Yazarlar geçmiş ve şimdiki Ricke laboratuarında tüm üyelerine teşekkür etmek istiyorum. Biz protokolü ile ilgili faydalı yorumları için, Calvin Patten, Jr, DVM ve Brigitte Raabe, DVM teşekkür ederim. R01DK093690, R01CA123199, RC2ESO18764: Biz bu çalışmalar için mali destek için ettirmeniz, NCI ve NIEHS kabul etmek istiyorum. TMN NIH T32 GM07356 tarafından finanse Rochester Üniversitesi Tıp Bilim Adamı Yetiştirme Programı bir stajyer, Ruth L. Kirschstein Ulusal Araştırma Hizmet Ödülü F30DK093173 altında NIH de bu projeyi destekliyor. CDV Wisconsin-Madison Üniversitesi&#39;nde T32ES007015 tarafından desteklenen T32CA157322 ve ABT tarafından desteklenmektedir. Içeriği sadece yazarların sorumluluğundadır ve mutlaka Genel Tıp Bilimleri veya NIH Ulusal Enstitüsü resmi görüşlerini temsil etmemektedir.

1.. Sıkıştırılmış Hormon / Drug Pellet hazırlanması <ol><li> Bir laboratuvar önlüğü, eldiven, maske, koruyucu gözlük ve bone Bu prosedür, bir kimyasal güvenlik kabini yapılmalıdır. Çapraz kontaminasyonu önlemek için, topak yapma makineleri önce iyice% 70 etanol ile ve pelletin her tür imalattan sonra temizlenir önemlidir. </li><li> Analitik ölçek kullanarak ve kağıt ağırlığı hormon / ilaç tozu istenilen miktarını ölçmek. Yaklaşık% 5 fazla presleme işlemi sırasında malzeme kaybı karşılamak için tavsiye edilir. </li><li> Bazı hormonları / ilaçların üretimi pelet önce karıştırılır, bir bağlayıcı madde veya dolgu maddesi gerektirir. Örneğin, 17β-estradiol, 2.5 mg pelet üretimi için, bir 25 mg pelet sonuçlanan kolesterol 22.5 mg, hormon ile birleştirir. </li><li> Dikkatle pres altında kalıp seti, yerine aktarmak ve pelet sıkıştırmak için sıkıca kolu aşağıya doğru bastırın. Olan sabit yüzey bakımı tutarlı basınç kullanınhacim oranı. </li><li> Sonraki kalıp yuvasını ters ve pelet serbest bırakmak için tekrar aşağıya kolu itin. </li><li> Bütünlüğü için pelet kontrol edin ve son kütle istenen aralıkta olup olmadığını belirlemek. Kabul edilebilir bir aralık (örneğin, 25 mg pelet için kabul edilebilir bir aralık 23,8-26,3 mg), nihai kütlesinde bir ±% 5 farktır. </li><li> Peletler ameliyat öncesi yapılan ve (koşulları ve depolama süresi pelet üretiminde kullanılan hormon ya da ilaç stabilitesi bağlı olarak) saklanabilir. Hormon granül üretim pelet alternatif olarak satın alınabilir. Pelet Satınalma onlar formüle ve bileşik olacağından olmayan ilaç sınıf ilaçların kullanımını önler. </li></ol> 2. Hücre Rekombinant ksenogratflarının hazırlanması <ol><li> Hasat ve kültürü birincil fare ürogenital mesenkimi (UGM) sayımı için toplanan edilmeden önce en az 4 hafta boyunca stromal hücreler. </li><li> Kültür olağan zahmet prostat epitelial hücre hatları ölümsüzleştirilmişiyon ve sayımı için toplamak. Bu örnek için, süspansiyon içinde greft başına 250,000 UGM stromal hücreleri ile greft başına 100,000 BPH-1 epitel hücreleri karıştırılarak yeniden birleştirici hücre greft hazırlar. </li><li> Pelet hücreler bir araya ve 50 ul 25 ul bir hacim içinde greft arzu edilen sayıda, her biri için yeterli nötralize tip 1 fare kuyruk kolajeni yeniden askıya. </li><li> 15 dakika boyunca 37 ° C &#39;de yeniden birleştirici greft ayarlama ve daha sonra aşılama öncesi kadar 48 saat boyunca 37 ° C&#39;de depolama için büyüme ortamı ile kaplayın. </li></ol> 3. Doku ksenogratflarının hazırlanması <ol><li> Doku alımı ve cerrahi işlem sırasında kan yoluyla bulaşan patojenlere için evrensel önlemleri koruyun. Kurumsal inceleme kurulu onayı ve bilgilendirilmiş rıza takiben, cerrahi rezeksiyon taze prostat dokusu elde. BPH büyüme incelemeler için dokular, prostat veya basit prosedürlerin prostatektomi, transüretral rezeksiyon hasat edilebilir. SKHA veya benign prost birincil ksenogratflardıryedik doku radikal prostatektomi örneklerinde elde edilebilir. </li><li> Mağaza izotonik tamponlu hücre medya veya buz üzerinde normal serum fizyolojik doku hasat. Doku ve depolama koşullarına bağlı olarak, numuneler önce, doku grefti hazırlanmasına kadar 24 saat süre ile depolanabilir. Yaygın uygulama formalin içinde sabitlenmiş ve rutin histoloji için işlenen bir bölümünde, üç adet numune halinde bölmek için, tek parça moleküler analiz için dondurulmuş ve bir parçası ayrıca doku ksenograftlarda (boyut olarak 1-3 mm) ayrıldı geçmeli. </li></ol> 4. Ateş hazırlanması Cam Pipet Cilalı <ol><li> Giyen göz koruması, laboratuvar mont ve ısıya dayanıklı eldiven, yaklaşık Bunsen beki alevi başlatmak için bir 60 ° açı içine yer cam Pasteur pipet. </li><li> Sıcak noktalar önlemek amacıyla pipet için bir sabit, hafif bir hareket tutun. </li><li> Amaç bir yuvarlak ile bir hafif kavisli uç olmanın ince ucu ve yangın lehçe çizmek, ucu kapalı. </li></ol&gt; 5. Araçların Hazırlanması ve Cerrahi Suite <ol><li> Bütün aletleri otoklavlayın. Ameliyat öncesinde, steril alanı korumak için özen, tüm araçları kontrol edin. </li><li> Emici pedler, diseksiyon kapsamı, anestezi burun konisi, cerrahi aletler ve çalışma alanı yönelmiş ısıtma lambası ile steril cerrahi alanı kurmak. Farelerde, ön ısıtılması boncuk sterilizatör arasında aletleri sterilize. </li><li> Montaj ve test anestezi cihazı; gaz skavenjeri tartın. </li><li> Tüm balmumu eşit eriyene kadar,% 70-80 güçte (eritilir ve erimemiş balmumu birleştirmek amacıyla balmumu ped yoğurma 1 dakika aralıklarla,) kadar 5 dakika boyunca mikrodalga