Yazarlar mükemmel balık yetiştiriciliği ve teknik destek için Xixia Luo teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma Sağlık hibe R21EY019401 (RT) ve P30EY04068 (RT) ve Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından finanse edilen ve Wayne State Üniversitesi, Göz Hastalıkları Anabilim Dalı için Körlük Önleme Araştırma tarafından sınırsız ödenekle de dahil olmak üzere, RT para start-up oldu. JT Wayne State Üniversitesi Enstitü tarafından sağlanan Thomas C. Rumble Bursu ile desteklenmiştir.

Bu protokol açıklanan tüm prosedürleri Tıp Wayne State Üniversitesi Okulu&#39;nda hayvan kullanımı komitesi tarafından onaylanmıştır. 1. Koyu Adaptasyon <ol><li> Transferi karanlık bir muhafaza içine normal konut sisteminden 10 yetişkin albino veya pigmentli balık ~. Varsa, tank ile normal su akışını sağlayan Zebra balığı konut modülü, yerleşik bir karanlık muhafaza kullanın. (Böyle bir sistem mevcut değilse, oksijen ile balık havalandırmak için emin olun, tamamen karanlık bir muhafaza içinde akvaryum yerleştirin). </li><li> 10 gün boyunca karanlıkta balık tutun. Hayvan besleme veya koyu kutusuna yeni balık eklerken, ışık uzun bir süre için balık maruz kalmasını önlemek için mümkün olduğunca çabuk hareket etmek emin olun. </li></ol> 2. UV Pozlama <ol><li> UV kaynağı için güç KAPALI olduğundan emin olun. Floresan stereomikroskopta gelen UV ışığı filament çıkarın. <ol><li> Ters bir kullanmaUV filament için bir stand olarak 15 cm çapında cam Petri kabı (ya da benzer bir 2 cm yüksekliğinde bir şey). Laboratuar tezgah Petri kabı bant. </li><li> Bant UV ışığı filament ters Petri kabı dön. Düzenlemek böylece Petri kabı filamanın çıkıntılar sonu ~ 2 mm. </li></ol></li><li> 250 ml&#39;lik bir cam kabın elde edilir. Alt ½, iki ve arka alüminyum folyo ile beher, folyo &quot;parlak&quot; yan beher iç yüzleri emin Kapak. Beher derecelendirilmişse, maruz beher açık yarım bırakarak, folyo ile beher ifadeli yarısını kapsar. </li><li> Balık tesisi sistemi, 100 ml su ile 250 ml beher doldurun. </li><li> Bir 4 L&#39;lik bir behere 250 ml beher yerleştirin. Su seviyesi, hatta 250 ml beher 100 ml su hattı ile kadar su ile 4 L kaba doldurun. </li><li> 250 ml&#39;lik behere 10 koyu ile muamele edilmiş hayvanların, maksimum ekleyin. Alüminyum küçük bir parça ile 250 ml beher Kapakfolyo. </li><li> UV filamana hemen bitişiğindeki tüm beher cihaz yerleştirin. Filaman 4 L kaba dış dokunarak ve 250 ml&#39;lik bir açıkta kalan kısmı bakmalıdır. 250 ml&#39;lik 4 L kaba alt merkezli olduğundan emin olun. </li><li> Maruz hayvanlar için izin, ancak UV filamanın ucu görmesini herhangi bir laboratuar personeli önlenmesi, 4L beher arkasında büyük, opak ekran yerleştirin. UYARI: Bu bariyer UV kaynağına Gücü açmadan ÖNCE yerinde olduğundan emin olun. </li><li> UV güç kaynağı açın. 30 dakika zamanlayıcı ayarlayın. Ne olursa olsun gerekli uyarı etiketleri bu masum laboratuar personeli yanlışlıkla UV ışınlarına kendilerini maruz bırakmayın sağlamak için yerleştirin. </li><li> 30 dakika sonra, UV güç kaynağı kapatın. Balık ile 250 ml beher çıkarın. NOT: UV ışınlarına maruz kalma birden fazla tur gerekiyorsa, pozlama protokolü tekrar önce (~ 20 dk) aşağı güç kaynağı soğumasını bekleyin. T yerine emin olunO her teşhir için taze sistemi su ile, 100 ml su. 4 L beher su değiştirilmesi gerekmez. </li></ol> 3. Halojen Lamba Işık Pozlama <ol><li> 1.8 L açık akrilik akvaryum içine 250 ml kaptan balık aktarın. Taşma işareti doldurun. </li><li> Halojen lamba ışığı tedavi alanı ayarlayın. Yerel bir nalburdan dört 250 W halojen lambalar programı