We thank Dr. Roger Erickson for his support and assistance with the preparation of the manuscript. This work was supported by the National Cancer Institute at the National Institutes of Health through grant numbers RO1CA160079, RO1CA138642, UO1CA184966 and VA funded program project number 1P1 BX001604.

hayvanları ile ilgili tüm prosedürler için protokoller gözden geçirilmiş ve bir Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmış olması gerekir. bakım ve laboratuar hayvanlarının kullanımı için resmen onaylanmış prosedürleri izleyin. Intra-prostatik enjeksiyon açık karın cerrahisi gerektiren ve hayvanların uygun cerrahi aseptik teknikler bütün prosedür sırasında kullanılan belirli bir ameliyathane ile bir patojen içermeyen ortamda muhafaza edilmelidir. İmplantasyon için Hücrelerin hazırlanması 1. NOT: Araştırma ihtiyacı dayanarak, herhangi bir prostat kanseri hücre hattı kullanılabilir. Hücre çizgileri kullanılarak üreticinin talimatlarına göre kültürlenir. <ol><li> kararlı biçimde ateşböceği lusiferaz genini ifade PC3M-Luc-C6 hücre hattı için, en az temel ortam (MEM) kültür hücreleri,% 10 cenin sığır serumu (FBS), 1 x esansiyel olmayan amino asitler ile takviye edilmiş, 1 x fleomisin, D1 ve 1 mM sodyum piruvat . bir kuluçka w hücreleri korumaki, 37 ° C de% 95 hava ve% 5 CO2 bulunan nemli bir atmosferde. PC3M-Luc-C6 hücreleri UCSF çekirdek tesisinden temin edilmiştir. </li><li> tripsinizasyon ile Hasat hücreleri. Fosfat tamponlu salin (PBS) ile bir kez kültür plakaları yıkayın. Hücreler müstakil yılına kadar 37 ° C&#39;de% 95 hava ve% 5 CO2 bulunan nemli bir atmosfere sahip bir kuluçka makinesi içinde, 10 cm tabak 2 mi% 0.05 tripsin ilave edin ve 3-5 dakika inkübe edilir. <ol><li> topaklanma önlemek için, vurma veya hücrelerin ayırmak için beklerken çanak sallayarak hücreleri ajitasyon yok. tam ortam 5 ml hücreleri toplamak ve 200 x g&#39;de 5 dakika boyunca aşağı doğru döndürün. Tripsin kaldırmak için PBS ile hücre pelet yıkayın. </li></ol></li><li> tripan mavisi dışlama deneyi ile canlı hücreleri numaralandırmak. % 0.4, 10 ul (ağ / hac), tripan mavisi solüsyonu ile PBS içinde hücre süspansiyonu 10 ul karıştırın. Bir hemositometre veya sayma kamara slayt içine karışımı yerleştirin ve mikroskop altında hemen hücreleri saymak ya da bir hücre cou odası slayt okumaknter. <ol><li> 10 ul medya 2.5 x 10 5 hücre ihtiva eden bir hücre süspansiyonu hazırlanır. 10 ul bazal membran benzeri hücre dışı matris ekstresi ile bir hücre süspansiyonu karıştırılır ve buz üzerinde hücreleri yerleştirin. Hücre süspansiyonuna luciferase ekleyin (1: 200 ul; hazır 30 mg / ml konsantrasyon) farelere enjekte edilmeden önce. NOT: Bu farklı deneysel gruplar arasında hücre enjeksiyonları tutarlılığını kontrol etmek için hayvanların hemen biyo-görüntüleme sağlar. hücre canlılığı ayrıldıktan sonra hızla azalır çünkü trypsinization sonra tercihen 30 dakika içinde, mümkün olduğunca çabuk hücreleri enjekte edilir. </li></ol></li></ol> Cerrahi Alan 2. Hazırlık <ol><li> asepsi teşvik derli toplu bir dezenfekte alanda ameliyat. </li><li> Ameliyat öncesi çamaşır suyu karışımı ile sayaç / laboratuvar tezgah dezenfekte edin. NOT: alkol kullanımı nedeniyle etkisini (15 dk) almak için gerekli uzun temas süresi cesareti olduğunu. </li><li> Steril örtüler kullanınemilebilir pedler ya da havlu temizleyin ve her seansta sonra bu malzemeleri değiştirin. Kullanmadan önce tüm aletleri sterilize. Tercih edilen yöntemler, bir hareketli