fırın, ısı yastıkları balmumu kullanılması. Dokunarak, ped boş kemirgen kurtarma kafesinin altında çok sıcak ve yer değil emin olun. </li><li> Cerrahi maske, bone, eldiven ve önlük gibi kemirgen cerrahi işlemler, Don kişisel koruyucu ekipman. </li></ol> 6. Cerrahi Prosedür: Böbrek Kapsül Xenografting<ol><li> Araştırma hayvanları içeren tüm işlemler kurumsal hayvan bakımı ve kullanımı komitelerinin onayı ile yapılmalıdır. Önce anestezi indüksiyon, sağlık ve refahını sağlamak için fareyi gözlemlemek. </li><li> % 3-5 izofluran anestezi için odasına fare yerleştirin. Hayvan hareket durdu ve solunum hızı düştüğünde, yüzüstü pozisyonda burun konisi transfer, ve% 1-3 anestezi korumak. </li><li> Gerekirse, fare geri tıraş için makasları kullanın. Atimik çıplak (nu / nu) fareler kullanılarak, bu gerekli değildir. </li><li> Anestezi yeterliliğini değerlendirmek için uzatılmış arka ayak dokumasında firma basınç uygulayın. Fare basınca yanıt verirse, daha fazla zaman etkili olması için anestezi gereklidir. Eğer gerekli ise, uygun bir anestezi elde etmek için hafifçe anestezi akışını ayarlamak. </li><li> Fare anestezi yeterli olduğunda, cerrahi, ardından bir iyot karışımı (Betadine) çözeltisi ile cerrahi sitesi dezenfekte% 70 alkol. </li><li> Don steril eldiven ve önlük, cerrahi bölgeye steril örtüler geçerlidir. Dişli forseps bir çift ile geri cilt kaldırın ve makas kullanılarak kaba bir 2-3 cm dorsal orta hat kesi yapmak. </li><li> Künt makas veya bir sonda kullanarak, (bilateral aşılama için kesiğin her iki tarafında tek taraflı ya da aşılama için, bir tarafta) gövde duvarının arasındaki temel dermis ayırın. </li><li> Lateral pozisyon içine fare konumlandırmak ve kas duvarından böbrek profilini görüntüleyerek böbreğin yerini belirlemek. Karın üzerine başparmak ve işaret parmağı ile elle basınç uygulayarak iç organları görselleştirmek yardımcı olabilir. </li><li> Ince iris makası kullanarak ve omurga vücut duvarı paralel bir 1 cm kesi yapmak, büyük damarları ve sinirleri spinal önlemek için dikkat çekici. Yavaşça başlangıç ​​kesi yerleştirmeden sonra makas geniş açarak (böbreğin uzun eksenine göre biraz daha uzun) 1.5-2.0 sm Bu kesi Widen. </li><li> Işaret parmağı ve başparmak ile böbrek her iki tarafında kas duvarın dışında hafif bir basınç uygulayarak böbrek Exteriorize. Tuck cilt vücut duvarı üzerinde kalacak olan, batın böbrek altında kenarları. Böbrek dışarıya alınır birlikte, steril tuzlu su uygulanarak renal kapsülün hidrasyon korumak. </li><li> Ince 5. forseps kullanarak hafifçe böbrek parankimi gelen böbrek kapsülü kaldırın ve ince neşter ile, kapsülde 2 -4 mm kesi yapmak. Kesiğin boyutunun greft boyutuna göre belirlenir, ancak kapsülün bütünlüğünü korumak için en aza düşürülmesi gerekmektedir. </li><li> Böbrek yüzeyine teğet olan kapsül altında bir yuvarlak kapalı uç ile ince ve yangın parlatılmış çizilmiş, bir cam Pasteur pipet işleyin. Yavaşça böbrek parankimi zarar vermemeye büyük özen kullanarak, greft için küçük bir kapsül cebi açın. </li><li> Böbrek Kapsülün kesik kenar aşı i ince forseps ile kaldırılmış, veateş cilalı cam pipet ile kapsül altında cep içine sokulur ve s. Birçok greft böbrek kapsülü altına yerleştirilir ve eşit olarak böbrek yüzeyinde aralıklı olabilir. </li><li> Aşılama sırasında, kapsül susuz olur ise, steril tuzlu su uygulanarak nemli olmalıdır. </li><li> Aşılama işlemi tamamlandığında, yavaşça vücut boşluğuna böbrek yerine kas duvar kesiğin tarafı kaldırın. Greftler kapsülü altında dışarı kayma olmadığını gözlemleyin. </li><li> Bir tek sütür (4-0, FS-2 vikril sütür) ile kas duvarı kapatın. Cerrahi işlem fareyi yeniden konumlandırarak kontralateral böbrek üzerinde tekrar edilebilir. </li><li> Aşılama tamamlandığında, fare (Protokol adım 7) aynı cerrahi işlem sırasında cilt altı pelet implantasyonu tabi olabilir. </li><li> Dişli forseps kullanarak, cilt kesi kenarları aynı hizaya ve insizyon kapatmak için 2-3 cerrahi yara klipleri geçerlidir. Analjezi yönetmek (kullandığımız 5-10 mg / kg carprofderi altı enjeksiyonu) ile en ve geri kafes yanal yatar konumda fare. Bir lamba ya da ısıtma pedi gelen ısı ile vücut ısısının bakım sağlamak. Az 15 dakika içinde gerçekleşmesi gereken fare, tam iyileşme için gözlemleyin. </li><li> Fareler kanama ve / veya diğer komplikasyonlar, ameliyat sonrası ağrı belirtileri sonraki 24 saat gözlem altında tutulmalıdır. Düzenli enfeksiyon belirtileri için cerrahi kesi inceleyin. </li><li> 7-14 gün ameliyat sonrası cerrahi yara klip temizleme cihazı ile yara klipleri çıkarın. </li></ol> 7. Cerrahi Prosedür: Subkutan Pelet İmplantasyonu <ol><li> Tekrar cerrahi prosedür xenografting böbrek kapsül 6,1-6,5 adımlar. </li><li> Cilt forseps bir çift ile geri cilt kaldırın ve makas kullanılarak kaba bir 1-2 cm dorsal orta hat kesi yapmak. </li><li> Künt makas veya bir sonda kullanılarak, bir kafatası yönünde gövde duvarından temel dermis ayırın. </li><li> Cilt forseps kullanarak,nazikçe cilt kesisi kranial yönü kaldırın ve düz, dişli forseps ile yavaşça hormon pelet tutan, pelet yerleştirin ve künt prob ile oluşturulan cepte, boyun ense de bırakın. </li><li> Tekrar cerrahi prosedür xenografting böbrek kapsülünden 6,18-6,20 adımlar. Derialtı pelet implantasyonu gerçekleştirirken yalnızca, cerrahi insizyon kapatmak için 1 cerrahi yara klibi kullanabilirsiniz. </li></ol>

