This work was funded by a New Faculty Award II from the California Institute of Regenerative Medicine (CIRM; RN2-00921-1), NIH-funded National Research Award (F32-HL104924), and CIRM Training Grant (TG21163). Materials were provided by: Glycosan Biosystems Inc / BioTime and Dr. Stephen Badylak (University of Pittsburgh)

PNIPAAM kaplı Tabaklar 1. Yaratılış <ol><li> % 60 toluen /% 40 heksan solüsyonu 2 ml pNIPAAM arasında 2.6 g çözülür. </li><li> PNIPAAM çözünene kadar karıştırılır, 10 dakika boyunca 60 ° C&#39;ye kadar karışım ısıtılır. </li><li> Büchner hunisi bir 60 mm çapında bir daire ve bir yerde kağıt içine filtre kağıdı kesin. </li><li> Önceden tartılmış bir cam kabın içine Buchner hunisinden çözeltisi (heksan plastikleri eritmemesi gibi, plastik kullanmayın) filtre. </li><li> Bir çan vakum (24 psi) O / N (16 saat) içine kabını ve içeriğini yerleştirin. Not: Artık madde isopropil reaksiyona girinceye kadar çok oksijen ile temas olmadığından emin olmak oksitlenir. </li><li> PNIPAAM ağırlığını tespit etmek için bir beher tartılır. </li><li> Çözeltisi bir a / a 50/50 oluşturarak, pNIPAAM izopropil alkol ekleyin. </li><li> UV ışığı altında 5 dakika boyunca doku kültür plakasının yüzeyinde çözeltisi ve ceket 2 ml yerleştirin. </li><li> Katı iki kez sıcak PBS ile 2 ml plakayı yıkayınHücre kültürü için kullanmadan önce. </li></ol> Hücre Sheets 2. Yaratılış Not: hedef organ birincil hücrelerin hücre katların farklı bir dizi yöntem kullanılarak oluşturulabilir, ya da burada tarif edildiği gibi termo-duyarlı polimer ile doku kültür yüzeylerin kaplanması ile. Ön kaplanmış ısıya duyarlı plakaları, aynı satıcıdan tarafından sunulmaktadır. Not: Bu protokol, 35 mm tabak kullanarak kültür içindir. Kısaca açıklamak gerekirse hücreler önce, bitişik hücreler arasında yanal bağlantı kurmak için birleşme noktasında 24 saat arasında, en az 37 ° C&#39;de inkübe edilir. Hücre tabakaları açmak için, plakalar, 32 ° C&#39;nin altındaki bir sıcaklıkta tabi tutulur. Hücre tabaka daha sonra, vasküler endotel hücreleri ile bir neovasküler hidrojel içeren izin veren güçlü baz lifli matrise transfer edilir. <ol><li> Hücre popülasyonu izole. Not: Bu yöntem, bireysel türev usul ve hücre tipine bağlıdır. Sıçan aorta ait yumuşak uSistemik lupus hücreleri (RASMC) bu örnekte kullanılmıştır. Bunlar, bir sıçan karın aortundan izole edilen primer düz kas hücreleridir. </li><li> Sıcak 2 ml PBS ile hücreleri