buharlı otoklav içinde, bir cam boncuk sterilizatör etilen oksit gazı ya da hidrojen peroksit buharı sterilizasyon vardır. </li><li> cerrahi prosedürü gerçekleştirmek için bir aseptik temizlenmiş diseksiyon mikroskobu kullanın ya da deneyimli araştırmacılar mikroskop olmadan gerçekleştirebilirsiniz. </li></ol> Tümör Hücreleri 3. implantasyonu <ol><li> erkek 6-8 haftalık bağışıklığı baskılanmış Balb / c veya NOD / SCID fareleri kullanın. Not: Bu, tümör büyümesi ve metastaz yavaş kinetik sahip olma eğilimindedir küçük hayvanlar ve daha büyük hayvanlar üzerinde çalıştırmak için daha zordur. </li><li> Hayvan Tesisin talimatlarına göre ön ameliyat ağrısı ilaç enjekte edilir. Örneğin, 0.1 mg / kg vücut ağırlığı bir dozda intra-peritonal buprenorfin kullanılabilir. </li><li> oksijen ve wa% 1-3 izofluran ile bir izofluran odasına yerleştirerek hayvanların anestezisibu hayvanların tam olarak anestezi kadar. Bu noktada kas tonusu hiçbir ayak refleks olmadığından emin olun. genel anestezi sırasında kseroftalmiden nedeniyle körlüğü önlemek için uygun veteriner oftalmik merhem yağ kullanın. Not: pentobarbital sodyum için araştırmacının tercih edilen bir yöntem, örneğin tarafından hayvanların anestezisi gram vücut ağırlığı başına, 0.05 mg intra-peritonal ya Ketamin / Ksilazin çözeltisi tatbik edilir (konsantrasyon: 17.16 mg / ml) 65 mg / kg dozda vücut ağırlığı subkutan kullanılır. Izofluran inhalasyonu anestezisi tercih edilen bir yöntemdir. göz merhemi hafifçe kornea sürtünmemelidir uygulanmalıdır. </li><li> izofluran bölme hayvan çıkarın ve hayvan devam etmeden önce, tam anestezi altında olmasını sağlamak için oksijen,% 1-2 izofluran sürekli akışı ile bir burun konisi cihazının içine koyun. <ol><li> Tıraş tarafından farelerden alınan saç çıkarın veya prosedürü başlamadan önce saç kremleri kullanın. NOT: Ameliyat sırasında steril bir ısıtma yastığı üzerinde fare yerleştirmek için tercih olacaktır. </li></ol></li><li> Bir yatar pozisyonda fare yerleştirin. povidon-iyot çözeltisi,% 70 etanol bezlerden, ardından 10 ağırlık / ağırlık ile% alt karın temizleyin. </li><li> ince forseps bir çift, 2 mm prepusyal bezi üzerinde penis kılıf üzerinde yaklaşık 1-2 cm ve göğüs kafesinin alt bölümünün yaklaşık 2-3 cm deri bir alanı kaldırın. </li><li> Ilk olarak bir bisturi ile deri yoluyla ve daha sonra bir makas (Şekil 1), kas tabakası içinden uzunluğunda bir orta hat kesimi 1cm sağlayın. </li><li> vücut boşluğunda mesane bulun. Bu kesi (Şekil 1) altında doğrudan yer alan sarı-açık kahverengi küresel bir organdır. </li><li> ince forseps kavrama bir çift mesane ve penis kılıf doğru vücut boşluğundan dışarı aşağı sonra yukarı kaldırın. Bu beyaz saclike organların çift ve açıkça farklı olan iki seminal veziküller gösterecektir. </li><li> Birliktepamuklu çubukla her el, seminal veziküller, teker teker dışa ve vücut boşluğuna çekip çıkarın ve onları ortada mesane (Şekil 2) ile karın dış yüzeye yüzüstü yatıyordu. </li><li> İki dorsal prostat lobları açıkça görülebilir şekilde pamuklu çubuklarla kullanarak, yavaşça, penis kılıf doğru mesane boynunun yakın yerleştirilmesi noktasında seminal veziküller geri yatırın. Doku hasarı (Şekil 3) önlemek için ıslak pamuk bezlerden kullanın. </li><li> şırıngada yüklemeden önce bir mikropipet ile hücre süspansiyonu çalkalayın. </li><li> Bir pamuklu çubukla pozisyonda seminal vezikül yerleştirirken, mikroskop altında dorsal prostat lob (Şekil 4) içine şırınga iğne takın. Bir bül oluşumu