öğrenmek zor ve mükemmel yok. Protokol kapsamında kritik adım Bu hayati önemli olduğunu tam kalınlıkta pvasküler adventisya ve dikiş iğnesinin da dahil olmak üzere intima eşek elde edilir. Kenarlarının Evertion ayrıca sızdırmazlık ve anastomoz iyileşmesi yardımcıları intima-to-intimada temas, var olmasını sağlar. Bir diğer hayati önemli faktör anastomoz sütür hatlarının gerilim de optimal sağlamaktır. Çok gevşek ve geri döndürülemez sızıntı olacak, çok sıkı ve akış darlık neden olur. Venöz tarafında bir sıkışık kalp neden olur ise, arteriyel tarafında bu, greft düşük perfüzyon neden olacaktır. Her şeyden önce, tekrarlama, prosedür ve detaylara sürekli dikkat tutarlılık mükemmel sonuçlar ve fundable ve yayınlanabilir veri verecektir.

Farelerde böbrek, akciğer, karaciğer ve pankreas nakli gerçekleştirmek için mümkün olduğu bir dönemde, 1973 yılından bu yana temel organ nakli ve immünoloji araştırma taşı 1-4 fare heterotopik kalp nakli modeli kalır. Aradan geçen yıllarda birçok makale bu prosedüre iyileştirmeler / geliştirmeler 5,6 detay yayınlanmıştır. Solid organ öncelikle vaskülerize naklinin bir model olarak bu prosedürü bulunmamaktadır. Bir kez hakim bu prosedür allojenik ret yanıtları 7, kronik vaskülopati 8 ve iskemi reperfüzyon hasarı 9 mekanizmalarının geliştirilmesi araştırma için oldukça rahat. Bu yordamı başarılı öğrenme tuşları tıpkı diğer cerrahi, eğitmen ve detaylara stajyer ve ilgi kısmında sabır gibidir. Sürecin başında, yeni cerrah olduğunu t göreceksinizhey Her nakli uzun saatler geçireceksiniz. Deneyim kazanmış gibi, cerrahi süreleri ve dolayısıyla iskemi, büyük ölçüde azaltacaktır. Her adım ayrıntılara dikkat er ya da geç başarıya götürecek. Eğitmen geçmek için ellerinden geleni yapabilir, ve bu ameliyatlar sırasında karşılaşılabilecek olası çukur düşme tüm tahmin ederken, &quot;yaratıcı&quot; stajyer olasılıkla kendi bazı bulacaksınız! Aşağıdaki gibi prosedürün temelleri vardır. Aort arkı artan donör olup uç-yan alıcı abdominal aorta ve donör pulmoner arter anastomoz olan uç-yan alıcı karın inferior vena kava (IVC) anastomoz. Kan koroner arterlere verici aorttan retrograd olarak alıcı aort akar. Kanı koroner sinüs yoluyla sağ atrium içine akıtır koroner sistemi aktıktan sonra, sağ ventrikül içine pompalanır vesonra alıcıya IVC içine pulmoner arter yoluyla. Bu şekilde, koroner arter kan sistemi temin edilir ve sinüs ritmi reperfüzyon 1-2 dakika içinde greft döner. Kalbin sol odaları altında yüklü aslında basınç olduğundan sol ventrikül serbest duvar zamanla atrofiye olur.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:608px;" width="607">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:247px;">Instrument</td>
			<td style="width:109px;">Roboz #</td>
			<td style="width:147px;">Fine Science Tools #</td>
			<td style="width:105px;">Arosurgical #</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Straight micro-dissecting forcep #5</td>
			<td>RS-5015</td>
			<td>11295-51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Curved micro-dissecting forcep #7</td>
			<td>RS-5047</td>
			<td>11297-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Curved serrated forcep</td>
			<td>RS-5137</td>
			<td>11052-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Vannas micro-dissecting scissors, short</td>
			<td>RS-5610</td>
			<td></td>
			<td>09.140.08</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td colspan="2" height="17" style="height:17px;">Micro-dissecting scissors, straight, sharp, long</td>
			<td></td>
			<td>11.602.11</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Micro spring handle needle holder</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>11.549.15</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Straight mosquito forcep</td>
			<td></td>
			<td>91308-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Micro-dissecting scissors, straight, blunt</td>
			<td>RS-5962</td>
			<td>14078-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Micro-dissecting scissors, curved, blunt</td>
			<td>RS-5981</td>
			<td>14079-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Micro retractor</td>
			<td>RS-6540</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Instrument tray, 10&#8221; x 6 &#189;&#8221; x &#190;&#8221;</td>
			<td>RT-1350S</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Silk suture, 5/0, 22.5m spool</td>
			<td></td>
			<td>18020-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Suture</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">10/0 nylon</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>T4A10Q07</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">5/0 silk</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>E19A05N</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Gloves</td>
			<td></td>
			<td>Drapes</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Biogel from Medex Supply</td>
			<td></td>
			<td>Precept, #64-9012-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Syringes</td>
			<td></td>
			<td>Cotton applicators</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">B-D 1cc insulin, #329424</td>
			<td></td>
			<td colspan="2">Fisher-brand, #23-400-100</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Povidone-Iodine swabs</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">PDI, #B40600</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">4/0 Cotton ties</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td colspan="2" height="17" style="height:17px;">Domestic cotton autoclaved with instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine heterotopic heart transplant technique

