We thank Dr. Roger Erickson for his support and assistance with the preparation of the manuscript. This work was supported by the National Cancer Institute at the National Institutes of Health through grant numbers RO1CA160079, RO1CA138642, UO1CA184966 and VA funded program project number 1P1 BX001604.

hayvanları ile ilgili tüm prosedürler için protokoller gözden geçirilmiş ve bir Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmış olması gerekir. bakım ve laboratuar hayvanlarının kullanımı için resmen onaylanmış prosedürleri izleyin. Intra-prostatik enjeksiyon açık karın cerrahisi gerektiren ve hayvanların uygun cerrahi aseptik teknikler bütün prosedür sırasında kullanılan belirli bir ameliyathane ile bir patojen içermeyen ortamda muhafaza edilmelidir. İmplantasyon için Hücrelerin hazırlanması 1. NOT: Araştırma ihtiyacı dayanarak, herhangi bir prostat kanseri hücre hattı kullanılabilir. Hücre çizgileri kullanılarak üreticinin talimatlarına göre kültürlenir. <ol><li> kararlı biçimde ateşböceği lusiferaz genini ifade PC3M-Luc-C6 hücre hattı için, en az temel ortam (MEM) kültür hücreleri,% 10 cenin sığır serumu (FBS), 1 x esansiyel olmayan amino asitler ile takviye edilmiş, 1 x fleomisin, D1 ve 1 mM sodyum piruvat . bir kuluçka w hücreleri korumaki, 37 ° C de% 95 hava ve% 5 CO2 bulunan nemli bir atmosferde. PC3M-Luc-C6 hücreleri UCSF çekirdek tesisinden temin edilmiştir. </li><li> tripsinizasyon ile Hasat hücreleri. Fosfat tamponlu salin (PBS) ile bir kez kültür plakaları yıkayın. Hücreler müstakil yılına kadar 37 ° C&#39;de% 95 hava ve% 5 CO2 bulunan nemli bir atmosfere sahip bir kuluçka makinesi içinde, 10 cm tabak 2 mi% 0.05 tripsin ilave edin ve 3-5 dakika inkübe edilir. <ol><li> topaklanma önlemek için, vurma veya hücrelerin ayırmak için beklerken çanak sallayarak hücreleri ajitasyon yok. tam ortam 5 ml hücreleri toplamak ve 200 x g&#39;de 5 dakika boyunca aşağı doğru döndürün. Tripsin kaldırmak için PBS ile hücre pelet yıkayın. </li></ol></li><li> tripan mavisi dışlama deneyi ile canlı hücreleri numaralandırmak. % 0.4, 10 ul (ağ / hac), tripan mavisi solüsyonu ile PBS içinde hücre süspansiyonu 10 ul karıştırın. Bir hemositometre veya sayma kamara slayt içine karışımı yerleştirin ve mikroskop altında hemen hücreleri saymak ya da bir hücre cou odası slayt okumaknter. <ol><li> 10 ul medya 2.5 x 10 5 hücre ihtiva eden bir hücre süspansiyonu hazırlanır. 10 ul bazal membran benzeri hücre dışı matris ekstresi ile bir hücre süspansiyonu karıştırılır ve buz üzerinde hücreleri yerleştirin. Hücre süspansiyonuna luciferase ekleyin (1: 200 ul; hazır 30 mg / ml konsantrasyon) farelere enjekte edilmeden önce. NOT: Bu farklı deneysel gruplar arasında hücre enjeksiyonları tutarlılığını kontrol etmek için hayvanların hemen biyo-görüntüleme sağlar. hücre canlılığı ayrıldıktan sonra hızla azalır çünkü trypsinization sonra tercihen 30 dakika içinde, mümkün olduğunca çabuk hücreleri enjekte edilir. </li></ol></li></ol> Cerrahi Alan 2. Hazırlık <ol><li> asepsi teşvik derli toplu bir dezenfekte alanda ameliyat. </li><li> Ameliyat öncesi çamaşır suyu karışımı ile sayaç / laboratuvar tezgah dezenfekte edin. NOT: alkol kullanımı nedeniyle etkisini (15 dk) almak için gerekli uzun temas süresi cesareti olduğunu. </li><li> Steril örtüler kullanınemilebilir pedler ya da havlu temizleyin ve her seansta sonra bu malzemeleri değiştirin. Kullanmadan önce tüm aletleri sterilize. Tercih edilen yöntemler, bir hareketli