edinin. Aynı yönde iki lamba bakan, merkezi dışında 29 cm düzenlemek. Benzer bir şekilde diğer iki lamba düzenleyin. <ol><li> Bu lambaların her iki set arasında ~ 73 cm bırakarak, lambalar ilk kümesi bakacak şekilde lambaların ikinci kümesi yerleştirin. Bu 29 x 73 cm dikdörtgen şeklinde ışık tedavisi alan oluşturur. </li></ol></li><li> Yerel bir nalburdan küçük bir fan alın. Sadece ışık tedavisi alanı dışında, lambaların iki takım arasında eşit uzaklıkta fan yerleştirin. </li><li> Ortasına su dolu iki 1.8 L tank yerleştirinlambaların iki takım arasında eşit uzaklıkta ışık tedavisi alan,. Lambaları ve tankın dış duvar arasındaki mesafe ~ 29 cm olmalıdır. Not: Sadece bir 1,8 L tankta 10 balık tedavi olsa bile, bu düzenleme kullanın. Her iki tank uygun aralık içinde her tankın su sıcaklığı tutmak için gereklidir. </li><li> Her tankta bir oksijen havalandırıcı yerleştirin. </li><li> Fan en yakın sonunda bir ~ 2 cm boşluk bırakarak, şeffaf akrilik kapaklı her tankı kapağı. Bu boşluğu içine hava darbe böylece fan düzenleyin. Tanklarının biri veya her ikisi bir termometre yerleştirin. </li><li> Işıklar, fan ve havalandırıcılar için güç açın. En fazla 4 gün için ışık tedavisi koruyun. Bu hayvanlara daha fazla stres su kalitesi ve sonuç etkileyecek gibi balık, ışık tedavisi sırasında verilmemelidir. </li><li> Günlük olarak ısı ve su izleyin. 30-33 ° C sıcaklıkta muhafaza Gerekirse, fan hızı ve / veya tank ve Li arasındaki mesafeyi ayarlamakghts. <ol><li> Gerektiği gibi, genellikle günlük sistemi su ile her bir tank kapalı üst. </li><li> Her zaman% 100 yakın bir hayatta kalma oranı korumak için sağlıklı yetişkin zebrafish (yaş genellikle 6-9 ay) kullanın. Bir balık tankında ölü bulundu Ancak, eğer, hemen çıkarın ve tüm depodaki su değiştirin. </li></ol></li></ol> 4. Doku Toplama <ol><li> Halojen ışık tedavinin başlangıcından sonra 48 saat tedavi alanından balık çıkarın. <ol><li> Taze etanol formaldehit fiksatif (1 kısım% 37 formaldehit, 9 parça% 100 etanol) hazırlayın. </li><li> 2-fenoksietanol (0.4 mg / L) bir anestezik doz aşımı ile Zebra balığı euthanize. </li><li> Bir kağıt havlu için ötenazi Zebra balığı aktarın. Kavisli bir forseps kullanarak göz tanıttılar. </li><li> 4 ° C&#39;de sabitleştirici ve mağaza O / N enüklee gözleri yerleştirin </li></ol></li><li> Gözler cryoprotect. <ol><li> Oda sıcaklığında 30 dakika boyunca% 5 sakkaroz 1x PBS yıkayınız, sonra bunun yerine2 saat boyunca% 5 sakkaroz taze PBS 1x. Daha sonra, 4 ° C&#39;de% 30 sukroz PBS 1x O / N yıkayın 4 ° C&#39;de bir doku dondurma orta ve% 30 sakaroz PBS 1x O / N 1:1 &#39;lik bir (eşit bölümler) içinde yıkayın </li></ol></li><li> -80% 100 doku dondurma orta ve mağaza gözleri Embed ° C Yönlendirmek gözleri böylece doku cryosectioning dorsal / ventral eksen üzerinde gerçekleştirilir. </li><li> Cam slaytlar cryosection doku ve yer. 55 ° C&#39;de 2 saat boyunca sıcak slaytlar -80 Mağaza slaytlar ° C veya hemen standart immünhistokimya gerçekleştirin. </li><li> Floresan mikroskobu 40,51 ile kesitli doku ve görüntü standart immünhistokimya gerçekleştirin. </li></ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Burada yaygın fotoreseptör kaybı ve güçlü bir yenilenme yanıt olarak sürekli bir parlak ışığa maruz kalma sonucu ile kısa UV ışınlarına maruz kalma birleştirerek olduğunu göstermektedir. Bireysel LIRD yöntem ile karşılaştırıldığında, bu kombine yöntem de retina her iki yarısı da çubuk ve koni hem de zarar için en etkili bir protokoldür. Önemli olarak, bu tedavi pigmentli hayvanların yanı sıra albino hayvanlarda etkilidir. Daha yaygın ve tutarl...