<ol>
	<li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cancer Facts Figures. 4, (2010).</li><li>McVary, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BPH:+epidemiology+and+comorbidities.">BPH: epidemiology and comorbidities.</a> Am. J. Manag. Care. 12, S122-S128 (2006).</li><li>Nicholson, T. M., Ricke, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Androgens+and+estrogens+in+benign+prostatic+hyperplasia:+past,+present+and+future.">Androgens and estrogens in benign prostatic hyperplasia: past, present and future.</a> Differentiation. 82, 184-199 (2011).</li><li>Ricke, W. A., Wang, Y., Cunha, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroid+hormones+and+carcinogenesis+of+the+prostate:+the+role+of+estrogens.">Steroid hormones and carcinogenesis of the prostate: the role of estrogens.</a> Differentiation. 75, 871-882 (2007).</li><li>Ricke, W. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroid+hormones+stimulate+human+prostate+cancer+progression+and+metastasis.">Steroid hormones stimulate human prostate cancer progression and metastasis.</a> Int. J. Cancer. 118, 2123-2131 (2006).</li><li>Belanger, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+serum+concentrations+of+conjugated+and+unconjugated+steroids+in+40-+to+80-year-old+men.">Changes in serum concentrations of conjugated and unconjugated steroids in 40- to 80-year-old men.</a> J. Clin. Endocrinol. 79, 1086-1090 (1994).</li><li>Nicholson, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testosterone+and+17beta-estradiol+induce+glandular+prostatic+growth,+bladder+outlet+obstruction,+and+voiding+dysfunction+in+male+mice.">Testosterone and 17beta-estradiol induce glandular prostatic growth, bladder outlet obstruction, and voiding dysfunction in male mice.</a> Endocrinology. 153, 5556-5565 (2012).</li><li>Str&#246;m, J. O., Theodorsson, A., Ingberg, E., Isaksson, I. M., Theodorsson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovariectomy+and+17&#946;-estradiol+Replacement+in+Rats+and+Mice:+A+Visual+Demonstration.">Ovariectomy and 17&#946;-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration.</a> J. Vis. Exp. (64), e4013 (2012).</li><li>Szot, G. L., Koudria, P., Bluestone, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+Pancreatic+Islets+Into+the+Kidney+Capsule+of+Diabetic+Mice.">Transplantation of Pancreatic Islets Into the Kidney Capsule of Diabetic Mice.</a> J. Vis. Exp. (9), e404 (2007).</li><li>Aamdal, S., Fodstad, O., Nesland, J. M., Pihl, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+human+tumour+xenografts+transplanted+under+the+renal+capsule+of+immunocompetent+mice.">Characteristics of human tumour xenografts transplanted under the renal capsule of immunocompetent mice.</a> Brit. J. Cancer. 51, 347-356 (1985).</li><li>Cunha, G. R., Lung, B., Reese, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glandular+epithelial+induction+by+embryonic+mesenchyme+in+adult+bladder+epithelium+of+BALB/c+mice.">Glandular epithelial induction by embryonic mesenchyme in adult bladder epithelium of BALB/c mice.</a> Investigative urology. 17, 302-304 (1980).</li><li>Norman, J. T., Cunha, G. R., Sugimura, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+induction+of+new+ductal+growth+in+adult+prostatic+epithelium+in+response+to+an+embryonic+prostatic+inductor.">The induction of new ductal growth in adult prostatic epithelium in response to an embryonic prostatic inductor.</a> The Prostate. 8, 209-220 (1986).</li><li>Hayward, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+between+adult+human+prostatic+epithelium+and+rat+urogenital+sinus+mesenchyme+in+a+tissue+recombination+model.">Interactions between adult human prostatic epithelium and rat urogenital sinus mesenchyme in a tissue recombination model.</a> Differentiation. 63, 131-140 (1998).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+human+prostatic+epithelial+model+of+hormonal+carcinogenesis.">A human prostatic epithelial model of hormonal carcinogenesis.</a> Cancer Res. 61, 6064-6072 (2001).</li><li>Ricke, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Androgen+hormone+action+in+prostatic+carcinogenesis:+stromal+androgen+receptors+mediate+prostate+cancer+progression,+malignant+transformation+and+metastasis.">Androgen hormone action in prostatic carcinogenesis: stromal androgen receptors mediate prostate cancer progression, malignant transformation and metastasis.</a> Carcinogenesis. 33, 1391-1398 (2012).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+efficient+xenograft+models+for+benign+and+malignant+human+prostate+tissue.">Development and characterization of efficient xenograft models for benign and malignant human prostate tissue.</a> The Prostate. 64, 149-159 (2005).</li><li>Goto, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proximal+prostatic+stem+cells+are+programmed+to+regenerate+a+proximal-distal+ductal+axis.">Proximal prostatic stem cells are programmed to regenerate a proximal-distal ductal axis.</a> Stem Cells. 24, 1859-1868 (2006).</li><li>Xin, L., Ide, H., Kim, Y., Dubey, P., Witte, O. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+regeneration+of+murine+prostate+from+dissociated+cell+populations+of+postnatal+epithelia+and+urogenital+sinus+mesenchyme.">In vivo regeneration of murine prostate from dissociated cell populations of postnatal epithelia and urogenital sinus mesenchyme.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100, 11896-11903 (2003).</li><li>Priolo, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+genomic+characterization+of+mouse+xenografts+of+human+primary+prostate+tumors.">Establishment and genomic characterization of mouse xenografts of human primary prostate tumors.</a> Am. J. Pathol. 176, 1901-1913 (2010).</li><li>Pritchett-Corning, K. R., Mulder, G. B., Luo, Y., White, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+Rodent+Surgery+for+the+New+Surgeon.">Principles of Rodent Surgery for the New Surgeon.</a> J. Vis. Exp. (47), e2586 (2011).</li></ol>