buharlı otoklav içinde, bir cam boncuk sterilizatör etilen oksit gazı ya da hidrojen peroksit buharı sterilizasyon vardır. </li><li> cerrahi prosedürü gerçekleştirmek için bir aseptik temizlenmiş diseksiyon mikroskobu kullanın ya da deneyimli araştırmacılar mikroskop olmadan gerçekleştirebilirsiniz. </li></ol> Tümör Hücreleri 3. implantasyonu <ol><li> erkek 6-8 haftalık bağışıklığı baskılanmış Balb / c veya NOD / SCID fareleri kullanın. Not: Bu, tümör büyümesi ve metastaz yavaş kinetik sahip olma eğilimindedir küçük hayvanlar ve daha büyük hayvanlar üzerinde çalıştırmak için daha zordur. </li><li> Hayvan Tesisin talimatlarına göre ön ameliyat ağrısı ilaç enjekte edilir. Örneğin, 0.1 mg / kg vücut ağırlığı bir dozda intra-peritonal buprenorfin kullanılabilir. </li><li> oksijen ve wa% 1-3 izofluran ile bir izofluran odasına yerleştirerek hayvanların anestezisibu hayvanların tam olarak anestezi kadar. Bu noktada kas tonusu hiçbir ayak refleks olmadığından emin olun. genel anestezi sırasında kseroftalmiden nedeniyle körlüğü önlemek için uygun veteriner oftalmik merhem yağ kullanın. Not: pentobarbital sodyum için araştırmacının tercih edilen bir yöntem, örneğin tarafından hayvanların anestezisi gram vücut ağırlığı başına, 0.05 mg intra-peritonal ya Ketamin / Ksilazin çözeltisi tatbik edilir (konsantrasyon: 17.16 mg / ml) 65 mg / kg dozda vücut ağırlığı subkutan kullanılır. Izofluran inhalasyonu anestezisi tercih edilen bir yöntemdir. göz merhemi hafifçe kornea sürtünmemelidir uygulanmalıdır. </li><li> izofluran bölme hayvan çıkarın ve hayvan devam etmeden önce, tam anestezi altında olmasını sağlamak için oksijen,% 1-2 izofluran sürekli akışı ile bir burun konisi cihazının içine koyun. <ol><li> Tıraş tarafından farelerden alınan saç çıkarın veya prosedürü başlamadan önce saç kremleri kullanın. NOT: Ameliyat sırasında steril bir ısıtma yastığı üzerinde fare yerleştirmek için tercih olacaktır. </li></ol></li><li> Bir yatar pozisyonda fare yerleştirin. povidon-iyot çözeltisi,% 70 etanol bezlerden, ardından 10 ağırlık / ağırlık ile% alt karın temizleyin. </li><li> ince forseps bir çift, 2 mm prepusyal bezi üzerinde penis kılıf üzerinde yaklaşık 1-2 cm ve göğüs kafesinin alt bölümünün yaklaşık 2-3 cm deri bir alanı kaldırın. </li><li> Ilk olarak bir bisturi ile deri yoluyla ve daha sonra bir makas (Şekil 1), kas tabakası içinden uzunluğunda bir orta hat kesimi 1cm sağlayın. </li><li> vücut boşluğunda mesane bulun. Bu kesi (Şekil 1) altında doğrudan yer alan sarı-açık kahverengi küresel bir organdır. </li><li> ince forseps kavrama bir çift mesane ve penis kılıf doğru vücut boşluğundan dışarı aşağı sonra yukarı kaldırın. Bu beyaz saclike organların çift ve açıkça farklı olan iki seminal veziküller gösterecektir. </li><li> Birliktepamuklu çubukla her el, seminal veziküller, teker teker dışa ve vücut boşluğuna çekip çıkarın ve onları ortada mesane (Şekil 2) ile karın dış yüzeye yüzüstü yatıyordu. </li><li> İki dorsal prostat lobları açıkça görülebilir şekilde pamuklu çubuklarla kullanarak, yavaşça, penis kılıf doğru mesane boynunun yakın yerleştirilmesi noktasında seminal veziküller geri yatırın. Doku hasarı (Şekil 3) önlemek için ıslak pamuk bezlerden kullanın. </li><li> şırıngada yüklemeden önce bir mikropipet ile hücre süspansiyonu çalkalayın. </li><li> Bir pamuklu çubukla pozisyonda seminal vezikül yerleştirirken, mikroskop altında dorsal prostat lob (Şekil 4) içine şırınga iğne takın. Bir bül oluşumu