yıkayın. </li><li> 5 dakika boyunca, hücrelere tripsin (ya da diğer molekül ayrılması / ayrışarak çözelti) 3 ml ilave edilir. </li><li> % 10 Fetal Sığır Serumu (FBS) içeren kültür ortamı ya da fosfat tampon solüsyonu (PBS) 3 ml tripsin ilave edilmesi ile inhibe eder. </li><li> Konik bir tüp içinde hücreleri toplamak ve bir kısım sayısı. </li><li> 5 dakika boyunca 1000 rpm&#39;de (228 xg) hücreleri dönerler. </li><li> Süpernatantı aspire ve büyüme ortamı hücreleri tekrar süspansiyon (SmGM2 artı mermi kiti kültür ortamı RASMC için kullanılır). </li><li> 100% izdiham elde edileceği bir konsantrasyonda pNIPAAM kaplı plaka - 35 mm bir ısıya-duyarlı levha üzerindeki hücreleri ihtiva eden ortam yerleştirin. Not: RASMCs için bu sayı / cm2 100,000 hücre olduğu belirlenmiştir. Bu va Bununla birlikte, bağlı geçen boyunca hücrelerin kaybı,% 120<html> Lue kullanılır. </li><li> 37 ° CO / N bir kuvöz içine yerleştirin. Not: levhaya hücre yapışmasını sağlamak için, 37 ° C&#39;de hücreleri korumak için önemlidir. </li></ol> Foundational Matrix 3. hazırlanması Not: Çeşitli 3D lifli matrisleri hassas hücre tabakaları arasında güçlü bir elyaflı matris tabaka için kullanılabilir. Bazı örnekler: gelfoam, biyo-cam, doğal asellülarize malzeme 26 ya da nanospun malzeme 27,28 Bu çalışmalarda kullanılan domuz mesane matrisi (UBM) cömertçe ortak çalışan Dr Badylak sağlandı 29. <ol><li> Hücresizleştirilmiş matris kullanıldığında, hücresel içeriği olmaması da dahil olmak üzere matris özelliklerini belirlemek 27,28, hücre spesifik canlılığı ve boş hacim, Kullanımdan önce. 22 </li><li> Arzu edilen bir boyut ve şekil, önceden sterilize edilmiş matris kesin. Not: Burada, bir delik yumruk 4 mm çaplı daire kesmek için kullanılır. </li></ol>ve_title &quot;&gt; 4. bir Neovasküler Hoşgörülü Hidrojeli içine Tohumculuk Endotel Hücreleri Not: Endotel hücreleri, kök veya projenitör hücrelerinin farklılaşma dahil olmak üzere çeşitli kaynaklardan elde edilen edilebilir. Burada, HuVECler kullanılır. <ol><li> Çapraz bağlama süresi olduğu sürece herhangi bir geçirgen hidrojel (fibrin, kolajen jeli) kullanarak canlı hücreler kalmak izin verecek kadar kısadır. Not: Burada, Hiyalüronan (HA) bazlı bir jel, bir disülfid köprüsü ile birlikte kullanılan çapraz bağlanmış olabilir. </li><li> Işletme protokolüne uygun olarak HA hidrojel hazırlayın. </li><li> Endotel hücrelerini toplamak ve 1x tripsin kullanılarak, tek bir hücre