tespit edilene kadar yavaş yavaş hücre süspansiyonu 20 ul enjekte edilir. Bir dışarı vurma bül enjeksiyonu doğru olduğunu gösterir. </li><li> ile enjeksiyon yerinde hafifçe iğne basın retracting ikenBirkaç saniye için bir pamuklu çubukla ve tutma sızıntısını önlemek için. </li><li> Dikkatle pamuklu seminal veziküller kaldırın ve mesane ardından tek geri vücut boşluğunda birine bunları takın. Bu yordamı gerçekleştirirken &#39;twirling&#39; iç organları kaçının. </li><li> vücut boşluğuna geri organları yerleştirdikten sonra, emilmeyen 4-0 naylon cerrahi sütür ile cilt kapatılması ardından emilebilir 4-0 kromik katgüt sütür ile kesintiye uğramış bir desen ilk kas tabakası dikin. deri de tamamen insizyon kapatmak için bir araya çekti ve cerrahi kelepçeler ile kapatılabilir. NOT: Fareler de dikişler ile birlikte tavsiye edilir çizilme ve dolayısıyla yara açılması yeniden doku yapıştırıcısı kullanımı yol açabilir onların yara, ısırma bir alışkanlığı var. Görüntü hayvanlar derhal deney grupları arasındaki eşit biyolüminesans yoğunluk var olduğundan emin olmak için. </li><li> kafesleri temizlemek ve ısınma lambası veya ısı altında tutmak için hayvanların dönmekped ing. tamamen anestezi kurtarmak ve sternum yatma korumak kadar sürekli hayvanları izleyin. </li></ol> Hayvanların 4. İzleme <ol><li> kurumsal protokollere göre, deney sonuna kadar düzenli olarak hayvanların izleyin. Cerrahi metal klips kullanıyorsanız, bir iki hafta sonra kaldırın. Deney süresi belirli bir araştırma ihtiyacı bağlıdır. NOT: Bu deney, sıçan prostatı implante kanser hücrelerinin başarılı bir kuruluş incelemek için 21 gün boyunca uygulanmıştır. </li><li> Hayvan Tesisin talimatlarına göre ağrı ilaç yönetmek. Gerektiğinde, örneğin 0.1 mg / kg vücut ağırlığı bir dozda intra-peritonal buprenorfin 6 saat ve daha fazla doz uygulandıktan sonra ikinci bir doz işlem sırasında her 8-12 saat kullanılır. </li><li> Hayvan ağırlığı, gıda tüketimi, ten rengi ve dokusu, aktivite ve idrar ve dışkılama sıklığı izleyin. hayvanların immed euthanizegeçirmeden% 15 daha büyük bir vücut ağırlığı önemli bir kayıp olup olmadığını. <ol><li> Ötenazi için, bilinç kaybı ve tam uyuşurucu meydana böylece CO2 yavaş yavaş odasına girmek için izin, oda ya da kafes hacmi / dakika 10-30% değiştirmesi için bir akış hızında bir un-kalabalık kafesin içine basınçlı bir tanktan CO 2 teslim ölümünden önce. </li><li> Solunum durması sonrasında, en az bir dakika süre ile CO2 akış korumak ve ölüm fiziksel yöntemin gerçekleştirilmesi öncesinde gerçekleştirilen, böylece yeterli bir süre için bölmeye hayvanlar bırakın. </li><li> Gerçekleştirin decapitation, servikal dislokasyon veya başka herhangi bir IACUC kimyasal hayvanları euthanizing sonra fiziksel yöntemi onayladı. NOT: Önemli ölçüde azaltılmış vücut ağırlığı genellikle uyuşuk durumunu gösterir. Tümör taşıyan hayvanlar, deneyin sonuna kadar, tümör varlığı dışında sağlıklı olmalıdır. Ötenazi Ötanazi AVMA Yönergeleri ile uyumlu olmalıdır ve liste olmalıonaylanmış IACUC protokolü, d. </li></ol></li></ol> Hayvanların 5. Non-invaziv Biyo-görüntüleme <ol><li> haftalık, kanser hücrelerinin, tümör büyümesi ve herhangi bir uzak metastaz kolonizasyonunu izlemek için non-invaziv bir görüntüleme tekniği kullanılarak hayvanları izleyin. NOT: vb GFP-görüntüleme, Lusiferaz görüntüleme, X-ışınları veya 3D mikro-bilgisayarlı tomografi (UCT) gibi görüntüleme yöntemleri spesifik araştırma dayalı kullanılabilir 12-15 gerekir. </li></ol>