tespit edilene kadar yavaş yavaş hücre süspansiyonu 20 ul enjekte edilir. Bir dışarı vurma bül enjeksiyonu doğru olduğunu gösterir. </li><li> ile enjeksiyon yerinde hafifçe iğne basın retracting ikenBirkaç saniye için bir pamuklu çubukla ve tutma sızıntısını önlemek için. </li><li> Dikkatle pamuklu seminal veziküller kaldırın ve mesane ardından tek geri vücut boşluğunda birine bunları takın. Bu yordamı gerçekleştirirken &#39;twirling&#39; iç organları kaçının. </li><li> vücut boşluğuna geri organları yerleştirdikten sonra, emilmeyen 4-0 naylon cerrahi sütür ile cilt kapatılması ardından emilebilir 4-0 kromik katgüt sütür ile kesintiye uğramış bir desen ilk kas tabakası dikin. deri de tamamen insizyon kapatmak için bir araya çekti ve cerrahi kelepçeler ile kapatılabilir. NOT: Fareler de dikişler ile birlikte tavsiye edilir çizilme ve dolayısıyla yara açılması yeniden doku yapıştırıcısı kullanımı yol açabilir onların yara, ısırma bir alışkanlığı var. Görüntü hayvanlar derhal deney grupları arasındaki eşit biyolüminesans yoğunluk var olduğundan emin olmak için. </li><li> kafesleri temizlemek ve ısınma lambası veya ısı altında tutmak için hayvanların dönmekped ing. tamamen anestezi kurtarmak ve sternum yatma korumak kadar sürekli hayvanları izleyin. </li></ol> Hayvanların 4. İzleme <ol><li> kurumsal protokollere göre, deney sonuna kadar düzenli olarak hayvanların izleyin. Cerrahi metal klips kullanıyorsanız, bir iki hafta sonra kaldırın. Deney süresi belirli bir araştırma ihtiyacı bağlıdır. NOT: Bu deney, sıçan prostatı implante kanser hücrelerinin başarılı bir kuruluş incelemek için 21 gün boyunca uygulanmıştır. </li><li> Hayvan Tesisin talimatlarına göre ağrı ilaç yönetmek. Gerektiğinde, örneğin 0.1 mg / kg vücut ağırlığı bir dozda intra-peritonal buprenorfin 6 saat ve daha fazla doz uygulandıktan sonra ikinci bir doz işlem sırasında her 8-12 saat kullanılır. </li><li> Hayvan ağırlığı, gıda tüketimi, ten rengi ve dokusu, aktivite ve idrar ve dışkılama sıklığı izleyin. hayvanların immed euthanizegeçirmeden% 15 daha büyük bir vücut ağırlığı önemli bir kayıp olup olmadığını. <ol><li> Ötenazi için, bilinç kaybı ve tam uyuşurucu meydana böylece CO2 yavaş yavaş odasına girmek için izin, oda ya da kafes hacmi / dakika 10-30% değiştirmesi için bir akış hızında bir un-kalabalık kafesin içine basınçlı bir tanktan CO 2 teslim ölümünden önce. </li><li> Solunum durması sonrasında, en az bir dakika süre ile CO2 akış korumak ve ölüm fiziksel yöntemin gerçekleştirilmesi öncesinde gerçekleştirilen, böylece yeterli bir süre için bölmeye hayvanlar bırakın. </li><li> Gerçekleştirin decapitation, servikal dislokasyon veya başka herhangi bir IACUC kimyasal hayvanları euthanizing sonra fiziksel yöntemi onayladı. NOT: Önemli ölçüde azaltılmış vücut ağırlığı genellikle uyuşuk durumunu gösterir. Tümör taşıyan hayvanlar, deneyin sonuna kadar, tümör varlığı dışında sağlıklı olmalıdır. Ötenazi Ötanazi AVMA Yönergeleri ile uyumlu olmalıdır ve liste olmalıonaylanmış IACUC protokolü, d. </li></ol></li></ol> Hayvanların 5. Non-invaziv Biyo-görüntüleme <ol><li> haftalık, kanser hücrelerinin, tümör büyümesi ve herhangi bir uzak metastaz kolonizasyonunu izlemek için non-invaziv bir görüntüleme tekniği kullanılarak hayvanları izleyin. NOT: vb GFP-görüntüleme, Lusiferaz görüntüleme, X-ışınları veya 3D mikro-bilgisayarlı tomografi (UCT) gibi görüntüleme yöntemleri spesifik araştırma dayalı kullanılabilir 12-15 gerekir. </li></ol>