Yazarlar, hiçbir rakip mali çıkarlarını olmadığını beyan ederim.

Bu kağıt ve belirtilen protokol, burada sıkıştırılmış hormonu ve / veya ilaç topaklarının imalatı ve farelerin deri altına topak implantasyonu için cerrahi prosedür tarif eder. Ele alınması araştırma sorusuna bağlı olarak, bu tekniğin tek başına, ya da yaygın olarak prostat araştırma 17-19 kullanılan teknikleri prostat hücre rekombinant greft veya prostat doku xenogreftler, renal kapsül Xenografting ile birlikte yapılabilir. Birlikte ele alındığında, bu teknikler hormonal k...

Prostat kanseri (SKHA) ve benign prostat hiperplazisi (BPH) önemli sağlık yük vardır. SKHA erkeklerde ikinci en sık görülen solid organ kanseri ve ölüme 1 ilgili kanser önde gelen nedenidir. BPH de yaşlı erkekler arasında son derece yaygın olduğunu ve BPH klinik bulgusu, alt üriner sistem semptomları (AÜSS), erkeklerin 2% 50-90 etkileyeceği tahmin edilmektedir. Androjenler ve östrojenler, SKHA ve BPH önemli olduğu bilinmektedir da karsinojenezi &#39;nin büyüme ve altında yatan hormonal mekanizmaların anlaşılması 3,4 eksik kalır. Basit ve genetik uysal hayvan modelleri prostat araştırma bu önceliklere hitap edecek çalışmaları desteklemek. Bu tür SKHA ve BPH, immunocomp içine tek başına ya da renal kapsülün Xenografting ile kombinasyon halinde deri altı, yavaş salma hormon peletlerin kullanılması, (başka bir bir türden hücreler, dokular ya da organların transferi) gibi hormon cevap veren hastalıklardaromised fare host, büyüme ve karsinogenez hormonal düzenlenmesini incelemek için basit ve tekrarlanabilir bir yöntem sağlar. Deri altına hormon topak implantasyonu kanser ve prostat 5 huylu büyüme hormonal düzenlenmesini incelemek için, basit ve yeniden üretilebilir bir tekniktir. 25 mg testosteron (T) ve 2.5 mg 17β-estradiol (E2) ile yetişkin erkek farelerin deri altına implantasyonu, yaşlanan erkeklerde 5,6 dinamik hormonal ortam yeniden, bir serum E2 artışı ve T kademeli azalmaya neden olur. Buna ek olarak, bu model BPH-AÜSS 5,7 klinik özellikleri birçok tartışıldı. Hormon tatbikat için alternatif yöntemler oral / gavaj uygulanmasını veya intraperitoneal enjeksiyon, kemirgen için sıkıntıya neden zaman içinde ilacın aynı miktarda sunma konusunda daha az tutarlıdır ve vardır daha fazlasını içerir, emek-yoğun bir defalık bir cerrahi implantasyon daha. Saat boyunca diğer deri altından modlarıormone ve / veya ilaç verme silastik kapsüller 8 bulunmaktadır. Daha da Silastic kapsüllerin kullanımı ile deneyime sahip olsa da, sıkıştırılmış granül kullanımı ve yeniden üretilebilirlik kolaylığı için tercih edilmektedir. Ayrıca, sıkıştırılmış hormon pelet bırakma oranları daha yaşlanan erkeklerde 5,7 gözlenen dinamik cinsiyet steroid hormon oranları taklit. Genetik olarak bağışıklık sistemi farelerin geliştirilmesi için, yabancı-doku naklinde tekniklerini içeren çeşitli in vivo model sistemleri, normal ve hastalıklı dokuların, çok çeşitli çalışma için geliştirilmiştir. Xenografting birkaç temel kategorisi vardır. Doku ksenogratflardır normal yapısı, habis tümör, ya da iyi huylu büyüme olabilir sağlam doku küçük bir parça oluşmaktadır. Szot ve diğ. (2007) son zamanlarda pankreas adacık 9 renal kapsül Xenografting aydınlatılmış var. Aamdal ve diğ. (1985) im 27 insan kanser hücre çizgilerinin böbrek yabancı-doku naklinde kapsül tarifmunocompromised fare 10 ev sahipliği yapıyor. Greftler, aynı zamanda (ya da kanserli olmayan tümörijenik), tek bir ölümsüz hücre hattı meydana gelmiş olabilir ya da mezenşimin (hücre yeniden birleştirici aşı) izole edilmiş hücreler ile bir araya ölümsüzleştirilmiş hücre dizisinden oluşabilir. Biz SKHA ve BPH gelişiminde stroma ve epitel rollerini araştırmak için, hücre yeniden bileşenler yabancı-doku naklinde lehine. Cunha ve ark. (1980) erişkin kemirgen mesane epiteli erkek fareler ana böbrek kapsülü altında embriyonik ürogenital sinüs mezenşimin (UGM) ve ksenogreflenmiş ile kombine edildiğinde, doku prostat asinüsü 11 benzeyen yapıları içine geliştirir olduğunu bildirmek için ilk oldu. Norman et al. (1986), doku yeniden bileşenler birleştirildiğinde yetişkin fare prostatik duktal epitelyum ve UGM, duktal büyüme ve morfolojilerinden 12 dallanma geçmesi gösterdi. Hayward ve ark. (1988), insan prostat epitelyum fetal m endüktif tepki gösterdiBenzer bir şekilde, 13 esenchyme. Birleştirerek prostat karsinogenez bir hormonal modeli, ölümsüzleştirilmiş insan prostat epitelyal hücre hattı BPH-1 UGM, birinci Wang et al., 14 (2001) tarafından rapor edilmiştir ve laboratuvarda 15 yaygın olarak kullanılmaktadır. Benign prostat epitel insanlarda 5 ileri SKHA modelleme, metastatik hastalığa dönüşür çünkü bu model SKHA ilerlemesini anlamak için uygundur. Özel bileşenler, genetik olarak manipüle edilebilir, çünkü yeniden birleştirici hücre aşılama stromal-epitelial etkileşimleri değerlendirmek için bir yöntem olarak özellikle yararlıdır. Xenografting için uygun diğer siteler intradermal, deri altı ve ortotopik yeri 16 bulunmaktadır. Ilgi konusu doku ve hastalık sürecine bağlı olarak, bu gibi uygun bir alternatif yaklaşımlar olabilir. Prostat hormonal zin ve iyi huylu büyüme düzenleme araştırmada, böbrek kapsülü seçinnedeniyle yüksek greft xenografting için site hızı, bol kan akımı, ve bir kapalı sitede 16 içine aşılanmasının daha fazla sayıda implant yeteneğini alır. Ayrıca, prostat atrofi ile sonuçlanan ana fare hormonal manipülasyon prostat ortotopik aşılama 16 kullanımını sınırlar. Bu protokol, sıkıştırılmış hormon / ilaç topak üretimi ve cerrahi implantasyon, hem de insan prostat hücre ve doku greft renal kapsül Xenografting teknikler yer almaktadır. Hep birlikte, bu teknikler, genetik olarak modifiye edilmiş bir fare SKHA ve / veya kontrol suşları daha BPH başlatılmasından daha duyarlı olup olmadığını belirlemek için hassas bir tahlil sağlar. Xenografting in vivo histolojik ve habis moleküler özellikleri geliştirmek için deneysel hücrelerin potansiyel değerlendirme, hem de iyi huylu ve kötü huylu hastalıkların geniş bir yelpazede için yeni tedavi stratejileri için bir tahlili için güçlü bir tekniktir.