<ol>
	<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics,+2015.">Cancer statistics, 2015.</a> CA Cancer J Clin. 65 (1), 5-29 (2015).</li><li>Andrieu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heat+shock+protein+27+confers+resistance+to+androgen+ablation+and+chemotherapy+in+prostate+cancer+cells+through+eIF4E.">Heat shock protein 27 confers resistance to androgen ablation and chemotherapy in prostate cancer cells through eIF4E.</a> Oncogene. 29 (13), 1883-1896 (2010).</li><li>Fusi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+options+in+hormone-refractory+metastatic+prostate+carcinoma.">Treatment options in hormone-refractory metastatic prostate carcinoma.</a> Tumori. 90 (6), 535-546 (2004).</li><li>Hughes, C., Murphy, A., Martin, C., Sheils, O., O'Leary, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+pathology+of+prostate+cancer.">Molecular pathology of prostate cancer.</a> J Clin Pathol. 58 (7), 673-684 (2005).</li><li>Pavese, J., Ogden, I. M., Bergan, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+murine+model+of+human+prostate+cancer+metastasis.">An orthotopic murine model of human prostate cancer metastasis.</a> J Vis Exp. (79), e50873 (2013).</li><li>Pettaway, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selection+of+highly+metastatic+variants+of+different+human+prostatic+carcinomas+using+orthotopic+implantation+in+nude+mice.">Selection of highly metastatic variants of different human prostatic carcinomas using orthotopic implantation in nude mice.</a> Clin Cancer Res. 2 (9), 1627-1636 (1996).</li><li>Rembrink, K., Romijn, J. C., van der Kwast, T. H., Rubben, H., Schroder, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+implantation+of+human+prostate+cancer+cell+lines:+a+clinically+relevant+animal+model+for+metastatic+prostate+cancer.">Orthotopic implantation of human prostate cancer cell lines: a clinically relevant animal model for metastatic prostate cancer.</a> Prostate. 31 (3), 168-174 (1997).</li><li>Kim, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blockade+of+epidermal+growth+factor+receptor+signaling+in+tumor+cells+and+tumor-associated+endothelial+cells+for+therapy+of+androgen-independent+human+prostate+cancer+growing+in+the+bone+of+nude+mice.">Blockade of epidermal growth factor receptor signaling in tumor cells and tumor-associated endothelial cells for therapy of androgen-independent human prostate cancer growing in the bone of nude mice.</a> Clin Cancer Res. 9 (3), 1200-1210 (2003).</li><li>Kim, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+platelet-derived+growth+factor+receptor+on+endothelial+cells+of+multidrug-resistant+prostate+cancer.">Targeting platelet-derived growth factor receptor on endothelial cells of multidrug-resistant prostate cancer.</a> J Natl Cancer Inst. 98 (11), 783-793 (2006).</li><li>Park, S. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+SRC+family+kinases+inhibits+growth+and+lymph+node+metastases+of+prostate+cancer+in+an+orthotopic+nude+mouse+model.">Targeting SRC family kinases inhibits growth and lymph node metastases of prostate cancer in an orthotopic nude mouse model.</a> Cancer Res. 68 (9), 3323-3333 (2008).</li><li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AFAP-110+is+overexpressed+in+prostate+cancer+and+contributes+to+tumorigenic+growth+by+regulating+focal+contacts.">AFAP-110 is overexpressed in prostate cancer and contributes to tumorigenic growth by regulating focal contacts.</a> J Clin Invest. 117 (10), 2962-2973 (2007).</li><li>Park, S. I., Kim, S. J., McCauley, L. K., Gallick, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-clinical+mouse+models+of+human+prostate+cancer+and+their+utility+in+drug+discovery.">Pre-clinical mouse models of human prostate cancer and their utility in drug discovery.</a> Curr Protoc Pharmacol. Chapter 14, Unit 14.15 (2010).</li><li>Johnson, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longitudinal+live+animal+micro-CT+allows+for+quantitative+analysis+of+tumor-induced+bone+destruction.">Longitudinal live animal micro-CT allows for quantitative analysis of tumor-induced bone destruction.</a> Bone. 48 (1), 141-151 (2011).</li><li>Steinbauer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GFP-transfected+tumor+cells+are+useful+in+examining+early+metastasis+in+vivo,+but+immune+reaction+precludes+long-term+tumor+development+studies+in+immunocompetent+mice.">GFP-transfected tumor cells are useful in examining early metastasis in vivo, but immune reaction precludes long-term tumor development studies in immunocompetent mice.</a> Clin Exp Metastasis. 20 (2), 135-141 (2003).</li><li>Yang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+fluorescent+orthotopic+bone+metastasis+model+of+human+prostate+cancer.">A fluorescent orthotopic bone metastasis model of human prostate cancer.</a> Cancer Res. 59 (4), 781-786 (1999).</li><li>Stephenson, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metastatic+model+for+human+prostate+cancer+using+orthotopic+implantation+in+nude+mice.">Metastatic model for human prostate cancer using orthotopic implantation in nude mice.</a> J Natl Cancer Inst. 84 (12), 951-957 (1992).</li><li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+metastatic+mouse+models+for+anticancer+drug+discovery+and+evaluation:+a+bridge+to+the+clinic.">Orthotopic metastatic mouse models for anticancer drug discovery and evaluation: a bridge to the clinic.</a> Invest New Drugs. 17 (4), 343-359 (1999).</li><li>Wang, X., An, Z., Geller, J., Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-malignancy+orthotopic+nude+mouse+model+of+human+prostate+cancer+LNCaP.">High-malignancy orthotopic nude mouse model of human prostate cancer LNCaP.</a> Prostate. 39 (3), 182-186 (1999).</li><li>An, Z., Wang, X., Geller, J., Moossa, A. R., Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+orthotopic+implantation+allows+high+lung+and+lymph+node+metastatic+expression+of+human+prostate+carcinoma+cell+line+PC-3+in+nude+mice.">Surgical orthotopic implantation allows high lung and lymph node metastatic expression of human prostate carcinoma cell line PC-3 in nude mice.</a> Prostate. 34 (3), 169-174 (1998).</li><li>Kim, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+c-Met+expression+by+an+adenovirus+expressing+a+c-Met+ribozyme+inhibits+tumorigenic+growth+and+lymph+node+metastases+of+PC3-LN4+prostate+tumor+cells+in+an+orthotopic+nude+mouse+model.">Reduced c-Met expression by an adenovirus expressing a c-Met ribozyme inhibits tumorigenic growth and lymph node metastases of PC3-LN4 prostate tumor cells in an orthotopic nude mouse model.</a> Clin Cancer Res. 9 (14), 5161-5170 (2003).</li></ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarları olduğunu beyan ederim.