Işık kaynaklı retina dejenerasyonuna (LIRD) genellikle kemirgenlerde ve hasar çubuk ve koni fotoreseptör için zebrabalıkları hem de kullanılır. Yetişkin Zebra balığı, fotoreseptör dejenerasyonu Müller glial hücreler yeniden girmek hücre döngüsü için tetikler ve geçici-yükselterek ataları üretmek. Bu ataları onlar sonuçta yeni bir fotoreseptör neden hasarlı bölgeye, göç gibi yayılmaya devam etmektedir. Şu anda, iki yaygın olarak kullanılan LIRD paradigmalar, her biri yenilenmesi yanıt olarak fotoreseptör kaybını ve buna tekabül eden farklar değişen derecelerde sonuçlar birçok türü vardır. Daha fazla genetik ve farmakolojik rejenerasyon sırasında ilgi tek tek genlerin rolü test etmek için kullanılabilir gibi, güçlü bir LIRD paradigma geliştirmek için bir ihtiyaç vardır. Burada bir LIRD protokol açıklar biz iki daha önce kurulmuş LIRD tekniklerinin kullanılması birleştirdik hangi çubuk ve koni fotoreseptör hem de yaygın ve tutarlı kaybına neden olur. Ayrıca, Bu protokol LIRD çalışmaları için albino arka planda ilgi transgenik hatları korumak için gereğini ortadan kaldırır pigmentli hayvanlarda kullanılmak üzere uzatılabilir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="586">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">UV light source</td>
			<td style="width:215px;">Leica</td>
			<td style="width:155px;">EL600</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glass Petri dish (150 x 20 mm)</td>
			<td>Sigma-Aldrich/Pyrex</td>
			<td>CLS3160152BO</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">250 ml glass beaker</td>
			<td>Sigma-Aldrich/Pyrex</td>
			<td>CLS1000250</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4 L glass beaker</td>
			<td>Sigma-Aldrich/Pyrex</td>
			<td>CLS10004L</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Aluminum foil</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>01-213-105</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">250 W halogen lamps</td>
			<td>Workforce</td>
			<td>265-669</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1.8 L clear acrylic tanks</td>
			<td>Aquaneering</td>
			<td>ZT180T</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1.8 L clear acrylic tank lids</td>
			<td>Aquaneering</td>
			<td>ZT180LCL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fan</td>
			<td>Honeywell</td>
			<td>HT-900</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Aerator</td>
			<td>Tetra</td>
			<td>77853-900</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Thermometer</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>YO-08008-58</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bent forceps (5/45)</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>504155</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a novel light damage paradigm for use in retinal regeneration studies in adult zebrafish