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>EQUIPMENT &amp; MATERIALS</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Pellet press</td>
			<td>PARR Industries </td>
			<td>2815</td>
			<td>3mm Punch &amp; Die set</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Analytical Balance</td>
			<td>Ohaus</td>
			<td>1918302</td>
			<td>Voyager or other</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Bunsen burner</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>03-962Q</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>L2</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Deltaphase Pad Kit (reheatable wax)</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>39DP</td>
			<td>Alternative to an electric heating pad</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Hot Bead sterilizer</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>18000-45</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Isoflurane Vaporizer</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>VAP3000</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Induction Chamber</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>RES644</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>F/AIR Canister</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>80120</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>4 port Manifold</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>RES536</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Rebreathing Circuits</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>CIR529</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Inlet/Outlet Fittings</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>VAP203/4</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Pressure Reg/Gauge</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>OXY508</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Oxygen Flowmeter</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>OXY660</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>21mm Clear Tubing</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>301-150</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Small Mice Nose Cone</td>
			<td>Supera Anesthesia Innov</td>
			<td>ACC526</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sterile surgical gown</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>350.79866.2</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Surgical mask</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>350.50111.2</td>
			<td>2-ply w/ earloops</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sterile gauze</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>001.14100.2</td>
			<td>2 x 2 inches</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sterile Gloves</td>
			<td>Kimberly Clark</td>
			<td>55092</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Bouffant</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>001.27100.2</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Cotton Tip Applicator</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>001.06220.2</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Surgical Scrub Wash</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>733.80010.3</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sterile Fields (Fenestrated)</td>
			<td>General Econopak, Inc</td>
			<td>88VCSTF</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>REAGENTS</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Cholesterol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C-3292</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Testosterone Proprionate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T-1875</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>17&beta;-estradiol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E-2758</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>193.33161.3</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Carprofen</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>193.70200.3</td>
			<td>Injectable (Rimadyl)</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Betadine</td>
			<td>Webster Veterinary</td>
			<td>07-836-3379</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sterile saline</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>193.74504.3</td>
			<td>NaCl 0.9%, Injectable</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>SURGICAL INSTRUMENTS</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Straight Sharp/Blunt Scissors</td>
			<td>Fine Scientific Tools (F.S.T.)</td>
			<td>14054-13</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Graefe forceps (Serrated, Toothed, Curved)</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11055-10</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Fine Iris scissors</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>14090-09</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Graefe Scalpel</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>10071-12</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dumont #5 forceps</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11251-20</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Glass Pasteur pipets</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S67050</td>
			<td>5" length</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Graefe forceps (Serrated, Curved)</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11052-10</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Graefe forceps (Serrated, Straight)</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>11050-10</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Vicryl Suture</td>
			<td>Midwest Vet Supply</td>
			<td>295-92100.2</td>
			<td>4-0, FS-2, Absorbable</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Needle Holder w/ scissor action</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>12002012</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Wound Clips</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>ACS CS</td>
			<td>May use 7mm or 9mm clips</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Reflex Wound Clipper</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>12031-09</td>
			<td>Correspond w/ wound clip size</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Would Clip Remover</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>12033-00</td>
			<td>Universal</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sterilization Container</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>20810-01</td>
			<td>Any autoclavable container will do</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Syringe w/ needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>148292C</td>
			<td>1cc, 25Gx1</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Ear Tag Applicator</td>
			<td>National Band &amp; Tag Co.</td>
			<td>1005s1</td>
			<td>Alternative to ear notching</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Small Animal Ear Tags</td>
			<td>National Band &amp; Tag Co.</td>
			<td>1005-1</td>
			<td></td>
		 </tr>
		</tbody>
 </table>

renal capsule xenografting and subcutaneous pellet implantation for the evaluation of prostate carcinogenesis and benign prostatic hyperplasia

Iki yaygın prostat hastalıkları, prostat kanseri (SKHA) ve benign prostat hiperplazisi (BPH) için yeni tedaviler, hormonal düzenlemeyi değerlendiren deneyler sıkı sıkıya bağlıdır. Seks steroid hormonlar (özellikle androjenler ve östrojenler) SKHA ve BPH önemli olan, biz sıkıştırılmış hormon granül kullanarak deneyler ile farelerde prostat büyümesi ve karsinojenezi uyaran kendi rollerini prob. Hormon ve / veya ilaç topakları kolaylıkla topak pres ile imal edilmiştir ve cerrahi olarak erkek fare konağın deri altı doku içine implante edilir. Ayrıca bağışıklık sistemi farelerinin böbrek kapsülü altında prostat hücre yeniden bileşenler Xenografting ile deri altından hormon topak implantasyonu birleştirerek hormonal kanser değerlendirilmesi için bir protokol açıklar. Ayrıca, deri altına topak implantasyonu hormon, BPH dokusunun renal kapsül Xenografting ile kombinasyon halinde, daha iyi huylu prost hormonal düzenleme anlaşılması için yararlıdırbüyüme yedik ve seks steroid hormon yolları hedef yeni tedavilerin test etmek.