Bu tekniği ilk Corry, Wynn ve Russell tarafından bildirilmiştir beri şimdi kırk yıldır. Diğer laboratuvarları yeterliliğine ve bu tekniği kullanmak için biraz yıl sürdü rağmen, artık yaygın olarak dünyada birçok laboratuvar tarafından kullanılmaktadır. Orijinal tekniği önemli bir arıtma geliştirilen ve Niimi tarafından 2001 yılında rapor edilmiştir. Merkezimizde üç cerrah (Plenter, Grazia, Pietra) elinde daha bir on yıl boyunca evrim geçirmiş teknikleri burada anlatılan. Bu teknikler şimdi cerrahlar ve araştırmacı bir genç kuşağa ediliyor. Ayrıntılar biz diğerleri bu çok kullanışlı modeli kullanmak mümkün olabilir böyle bir şekilde burada anlatmayı çalışacağız - büyük ölçüde Niimi deneyimlerine dayanarak, kullanılan prosedürleri ince ayrıntılar gelişmiştir. Niimi gibi, öğrenme için bir video yardım başlayanlar için paha biçilmez bir kaynak olduğunu bulduk.

<html> Bu cerrahi tekniğin kullanımı basit grefte / ret çalışmaları, ya da oldukça karmaşık deneysel protokollerin ya için yolu açar. Kısaca, aşağıdaki şekilde tarif edilen çalışmada varsa Fas ve / veya CD4 T hücresi aracılı rejeksiyon mekanizmaları olarak perforin arasında, katılımını tanımlamak için aranan. Bu, bugün mevcut olan fare suşlarının olağanüstü dizi ile mümkün olmuştur. Sonuçlar CD4 efektör T hücreleri ile kardiyak allogreftlerin doğrudan greft reddi Fas ifadesi ve T hücresi perforin ifade alternatif katkı gerektirdiğini göstermektedir. Bildiğimiz kadarıyla, bu CD4 T hücreleri tarafından sitolitik aktivitesi canlı primer akut allogreft reddi için zorunlu bir rol oynayabileceği ilk gösteri. 1.jpg &quot;/&gt; . Şekil 1 Perforin ve Fas (Fas-ligand eksik) CD4 T hücreleri B6 bez sulandırmak için kullanılmıştır zorunlu ve CD4 T hücre-aracılı Kardiyak Reddi B6, B6 PFPKO (perforin knock-out), ve B6 gld Paralel Pathways Temsil - / - Kalp Allograftlardaki Ipr C3H vahşi tip veya Fas-eksik C3H alıcıları. Yalnız Fas çıkarılması (♦, p = NS kontrol Wt C3H vs + B6 CD4 T hücreleri) donör kalplerin veya CD4 T hücreleri (çıkarılması veya tek başına perforin gelen ■, p = NS kontrol Wt C3H vs + B6 CD4 T hücreleri) reddetme iptal değildi. İlginç bir şekilde, efektör T hücrelerinden CD4 FasL kaldırılmasıdır vs &lt;●, p &lt;Wt C3H + B6 CD4 T hücreleri vs 0.02, p &lt;Wt C3H + B6 PFPKO CD4 T hücreleri vs 0.01, p ve (anlamlı ve önemli bir gecikme 0.01 ret mi . C3H lpr + B6 CD4 T hücreleri). Ancak, çoğu allogreftler hala (5 4) reddedildi. Önemli bir şekilde, hem verici Fas ve CD4 T hücre perforin eşzamanlı olarak çıkarılmasıtamamen iptal reddi (○, p &lt;0.002 kontrol Wt C3H genel + B6 CD4 T hücreleri, Wt C3H + B6 PFPKO CD4 T hücreleri ve C3H lpr + B6 CD4 T hücreleri). Bu iptal önemli ölçüde daha güçlü bir CD4 T hücresi FasL münferit kaldırma fazla oldu (○, p &lt;0.003 vs kontrol Wt C3H + B6 gld CD4 T hücreleri). Grazia ve ark 10. Izni ile yayımlanmaktadır.