Bu el yazması bir insan ortotopik prostat kanseri ksenograft fare modeli oluşturmak için ayrıntılı bir yordam açıklanır. Bu model, bağışıklık yetersizliği olan farelerde dorsal prostat loblar, insan prostat kanseri hücre kuşağı PC3M-Luc-C6 doğrudan implantasyonu ile kurulmuştur. Tümörler deney boyunca gelişmeye bırakılmıştır. Tümör büyüme deney sırasında bir non-invaziv biyoparlaklık görüntüleme sistemi ile haftalık izlendi. Ksenograft tümör modeller...

Prostat kanseri sonraki akciğer ve bronşların (% 28) 1 kanseri, ABD&#39;de erkekler arasında kanser ölümlerinin (% 9) ikinci en yaygın nedenidir. Son verilere göre, 220, 800 yeni teşhis prostat kanseri vakası ve 27 540 ölüm 2015 1 oluşacak tahmin edilmektedir. Ilerlemiş metastatik hastalık olduğunu iken, erken evre prostat kanseri beş yıllık sağkalım oranı göreceli&gt;% 99 sadece% 28 1. metastatik hastalığın tedavisi için önemli bir zorluk, özellikle prostat kanseri için sık ortaya çıktığı yerdir kemik için, diğer organlara metastaz için, bu hastalığın eğilimini altında yatan moleküler mekanizmaların anlaşılması eksikliğidir. Bu nedenle, gelişmiş metastatik hastalık 2,3 ilerleme karşı etkili tedavi rejimleri geliştirmek için bu prostat tümörlerinin moleküler makyaj incelemek için açık bir ihtiyaç vardır. Prostat sergi HIG tümörleriilerlemesi için iyi tanımlanmış bir yolun olmadan h biyolojik heterojenlik. Metastaz sıklıkla tümör invazivlik 4 önceden hiçbir göstergesi ile meydana gelir. Bu klinik heterojenite prostat kanserinin moleküler çeşitlilik atfedilir. Bu ölümcül tümörlerin moleküler makyaj anlamak bu hastalık için daha iyi teşhis ve tedavi stratejilerinin tasarımı anahtarıdır. Sonuç olarak, prostat kanseri araştırması şu anda anlaşılması ve metastaz engelleyen odaklanmıştır. Preklinik in vivo fare modelleri ilerlemiş metastatik hastalık prostat kanseri ilerlemesinde moleküler mekanizmalarını anlamak için çeşitli seçenekler sunuyoruz. Buna ek olarak, bu modeller, bu hastalığa karşı yeni tedavi stratejileri klinik öncesi değerlendirmeleri için önemlidir. En yaygın olarak kullanılan hayvan modelleri, transjenik fare modelleri, kuyruk damarından, intra-kalp implantasyonu ve insan ortotopik fare modelleri bulunmaktadır. Transgenik çalışmalar zaman consumi vardırng ve insanların bu farelerde prostat kanseri gelişme korelasyon değişkenliğini 11 göstermiştir. Spontan metastatik fare modellerinde, hücreler dolaşıma doğrudan enjekte edilir ve onlar hızlı gerçekleştirme süresi olsa, bunlar primer tümör veya metastatik kaskad 5 ilk adımlarını incelemek için kullanılamaz. Ortotopik ksenograft modelleri kemik metastatik lezyonlar, prostat kanseri metastaz ortak sitesi geliştirme sınırlama var. Bununla birlikte, insan ortotopik prostat kanseri ksenograft fare modeli iyi karakterize ve yaygın primer tümör gelişimi, tümör ve organ mikroçevresinin, terapötik müdahale 6 metastatik hastalık ve deneysel ilaçların kullanımı başlangıç ​​aşamasında arasındaki çapraz konuşma moleküler olayları incelemek için kullanılır , 7,8-11.

<table><tbody><tr><td>PC3 prostate cancer cell line&amp;nbsp;</td><td>ATCC</td><td>CRL-1435</td><td></td></tr><tr><td>Minimum Essential Medium (MEM)&amp;nbsp;</td><td>GIBCO,Life Technology</td><td>11095-080</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>GIBCO,Life Technology</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>GIBCO,Life Technology</td><td>10437-028</td><td></td></tr><tr><td>Zeocin</td><td>Invitrogen,Life Technology</td><td>R250-01</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin&amp;nbsp;</td><td>GIBCO,Life Technology</td><td>25300-54</td><td></td></tr><tr><td>IVIS&amp;nbsp;</td><td>Xenogen-Caliper</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Insulin Syringes (300 &amp;micro;l, 28.5 g)</td><td>Becton Dickinson</td><td>309300</td><td></td></tr><tr><td>Mice</td><td>Charles River Laboratories, Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alcohol Swabs</td><td>MEDEquip Depot</td><td>326895 BD</td><td></td></tr><tr><td>PVP Iodine Prep Pad</td><td>MEDEquip Depot</td><td>C12400PDI</td><td></td></tr><tr><td>Surgical CatGut Chromic Suture</td><td>Demetech</td><td>CC224017F0P</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>354248</td><td></td></tr></tbody></table>

pre-clinical orthotopic murine model of human prostate cancer

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information about this disease. The human orthotopic prostate cancer xenograft mouse model provides a useful alternative approach for understanding the specific interactions between genetically and molecularly altered tumor cells, their organ microenvironment, and for evaluation of efficacy of therapeutic regimens. This is a well characterized model designed to study the molecular events of primary tumor development and it recapitulates the early events in the metastatic cascade prior to embolism and entry of tumor cells into the circulation. Thus it allows elucidation of molecular mechanisms underlying the initial phase of metastatic disease. In addition, this model can annotate drug targets of clinical relevance and is a valuable tool to study prostate cancer progression. In this manuscript we describe a detailed procedure to establish a human orthotopic prostate cancer xenograft mouse model.

Prostatik lobuna PC3M-Luc-C6 hücrelerinin ortotopik implantasyonu takiben fareler haftada deney sırasında (- B Şekil 5A) üzerinden hücrelerin kolonizasyonunun ve tümör büyümesini izlemek için canlı bir hayvan biyolüminesans görüntüleme sistemi kullanılarak görüntülendi. bioluminescent sinyal Niceleme PC3M-Luc-C6 hücreleri başarıyla prostat lobları kolonize olduğunu göstermiştir. Artan biyolüminesans deneyi (Şekil 5B)<...

Watch this Scientific Journal Video about Pre-clinical Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer at JoVE.com

Pre-clinical Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer

Prostate cancer is the second most common cause of cancer-related deaths in the United States. An orthotopic cancer model provides a useful approach to understand the biology of prostate cancer and to evaluate the efficacy of therapeutic regimens. This protocol describes detailed steps necessary to establish an orthotopic prostate cancer mouse model.