<html> Test edilecek olan hipotez bağlı olarak, doku ya da hücre yeniden bileşenler böbrek yabancı-doku naklinde kapsül tek başına, ya da deri altı hormon topak implantasyonu ile kombinasyon halinde gerçekleştirilebilir. Deri altından hormon topak implantasyonu ile böbrek yabancı-doku naklinde kapsül deney birleştiren hayali bir deneyinin şematik Şekil 1 &#39;de gösterilmiştir. Toz haline getirilmiş ve / veya kristal maddelerin çeşitli topak pres ile sıkıştırılmış pelet ür...

Watch this Scientific Journal Video about Renal Capsule Xenografting and Subcutaneous Pellet Implantation for the Evaluation of Prostate Carcinogenesis and Benign Prostatic Hyperplasia at JoVE.com

Renal Capsule Xenografting and Subcutaneous Pellet Implantation for the Evaluation of Prostate Carcinogenesis and Benign Prostatic Hyperplasia

Bu farelere, sıkıştırılmış hormon peletlerin üretimi, hem de deri altından cerrahi implantasyon açıklar. Bu strateji, hormonal karsinojenezi ve iyi huylu prostat büyümesi düzenleme değerlendirmek için atimik çıplak farelerin böbrek kapsülünün altına hücre ve doku senograflarının büyümesi ile kombine edilebilir.

Prostat Karsinogenezde ve İyi Huylu Prostat Büyümesi ve Değerlendirilmesi için böbrek Kapsül Xenografting ve Derialtı Pelet İmplantasyonu

New therapies for two common prostate diseases,  prostate cancer (PrCa) and benign prostatic hyperplasia (BPH), depend  critically on experiments ...

renal-capsule-xenografting-subcutaneous-pellet-implantation-for

Research

JoVE Journal

Medicine

24.9K Görüntüleme.  University of Wisconsin-Madison.  Bu farelere, sıkıştırılmış hormon peletlerin üretimi, hem de deri altından cerrahi implantasyon açıklar. Bu strateji, hormonal karsinojenezi ve iyi huylu prostat büyümesi düzenleme değerlendirmek için atimik çıplak farelerin böbrek kapsülünün altına hücre ve doku senograflarının büyümesi ile kombine edilebilir. 

Video: Renal Capsule Xenografting and Subcutaneous Pellet Implantation for the Evaluation of Prostate Carcinogenesis and Benign Prostatic Hyperplasia

Evaluation of Nanoparticle Uptake in Tumors in Real Time Using Intravital Imaging

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle uptake in tumors at the microscopic level1,2,3, highlighting the utility of a suitable xenograft model in which to perform detailed uptake analyses. Here, we use high-resolution intravital imaging to evaluate nanoparticle uptake in human tumor xenografts in a modified, shell-less chicken embryo model. The chicken embryo model is particularly well-suited for these in vivo analyses because it supports the growth of human tumors, is relatively inexpensive and does not require anesthetization or surgery 4,5. Tumor cells form fully vascularized xenografts within 7 days when implanted into the chorioallantoic membrane (CAM) 6. The resulting tumors are visualized by non-invasive real-time, high-resolution imaging that can be maintained for up to 72 hours with little impact on either the host or tumor systems. Nanoparticles with a wide range of sizes and formulations administered distal to the tumor can be visualized and quantified as they flow through the bloodstream, extravasate from leaky tumor vasculature, and accumulate at the tumor site. We describe here the analysis of nanoparticles derived from Cowpea mosaic virus (CPMV) decorated with near-infrared fluorescent dyes and/or polyethylene glycol polymers (PEG) 7, 8, 9,10,11. Upon intravenous administration, these viral nanoparticles are rapidly internalized by endothelial cells, resulting in global labeling of the vasculature both outside and within the tumor7,12. PEGylation of the viral nanoparticles increases their plasma half-life, extends their time in the circulation, and ultimately enhances their accumulation in tumors via the enhanced permeability and retention (EPR) effect 7, 10,11. The rate and extent of accumulation of nanoparticles in a tumor is measured over time using image analysis software. This technique provides a method to both visualize and quantify nanoparticle dynamics in human tumors.

We present a novel approach to quantify nanoparticle localization in the vasculature of human xenografted tumors using dynamic, real-time intravital imaging in an avian embryo model.

Intravital Görüntüleme Gerçek Zamanlı tümörler Nanopartikül Alımı Değerlendirme

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle ...

Tıp

Cell Population Analyses During Skin Carcinogenesis

Cancer development is a multiple-step process involving many cell types including cancer precursor cells, immune cells, fibroblasts and endothelial cells. Each type of cells undergoes signaling and functional changes during carcinogenesis. The current challenge for many cancer researchers is to dissect these changes in each cell type during the multiple-step process in vivo. In the last few years, the authors have developed a set of procedures to isolate different cell populations during skin cancer development using K14creER/R26-SmoM2YFP mice. The procedure is divided into 6 parts: 1) generating appropriate mice for the study (K14creER+ and R26-SmoM2YFP+ mice in this protocol); 2) inducing SmoM2YFP expression in mouse skin; 3) preparing mouse skin biopsies; 4) isolating epidermis from skin; 5) preparing single cells from epidermis; 6) labeling single cell populations for flow cytometry analysis. Generation of sufficient number of mice with the right genotype is the limiting step in this protocol, which may take up to two months. The rest of steps take a few hours to a few days. Within this protocol, we also include a section for troubleshooting. Although we focus on skin cancer, this protocol may be modified to apply for other animal models of human diseases.