<ol>
	<li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics,+2015.">Cancer statistics, 2015.</a> CA Cancer J Clin. 65 (1), 5-29 (2015).</li><li>Andrieu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heat+shock+protein+27+confers+resistance+to+androgen+ablation+and+chemotherapy+in+prostate+cancer+cells+through+eIF4E.">Heat shock protein 27 confers resistance to androgen ablation and chemotherapy in prostate cancer cells through eIF4E.</a> Oncogene. 29 (13), 1883-1896 (2010).</li><li>Fusi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+options+in+hormone-refractory+metastatic+prostate+carcinoma.">Treatment options in hormone-refractory metastatic prostate carcinoma.</a> Tumori. 90 (6), 535-546 (2004).</li><li>Hughes, C., Murphy, A., Martin, C., Sheils, O., O'Leary, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+pathology+of+prostate+cancer.">Molecular pathology of prostate cancer.</a> J Clin Pathol. 58 (7), 673-684 (2005).</li><li>Pavese, J., Ogden, I. M., Bergan, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+orthotopic+murine+model+of+human+prostate+cancer+metastasis.">An orthotopic murine model of human prostate cancer metastasis.</a> J Vis Exp. (79), e50873 (2013).</li><li>Pettaway, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selection+of+highly+metastatic+variants+of+different+human+prostatic+carcinomas+using+orthotopic+implantation+in+nude+mice.">Selection of highly metastatic variants of different human prostatic carcinomas using orthotopic implantation in nude mice.</a> Clin Cancer Res. 2 (9), 1627-1636 (1996).</li><li>Rembrink, K., Romijn, J. C., van der Kwast, T. H., Rubben, H., Schroder, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+implantation+of+human+prostate+cancer+cell+lines:+a+clinically+relevant+animal+model+for+metastatic+prostate+cancer.">Orthotopic implantation of human prostate cancer cell lines: a clinically relevant animal model for metastatic prostate cancer.</a> Prostate. 31 (3), 168-174 (1997).</li><li>Kim, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blockade+of+epidermal+growth+factor+receptor+signaling+in+tumor+cells+and+tumor-associated+endothelial+cells+for+therapy+of+androgen-independent+human+prostate+cancer+growing+in+the+bone+of+nude+mice.">Blockade of epidermal growth factor receptor signaling in tumor cells and tumor-associated endothelial cells for therapy of androgen-independent human prostate cancer growing in the bone of nude mice.</a> Clin Cancer Res. 9 (3), 1200-1210 (2003).</li><li>Kim, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+platelet-derived+growth+factor+receptor+on+endothelial+cells+of+multidrug-resistant+prostate+cancer.">Targeting platelet-derived growth factor receptor on endothelial cells of multidrug-resistant prostate cancer.</a> J Natl Cancer Inst. 98 (11), 783-793 (2006).</li><li>Park, S. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+SRC+family+kinases+inhibits+growth+and+lymph+node+metastases+of+prostate+cancer+in+an+orthotopic+nude+mouse+model.">Targeting SRC family kinases inhibits growth and lymph node metastases of prostate cancer in an orthotopic nude mouse model.</a> Cancer Res. 68 (9), 3323-3333 (2008).</li><li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AFAP-110+is+overexpressed+in+prostate+cancer+and+contributes+to+tumorigenic+growth+by+regulating+focal+contacts.">AFAP-110 is overexpressed in prostate cancer and contributes to tumorigenic growth by regulating focal contacts.</a> J Clin Invest. 117 (10), 2962-2973 (2007).</li><li>Park, S. I., Kim, S. J., McCauley, L. K., Gallick, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-clinical+mouse+models+of+human+prostate+cancer+and+their+utility+in+drug+discovery.">Pre-clinical mouse models of human prostate cancer and their utility in drug discovery.</a> Curr Protoc Pharmacol. Chapter 14, Unit 14.15 (2010).</li><li>Johnson, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longitudinal+live+animal+micro-CT+allows+for+quantitative+analysis+of+tumor-induced+bone+destruction.">Longitudinal live animal micro-CT allows for quantitative analysis of tumor-induced bone destruction.</a> Bone. 48 (1), 141-151 (2011).</li><li>Steinbauer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GFP-transfected+tumor+cells+are+useful+in+examining+early+metastasis+in+vivo,+but+immune+reaction+precludes+long-term+tumor+development+studies+in+immunocompetent+mice.">GFP-transfected tumor cells are useful in examining early metastasis in vivo, but immune reaction precludes long-term tumor development studies in immunocompetent mice.</a> Clin Exp Metastasis. 20 (2), 135-141 (2003).</li><li>Yang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+fluorescent+orthotopic+bone+metastasis+model+of+human+prostate+cancer.">A fluorescent orthotopic bone metastasis model of human prostate cancer.</a> Cancer Res. 59 (4), 781-786 (1999).</li><li>Stephenson, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metastatic+model+for+human+prostate+cancer+using+orthotopic+implantation+in+nude+mice.">Metastatic model for human prostate cancer using orthotopic implantation in nude mice.</a> J Natl Cancer Inst. 84 (12), 951-957 (1992).</li><li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+metastatic+mouse+models+for+anticancer+drug+discovery+and+evaluation:+a+bridge+to+the+clinic.">Orthotopic metastatic mouse models for anticancer drug discovery and evaluation: a bridge to the clinic.</a> Invest New Drugs. 17 (4), 343-359 (1999).</li><li>Wang, X., An, Z., Geller, J., Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-malignancy+orthotopic+nude+mouse+model+of+human+prostate+cancer+LNCaP.">High-malignancy orthotopic nude mouse model of human prostate cancer LNCaP.</a> Prostate. 39 (3), 182-186 (1999).</li><li>An, Z., Wang, X., Geller, J., Moossa, A. R., Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+orthotopic+implantation+allows+high+lung+and+lymph+node+metastatic+expression+of+human+prostate+carcinoma+cell+line+PC-3+in+nude+mice.">Surgical orthotopic implantation allows high lung and lymph node metastatic expression of human prostate carcinoma cell line PC-3 in nude mice.</a> Prostate. 34 (3), 169-174 (1998).</li><li>Kim, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+c-Met+expression+by+an+adenovirus+expressing+a+c-Met+ribozyme+inhibits+tumorigenic+growth+and+lymph+node+metastases+of+PC3-LN4+prostate+tumor+cells+in+an+orthotopic+nude+mouse+model.">Reduced c-Met expression by an adenovirus expressing a c-Met ribozyme inhibits tumorigenic growth and lymph node metastases of PC3-LN4 prostate tumor cells in an orthotopic nude mouse model.</a> Clin Cancer Res. 9 (14), 5161-5170 (2003).</li></ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarları olduğunu beyan ederim.