Işık kaynaklı retina dejenerasyonuna (LIRD) genellikle kemirgenlerde ve hasar çubuk ve koni fotoreseptör için zebrabalıkları hem de kullanılır. Yetişkin Zebra balığı, fotoreseptör dejenerasyonu Müller glial hücreler yeniden girmek hücre döngüsü için tetikler ve geçici-yükselterek ataları üretmek. Bu ataları onlar sonuçta yeni bir fotoreseptör neden hasarlı bölgeye, göç gibi yayılmaya devam etmektedir. Şu anda, iki yaygın olarak kullanılan LIRD paradigmalar, her biri yenilenmesi yanıt olarak fotoreseptör kaybını ve buna tekabül eden farklar değişen derecelerde sonuçlar birçok türü vardır. Daha fazla genetik ve farmakolojik rejenerasyon sırasında ilgi tek tek genlerin rolü test etmek için kullanılabilir gibi, güçlü bir LIRD paradigma geliştirmek için bir ihtiyaç vardır. Burada bir LIRD protokol açıklar biz iki daha önce kurulmuş LIRD tekniklerinin kullanılması birleştirdik hangi çubuk ve koni fotoreseptör hem de yaygın ve tutarlı kaybına neden olur. Ayrıca, Bu protokol LIRD çalışmaları için albino arka planda ilgi transgenik hatları korumak için gereğini ortadan kaldırır pigmentli hayvanlarda kullanılmak üzere uzatılabilir.

Evvel tarif ışık tedavi protokolü LIRD her bir yöntemi ile karşılaştırılmıştır. Koyu ile tedavi edilen hayvanlarda yetişkin albino (Şekil 3-5), bireysel ışık tedavileri önemli bir çubuk kaybı (Şekil 3) ve koni (Şekil 4) fotoreseptör sonuçlandı. Ancak, her iki bireysel tedaviler öncelikle nispeten ışık tedavileri (Şekil 3 ve 4) korunmaktadır ventral retina bırakarak, retinanın dorsal yarısında...

Watch this Scientific Journal Video about A Novel Light Damage Paradigm for Use in Retinal Regeneration Studies in Adult Zebrafish at JoVE.com

A Novel Light Damage Paradigm for Use in Retinal Regeneration Studies in Adult Zebrafish

Çoklu ışık zarar protokolleri zarar fotoreseptör tarif ve dolayısıyla yetişkin zebrafish bir retina rejenerasyon tepki neden olmuştur. Bu protokol, pigmentli hayvanlarda kullanılabilen geliştirilmiş bir yöntem açıklanır ve bu çubuk ve tüm retinada arasında koni fotoreseptörlerin büyük çoğunluğu zarar verir.

Yetişkin Zebra balığı Retina Rejenerasyon Çalışmaları Kullanım için Yeni Bir Işık Hasar Paradigma

Light-induced retinal degeneration (LIRD) is commonly used in both rodents and zebrafish to damage rod and cone photoreceptors. In adult zebrafish, ...

a-novel-light-damage-paradigm-for-use-retinal-regeneration-studies

Research

JoVE Journal

Neuroscience

10.1K Görüntüleme.  Wayne State University School of Medicine.  Çoklu ışık zarar protokolleri zarar fotoreseptör tarif ve dolayısıyla yetişkin zebrafish bir retina rejenerasyon tepki neden olmuştur. Bu protokol, pigmentli hayvanlarda kullanılabilen geliştirilmiş bir yöntem açıklanır ve bu çubuk ve tüm retinada arasında koni fotoreseptörlerin büyük çoğunluğu zarar verir. 

Video: A Novel Light Damage Paradigm for Use in Retinal Regeneration Studies in Adult Zebrafish

Recording and Analysis of Circadian Rhythms in Running-wheel Activity in Rodents

When rodents have free access to a running wheel in their home cage, voluntary use of this wheel will depend on the time of day1-5. Nocturnal rodents, including rats, hamsters, and mice, are active during the night and relatively inactive during the day. Many other behavioral and physiological measures also exhibit daily rhythms, but in rodents, running-wheel activity serves as a particularly reliable and convenient measure of the output of the master circadian clock, the suprachiasmatic nucleus (SCN) of the hypothalamus. In general, through a process called entrainment, the daily pattern of running-wheel activity will naturally align with the environmental light-dark cycle (LD cycle; e.g. 12 hr-light:12 hr-dark). However circadian rhythms are endogenously generated patterns in behavior that exhibit a ~24 hr period, and persist in constant darkness. Thus, in the absence of an LD cycle, the recording and analysis of running-wheel activity can be used to determine the subjective time-of-day. Because these rhythms are directed by the circadian clock the subjective time-of-day is referred to as the circadian time (CT). In contrast, when an LD cycle is present, the time-of-day that is determined by the environmental LD cycle is called the zeitgeber time (ZT).
Although circadian rhythms in running-wheel activity are typically linked to the SCN clock6-8, circadian oscillators in many other regions of the brain and body9-14 could also be involved in the regulation of daily activity rhythms. For instance, daily rhythms in food-anticipatory activity do not require the SCN15,16 and instead, are correlated with changes in the activity of extra-SCN oscillators17-20. Thus, running-wheel activity recordings can provide important behavioral information not only about the output of the master SCN clock, but also on the activity of extra-SCN oscillators. Below we describe the equipment and methods used to record, analyze and display circadian locomotor activity rhythms in laboratory rodents.