İnsan Prostat Kanseri klinik öncesi Ortotopik murin modeli

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information ...

pre-clinical-orthotopic-murine-model-of-human-prostate-cancer

Research

JoVE Journal

Medicine

14.2K Görüntüleme.  VA Medical Center and UCSF. Prostate cancer is the second most common cause of cancer-related deaths in the United States. An orthotopic cancer model provides a useful approach to understand the biology of prostate cancer and to evaluate the efficacy of therapeutic regimens. This protocol describes detailed steps necessary to establish an orthotopic prostate cancer mouse model.

Video: Pre-clinical Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer

A Murine Orthotopic Bladder Tumor Model and Tumor Detection System

This protocol describes the generation of bladder tumors in female C57BL/6J mice using the murine bladder cancer cell line MB49, which has been modified to secrete human Prostate Specific Antigen (PSA), and the procedure for the confirmation of tumor implantation. In brief, mice are anesthetized using injectable drugs and are made to lay in the dorsal position. Urine is vacated from the bladder and 50 &#181;L of poly-L-lysine (PLL) is slowly instilled at a rate of 10 &#181;L/20 s using a 24 G IV catheter. It is left in the bladder for 20 min by stoppering the catheter. The catheter is removed and PLL is vacated by gentle pressure on the bladder. This is followed by instillation of the murine bladder cancer cell line (1 x 105 cells/50 &#181;L) at a rate of 10 &#181;L/20 s. The catheter is stoppered to prevent premature evacuation. After 1 h, the mice are revived with a reversal drug, and the bladder is vacated. The slow instillation rate is important, as it reduces vesico-ureteral reflux, which can cause tumors to occur in the upper urinary tract and in the kidneys. The cell line should be well re-suspended to reduce clumping of cells, as this can lead to uneven tumor sizes after implantation.
This technique induces tumors with high efficiency. Tumor growth is monitored by urinary PSA secretion. PSA marker monitoring is more reliable than ultrasound or fluorescence imaging for the detection of the presence of tumors in the bladder. Tumors in mice generally reach a maximum size that negatively impacts health by about 3 - 4 weeks if left untreated. By monitoring tumor growth, it is possible to differentiate mice that were cured from those that were not successfully implanted with tumors. With only end-point analysis, the latter may be mistakenly assumed to have been cured by therapy.

This protocol describes the generation of murine orthotopic bladder tumors in female C57BL/6J mice and the monitoring of tumor growth.

Bir Fare Ortotopik Mesane Tümör Modeli ve Tümör Tespit Sistemi

This protocol describes the generation of bladder tumors in female C57BL/6J mice using the murine bladder cancer cell line MB49, which has been modified ...

Kanser Araştırmaları

A Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and transgenic genetically engineered mouse models. Unlike subcutaneous tumors, orthotopic tumors contain more clinically accurate vasculature, tumor microenvironment, and responses to multiple therapies. In contrast to genetically engineered mouse models, orthotopic models can be performed with lower cost and in less time, involve the use of highly complex and heterogeneous mouse or human cancer cell lines, rather that single genetic alterations, and these cell lines can be genetically modified, such as to express imaging agents. Here, we present a protocol to surgically injecting a luciferase- and mCherry-expressing murine prostate cancer cell line into the anterior prostate lobe of mice. These mice developed orthotopic tumors that were non-invasively monitored in vivo and further analyzed for tumor volume, weight, mouse survival, and immune infiltration. Further, orthotopic tumor-bearing mice were surgically castrated, leading to immediate tumor regression and subsequent recurrence, representing castration-resistant prostate cancer. Although technical skill is required to carry out this procedure, this syngeneic orthotopic model of both androgen-dependent and castration-resistant prostate cancer is of great use to all investigators in the field.

The goal of this protocol is to demonstrate the intra-prostatic injection of prostate cancer cells, with subsequent castration. Orthotopic pre-clinical models of androgen-dependent and castration-resistant prostate cancer are critical to study the disease in the context of a clinically relevant tumor microenvironment and an immunocompetent host.

Kollarındaki ve floresan Orthotopic Syngeneic fare modeli androjen bağlı ve kısırlaştırma dayanıklı prostat kanseri

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and ...

Virus Delivery of CRISPR Guides to the Murine Prostate for Gene Alteration

With an increasing incidence of prostate cancer, identification of new tumor drivers or modulators is crucial. Genetically engineered mouse models (GEMM) for prostate cancer are hampered by tumor heterogeneity and its complex microevolution dynamics. Traditional prostate cancer mouse models include, amongst others, germline and conditional knockouts, transgenic expression of oncogenes, and xenograft models. Generation of de novo mutations in these models is complex, time-consuming, and costly. In addition, most of traditional models target the majority of the prostate epithelium, whereas human prostate cancer is well known to evolve as an isolated event in only a small subset of cells. Valuable models need to simulate not only prostate cancer initiation, but also progression to advanced disease.
Here we describe a method to target a few cells in the prostate epithelium by transducing cells by viral particles. The delivery of an engineered virus to the murine prostate allows alteration of gene expression in the prostate epithelia. Virus type and quantity will hereby define the number of targeted cells for gene alteration by transducing a few cells for cancer initiation and many cells for gene therapy. Through surgery-based injection in the anterior lobe, distal from the urinary track, the tumor in this model can expand without impairing the urinary function of the animal. Furthermore, by targeting only a subset of prostate epithelial cells the technique enables clonal expansion of the tumor, and therefore mimics human tumor initiation, progression, as well as invasion through the basal membrane.
This novel technique provides a powerful prostate cancer model with improved physiological relevance. Animal suffering is limited, and since no additional breeding is required, overall animal count is reduced. At the same time, analysis of new candidate genes and pathways is accelerated, which in turn is more cost efficient.