çözeltisi içine dağılırlar. Not: Accutase ya da hücre ayırma tamponu, aynı zamanda, tek bir hücre dağılımı için kullanılabilir. </li><li> Ya da PBS içinde% 10 FBS çözelti / 15 ml konik bir tüp hücre toplanmasını içerir (bu hücrelerin serumu ile temas etmemesi çok önemlidir ise) soya fasulyesi tripsin inhibitörü eşit miktarda kullanılarak tripsin enzimi devre dışı bırakır. </li><li> Chücreleri ount ve yama boyutları için gerekli hacmini hesaplamak (daha önce sayısal). Not: 4 mm yama için, buraya 2.000.000 endotel hücreleri kullanılır. </li><li> 2 milyondan hücreleri Özü ve yeni bir 15 ml konik tüp içine yerleştirin. </li><li> 5 dakika boyunca (228 xg) dönerler. </li><li> Bir konik bir tüp içinde bir pelet gibi hücreleri bırakarak, süpernatan aspire. </li><li> 1 oranından: 1, HA ve jelatin sıvı malzeme karıştırın. Daha sonra pelet içeren konik tüp içine, toplam hacmin% 80 ekleyin. </li><li> 1, HA / Jelatin karışımı: 1 endotel hücrelerinin yeniden süspanse </li><li> Kademe 2 de elde baz lifli matris içine HA / Jelatin karışımı içinde süspansiye edilmiş hücreler yerleştirin. </li><li> Çapraz bağlayıcının istenen toplam hacminin 1/5 (yüzde 20) ilave </li><li> 37 ° C&#39;de 1 saat süreyle inkübe edin. </li></ol> Hücre Sheets 5. İzolasyon <ol><li> Bir hücre kültür kaput bekletildi ve yerden hücreleri ihtiva eden 35 mm pNIPAAM-işlemden geçirilmiş olan levhalarda kaldırRT. </li><li> Hızlı bir şekilde hücrelerden ortam havalandırın, ve 37 ° C&#39;ye ısıtılmış olan% 6, normal jelatin 2 ml ekleyin. </li><li> Jelatin hala sıcak iken, normal jelatin (Film 1) yüzeyinin altına daldırılması, jelatin içine metal kafes yerleştirin. </li><li> Jelatin sertleşmesine izin 5-7 dakika boyunca buz üzerine tüm plaka koyun. </li><li> 7 dakika sonra, dikkatli bir şekilde levhanın yan kenarları jelatin ayırmak için bir ıspatula kullanarak ve daha sonra plaka Not metal kafes kaldırmak için forseps kullanımı:% 6 jelatin ve hücre yapraklan çıtalı kaldırmalıdır. </li><li> Çanak hücre tabakasını taşı ve dikkatli bir yapının üzerine kafes ayarı, baz lifli matris, hidrojel kombinasyonunun üzerine yerleştirin. Not: hücre tabakanın tepe tarafı hala en üst konumunda olacaktır. </li><li> Sıcak ortamda (37 ° C) 2 ml ekleyin. </li><li> O / N, hidrojel yüzeyine yapışma hücrelerinin Ön izin inkübe edin. </li><li> T kaldırÇözelti (yaklaşık 1 saat), ya da bir sonraki gün ısındıktan sonra o, metal kafes. </li></ol>