Circadian rhythms in voluntary wheel-running activity in mammals are tightly coupled to the molecular oscillations of a master clock in the brain. As such, these daily rhythms in behavior can be used to study the influence of genetic, pharmacological, and environmental factors on the functioning of this circadian clock.

Kemirgenler Faaliyet teker Running kayıt ve Sirkadiyen Rhythms Analizi

When rodents have free access to a running wheel in their home cage, voluntary use of this wheel will depend on the time of day1-5. Nocturnal rodents, ...

Nörobilim

Retrograde Labeling of Retinal Ganglion Cells in Adult Zebrafish with Fluorescent Dyes

As retrograde labeling retinal ganglion cells (RGCs) can isolate RGCs somata from dying sites, it has become the gold standard for counting RGCs in RGCs survival and regeneration experiments. Many studies have been performed in mammalian animals to research RGCs survival after optic nerve injury. However, retrograde labeling of RGCs in adult zebrafish has not yet been reported, though some alternative methods can count cell numbers in retinal ganglion cell layers (RGCL). Considering the small size of the adult zebrafish skull and the high risk of death after drilling on the skull, we open the skull with the help of acid-etching and seal the hole with a light curing bond, which could significantly improve the survival rate. After absorbing the dyes for 5 days, almost all the RGCs are labeled. As this method does not need to transect the optic nerve, it is irreplaceable in the research of RGCs survival after optic nerve crush in adult zebrafish. Here, we introduce this method step by step and provide representative results.

We introduce an efficient method to retrograde label retinal ganglion cells (RGCs) in adult zebrafish.

Floresan Boyalar Yetişkin Zebra balığı Retina Ganglion Hücreleri retrograd Etiketleme

As retrograde labeling retinal ganglion cells (RGCs) can isolate RGCs somata from dying sites, it has become the gold standard for counting RGCs in RGCs ...

Stab Wound Injury of the Zebrafish Adult Telencephalon: A Method to Investigate Vertebrate Brain Neurogenesis and Regeneration

Adult zebrafish have an amazing capacity to regenerate their central nervous system after injury. To investigate the cellular response and the molecular mechanisms involved in zebrafish adult central nervous system (CNS) regeneration and repair, we developed a zebrafish model of adult telencephalic injury.
In this approach, we manually generate an injury by pushing an insulin syringe needle into the zebrafish adult telencephalon. At different post injury days, fish are sacrificed, their brains are dissected out and stained by immunohistochemistry and/or in situ hybridization (ISH) with appropriate markers to observe cell proliferation, gliogenesis, and neurogenesis. The contralateral unlesioned hemisphere serves as an internal control. This method combined for example with RNA deep sequencing can help to screen for new genes with a role in zebrafish adult telencephalon neurogenesis, regeneration, and repair.

To shed light on the cellular and molecular mechanisms of zebrafish adult neurogenesis and regeneration, we developed a protocol for invasive surgery causing mechanical injuries in the zebrafish adult telencephalon and subsequent monitoring of changes in the stabbed hemisphere by immunohistochemistry or in situ hybridization.

Zebra balığı Yetişkin telencephalon stab Yara Yaralanma: Omurgalı Beyin nöron ve Rejenerasyon Soruşturma Bir Yöntem

Adult zebrafish have an amazing capacity to regenerate their central nervous system after injury. To investigate the cellular response and the molecular ...