This protocol describes a newly established method for virus delivery to the murine prostate. Using either CRISPR/Cas9 technology, gene overexpression, or Cre recombinase delivery, the technique allows orthotopic alteration of gene expression and implements a novel mouse model for prostate cancer.

Virüs gen değiştirme için fare prostat CRISPR kılavuzları teslimini

With an increasing incidence of prostate cancer, identification of new tumor drivers or modulators is crucial. Genetically engineered mouse models (GEMM) ...

Identification, Histological Characterization, and Dissection of Mouse Prostate Lobes for In Vitro 3D Spheroid Culture Models

Genetically engineered mouse models (GEMMs) serve as effective pre-clinical models for investigating most types of human cancers, including prostate cancer (PCa). Understanding the anatomy and histology of the mouse prostate is important for the efficient use and proper characterization of such animal models. The mouse prostate has four distinct pairs of lobes, each with their own characteristics. This article demonstrates the proper method of dissection and identification of mouse prostate lobes for disease analysis. Post-dissection, the prostate cells can be further cultured in vitro for mechanistic understanding. Since mouse prostate primary cells tend to lose their normal characteristics when cultured in vitro, we outline here a method for isolating the cells and growing them as 3D spheroid cultures, which is effective for preserving the physiological characteristics of the cells. These 3D cultures can be used for analyzing cell morphology and behavior in near-physiological conditions, investigating altered levels and localizations of key proteins and pathways involved in the development and progression of a disease, and looking at responses to drug treatments.

Genetically engineered mice are useful models for investigating prostate cancer mechanisms. Here we present a protocol to identify and dissect prostate lobes from a mouse urogenital system, differentiate them based on histology, and isolate and culture the primary prostate cells in vitro as spheroids for downstream analyses.

Kimlik, histolojik karakterizasyonu ve için fare Vitro 3D küresel kültür modelleri prostat lob diseksiyonu

Genetically engineered mouse models (GEMMs) serve as effective pre-clinical models for investigating most types of human cancers, including prostate ...

MR Molecular Imaging of Prostate Cancer with a Small Molecular CLT1 Peptide Targeted Contrast Agent

Tumor extracellular matrix has abundance of cancer related proteins that can be used as biomarkers for cancer molecular imaging. In this work, we demonstrated effective MR cancer molecular imaging with a small molecular peptide targeted Gd-DOTA monoamide complex as a targeted MRI contrast agent specific to clotted plasma proteins in tumor stroma. We performed the experiment of evaluating the effectiveness of the agent for non-invasive detection of prostate tumor with MRI in a mouse orthotopic PC-3 prostate cancer model. The targeted contrast agent was effective to produce significant tumor contrast enhancement at a low dose of 0.03 mmol Gd/kg. The peptide targeted MRI contrast agent is promising for MR molecular imaging of prostate tumor.

To demonstrate MR cancer molecular imaging with a small peptide targeted MRI contrast agent specific to clotted plasma proteins in tumor stroma in a mouse prostate cancer model.

Küçük Moleküler CLT1 Peptide Hedefli Kontrast Agent ile Prostat Kanseri MR Moleküler Görüntüleme

Tumor extracellular  matrix has abundance of cancer related proteins that can be used as biomarkers  for cancer molecular imaging. In this work,  we ...

Tıp

Renal Capsule Xenografting and Subcutaneous Pellet Implantation for the Evaluation of Prostate Carcinogenesis and Benign Prostatic Hyperplasia

New therapies for two common prostate diseases, prostate cancer (PrCa) and benign prostatic hyperplasia (BPH), depend critically on experiments evaluating their hormonal regulation. Sex steroid hormones (notably androgens and estrogens) are important in PrCa and BPH; we probe their respective roles in inducing prostate growth and carcinogenesis in mice with experiments using compressed hormone pellets. Hormone and/or drug pellets are easily manufactured with a pellet press, and surgically implanted into the subcutaneous tissue of the male mouse host. We also describe a protocol for the evaluation of hormonal carcinogenesis by combining subcutaneous hormone pellet implantation with xenografting of prostate cell recombinants under the renal capsule of immunocompromised mice. Moreover, subcutaneous hormone pellet implantation, in combination with renal capsule xenografting of BPH tissue, is useful to better understand hormonal regulation of benign prostate growth, and to test new therapies targeting sex steroid hormone pathways.

We describe the manufacture of compressed hormone pellets, as well as subcutaneous surgical implantation into mice. This strategy can be combined with the growth of cell and tissue xenografts under the renal capsule of athymic nude mice to evaluate hormonal carcinogenesis and regulation of benign prostate growth.

Prostat Karsinogenezde ve İyi Huylu Prostat Büyümesi ve Değerlendirilmesi için böbrek Kapsül Xenografting ve Derialtı Pelet İmplantasyonu

New therapies for two common prostate diseases,  prostate cancer (PrCa) and benign prostatic hyperplasia (BPH), depend  critically on experiments ...