Carcinogenesis is a process involving interactions between cancer cells and the cancer microenvironment. To dissect the molecular events, one needs to isolate different cell populations at different stages during cancer development. Using a mouse model for basal cell carcinoma, we describe a protocol for cell analyses during carcinogenesis.

Hücre Nüfus Analizler Cilt Karsinojenez sırasında

Cancer development is  a multiple-step process involving many cell types including cancer precursor  cells, immune cells, fibroblasts and endothelial ...

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Mouse models are widely used to study pathogenesis of human diseases and to evaluate diagnostic procedures as well as therapeutic interventions preclinically. However, valid assessment of pathological alterations often requires histological analysis, and when performed ex vivo, necessitates death of the animal. Therefore in conventional experimental settings, intra-individual follow-up examinations are rarely possible. Thus, development of murine endoscopy in live mice enables investigators for the first time to both directly visualize the gastrointestinal mucosa and also repeat the procedure to monitor for alterations. Numerous applications for in vivo murine endoscopy exist, including studying intestinal inflammation or wound healing, obtaining mucosal biopsies repeatedly, and to locally administer diagnostic or therapeutic agents using miniature injection catheters. Most recently, molecular imaging has extended diagnostic imaging modalities allowing specific detection of distinct target molecules using specific photoprobes. In conclusion, murine endoscopy has emerged as a novel cutting-edge technology for diagnostic experimental in vivo imaging and may significantly impact on preclinical research in various fields.

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Small animal imaging techniques allow serial diagnostic examinations and therapeutic interventions in vivo. Recently, the scope of applications has significantly widened and currently includes assessment of colonic tumor development, wound healing and monitoring of inflammation. This protocol illustrates these diverse potential applications of murine endoscopy.

Murin için Endoskop<em&gt; In Vivo</em&gt; Karsinojenez ve bağırsak Değerlendirilmesi Multimodaller Görüntüleme Yara İyileşmesi ve İltihap

Mouse models are widely used to study pathogenesis of human diseases and to evaluate diagnostic procedures as well as therapeutic interventions ...

Evaluation of Tumor-infiltrating Leukocyte Subsets in a Subcutaneous Tumor Model

Specialized immune cells that infiltrate the tumor microenvironment regulate the growth and survival of neoplasia.&#160; Malignant cells must elude or subvert anti-tumor immune responses in order to survive and flourish. Tumors take advantage of a number of different mechanisms of immune &#8220;escape,&#8221; including the recruitment of tolerogenic DC, immunosuppressive regulatory T cells (Tregs), and myeloid-derived suppressor cells (MDSC) that inhibit cytotoxic anti-tumor responses. Conversely, anti-tumor effector immune cells can slow the growth and expansion of malignancies: immunostimulatory dendritic cells, natural killer cells which harbor innate anti-tumor immunity, and cytotoxic T cells all can participate in tumor suppression. The balance between pro- and anti-tumor leukocytes ultimately determines the behavior and fate of transformed cells; a multitude of human clinical studies have borne this out. Thus, detailed analysis of leukocyte subsets within the tumor microenvironment has become increasingly important. Here, we describe a method for analyzing infiltrating leukocyte subsets present in the tumor microenvironment in a mouse tumor model. Mouse B16 melanoma tumor cells were inoculated subcutaneously in C57BL/6 mice. At a specified time, tumors and surrounding skin were resected en bloc and processed into single cell suspensions, which were then stained for multi-color flow cytometry. Using a variety of leukocyte subset markers, we were able to compare the relative percentages of infiltrating leukocyte subsets between control and chemerin-expressing tumors. Investigators may use such a tool to study the immune presence in the tumor microenvironment and when combined with traditional caliper size measurements of tumor growth, will potentially allow them to elucidate the impact of changes in immune composition on tumor growth. Such a technique can be applied to any tumor model in which the tumor and its microenvironment can be resected and processed.

This protocol describes a method for the detailed evaluation of leukocyte subsets within the tumor microenvironment in a mouse tumor model. Chemerin-expressing B16 melanoma cells were implanted subcutaneously into syngeneic mice. Cells from the tumor microenvironment were then stained and analyzed by flow cytometry, allowing for detailed leukocyte subset analyses.

Bir deri altı tümör modelinde tümör-süzücü lökosit subsetleri Değerlendirilmesi

Specialized immune cells that infiltrate the tumor microenvironment regulate the growth and survival of neoplasia.&#160; Malignant cells must elude or ...

Balloon-based Injury to Induce Myointimal Hyperplasia in the Mouse Abdominal Aorta

The use of animal models is essential for a better understanding of MH, one major cause for arterial stenosis.In this article, we demonstrate a murine balloon denudation model, which is comparable with established vessel injury models in large animals. The aorta denudation model with balloon catheters mimics the clinical setting and leads to comparable pathobiological and physiological changes. Briefly, after performing a horizontal incision in the aorta abdominalis, a balloon catheter will be inserted into the vessel, inflated, and introduced retrogradely. Inflation of the balloon will lead to intima injury and overdistension of the vessel. After removing the catheter, the aortic incision will be closed with single stiches. The model shown in this article is reproducible, easy to perform, and can be established quickly and reliably. It is especially suitable for evaluating expensive experimental therapeutic agents, which can be applied in an economical fashion. By using different knockout-mouse strains, the impact of different genes on MH development can be assessed.

This article demonstrates a murine model to study the development of myointimal hyperplasia (MH) after aortic balloon injury.

Fare Abdominal aort Myointimal Hiperplazi ikna etmek için balon tabanlı yaralanma

The use of animal models is essential for a better understanding of MH, one major cause for arterial stenosis.In this article, we demonstrate a murine ...

Surgical Treatment for Benign Prostatic Hyperplasia: Holmium Laser Enucleation of the Prostate (HoLEP).