The Use of Trace Eyeblink Classical Conditioning to Assess Hippocampal Dysfunction in a Rat Model of Fetal Alcohol Spectrum Disorders

Neonatal rats were administered a relatively high concentration of ethyl alcohol (11.9% v/v) during postnatal days 4-9, a time when the fetal brain undergoes rapid organizational change and is similar to accelerated brain changes that occur during the third trimester in humans. This model of fetal alcohol spectrum disorders (FASDs) produces severe brain damage, mimicking the amount and pattern of binge-drinking that occurs in some pregnant alcoholic mothers. We describe the use of trace eyeblink classical conditioning (ECC), a higher-order variant of associative learning, to assess long-term hippocampal dysfunction that is typically seen in alcohol-exposed adult offspring. At 90 days of age, rodents were surgically prepared with recording and stimulating electrodes, which measured electromyographic (EMG) blink activity from the left eyelid muscle and delivered mild shock posterior to the left eye, respectively. After a 5 day recovery period, they underwent 6 sessions of trace ECC to determine associative learning differences between alcohol-exposed and control rats. Trace ECC is one of many possible ECC procedures that can be easily modified using the same equipment and software, so that different neural systems can be assessed. ECC procedures in general, can be used as diagnostic tools for detecting neural pathology in different brain systems and different conditions that insult the brain.

Trace eyeblink classical conditioning (ECC) was used to assess hippocampal-dependent associative learning in adult rats that were administered a high concentration (11.9% v/v) of alcohol during early neonatal brain development. In general, ECC procedures are sound diagnostic tools for detecting brain dysfunction across many psychological and biomedical settings.

Hipokampal disfonksiyon Fetal alkol spektrum bozuklukları, fare modeli değerlendirmek için izleme Eyeblink Klasik koşullanma kullanımı

Neonatal rats were administered a relatively high concentration of ethyl alcohol (11.9% v/v) during postnatal days 4-9, a time when the fetal brain ...

Modeling Amyloid-&#946;42 Toxicity and Neurodegeneration in Adult Zebrafish Brain

Alzheimer's disease (AD) is a debilitating neurodegenerative disease in which accumulation of toxic amyloid-&#946;42 (A&#946;42) peptides leads to synaptic degeneration, inflammation, neuronal death, and learning deficits. Humans cannot regenerate lost neurons in the case of AD in part due to impaired proliferative capacity of the neural stem/progenitor cells (NSPCs) and reduced neurogenesis. Therefore, efficient regenerative therapies should also enhance the proliferation and neurogenic capacity of NSPCs. Zebrafish (Danio rerio) is a regenerative organism, and we can learn the basic molecular programs with which we could design therapeutic approaches to tackle AD. For this reason, the generation of an AD-like model in zebrafish was necessary. Using our methodology, we can introduce synthetic derivatives of A&#946;42 peptide with tissue penetrating capability into the adult zebrafish brain, and analyze the disease pathology and the regenerative response. The advantage over the existing methods or animal models is that zebrafish can teach us how a vertebrate brain can naturally regenerate, and thus help us to treat human neurodegenerative diseases better by targeting endogenous NSPCs. Therefore, the amyloid-toxicity model established in the adult zebrafish brain may open new avenues for research in the field of neuroscience and clinical medicine. Additionally, the simple execution of this method allows for cost-effective and efficient experimental assessment. This manuscript describes the synthesis and injection of A&#946;42 peptides into zebrafish brain.

Modeling Amyloid-&amp;#946;42 Toxicity and Neurodegeneration in Adult Zebrafish Brain

This protocol describes the synthesis, characterization, and injection of monomeric amyloid-&#946;42 peptides for generating amyloid toxicity in adult zebrafish to establish an Alzheimer&#39;s disease model, followed by histological analyses and detection of aggregations.

Amiloid β42 toksisite ve ateş yetişkin Zebra balığı beyinde modelleme

Alzheimer's disease (AD) is a debilitating neurodegenerative disease in which accumulation of toxic amyloid-&#946;42 (A&#946;42) peptides leads to ...