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but rather the formation of distinct metastasis, the ability to effectively model this progression pre-clinically is of high value. In this model, cells are directly implanted into the ventral lobe of the prostate in Balb/c athymic mice, and allowed to progress for 4-6 weeks. At experiment termination, several distinct endpoints can be measured, such as size and molecular characterization of the primary tumor, the presence and quantification of circulating tumor cells in the blood and bone marrow, and formation of metastasis to the lung. In addition to a variety of endpoints, this model provides a picture of a cells ability to invade and escape the primary organ, enter and survive in the circulatory system, and implant and grow in a secondary site. This model has been used effectively to measure metastatic response to both changes in protein expression as well as to response to small molecule therapeutics, in a short turnaround time.

This orthotopic model of human prostate cancer allows for quantification of tumor size, circulating tumor cells, and formation of distinct metastasis to the lung. As cells must escape the primary organ, enter the blood stream, and implant into a secondary site, this model effectively recapitulates the scenario in humans.

İnsan Prostat Kanser metastaz Ortotopik fare modeli

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

Intra-Cardiac Injection of Human Prostate Cancer Cells to Create a Bone Metastasis Xenograft Mouse Model

As the most common male malignancy, prostate cancer (PC) ranks second in mortality, primarily due to a 65%-75% bone metastasis rate. Therefore, it is essential to understand the process and related mechanisms of prostate cancer bone metastasis for developing new therapeutics. For this, an animal model of bone metastasis is an essential tool. Here, we report detailed procedures to generate a bone metastasis mouse model via intra-cardiac injection of prostate cancer cells. A bioluminescence imaging system can determine whether prostate cancer cells have been accurately injected into the heart and monitor cancer cell metastasis since it has great advantages in monitoring metastatic lesion development. This model replicates the natural development of disseminated cancer cells to form micro-metastases in the bone and imitates the pathological process of prostate cancer bone metastasis. It provides an effective tool for further exploration of the molecular mechanisms and the in vivo therapeutic effects of this disease.

Here, we present a protocol for the intra-cardiac injection of human prostate cancer cells to generate a mouse model with bone metastasis lesions.

Kemik Metastazı Ksenograft Fare Modeli Oluşturmak için İnsan Prostat Kanseri Hücrelerinin İntrakardiyak Enjeksiyonu

As the most common male malignancy, prostate cancer (PC) ranks second in mortality, primarily due to a 65%-75% bone metastasis rate. Therefore, it is ...

Generation of Prostate Cancer Patient Derived Xenograft Models from Circulating Tumor Cells

Patient derived xenograft (PDX) models are gaining popularity in cancer research and are used for preclinical drug evaluation, biomarker identification, biologic studies, and personalized medicine strategies. Circulating tumor cells (CTC) play a critical role in tumor metastasis and have been isolated from patients with several tumor types. Recently, CTCs have been used to generate PDX experimental models of breast and prostate cancer. This manuscript details the method for the generation of prostate cancer PDX models from CTCs developed by our group. Advantages of this method over conventional PDX models include independence from surgical sample collection and generating experimental models at various disease stages. Density gradient centrifugation followed by red blood cell lysis and flow cytometry depletion of CD45 positive mononuclear cells is used to enrich CTCs from peripheral blood samples collected from patients with metastatic disease. The CTCs are then injected into immunocompromised mice; subsequently generated xenografts can be used for functional studies or harvested for molecular characterization. The primary limitation of this method is the negative selection method used for CTC enrichment. Despite this limitation, the generation of PDX models from CTCs provides a novel experimental model to be applied to prostate cancer research.

This manuscript details a method used to generate prostate cancer patient derived xenografts (PDXs) from circulating tumor cells (CTCs). The generation of PDX models from CTCs provides an alternative experimental model to study prostate cancer; the most commonly diagnosed tumor and a frequent cause of death from cancer in men.

Prostat Kanseri Hasta Üretimi Tümör Hücreleri Sirkülasyon gelen Xenograftlarında Modeller Türetilmiş

Patient derived xenograft (PDX) models are gaining popularity in cancer research and are used for preclinical drug evaluation, biomarker identification, ...

Murine Prostate Micro-dissection and Surgical Castration

Mouse models are used extensively to study prostate cancer and other diseases. The mouse is an excellent model with which to study the prostate and has been used as a surrogate for discoveries in human prostate development and disease. Prostate micro-dissection allows consistent study of lobe-specific prostate anatomy, histology, and cellular characteristics in the absence of contamination of other tissues. Testosterone affects prostate development and disease. Androgen deprivation therapy is a common treatment for prostate cancer patients, but many prostate tumors become castration-resistant. Surgical castration of mouse models allows for the study of castration resistance and other facets of hormonal biology on the prostate. This procedure can be coupled with testosterone reintroduction, or hormonal regeneration of the prostate, a powerful method to study stem cell lineages in the prostate. Together, prostate micro-dissection and surgical castration opens up a multitude of opportunities for robust and consistent research of prostate development and disease. This manuscript describes the protocols for prostate micro-dissection and surgical castration in the laboratory mouse.

This manuscript describes the protocols for prostate micro-dissection and surgical castration in the laboratory mouse. We also depict representative results produced by these protocols. Finally, we discuss the advantages and utilization of these protocols.

Mürin Prostat Mikro-diseksiyon ve Cerrahi Kastrasyon

Mouse models are used extensively to study prostate cancer and other diseases. The mouse is an excellent model with which to study the prostate and has ...