Watch this Scientific Journal Video about Murine Heterotopic Heart Transplant Technique at JoVE.com

Murine Heterotopic Heart Transplant Technique

El yazması fare heterotopik kalp nakli gerçekleştirmek için gereken adımları açıklar.

Mürin Heterotopik Kalp Nakli Tekniği

It is now over forty years since this technique was first reported by Corry, Wynn and Russell. Although it took some years for other labs to become ...

murine-heterotopic-heart-transplant-technique

Research

JoVE Journal

Medicine

16.7K Görüntüleme.  University of Colorado Denver.  El yazması fare heterotopik kalp nakli gerçekleştirmek için gereken adımları açıklar. 

Video: Murine Heterotopic Heart Transplant Technique

A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) Research

Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) such as hand and face transplants represent a viable treatment option for complex musculoskeletal trauma and devastating tissue loss. Despite favorable and highly encouraging early and intermediate functional outcomes, rejection of the highly immunogenic skin component of a VCA and potential adverse effects of chronic multi-drug immunosuppression continue to hamper widespread clinical application of VCA. Therefore, research in this novel field needs to focus on translational studies related to unique immunologic features of VCA and to develop novel immunomodulatory strategies for immunomodulation and tolerance induction following VCA without the need for long term immunosuppression.
This article describes a reliable and reproducible translational large animal model of VCA that is comprised of an osteomyocutaneous flap in a MHC-defined swine heterotopic hind limb allotransplantation. Briefly, a well-vascularized skin paddle is identified in the anteromedial thigh region using near infrared laser angiography. The underlying muscles, knee joint, distal femur, and proximal tibia are harvested on a femoral vascular pedicle. This allograft can be considered both a VCA and a vascularized bone marrow transplant with its unique immune privileged features. The graft is transplanted to a subcutaneous abdominal pocket in the recipient animal with a skin component exteriorized to the dorsolateral region for immune monitoring.
Three surgical teams work simultaneously in a well-coordinated manner to reduce anesthesia and ischemia times, thereby improving efficiency of this model and reducing potential confounders in experimental protocols. This model serves as the groundwork for future therapeutic strategies aimed at reducing and potentially eliminating the need for chronic multi-drug immunosuppression in VCA.

A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation VCA Research

Vascularized Composite Allotransplantations (VCA) have become a clinical reality. However, broad clinical application of VCA is limited by chronic multi-drug immunosuppression. The authors present a reliable and reproducible large animal model to translate novel immunomodulatory strategies that can minimize or potentially eliminate the need of immunosuppression in VCA.

Translational Vaskülarize Kompozit allotransplantasyon (VCA) Araştırma için Modifiye heterotopik Domuz Hind Ekstremite nakli Modeli

Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) such as hand and face transplants represent a viable treatment option for complex musculoskeletal trauma ...

Tıp

Murine Cervical Heart Transplantation Model Using a Modified Cuff Technique

Mouse models are of special interest in research since a wide variety of monoclonal antibodies and commercially defined inbred and knockout strains are available to perform mechanistic in vivo studies. While heart transplantation models using a suture technique were first successfully developed in rats, the translation into an equally widespread used murine equivalent was never achieved due the technical complexity of the microsurgical procedure. In contrast, non-suture cuff techniques, also developed initially in rats, were successfully adapted for use in mice1-3. This technique for revascularization involves two major steps I) everting the recipient vessel over a polyethylene cuff; II) pulling the donor vessel over the formerly everted recipient vessel and holding it in place with a circumferential tie. This ensures a continuity of the endothelial layer, short operating time and very high patency rates4.
Using this technique for vascular anastomosis we performed more than 1,000 cervical heart transplants with an overall success rate of 95%. For arterial inflow the common carotid artery and the proximal aortic arch were anastomosed resulting in a retrograde perfusion of the transplanted heart. For venous drainage the pulmonary artery of the graft was anastomosed with the external jugular vein of the recipient5.
Herein, we provide additional details of this technique to supplement the video.