M&#252;ller Glia Cell Activation in a Laser-induced Retinal Degeneration and Regeneration Model in Zebrafish

A fascinating difference between teleost and mammals is the lifelong potential of the teleost retina for retinal neurogenesis and regeneration after severe damage. Investigating the regeneration pathways in zebrafish might bring new insights to develop innovative strategies for the treatment of retinal degenerative diseases in mammals. Herein, we focused on the induction of a focal lesion to the outer retina in adult zebrafish by means of a 532 nm diode laser. A localized injury allows investigating biological processes that take place during retinal degeneration and regeneration directly at the area of damage. Using non-invasive optical coherence tomography (OCT), we were able to define the location of the damaged area and monitor subsequent regeneration in vivo. Indeed, OCT imaging produces high-resolution, cross-sectional images of the zebrafish retina, providing information which was previously only available with histological analyses. In order to confirm the data from real-time OCT, histological sections were performed and regenerative response after the induction of the retinal injury was investigated by immunohistochemistry.

M&amp;#252;ller Glia Cell Activation in a Laser-induced Retinal Degeneration and Regeneration Model in Zebrafish

The zebrafish is a popular animal model to study mechanisms of retinal degeneration/regeneration in vertebrates. This protocol describes a method to induce localized injury disrupting the outer retina with minimal damage to the inner retina. Subsequently, we monitor in vivo the retinal morphology and the M&#252;ller glia response throughout retinal regeneration.

Bir lazer kaynaklı retina dejenerasyonu, Zebra balığı rejenerasyon modelini Müller Glia hücre aktivasyonu

A fascinating difference between teleost and mammals is the lifelong potential of the teleost retina for retinal neurogenesis and regeneration after ...

Preparing Fresh Retinal Slices from Adult Zebrafish for Ex Vivo Imaging Experiments

The retina is a complex tissue that initiates and integrates the first steps of vision. Dysfunction of retinal cells is a hallmark of many blinding diseases, and future therapies hinge on fundamental understandings about how different retinal cells function normally. Gaining such information with biochemical methods has proven difficult because contributions of particular cell types are diminished in the retinal cell milieu. Live retinal imaging can provide a view of numerous biological processes on a subcellular level, thanks to a growing number of genetically encoded fluorescent biosensors. However, this technique has thus far been limited to tadpoles and zebrafish larvae, the outermost retinal layers of isolated retinas, or lower resolution imaging of retinas in live animals. Here we present a method for generating live ex vivo retinal slices from adult zebrafish for live imaging via confocal microscopy. This preparation yields transverse slices with all retinal layers and most cell types visible for performing confocal imaging experiments using perfusion. Transgenic zebrafish expressing fluorescent proteins or biosensors in specific retinal cell types or organelles are used to extract single-cell information from an intact retina. Additionally, retinal slices can be loaded with fluorescent indicator dyes, adding to the method&#39;s versatility. This protocol was developed for imaging Ca2+ within zebrafish cone photoreceptors, but with proper markers it could be adapted to measure Ca2+ or metabolites in M&#252;ller cells, bipolar and horizontal cells, microglia, amacrine cells, or retinal ganglion cells. The retinal pigment epithelium is removed from slices so this method is not suitable for studying that cell type. With practice, it is possible to generate serial slices from one animal for multiple experiments. This adaptable technique provides a powerful tool for answering many questions about retinal cell biology, Ca2+, and energy homeostasis.

Preparing Fresh Retinal Slices from Adult Zebrafish for Ex Vivo Imaging Experiments

Imaging retinal tissue can provide single-cell information that cannot be gathered from traditional biochemical methods. This protocol describes preparation of retinal slices from zebrafish for confocal imaging. Fluorescent genetically encoded sensors or indicator dyes allow visualization of numerous biological processes in distinct retinal cell types.

Ex Vivo deneyler görüntüleme için yetişkin Zebra balığı üzerinden hazırlanması taze retina dilimleri

The retina is a complex tissue that initiates and integrates the first steps of vision. Dysfunction of retinal cells is a hallmark of many blinding ...

Ablation of a Neuronal Population Using a Two-photon Laser and Its Assessment Using Calcium Imaging and Behavioral Recording in Zebrafish Larvae

To identify the role of a subpopulation of neurons in behavior, it is essential to test the consequences of blocking its activity in living animals. Laser ablation of neurons is an effective method for this purpose when neurons are selectively labeled with fluorescent probes. In the present study, protocols for laser ablating a subpopulation of neurons using a two-photon microscope and testing of its functional and behavioral consequences are described. In this study, prey capture behavior in zebrafish larvae is used as a study model. The pretecto-hypothalamic circuit is known to underlie this visually-driven prey catching behavior. Zebrafish pretectum were laser-ablated, and neuronal activity in the inferior lobe of the hypothalamus (ILH; the target of the pretectal projection) was examined. Prey capture behavior after pretectal ablation was also tested.