<ol>
	<li>Ohashi, K., Okano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+tissue+engineering+of+the+liver+and+islets.">Functional tissue engineering of the liver and islets.</a> Anat Rec (Hoboken). 297, 73-82 (2014).</li><li>Chen, Q. Z., Harding, S. E., Ali, N. N., Lyon, A. R., Boccaccini, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomaterials+in+cardiac+tissue+engineering:+Ten+years+of+research+survey.">Biomaterials in cardiac tissue engineering: Ten years of research survey.</a> Mat Sci Eng R. 59, 1-37 (2008).</li><li>Jakob, P., Landmesser, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+status+of+cell-based+therapy+for+heart+failure.">Current status of cell-based therapy for heart failure.</a> Curr Heart Fail Rep. 10, 165-176 (2013).</li><li>Tongers, J., Losordo, D. W., Landmesser, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+and+progenitor+cell-based+therapy+in+ischaemic+heart+disease:+promise,+uncertainties,+and+challenges.">Stem and progenitor cell-based therapy in ischaemic heart disease: promise, uncertainties, and challenges.</a> Eur Heart J. 32, 1197-1206 (2011).</li><li>Etzion, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+embryonic+cardiomyocyte+transplantation+on+the+progression+of+heart+failure+in+a+rat+model+of+extensive+myocardial+infarction.">Influence of embryonic cardiomyocyte transplantation on the progression of heart failure in a rat model of extensive myocardial infarction.</a> J Mol Cell Cardiol. 33, 1321-1330 (2001).</li><li>Masuda, S., Shimizu, T., Yamato, M., Okano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+sheet+engineering+for+heart+tissue+repair.">Cell sheet engineering for heart tissue repair.</a> Adv Drug Deliv Rev. 60, 277-285 (2008).</li><li>Koh, G. Y., Soonpaa, M. H., Klug, M. G., Field, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+for+myocardial+repair.">Strategies for myocardial repair.</a> J Interv Cardiol. 8, 387-393 (1995).</li><li>Li, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Construction+of+a+bioengineered+cardiac+graft.">Construction of a bioengineered cardiac graft.</a> J Thorac Cardiovasc Surg. 119, 368-375 (2000).</li><li>Muller-Ehmsen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rebuilding+a+damaged+heart:+long-term+survival+of+transplanted+neonatal+rat+cardiomyocytes+after+myocardial+infarction+and+effect+on+cardiac+function.">Rebuilding a damaged heart: long-term survival of transplanted neonatal rat cardiomyocytes after myocardial infarction and effect on cardiac function.</a> Circulation. , 105-1720 (2002).</li><li>Reinecke, H., Zhang, M., Bartosek, T., Murry, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival,+integration,+and+differentiation+of+cardiomyocyte+grafts:+a+study+in+normal+and+injured+rat+hearts.">Survival, integration, and differentiation of cardiomyocyte grafts: a study in normal and injured rat hearts.</a> Circulation. , 100-193 (1999).</li><li>Roell, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+cardiomyoplasty+improves+survival+after+myocardial+injury.">Cellular cardiomyoplasty improves survival after myocardial injury.</a> Circulation. 105, 2435-2441 (2002).</li><li>Soonpaa, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+approaches+for+myocardial+regeneration.">Potential approaches for myocardial regeneration.</a> Ann N Y Acad Sci. 752, 446-454 (1995).</li><li>Akins, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+tissue+engineering+mend+broken+hearts.">Can tissue engineering mend broken hearts.</a> Circ Res. 90, 120-122 (2002).</li><li>Goodell, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+plasticity+in+muscle+and+bone+marrow.">Stem cell plasticity in muscle and bone marrow.</a> Ann N Y Acad Sci. 938, 208-218 (2001).</li><li>Menasche, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myoblast+transplantation+for+heart+failure.">Myoblast transplantation for heart failure.</a> Lancet. 357, 279-280 (2001).</li><li>Murry, C. E., Wiseman, R. W., Schwartz, S. M., Hauschka, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skeletal+myoblast+transplantation+for+repair+of+myocardial+necrosis.">Skeletal myoblast transplantation for repair of myocardial necrosis.</a> J Clin Invest. 98, 2512-2523 (1172).