Bu el yazması bir insan ortotopik prostat kanseri ksenograft fare modeli oluşturmak için ayrıntılı bir yordam açıklanır. Bu model, bağışıklık yetersizliği olan farelerde dorsal prostat loblar, insan prostat kanseri hücre kuşağı PC3M-Luc-C6 doğrudan implantasyonu ile kurulmuştur. Tümörler deney boyunca gelişmeye bırakılmıştır. Tümör büyüme deney sırasında bir non-invaziv biyoparlaklık görüntüleme sistemi ile haftalık izlendi. Ksenograft tümör modeller...

Prostat kanseri sonraki akciğer ve bronşların (% 28) 1 kanseri, ABD&#39;de erkekler arasında kanser ölümlerinin (% 9) ikinci en yaygın nedenidir. Son verilere göre, 220, 800 yeni teşhis prostat kanseri vakası ve 27 540 ölüm 2015 1 oluşacak tahmin edilmektedir. Ilerlemiş metastatik hastalık olduğunu iken, erken evre prostat kanseri beş yıllık sağkalım oranı göreceli&gt;% 99 sadece% 28 1. metastatik hastalığın tedavisi için önemli bir zorluk, özellikle prostat kanseri için sık ortaya çıktığı yerdir kemik için, diğer organlara metastaz için, bu hastalığın eğilimini altında yatan moleküler mekanizmaların anlaşılması eksikliğidir. Bu nedenle, gelişmiş metastatik hastalık 2,3 ilerleme karşı etkili tedavi rejimleri geliştirmek için bu prostat tümörlerinin moleküler makyaj incelemek için açık bir ihtiyaç vardır. Prostat sergi HIG tümörleriilerlemesi için iyi tanımlanmış bir yolun olmadan h biyolojik heterojenlik. Metastaz sıklıkla tümör invazivlik 4 önceden hiçbir göstergesi ile meydana gelir. Bu klinik heterojenite prostat kanserinin moleküler çeşitlilik atfedilir. Bu ölümcül tümörlerin moleküler makyaj anlamak bu hastalık için daha iyi teşhis ve tedavi stratejilerinin tasarımı anahtarıdır. Sonuç olarak, prostat kanseri araştırması şu anda anlaşılması ve metastaz engelleyen odaklanmıştır. Preklinik in vivo fare modelleri ilerlemiş metastatik hastalık prostat kanseri ilerlemesinde moleküler mekanizmalarını anlamak için çeşitli seçenekler sunuyoruz. Buna ek olarak, bu modeller, bu hastalığa karşı yeni tedavi stratejileri klinik öncesi değerlendirmeleri için önemlidir. En yaygın olarak kullanılan hayvan modelleri, transjenik fare modelleri, kuyruk damarından, intra-kalp implantasyonu ve insan ortotopik fare modelleri bulunmaktadır. Transgenik çalışmalar zaman consumi vardırng ve insanların bu farelerde prostat kanseri gelişme korelasyon değişkenliğini 11 göstermiştir. Spontan metastatik fare modellerinde, hücreler dolaşıma doğrudan enjekte edilir ve onlar hızlı gerçekleştirme süresi olsa, bunlar primer tümör veya metastatik kaskad 5 ilk adımlarını incelemek için kullanılamaz. Ortotopik ksenograft modelleri kemik metastatik lezyonlar, prostat kanseri metastaz ortak sitesi geliştirme sınırlama var. Bununla birlikte, insan ortotopik prostat kanseri ksenograft fare modeli iyi karakterize ve yaygın primer tümör gelişimi, tümör ve organ mikroçevresinin, terapötik müdahale 6 metastatik hastalık ve deneysel ilaçların kullanımı başlangıç ​​aşamasında arasındaki çapraz konuşma moleküler olayları incelemek için kullanılır , 7,8-11.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="732">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:229px;">PC3 prostate cancer cell line&#160;</td>
			<td style="width:188px;">ATCC</td>
			<td style="width:111px;">CRL-1435</td>
			<td style="width:204px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Minimum Essential Medium (MEM)&#160;</td>
			<td>GIBCO,Life Technology</td>
			<td>11095-080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PBS</td>
			<td>GIBCO,Life Technology</td>
			<td>10010-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FBS</td>
			<td>GIBCO,Life Technology</td>
			<td>10437-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Zeocin</td>
			<td>Invitrogen,Life Technology</td>
			<td>R250-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypsin&#160;</td>
			<td>GIBCO,Life Technology</td>
			<td>25300-54</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">IVIS&#160;</td>
			<td>Xenogen-Caliper</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Insulin Syringes (300ul, 28.5g)</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>309300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mice</td>
			<td>Charles River Laboratories, Inc</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Alcohol Swabs</td>
			<td>MEDEquip Depot</td>
			<td>326895 BD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PVP Iodine Prep Pad</td>
			<td>MEDEquip Depot</td>
			<td>C12400PDI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Surgical CatGut Chromic Suture</td>
			<td>Demetech</td>
			<td>CC224017F0P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Matrigel</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354248</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

pre-clinical orthotopic murine model of human prostate cancer

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information about this disease. The human orthotopic prostate cancer xenograft mouse model provides a useful alternative approach for understanding the specific interactions between genetically and molecularly altered tumor cells, their organ microenvironment, and for evaluation of efficacy of therapeutic regimens. This is a well characterized model designed to study the molecular events of primary tumor development and it recapitulates the early events in the metastatic cascade prior to embolism and entry of tumor cells into the circulation. Thus it allows elucidation of molecular mechanisms underlying the initial phase of metastatic disease. In addition, this model can annotate drug targets of clinical relevance and is a valuable tool to study prostate cancer progression. In this manuscript we describe a detailed procedure to establish a human orthotopic prostate cancer xenograft mouse model.

Prostatik lobuna PC3M-Luc-C6 hücrelerinin ortotopik implantasyonu takiben fareler haftada deney sırasında (- B Şekil 5A) üzerinden hücrelerin kolonizasyonunun ve tümör büyümesini izlemek için canlı bir hayvan biyolüminesans görüntüleme sistemi kullanılarak görüntülendi. bioluminescent sinyal Niceleme PC3M-Luc-C6 hücreleri başarıyla prostat lobları kolonize olduğunu göstermiştir. Artan biyolüminesans deneyi (Şekil 5B)<...

Watch this Scientific Journal Video about Pre-clinical Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer at JoVE.com

Pre-clinical Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer

Prostate cancer is the second most common cause of cancer-related deaths in the United States. An orthotopic cancer model provides a useful approach to understand the biology of prostate cancer and to evaluate the efficacy of therapeutic regimens. This protocol describes detailed steps necessary to establish an orthotopic prostate cancer mouse model.

İnsan Prostat Kanseri klinik öncesi Ortotopik murin modeli

To study the multifaceted biology of prostate cancer, pre-clinical in vivo models offer a range of options to uncover critical biological information ...

pre-clinical-orthotopic-murine-model-of-human-prostate-cancer

Research

JoVE Journal

Medicine

14.1K Görüntüleme.  VA Medical Center and UCSF. Prostate cancer is the second most common cause of cancer-related deaths in the United States. An orthotopic cancer model provides a useful approach to understand the biology of prostate cancer and to evaluate the efficacy of therapeutic regimens. This protocol describes detailed steps necessary to establish an orthotopic prostate cancer mouse model.