Here, we present a protocol to ablate a genetically labeled subpopulation of neurons by a two-photon laser from Zebrafish larvae.

Ablasyon nöronal nüfusunun iki fotonlu lazer ve kalsiyum görüntüleme ve davranış kayıt zebra balığı larva kullanarak kendi değerlendirme kullanma

To identify the role of a subpopulation of neurons in behavior, it is essential to test the consequences of blocking its activity in living animals. Laser ...

A Novel In Vitro Model of Blast Traumatic Brain Injury

Traumatic brain injury is a leading cause of death and disability in military and civilian populations. Blast traumatic brain injury results from the detonation of explosive devices, however, the mechanisms that underlie the brain damage resulting from blast overpressure exposure are not entirely understood and are believed to be unique to this type of brain injury. Preclinical models are crucial tools that contribute to better understand blast-induced brain injury. A novel in vitro blast TBI model was developed using an open-ended shock tube to simulate real-life open-field blast waves modelled by the Friedlander waveform. C57BL/6N mouse organotypic hippocampal slice cultures were exposed to single shock waves and the development of injury was characterized up to 72 h using propidium iodide, a well-established fluorescent marker of cell damage that only penetrates cells with compromised cellular membranes. Propidium iodide fluorescence was significantly higher in the slices exposed to a blast wave when compared with sham slices throughout the duration of the protocol. The brain tissue injury is very reproducible and proportional to the peak overpressure of the shock wave applied.

A Novel In Vitro Model of Blast Traumatic Brain Injury

This paper describes a novel model of primary blast traumatic brain injury. A compressed-air driven shock tube is used to expose in vitro mouse hippocampal slice cultures to a single shock wave. This is a simple and rapid protocol generating a reproducible brain tissue injury with a high throughput.

Patlama travmatik beyin hasarı roman Vitro modeli

Traumatic brain injury is a leading cause of death and disability in military and civilian populations. Blast traumatic brain injury results from the ...

An Emerging Target Paradigm to Evoke Fast Visuomotor Responses on Human Upper Limb Muscles

To reach towards a seen object, visual information has to be transformed into motor commands. Visual information such as the object&#8217;s color, shape, and size are processed and integrated within numerous brain areas, then ultimately relayed to the motor periphery. In some instances, a reaction is needed as fast as possible. These fast visuomotor transformations, and their underlying neurological substrates, are poorly understood in humans as they have lacked a reliable biomarker. Stimulus-locked responses (SLRs) are short latency (&#60;100 ms) bursts of electromyographic (EMG) activity representing the first wave of muscle recruitment influenced by visual stimulus presentation. SLRs provide a quantifiable output of rapid visuomotor transformations, but SLRs have not been consistently observed in all subjects in past studies. Here we describe a new, behavioral paradigm featuring the sudden emergence of a moving target below an obstacle that consistently evokes robust SLRs. Human participants generated visually guided reaches toward or away from the emerging target using a robotic manipulandum while surface electrodes recorded EMG activity from the pectoralis major muscle. In comparison to previous studies that investigated SLRs using static stimuli, the SLRs evoked with this emerging target paradigm were larger, evolved earlier, and were present in all participants. Reach reaction times (RTs) were also expedited in the emerging target paradigm. This paradigm affords numerous opportunities for modification that could permit systematic study of the impact of various sensory, cognitive, and motor manipulations on fast visuomotor responses. Overall, our results demonstrate that an emerging target paradigm is capable of consistently and robustly evoking activity within a fast visuomotor system.

Presented here is a behavioral paradigm that elicits robust fast visuomotor responses on human upper limb muscles during visually guided reaches.

İnsan Üst Ekstremite Kaslarında Hızlı Visuomotor Tepkiler uyandırmak için Yükselen Bir Hedef Paradigma

To reach towards a seen object, visual information has to be transformed into motor commands. Visual information such as the object&#8217;s color, shape, ...