</li><li>Orlic, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplanted+adult+bone+marrow+cells+repair+myocardial+infarcts+in+mice.">Transplanted adult bone marrow cells repair myocardial infarcts in mice.</a> Ann N Y Acad Sci. 938, 221-229 (2001).</li><li>Elia, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silk-hyaluronan-based+composite+hydrogels:+a+novel,+securable+vehicle+for+drug+delivery.">Silk-hyaluronan-based composite hydrogels: a novel, securable vehicle for drug delivery.</a> J Biomater Appl. 27, 749-762 (2013).</li><li>Kai, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell-loaded+nanofibrous+patch+promotes+the+regeneration+of+infarcted+myocardium+with+functional+improvement+in+rat+model.">Stem cell-loaded nanofibrous patch promotes the regeneration of infarcted myocardium with functional improvement in rat model.</a> Acta Biomater. , (2014).</li><li>Hong, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracheal+reconstruction+using+chondrocytes+seeded+on+a+poly(l-lactic-co-glycolic+acid)-fibrin/hyaluronan.">Tracheal reconstruction using chondrocytes seeded on a poly(l-lactic-co-glycolic acid)-fibrin/hyaluronan.</a> J Biomed Mater Res A. , (2014).</li><li>Serpooshan, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+bioengineered+acellular+collagen+patch+on+cardiac+remodeling+and+ventricular+function+post+myocardial+infarction.">The effect of bioengineered acellular collagen patch on cardiac remodeling and ventricular function post myocardial infarction.</a> Biomaterials. 34, 9048-9055 (2013).</li><li>Turner, W. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+tissue+development+for+delivery+of+embryonic+stem+cell-derived+endothelial+and+cardiac+cells+in+natural+matrices.">Cardiac tissue development for delivery of embryonic stem cell-derived endothelial and cardiac cells in natural matrices.</a> J Biomed Mater Res B Appl Biomater. 100, 2060-2072 (2012).</li><li>Sato, M., Yamato, M., Hamahashi, K., Okano, T., Mochida, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Articular+cartilage+regeneration+using+cell+sheet+technology.">Articular cartilage regeneration using cell sheet technology.</a> Anat Rec (Hoboken). 297, 36-43 (2014).</li><li>Sawa, Y., Miyagawa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Present+and+future+perspectives+on+cell+sheet-based+myocardial+regeneration+therapy.">Present and future perspectives on cell sheet-based myocardial regeneration therapy.</a> Biomed Res Int. 2013, 583912 (2013).</li><li>Demirbag, B., Huri, P. Y., Kose, G. T., Buyuksungur, A., Hasirci, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advanced+cell+therapies+with+and+without+scaffolds.">Advanced cell therapies with and without scaffolds.</a> Biotechnol J. 6, 1437-1453 (2011).</li><li>Song, J. J., Ott, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+engineering+based+on+decellularized+matrix+scaffolds.">Organ engineering based on decellularized matrix scaffolds.</a> Trends Mol Med. 17, 424-432 (2011).</li><li>Badylak, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+extracellular+matrix+as+an+inductive+scaffold+for+the+partial+replacement+of+functional+myocardium.">The use of extracellular matrix as an inductive scaffold for the partial replacement of functional myocardium.</a> Cell Transplant. 15, S29-S40 (2006).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lineage+restriction+of+human+hepatic+stem+cells+to+mature+fates+is+made+efficient+by+tissue-specific+biomatrix+scaffolds.">Lineage restriction of human hepatic stem cells to mature fates is made efficient by tissue-specific biomatrix scaffolds.</a> Hepatology. 53, 293-305 (2011).</li><li>Gilbert, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen+fiber+alignment+and+biaxial+mechanical+behavior+of+porcine+urinary+bladder+derived+extracellular+matrix.">Collagen fiber alignment and biaxial mechanical behavior of porcine urinary bladder derived extracellular matrix.</a> Biomaterials. 29, 4775-4782 (2008).</li><li>Luna, J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiscale+biomimetic+topography+for+the+alignment+of+neonatal+and+embryonic+stem+cell-derived+heart+cells.">Multiscale biomimetic topography for the alignment of neonatal and embryonic stem cell-derived heart cells.</a> Tissue Eng Part C Methods. 17, 579-588 (2011).</li></ol>