Video: Pre-clinical Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and subsequent cell adhesion. After their bladders are transurethrally catheterized and drained, animals are again catheterized to permit insertion of a platinum wire into bladders without damaging the urethra or bladder. The catheters are made of Teflon to serve as an insulator for the wire, which will conduct electrical current into the bladder to create a burn injury. An electrocautery unit is used to deliver 2.5W to the exposed end of the wire, burning away extracellular layers and providing attachment sites for carcinoma cells that are delivered in suspension to the bladder through a subsequent catheterization. Cells remain in the bladder for 90 minutes, after which the catheters are removed and the bladders allowed to drain naturally. The development of tumor is monitored via ultrasound. Specific attention is paid to the catheterization technique in the accompanying video.

Bladder tumors are established in female mice in a minimally invasive fashion through catheterization, local cauterization, and subsequent adhesion of carcinoma cells to the burn sites.

Murin Mesane Kanseri bir Ortotopik Model

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

Tıp

Combination Radiotherapy in an Orthotopic Mouse Brain Tumor Model

Glioblastoma multiforme (GBM) are the most common and aggressive adult primary brain tumors1. In recent years there has been substantial progress in the understanding of the mechanics of tumor invasion, and direct intracerebral inoculation of tumor provides the opportunity of observing the invasive process in a physiologically appropriate environment2. As far as human brain tumors are concerned, the orthotopic models currently available are established either by stereotaxic injection of cell suspensions or implantation of a solid piece of tumor through a complicated craniotomy procedure3. In our technique we harvest cells from tissue culture to create a cell suspension used to implant directly into the brain. The duration of the surgery is approximately 30 minutes, and as the mouse needs to be in a constant surgical plane, an injectable anesthetic is used. The mouse is placed in a stereotaxic jig made by Stoetling (figure 1). After the surgical area is cleaned and prepared, an incision is made; and the bregma is located to determine the location of the craniotomy. The location of the craniotomy is 2 mm to the right and 1 mm rostral to the bregma. The depth is 3 mm from the surface of the skull, and cells are injected at a rate of 2 &mu;l every 2 minutes. The skin is sutured with 5-0 PDS, and the mouse is allowed to wake up on a heating pad. From our experience, depending on the cell line, treatment can take place from 7-10 days after surgery. Drug delivery is dependent on the drug composition. For radiation treatment the mice are anesthetized, and put into a custom made jig. Lead covers the mouse's body and exposes only the brain of the mouse. The study of tumorigenesis and the evaluation of new therapies for GBM require accurate and reproducible brain tumor animal models. Thus we use this orthotopic brain model to study the interaction of the microenvironment of the brain and the tumor, to test the effectiveness of different therapeutic agents with and without radiation.

The purpose of this article is to describe the use of an orthotopic glioblastoma model for chemoradiation studies. This article will go though cell processing, implanting, and radiotherapy of the mouse using an intracranial model.

Bir Ortotopik Fare Beyin Tümörü Modelinde Kombinasyon Radyoterapi

Glioblastoma multiforme (GBM) are the most common and aggressive adult primary brain tumors1. In recent years there has been substantial progress in the ...

Development of Obliterative Bronchiolitis in a Murine Model of Orthotopic Lung Transplantation

Orthotopic lung transplantation in rats was first reported by Asimacopoulos and colleagues in 1971 1. Currently, this method is well accepted and standardized not only for the study of allo-rejection but also between syngeneic strains for examining mechanisms of ischemia-reperfusion injury after lung transplantation. Although the application of the rat and other large animal model 2 contributed significantly to the elucidation of these studies, the scope of those investigations is limited by the scarcity of knockout and transgenic rats. Due to no effective therapies for obliterative bronchiolitis, the leading cause of death in lung transplant patients, there has been an intensive search for pre-clinical models that replicate obliterative bronchiolitis. The tracheal allograft model is the most widely used and may reproduce some of the histopathologic features of obliterative bronchiolitis 3. However, the lack of an intact vasculature with no connection to the recipient's conducting airways, and incomplete pathologic features of obliterative bronchiolitis limit the utility of this model 4. Unlike transplantation of other solid organs, vascularized mouse lung transplants have only recently been reported by Okazaki and colleagues for the first time in 2007 5. Applying the basic principles of the rat lung transplant, our lab initiated the obliterative bronchiolitis model using minor histoincompatible antigen murine orthotopic single-left lung transplants which allows the further study of obliterative bronchiolitis immunopathogenesis6.

Obliterative bronchiolitis is the key impediment to the long-term survival of lung transplant recipients and the lack of a robust preclinical model precludes examining obliterative bronchiolitis immunopathogenesis. Unlike other solid organ transplants, vascularized mouse lung transplantation has only recently been developed. Here we show our independently developed obliterative bronchiolitis model after murine orthotopic single-lung transplantation.

Ortotopik Akciğer Transplantasyonu bir Mürin Modelinde Obliteratif Bronşiolit Gelişimi

Orthotopic lung transplantation in rats was first reported by Asimacopoulos and colleagues in 1971 1. Currently, this method is well accepted and ...