The murine cervical heart transplantation model is well suited for immunological as well as ischemia reperfusion injury studies. We modified the procedure using a non-suture cuff technique and performed more than 1,000 successful transplants with this approach.
Herein, we provide additional details of this technique to supplement the video.

Modifiye Manşet Tekniği Sıçangiller Servikal Kalp Nakli Modeli

Mouse models are of special interest in research since a wide variety of monoclonal antibodies and commercially defined inbred and knockout strains are ...

A Modified Method for Heterotopic Mouse Heart Transplantion

Mice are often used as heart transplant donors and recipients in studies of transplant immunology due to the wide range of transgenic mice and reagents available. A difficulty is presented due to the small size of the animal and the considerable technical challenges of the microsurgery involved in heart transplantation. In particular, a high rate of technical failure early after transplantation may result from recipient death and post-operative complications such as hind limb paralysis or a non-beating heart. Here, the complete technique for heterotopic mouse heart transplantation is demonstrated, involving harvesting the donor heart and its subsequent implantation into a recipient mouse. The donor heart is harvested immediately following in situ perfusion with cold heparinized saline and transection of the ascending aorta and pulmonary artery. The recipient operation involves preparation of the abdominal aorta and inferior vena cava (IVC), followed by end-to-side anastomosis of the donor aorta with the recipient aorta using a single running 10-0 microsuture and a similar anastomosis of the donor pulmonary artery with the recipient IVC. Following the operation the animal is injected with 0.6 ml normal saline subcutaneously and allowed to recover on a 37&#160;&#176;C heating pad. The results from 227 mouse heart transplants are summarized with a success rate at 48 hr of 86.8%. Of the 13.2% failures within 48 hr, 5 (2.2%) experienced hind limb paralysis, 10 (4.4%) had a non-beating heart due to graft ischemic injury and/or thrombosis, while 15 (6.6%) died within 48 hr.

A technique is demonstrated for the microsurgical procedure for heterotopic transplantation of hearts in mice, including simplified methods for donor harvesting and recipient vessel anastomosis.

Heterotopik Fare Kalp NAKLİ için Modifiye Yöntem

Mice are often used as heart transplant donors and recipients in studies of transplant immunology due to the wide range of transgenic mice and reagents ...

Rat Heterotopic Abdominal Heart/Single-lung Transplantation in a Volume-loaded Configuration

Herein, we describe a novel technique for heterotopic abdominal heart-lung transplantation (HAHLT) in rats. The configuration of the transplant graft involves anastomosis of donor inferior vena cava (IVC) to recipient IVC, and donor ascending aorta (Ao) to recipient abdominal Ao. The right upper and middle lung lobes are preserved and function as conduits for blood flow from right heart to left heart.
There are several advantages to using this technique, and it lends itself to a broad range of applications. Because the graft is transplanted in a configuration that allows for dyamic volume-loading, cardiac function may be directly assessed in vivo. The use of pressure-volume conductance catheters permits characterization of load-dependent and load-independent hemodynamic parameters. The graft may be converted to a loaded configuration by applying a clamp to the recipient&#8217;s infra-hepatic IVC. We describe modified surgical techniques for both donor and recipient operations, and an ideal myocardial protection strategy. Depending on the experimental aim, this model may be adapted for use in both acute and chronic studies of graft function, immunologic status, and variable ventricular loading conditions. The conducting airways to the transplanted lung are preserved, and allow for acute lung re-ventilation. This facilitates analysis of the effects of the mixed venous and arterial blood providing coronary perfusion to the graft.
A limitation of this model is its technical complexity. There is a significant learning curve for new operators, who should ideally be mentored in the technique. A surgical training background is advantageous for those wishing to apply this model. Despite its complexity, we aim to present the model in a clear and easily applicable format. Because of the physiologic similarity of this model to orthotopic transplantation, and its broad range of study applications, the effort invested in learning the technique is likely to be worthwhile.