We have nothing to disclose.

Protokolde kritik adımlar şunlardır: thermoresponsive polimer ile levha yüzeylerinin kaplanması ve plakaların soğutulduktan sonra hücre tabakalan manipüle. Farklı hücrelerin farklı fiziksel özellikler sergiler, çünkü yapışkanlık gibi, kaldırma zaman her bir farklı bir hücre tipi için optimize edilmelidir. Bu protokolün ikinci ve en önemlisi zorlu bileşeni, hücre zarının, doku montaj yöntemleri eleştirel bir yönü manipülasyon merkezleri. Hücre sayfasındaki tek hücre tabakası oldukça...

Injection of cells and/or single materials alone has shown variable success in other organ systems and limited success in cardiac regeneration.5,7-12 Currently, stem cell-derived cells are delivered to damaged tissue using a variety of delivery methods including: direct cell injection into tissue and perfusion into the blood supply.13-17 Others have implanted cells alone, materials alone and/or in combination with material carriers to help regenerate damaged organs.18-21 This design combines multiple strategies that provide material strength, patterning in multiple materials and multiple cell types. 
Specifically, the base acellularized fibrous matrix provides the foundational physical strength to the construct, making it suitable for suturing in into the patient, if necessary. The void spaces in the base matrix are filled with endothelial cells in a neovascular permissive hydrogel22 for rapidly establishing vascularization of the implanted construct. This composite is then integrated with pre-patterned cell sheets that allow enhanced cell-to-cell communication, more closely mimic the native tissue.1,23-25 The overall production process for the layered cellular patch is outlined by the flowchart in Figure 1.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="695">
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:207px;">Table of Reagents:</td>
			<td style="width:128px;"></td>
			<td style="width:140px;"></td>
			<td style="width:221px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:207px;">Reagent</td>
			<td style="width:128px;">Company</td>
			<td style="width:140px;">Catalogue number</td>
			<td style="width:221px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">Calcein-AM</td>
			<td style="width:128px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:140px;">C3099</td>
			<td style="width:221px;">Cell tracker / live dye</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">Lysotracker Red</td>
			<td style="width:128px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:140px;">L7528</td>
			<td style="width:221px;">Cell tracker</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">Neutral Red</td>
			<td style="width:128px;">Sigma</td>
			<td style="width:140px;">N7005</td>
			<td style="width:221px;">Visible Cell dye</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:207px;">pNIPAAM</td>
			<td style="width:128px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:140px;">412780250</td>
			<td style="width:221px;">Poly(N-isopropylacrylamide)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">Toluene</td>
			<td style="width:128px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:140px;">244511-1L</td>
			<td style="width:221px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">Hexane</td>
			<td style="width:128px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:140px;">296090-1L</td>
			<td style="width:221px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">RAOSMC</td>
			<td style="width:128px;">Lonza</td>
			<td style="width:140px;">R-ASM-580</td>
			<td style="width:221px;">Rat Aortic Smooth Muscle Cells</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:207px;">SmGM2</td>
			<td style="width:128px;">Lonza</td>
			<td style="width:140px;">CC-4149</td>
			<td style="width:221px;">Smooth Muscle Media</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:207px;">HUVEC</td>
			<td style="width:128px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:140px;">C-003-5C</td>
			<td style="width:221px;">Human Venous Endothelial Cells</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">HyStem</td>
			<td style="width:128px;">Glycosan/Biotime</td>
			<td style="width:140px;">------------</td>
			<td style="width:221px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">Isopropyl alcohol</td>
			<td style="width:128px;">VWR International</td>
			<td style="width:140px;">BDH1133-4LP</td>
			<td style="width:221px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">Trypsin</td>
			<td style="width:128px;">Corning Cellgro</td>
			<td style="width:140px;">25-053-C1</td>
			<td style="width:221px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">PBS</td>
			<td style="width:128px;">Gibco</td>
			<td style="width:140px;">14287-072</td>
			<td style="width:221px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:207px;">FBS</td>
			<td style="width:128px;">Gibco</td>
			<td style="width:140px;">16140-071</td>
			<td style="width:221px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;">Table of Specific Equipment:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">&#160;Equipment&#160;</td>
			<td style="width:128px;">&#160;Company&#160;</td>
			<td style="width:140px;">&#160;Catalogue number&#160;</td>
			<td style="width:221px;">&#160;Comments (optional)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">&#160;Filter paper&#160;</td>
			<td style="width:128px;">&#160;Ahlstrom&#160;</td>
			<td style="width:140px;">&#160;6310-0900&#160;</td>
			<td style="width:221px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">&#160;Buchner Funnel&#160;</td>
			<td style="width:128px;">&#160;Sigma Aldrich&#160;</td>
			<td style="width:140px;">&#160;Z247308&#160;</td>
			<td style="width:221px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">&#160;UpCell Plates&#160;</td>
			<td style="width:128px;">&#160;Nunc&#160;</td>
			<td style="width:140px;">&#160;2014-11&#160;</td>
			<td style="width:221px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:207px;">&#160;UV light.&#160;</td>
			<td style="width:128px;">&#160;Jelight Company&#160;</td>
			<td style="width:140px;">&#160;UVO Cleaner Model No.42&#160;</td>
			<td style="width:221px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

tissue engineering: construction of a multicellular 3d scaffold for the delivery of layered cell sheets