An Orthotopic Bladder Cancer Model for Gene Delivery Studies

Bladder cancer is the second most common cancer of the urogenital tract and novel therapeutic approaches that can reduce recurrence and progression are needed. The tumor microenvironment can significantly influence tumor development and therapy response. It is therefore often desirable to grow tumor cells in the organ from which they originated. This protocol describes an orthotopic model of bladder cancer, in which MB49 murine bladder carcinoma cells are instilled into the bladder via catheterization. Successful tumor cell implantation in this model requires disruption of the protective glycosaminoglycan layer, which can be accomplished by physical or chemical means. In our protocol the bladder is treated with trypsin prior to cell instillation. Catheterization of the bladder can also be used to deliver therapeutics once the tumors are established. This protocol describes the delivery of an adenoviral construct that expresses a luciferase reporter gene. While our protocol has been optimized for short-term studies and focuses on gene delivery, the methodology of mouse bladder catheterization has broad applications.

Implantation of cancer cells into the organ of origin can serve as a useful preclinical model to evaluate novel therapies. MB49 bladder carcinoma cells can be grown within the bladder following intravesical instillation. This protocol demonstrates catheterization of the mouse bladder for the purpose of tumor implantation and adenoviral delivery.

Gene Teslim Çalışmaları Ortotopik Mesane Kanseri Modeli

Bladder cancer is the second most common cancer of the urogenital tract and novel therapeutic approaches that can reduce recurrence and progression are ...

Formation of Human Prostate Epithelium Using Tissue Recombination of Rodent Urogenital Sinus Mesenchyme and Human Stem Cells

Progress in prostate cancer research is severely limited by the availability of human-derived and hormone-na&iuml;ve model systems, which limit our ability to understand genetic and molecular events underlying prostate disease initiation. Toward developing better model systems for studying human prostate carcinogenesis, we and others have taken advantage of the unique pro-prostatic inductive potential of embryonic rodent prostate stroma, termed urogenital sinus mesenchyme (UGSM). When recombined with certain pluripotent cell populations such as embryonic stem cells, UGSM induces the formation of normal human prostate epithelia in a testosterone-dependent manner. Such a human model system can be used to investigate and experimentally test the ability of candidate prostate cancer susceptibility genes at an accelerated pace compared to typical rodent transgenic studies. Since Human embryonic stem cells (hESCs) can be genetically modified in culture using inducible gene expression or siRNA knock-down vectors prior to tissue recombination, such a model facilitates testing the functional consequences of genes, or combinations of genes, which are thought to promote or prevent carcinogenesis.
The technique of isolating pure populations of UGSM cells, however, is challenging and learning often requires someone with previous expertise to personally teach. Moreover, inoculation of cell mixtures under the renal capsule of an immunocompromised host can be technically challenging. Here we outline and illustrate proper isolation of UGSM from rodent embryos and renal capsule implantation of tissue mixtures to form human prostate epithelium. Such an approach, at its current stage, requires in vivo xenografting of embryonic stem cells; future applications could potentially include in vitro gland formation or the use of induced pluripotent stem cell populations (iPSCs).

To unravel the earliest molecular mechanisms underlying prostate cancer initiation, novel and innovative human model systems and approaches are desperately needed. The potential of pre-prostatic urogenital sinus mesenchyme (UGSM) to induce pluripotent stem cell populations to form human prostate epithelium is a powerful experimental tool in prostate research.

Kemirgen Ürogenital Sinüs mezenşimin ve İnsan Kök Hücre Doku Rekombinasyon kullanarak İnsan Prostat epiteli oluşumu

Progress in prostate cancer research is severely  limited by the availability of human-derived and hormone-na&iuml;ve model systems,  which limit our ...

Bioluminescent Orthotopic Model of Pancreatic Cancer Progression

Pancreatic cancer has an extremely poor five-year survival rate of 4-6%. New therapeutic options are critically needed and depend on improved understanding of pancreatic cancer biology. To better understand the interaction of cancer cells with the pancreatic microenvironment, we demonstrate an orthotopic model of pancreatic cancer that permits non-invasive monitoring of cancer progression. Luciferase-tagged pancreatic cancer cells are resuspended in Matrigel and delivered into the pancreatic tail during laparotomy. Matrigel solidifies at body temperature to prevent leakage of cancer cells during injection. Primary tumor growth and metastasis to distant organs are monitored following injection of the luciferase substrate luciferin, using in vivo imaging of bioluminescence emission from the cancer cells. In vivo imaging also may be used to track primary tumor recurrence after resection. This orthotopic model is suited to both syngeneic and xenograft models and may be used in pre-clinical trials to investigate the impact of novel anti-cancer therapeutics on the growth of the primary pancreatic tumor and metastasis.

Improved understanding of pancreatic cancer biology is critically needed to enable the development of better therapeutic options to treat pancreatic cancer. To address this need, we demonstrate an orthotopic model of pancreatic cancer that permits non-invasive monitoring of cancer progression using in vivo bioluminescence imaging.

Pankreas Kanseri İlerleme Bioluminescent Ortotopik Model

Pancreatic cancer has an extremely poor five-year survival rate of 4-6%.  New therapeutic options are critically needed and depend on improved ...