We describe a novel technique for heterotopic abdominal heart-lung transplantation (HAHLT) in rats. The transplant configuration results in a partially loaded graft circulation, allowing direct functional assessment. This model may be employed for acute or chronic studies of function and immunologic status of the transplanted graft.

Sıçan Heterotopik Abdominal Kalp / Bir Ses yüklenen Yapılandırması Tek akciğer transplantasyonu

Herein, we describe a novel technique for heterotopic abdominal heart-lung transplantation (HAHLT) in rats. The configuration of the transplant graft ...

Murine Kidney Transplant Technique

The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become proficient in and utilize this technique, it is now widely used by many laboratories around the world. A significant refinement to the original technique using the donor aorta to form the arterial anastomosis instead of the renal artery was developed and reported in 1993 by Kalina and Mottram 2 with a further advancement coming from the same laboratory in 1999 3. While one can become proficient in this model, a search of the literature reveals that many labs still experience a high proportion of graft loss due to arterial thrombosis. We describe here a technique that was devised in our laboratory that vastly reduces the arterial thrombus reported by others 4,5. This is achieved by forming a heel-and-toe cuff of the donor infra-renal aorta that facilitates a larger anastomosis and straighter blood flow into the kidney.

The goal of this manuscript is to describe the steps required to perform a kidney transplant in a mouse, paying particular attention to the details of the arterial anastomosis.

Murin Böbrek nakli Tekniği

The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become ...

Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice

The heterotopic cervical heart transplantation in mice is a valuable tool in transplant and cardiovascular research. The cuff technique greatly simplifies this model by avoiding challenging suture anastomoses of small vessels thereby reducing warm ischemia time. In comparison to abdominal graft implantation the cervical model is less invasive and the implanted graft is easily accessible for further follow-up examinations. Anastomoses are performed by pulling the ascending aorta of the graft over the cuff with the recipient&#8217;s common carotid artery and by pulling the main pulmonary artery over the cuff with the external jugular vein. Selection of appropriate cuff size and complete mobilization of the vessels are important for successful revascularization. Ischemia-reperfusion (I/R) injury can be minimized by perfusing the graft with a cardioplegic solution and by hypothermia. In this article, we provide technical details for a simplified and improved cuff technique, which should allow surgeons with basic microsurgical skills to perform the procedure with a high success rate.

The cuff technique shortens and facilitates the model of heterotopic cervical heart transplantation in mice by avoiding technically challenging suture anastomoses of small vessels. The technical details shown in this video paper should allow researches to establish this model in their laboratories.

Farelerde Heterotopik Servikal Kalp Nakli

The heterotopic cervical heart transplantation in mice is a valuable tool in transplant and cardiovascular research. The cuff technique greatly simplifies ...

Vein Interposition Model: A Suitable Model to Study Bypass Graft Patency

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. Research models for bypass graft failure are essential for a better understanding of pathobiological and pathophysiological processes during graft patency loss. Large animal models, such as pigs or sheep, resemble human anatomical structures but require special facilities and equipment. This video describes a rat vein interposition model to investigate vein graft patency loss. Rats are inexpensive and easy to handle. Compared to mouse models, the convenient size of rats permits better operability and enables a sufficient amount of material to be obtained for further diverse analysis. In brief, the inferior epigastric vein of a donor rat is harvested and used to replace a segment of the femoral artery. Anastomosis is conducted via single stitches and sealed with fibrin glue. Graft patency can be monitored non-invasively using duplex sonography. Myointimal hyperplasia, which is the main cause for graft patency loss, develops progressively over time and can be calculated from histological cross sections.

This video demonstrates a model to study the development of myointimal hyperplasia after venous interposition surgery in rats.

Ven interpozisyonu Model: baypas açıklığının Eğitim için uygun bir model

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. ...

Balloon-based Injury to Induce Myointimal Hyperplasia in the Mouse Abdominal Aorta

The use of animal models is essential for a better understanding of MH, one major cause for arterial stenosis.In this article, we demonstrate a murine balloon denudation model, which is comparable with established vessel injury models in large animals. The aorta denudation model with balloon catheters mimics the clinical setting and leads to comparable pathobiological and physiological changes. Briefly, after performing a horizontal incision in the aorta abdominalis, a balloon catheter will be inserted into the vessel, inflated, and introduced retrogradely. Inflation of the balloon will lead to intima injury and overdistension of the vessel. After removing the catheter, the aortic incision will be closed with single stiches. The model shown in this article is reproducible, easy to perform, and can be established quickly and reliably. It is especially suitable for evaluating expensive experimental therapeutic agents, which can be applied in an economical fashion. By using different knockout-mouse strains, the impact of different genes on MH development can be assessed.