Böyle yetişkin insan kalpleri gibi birçok dokular, yeterince hasar sonra yeniden edemiyoruz. Doku mühendisliği 2,3 Stratejileri kurtarma ve tamir vücut yardımcı yenilikler öneriyoruz. Örneğin, TE yaklaşımlar miyokard infarktüsü (MI) sonrası kalp biçimlenme zayıflatır ve muhtemelen normale yakın ön-MI düzeyine toplam kalp fonksiyonunu artırmak mümkün olabilir. 4, kalp dokusu başarılı rejenerasyon doğru teslimini içeren herhangi bir fonksiyonel doku gibi implante hücre / doku greft entegrasyonu ve hayatta lehine çevre ipuçları ile birden fazla hücre tipleri. Verme araçları, hücre hayatta kalması üzerindeki etkileri, malzeme mukavemeti, ve hücre-doku organizasyon kolaylaştırılması olarak değerlendirildiğinde çözünür sinyalleri, hücre-hücre etkileşimleri ve matris malzemeleri: İşlenmiş dokular da dahil olmak üzere, birden çok parametre yönelik olmalıdır. Greft hücreleri doğrudan enjeksiyon sadece bu temel unsurlarını görmezden istihdam Çalışmaları. 2,5,6Bu malzemelerle birleştirerek bir doku tasarım henüz geliştirilecek gelmiştir. Burada, &quot;doku&quot; olarak yeni damar oluşumunun arttırılması için hedef organ, hücre tipi ve endotelial hücreleri içeren biyolojik şekilde türetilmemiş malzemelerden iki ayrı tip desenli hücre tabakaları perdelenmesini kullanarak entegre tasarımlarının bir örnek sunulmuştur. Bu çalışmalar kalp-benzeri doku nesil odaklanmış olsa da, bu doku tasarım, minimal tasarım ve malzeme değişiklikleri ile kalp daha başka birçok organ uygulanabilir ve rejeneratif tedaviler için bir off-the-raf ürünü olması gerekiyordu. Protokol beş ayrıntılı adımlar içermektedir. Bir ısıya duyarlı Poli (N -isopropylacrylamide) (pNIPAAM) kat doku kültür tabaklarına kullanılır. Daha sonra, doku spesifik hücreler, güçlü bir yan yapışıklığı hücre tabakaları meydana getirmek üzere kaplanmış plakalar / mikrodesenlerle yüzeylerin yüzeyi üzerinde kültürlenmiştir. Üçüncü olarak, bir taban matris neovasküler üreti gözenekli bir matris ile birleştirerek dokusu oluşturulurhidrojeller ve endotel hücreleri ettik. Son olarak, hücre tabakaları pNIPAAM kaplı kaplar kaldırılır ve komple yapı yapım taban elemanına transfer edilir.

Akış diyagramıdır (Şekil 1) çok tabakalı yama yapılması için genel bir yöntem gösterir. Hücre levhalar 32 ° C&#39;nin altında bırakarak pNIPAAM tedavi plaka ayrılmaktadır. Daha sonra hücre tabakası altta uzanan elyaflı matrisi (Şekil 1) içine ekildi endotel hücreleri içeren çapraz bağlanmış hidrojel üstüne yerleştirilir. Önceden işlem görmüş ısıya duyarlı Levhalar, aynı zamanda, hücre tabakaları oluşturmak için kullanılabilir. Özel topoloji...

Watch this Scientific Journal Video about Tissue Engineering: Construction of a Multicellular 3D Scaffold for the Delivery of Layered Cell Sheets at JoVE.com

Tissue Engineering: Construction of a Multicellular 3D Scaffold for the Delivery of Layered Cell Sheets

For creation of highly organized structures of complex tissue, one must assemble multiple material and cell types into an integrated composite. This combinatorial design incorporates organ-specific layered cell sheets with two distinct biologically-derived materials containing a strong fibrous matrix base, and endothelial cells for enhancing new vessels formation.

Doku Mühendisliği: Katmanlı Hücre Sheets teslimi için bir Multisellüler 3D İskele İnşaatı

Many tissues, such as the adult human hearts, are unable to adequately regenerate after damage.2,3 Strategies in tissue engineering propose innovations to ...

tissue-engineering-construction-multicellular-3d-scaffold-for

Research

JoVE Journal

Bioengineering

14.3K Görüntüleme.  University of California, Merced. For creation of highly organized structures of complex tissue, one must assemble multiple material and cell types into an integrated composite. This combinatorial design incorporates organ-specific layered cell sheets with two distinct biologically-derived materials containing a strong fibrous matrix base, and endothelial cells for enhancing new vessels formation.