Pre-clinical Evaluation of Tyrosine Kinase Inhibitors for Treatment of Acute Leukemia

Receptor tyrosine kinases have been implicated in the development and progression of many cancers, including both leukemia and solid tumors, and are attractive druggable therapeutic targets. Here we describe an efficient four-step strategy for pre-clinical evaluation of tyrosine kinase inhibitors (TKIs) in the treatment of acute leukemia. Initially, western blot analysis is used to confirm target inhibition in cultured leukemia cells. Functional activity is then evaluated using clonogenic assays in methylcellulose or soft agar cultures. Experimental compounds that demonstrate activity in cell culture assays are evaluated in vivo using NOD-SCID-gamma (NSG) mice transplanted orthotopically with human leukemia cell lines. Initial in vivo pharmacodynamic studies evaluate target inhibition in leukemic blasts isolated from the bone marrow. This approach is used to determine the dose and schedule of administration required for effective target inhibition. Subsequent studies evaluate the efficacy of the TKIs in vivo using luciferase expressing leukemia cells, thereby allowing for non-invasive bioluminescent monitoring of leukemia burden and assessment of therapeutic response using an in vivo bioluminescence imaging system. This strategy has been effective for evaluation of TKIs in vitro and in vivo and can be applied for identification of molecularly-targeted agents with therapeutic potential or for direct comparison and prioritization of multiple compounds.

Receptor tyrosine kinases are ectopically expressed in many cancers and have been identified as therapeutic targets in acute leukemia. This manuscript describes an efficient strategy for pre-clinical evaluation of tyrosine kinase inhibitors for the treatment of acute leukemia.

Akut lösemi tedavisi için Tirosin Kinaz İnhibitörleri klinik öncesi değerlendirilmesi

Receptor tyrosine kinases have been implicated in the development and progression of many cancers, including both leukemia and solid tumors, and are ...

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but rather the formation of distinct metastasis, the ability to effectively model this progression pre-clinically is of high value. In this model, cells are directly implanted into the ventral lobe of the prostate in Balb/c athymic mice, and allowed to progress for 4-6 weeks. At experiment termination, several distinct endpoints can be measured, such as size and molecular characterization of the primary tumor, the presence and quantification of circulating tumor cells in the blood and bone marrow, and formation of metastasis to the lung. In addition to a variety of endpoints, this model provides a picture of a cells ability to invade and escape the primary organ, enter and survive in the circulatory system, and implant and grow in a secondary site. This model has been used effectively to measure metastatic response to both changes in protein expression as well as to response to small molecule therapeutics, in a short turnaround time.

This orthotopic model of human prostate cancer allows for quantification of tumor size, circulating tumor cells, and formation of distinct metastasis to the lung. As cells must escape the primary organ, enter the blood stream, and implant into a secondary site, this model effectively recapitulates the scenario in humans.

İnsan Prostat Kanser metastaz Ortotopik fare modeli

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly isolated from human tissues and serially propagated in immunodeficient mice, typically through antibody labeling of subpopulations of cells and fractionation by flow cytometry. However, the unique clinical features of prostate cancer have considerably limited the study of prostate CSCs from fresh human tumor samples. We recently reported the isolation of prostate CSCs directly from human tissues by virtue of their HLA class I (HLAI)-negative phenotype. Prostate cancer cells are harvested from surgical specimens and mechanically dissociated. A cell suspension is generated and labeled with fluorescently conjugated HLAI and stromal antibodies. Subpopulations of HLAI-negative cells are finally isolated using a flow cytometer. The principal limitation of this protocol is the frequently microscopic and multifocal nature of primary cancer in prostatectomy specimens. Nonetheless, isolated live prostate CSCs are suitable for molecular characterization and functional validation by transplantation in immunodeficient mice.

The isolation of cancer stem cells (CSCs) directly from human tissues is requisite for their biological characterization. This manuscript describes a methodology for the isolation of prostate CSCs from human tissues, while also providing tips on troubleshooting difficult steps.

İnsan Prostat Kanseri Örneklerinden Kanser Kök Hücreleri İzolasyon

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

An Orthotopic Mouse Model of Spontaneous Breast Cancer Metastasis

Metastasis is the primary cause of mortality of breast cancer patients. The mechanism underlying cancer cell metastasis, including breast cancer metastasis, is largely unknown and is a focus in cancer research. Various breast cancer spontaneous metastasis mouse models have been established. Here, we report a simplified procedure to establish orthotopic transplanted breast cancer primary tumor and resultant spontaneous metastasis that mimic human breast cancer metastasis. Combined with the bioluminescence live tumor imaging, this mouse model allows tumor growth and progression kinetics to be monitored and quantified. In this model, a low dose (1 x 104 cells) of 4T1-Luc breast cancer cells was injected into BALB/c mouse mammary fat pad using a tuberculin syringe. Mice were injected with luciferin and imaged at various time points using a bioluminescent imaging system. When the primary tumors grew to the size limit as in the IACUC-approved protocol (approximately 30 days), mice were anesthetized under constant flow of 2% isoflurane and oxygen. The tumor area was sterilized with 70% ethanol. The mouse skin around the tumor was excised to expose the tumor which was removed with a pair of sterile scissors. Removal of the primary tumor extends the survival of the 4T-1 tumor-bearing mice for one month. The mice were then repeatedly imaged for metastatic tumor spreading to distant organs. Therapeutic agents can be administered to suppress tumor metastasis at this point. This model is simple and yet sensitive in quantifying breast cancer cell growth in the primary site and progression kinetics to distant organs, and thus is an excellent model for studying breast cancer growth and progression, and for testing anti-metastasis therapeutic and immunotherapeutic agents in vivo.

An orthotopic breast cancer primary tumor model and surgical removal of primary tumor to extend mouse life to generate spontaneous metastasis are described. The tumor growth and progression are monitored and quantified by luciferase fluorescence imaging.