This article demonstrates a murine model to study the development of myointimal hyperplasia (MH) after aortic balloon injury.

Fare Abdominal aort Myointimal Hiperplazi ikna etmek için balon tabanlı yaralanma

The use of animal models is essential for a better understanding of MH, one major cause for arterial stenosis.In this article, we demonstrate a murine ...

A Mouse Model of Vascularized Heterotopic Spleen Transplantation for Studying Spleen Cell Biology and Transplant Immunity

The spleen is a unique lymphoid organ that plays a critical role in the homeostasis of the immune and hematopoietic systems. Patients that have undergone splenectomy regardless of precipitating causes are prone to develop an overwhelming post-splenectomy infection and experience increased risks of deep venous thrombosis and malignancies. Recently, epidemiological studies indicated that splenectomy might be associated with the occurrence of cardiovascular diseases, suggesting that physiological functions of the spleen have not yet been fully recognized. Here, we introduce a mouse model of vascularized heterotopic spleen transplantation, which not only can be utilized to study the function and behavioral activity of splenic immune cell subsets in different biologic processes, but also can be a powerful tool to test the therapeutic potential of spleen transplantation in certain diseases. The main surgical steps of this model include donor spleen harvest, the removal of recipient native spleen, and spleen graft revascularization. Using congenic mouse strains (e.g., mice with CD45.1/CD45.2 backgrounds), we observed that after syngeneic transplantation, both donor-derived splenic lymphocytes and myeloid cells migrated out of the graft as early as post-operative day 1, concomitant with the influx of multiple types of recipient cells, thus generating a unique chimera. &#160;Despite relatively challenging techniques, this procedure can be performed with &#62;90% success rate. This model allows tracking the fate, longevity, and function of splenocytes during steady state and in a disease setting following a spleen transplantation, thereby offering a great opportunity to discover the distinct role for spleen-derived immune cells in different disease processes.

This protocol details the surgical steps of a mouse model of vascularized heterotopic spleen transplantation, a technically challenging model that can serve as a powerful tool in studying the fate and longevity of spleen cells, the mechanisms of distinct spleen cell populations in disease progression, and transplant immunity.

Dalak hücre biyoloji ve nakli bağışıklık eğitimi için vascularized heterotopik dalak transplantasyonunun fare modeli

The spleen is a unique lymphoid organ that plays a critical role in the homeostasis of the immune and hematopoietic systems. Patients that have undergone ...

Murine Cervical Aortic Transplantation Model using a Modified Non-Suture Cuff Technique

With the introduction of powerful immunosuppressive protocols, distinct advances are possible in the prevention and therapy of acute rejection episodes. However, only minor improvement in the long-term results of transplanted solid organs could be observed over the past decades. In this context, chronic allograft vasculopathy (CAV) still represents the leading cause of late organ failure in cardiac, renal and pulmonary transplantation.
Thus far, the underlying pathogenesis of CAV development remains unclear, explaining why effective treatment strategies are presently missing and emphasizing a need for relevant experimental models in order to study the underlying pathophysiology leading to CAV formation. The following protocol describes a murine heterotopic cervical aortic transplantation model using a modified non-suture cuff technique. In this technique, a segment of the thoracic aorta is interpositioned in the right common carotid artery. With the use of the non-suture cuff technique, an easy to learn and reproducible model can be established, minimizing the possible heterogeneity of sutured vascular micro anastomoses.

Here, we present a protocol of heterotopic aortic transplantation in mice using the non-suture cuff technique in a cervical murine model. This model can be used to study the underlying pathology of chronic allograft vasculopathy (CAV) and can help evaluate new therapeutic agents in order to prevent its formation.

Modifiye Dikişsiz Manşet Tekniği Kullanılarak Murine Servikal Aort Transplantasyon Modeli

With the introduction of powerful immunosuppressive protocols, distinct advances are possible in the prevention and therapy of acute rejection episodes. ...