Benign prostatic hyperplasia (BPH) commonly occurs among elderly males. The condition causes symptoms in the lower urinary tract, thereby reducing the quality of life. BPH includes 2 major treatments: medication and surgery. Surgical treatment is often the most effective and final intervention. Holmium laser enucleation of the prostate (HoLEP), one of the most efficient surgical procedures for BPH, is conducted transurethrally. During surgery, the most important and most difficult part is to locate the surgical capsule of the prostate, which is consistent to the idea of anatomic surgery. Different skills may be needed in treating different parts of the prostate. HoLEP tends to be efficient and safe with good hemostatic properties, and able to treat bladder calculus, which may be the complications of BPH. The technique is particularly suitable for prostate of varying volumes and sizes. Indeed, HoLEP also presents certain disadvantages, such as a long learning curve and costly equipment. Regardless, this method may be the "new standard" and the excellent method for the surgical treatment of BPH.

Surgical Treatment for Benign Prostatic Hyperplasia: Holmium Laser Enucleation of the Prostate HoLEP.

Here we present a safe and efficient protocol, holmium laser enucleation of the prostate, to treat benign prostatic hyperplasia.

Benign Prostatik Hiperplazi için cerrahi tedavi: holmiyum lazer enükleasyon prostat (HoLEP).

Benign prostatic hyperplasia (BPH) commonly occurs among elderly males. The condition causes symptoms in the lower urinary tract, thereby reducing the ...

Enucleation of the Prostate for the Treatment of Benign Prostatic Hyperplasia Using a 980 nm Diode Laser

In the aging male population, the occurrence of lower urinary tract symptoms (LUTS) caused by benign prostatic hyperplasia (BPH) is a common problem. Here, we introduce a new technique called 980 nm diode laser enucleation (DiLEP) to treat BPH1. Diode lasers can absorb both water and hemoglobin at the same time, so they are good for cutting and hemostasis2. The diode laser was approved by the FDA in 2007, and has been used in the treatment of BPH because of its effective cutting and hemostasis effect3. DiLEP presents several advantages over other techniques, such as TURP, HoLEP, and PVP. During the procedure, we define the boundary of a high-volume prostate and separate it into three lobes with a diode laser by burning two rings and one groove (like a Cupid&#39;s arrow). Compared to other procedures, mDiLEP has fewer intraoperative complications, a shorter learning curve, and achieves more tissue resection.

Here, we present a protocol for modified 980 nm diode laser enucleation to treat large volume benign prostatic hyperplasia.

980 nm Diyot Lazer Kullanılarak İyi Huylu Prostat Hiperplazisinin Tedavisi için Prostatın Enükleasyonu

In the aging male population, the occurrence of lower urinary tract symptoms (LUTS) caused by benign prostatic hyperplasia (BPH) is a common problem. ...

Direct Drug Delivery to Kidney via the Renal Artery

There is a need for directed injections to enable increased and specific renal exposure for efficient evaluation of drug targets in the renal research field. Accumulation of drugs in certain organs may give rise to adverse and unwanted effects, depending on the nature of injectate. To minimize spillover and/or accumulation in other tissues, the herein described method directs the formulation into the renal artery bloodstream by inserting a catheter in the infra renal aorta, just below where it branches into the renal artery, resulting in the kidney as first reached organ and distributing of formulation throughout the kidney.
This manuscript provides a detailed description of the method, as well as its challenges and difficulties. It guides the experimenter to become skillful with this type of microsurgery that requires accuracy under sterile conditions. Speed is crucial for minimizing the ischemia and practicing the procedure will increase the chance of successful injections without adverse effects. By modulating the time between injection and reperfusion as well as the injected volume, the risk of spillover to other organs is mitigated. 
Note that this technique is suitable for single dosing strategies.

This manuscript describes a method for targeted delivery to a single kidney via a catheter placed in the infrarenal abdominal aorta in the mouse.

Böbrek Atardamarı Ile Böbreğe Doğrudan İlaç Verilmesi

There is a need for directed injections to enable increased and specific renal exposure for efficient evaluation of drug targets in the renal research ...

Repetitive Blood Sampling from the Subclavian Vein of Conscious Rat

Rats are widely used in pharmacokinetics (PK) and toxicokinetic (TK) studies that need to collect a certain amount of blood at specific time points to detect drug exposure. The rat blood sampling method determines the quality of the plasma and further affects the precision of the test results. The subclavian vein blood collection method described in this protocol collects blood samples repeatedly in the conscious state of animals to meet the needs of PK and TK tests. The skills of restraint handling and appropriate procedure of needle incision ensure the success rate of blood collection. It is easy to operate while ensuring the quality of plasma and at the same time catering to animal welfare. However, this method requires skilled operation, and an improper one may cause animal weakness, pain, lameness, and even mortality. The current method has been used in the testing facility for a 4-week oral toxicity study in Sprague Dawley (SD) rats with TK. The maximum amount of blood collected within 24 h did not exceed 20% of the animal's total blood. The animals' body weight was more than 200 g for males and females. The data showed that the animals' bodyweight increased steadily every week, and the clinical observation was normal after repetitive sample collection.

The present protocol describes a simple and efficient method for collecting blood from the subclavian vein in rats. It enables rapid, timely, and easily identifiable sampling without anesthesia and obtains high-quality blood through repetitive sample collection.

Bilinçli Sıçan Subklaviyen Veninden Tekrarlayan Kan Örneklemesi

Rats are widely used in pharmacokinetics (PK) and toxicokinetic (TK) studies that need to collect a certain amount of blood at specific time points to ...

A Retrograde Implantation Approach for Peritoneal Dialysis Catheter Placement in Mice

Murine models are employed to probe various aspects of peritoneal dialysis (PD), such as peritoneal inflammation and fibrosis. These events drive peritoneal membrane failure in humans, which remains an area of intense investigation due to its profound clinical implications in managing patients with end-stage kidney disease (ESKD). Despite the clinical importance of PD and its related complications, current experimental murine models suffer from key technical challenges that compromise the models&#39; performance. These include PD catheter migration and kinking and usually warrant earlier catheter removal. These limitations also drive the need for a greater number of animals to complete a study. Addressing these drawbacks, this study introduces technical improvements and surgical nuances to prevent commonly observed PD catheter complications in a murine model. Moreover, this modified model is validated by inducing peritoneal inflammation and fibrosis using lipopolysaccharide injections. In essence, this paper describes an improved method to create an experimental model of PD.

This article describes modifications of a procedure to implant a peritoneal dialysis catheter in a murine model to avoid major technical issues observed with the conventional techniques.