Yazarlar akış sitometri ile onu mükemmel teknik yardım için Alison Logar teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma Savunma Bakanlığı (JH), Henry J. Mankin Endowed Başkanı (JH), Eğitim ve Kazakistan Cumhuriyeti Bilim Bakanlığı (AS) hibe ile desteklenmiştir. CWC Amerikan Kalp Derneği predoctoral bursu (11PRE7490001) tarafından kısmen desteklenmiştir. M.Corselli Rejeneratif Tıp eğitim bursu için California Institute (TG2-01169) tarafından desteklenmiştir.

1. Kas Biyopsi İşleme <ol><li> Dulbecco Modifiye Edilmiş Eagle Ortamı,% 5 fetal sığır serumu (FBS) ile desteklenmiş (DMEM) içinde buz üzerinde insan iskelet kası biyopsisi Koruma% 1 Penisilin-Streptomisin taşıma sırasında (P / S). </li><li> Kas biyopsi alınmasından sonra, taşıma kabından örnek çıkarın ve steril şartlar altında% 2 antifungal antibiyotik solüsyon (A / A) ile doldurulmuş fosfat-tamponlu salin (PBS) içinde iki kere yıkayın. </li><li> 2% A / A ile takviye edilmiş DMEM içinde steril makas ve forsepsle bağlı yağ ve bağ doku çıkarın. </li><li> Diseksiyon mikroskobu altında büyük kan damarları sökülmesi ve daha sonra küçük parçalar (boyut &lt;1 cm2) içine, kas numune kesin. </li><li> 20 mi muhafaza ortamında kesme kas parça (&lt;5 gram) korumak (PM, DMEM,% 10 FBS ve% 1 P / S ile takviye edilmiş) kadar 5 gün boyunca 4 ℃ de. </li></ol> 2. Kas Dissociatiyonu ve Hücre İzolasyonu <ol><li> Hücre izolasyon gününde, PM kas parçaları kaldırmak ve PBS içinde iki kez yıkayın% 2 P / S ile desteklenmiş. Sindirim solüsyonu yapmak için, tip I, tip II ve tip IV kolajenazları taze PM halinde (100 mg / ml) ilave edilmektedir. </li><li> Ince ince doğrayın ve çözüm hiçbir pıhtılaşması ile 10 ml serolojik pipet geçene kadar mekanik PM küçük bir miktar ile bir petri kabına steril makas ve forseps ile kas parçaları kıyma. Bu işlem sırasında kalan yağ ve bağ doku çıkarın. Yetişkin kas en az 8-10 gram ya da her bir hücre izolasyonu fetal kas 2 gram kullanın. </li><li> 20 ml (veya 10 ml cenin kıyılmış kas 2 gram) 10 ml&#39;lik bir pipet ile serolojik sindirim solüsyonunun kesitler kıyılır yetişkin kas 4-5 gram aktarın. 80 rpm - 70 ° C&#39;de bir orbital çalkalayıcı üzerinde 37 ° C&#39;de 60 dakika ℃ - 50 Digest. Buna göre miktarına bağlı olarak sindirim süresi ve / veya çalkalama hızının ayarlanmasıyla, hücre yüzey antijeni, verim ve koruma optimizedoku. Bulanıklık neredeyse silinene kadar sindirim durumunu her 15-20 dk gözlemleyin. </li><li> Şiddetle sindirilmiş dokuya 10 ml serolojik pipet ile 3-5 kez pipetle. Reaksiyonu durdurmak ve daha sonra 4 dakika boyunca 400 x g&#39;de santrifüj PM eşit miktarda ekleyin. </li><li> Dikkatlice süpernatant kaldırmak; yıkamak için 10 mL PM olarak pelet, ve daha sonra 100 um&#39;lik bir hücre süzgecinden süzülmüştür. </li><li> 4 dakika boyunca 400 x g&#39;de santrifüj ve dikkatle süpernatant kaldırmak. Eritrosit lisiz tamponu (155 mM NH4CI, 10 mM KHCO 3, 0,1mm EDTA), tek bir hücre süspansiyonu elde etmek için bir 70 mikron hücre süzgecinden filtre ve daha sonra oda sıcaklığında 10 dakika boyunca inkübe pelet tekrar. Herhangi bir yağış görülmektedir tekrar bir 70-m hücre süzgecinden Filtre. </li><li> 4 dakika boyunca 400 x g&#39;de santrifüje ve 0.5 ml PBS içinde hücre pelletini. Hücrelerin sayısını. Hücre sıralama için en az 5.000.000 hücre toplam elde edilir. SINGL sulandırmakboyama için PBS ile ml başına en az 5.000.000 hücrelere e hücre süspansiyonu. Kontrol boyamalar için 11 tüpleri (lekesiz kontrolü, negatif kontroller ve tek renkli pozitif kontroller) içine hücre süspansiyonu ve bölünmüş 50-100 ul dışarı atın. </li></ol> 3. Hücre Etiketleme ve sıralama <ol><li> Gerekirse amacı bloke edilmesi için (PBS içinde 1:10 seyreltilmiş) fare serumu 4 ℃ de 10 dakika boyunca tek bir hücre süspansiyonu inkübe edin. </li><li> Tek bir hücre süspansiyonu içine (100 tüm 1) ve 4 ℃ de 20 dakika boyunca inkübe CD34-APC, CD45, APC-Cy7, CD56-PE-Cy7, CD144 PE-ve FITC-CD146 ekleyin. Negatif kontrol için, APC- APC-Cy7-, PE-Cy7-, PE- ve FITC ile konjüge edilmiş antikor, IgG izotip eşdeğer konsantrasyonlarda ilave ediniz ve 4 ℃ de 20 dakika boyunca inkübe edin. Tek renkli Pozitif kontroller için, tek tek her bir tüp, CD34-APC, CD45, APC-Cy7, CD56-PE-Cy7, CD144 PE-ve FITC-CD146 eşdeğer konsantrasyonlarda eklenmesi ve 4 ℃ de 20 dakika boyunca inkübe edin. </li><li> İnkübasyondan sonra, 4 dakika boyunca 400 x g&#39;de santrifüj yıkayın. % 5 FBS ve% 1 P / S ilave 2 ml DMEM - 1 hücre pelletini. Hücre süspansiyonunun nihai konsantrasyonu, ml başına en az 5.000.000 hücre olmalıdır. 7-AAD (1: 100) ilave edilir ve ölü hücre çıkarılması için oda sıcaklığında 15 dakika inkübe edilir. Negatif kontrol ve tek renk ve pozitif kontrol,% 5 FBS ve% 1 P / S ile desteklenmiş 0.5 ml DMEM içinde tekrar süspansiyon hücre topaklar üretilir. </li><li> Tüpler sitometri yuvarlak alt polistiren akışına bütün hücre süspansiyonları aktarın. (Her tüp önceden doldurulmuş uygun kültür ortamı 500 ul: MECS için MPM; EGM-2 PC&#39;ler için; komisyonlarda için AC orta) hücre toplama tüpleri hazırlayın. Hücre sıralayıcı etmek için buz üzerinde Taşıma hücre süspansiyonları. </li><li> Boyanmamış kontrol, negatif kontroller, tek renkli pozitif kontroller ve ana hücre süspansiyonu sırayla hücre sıralayıcı çalıştırın hücre süspansiyonları hücre s maksimize etmek için sıkı yolluk lazer yoğunluğu, kanal tazminat ve hücre popülasyonu ayarlarkenurity (vallahi ve akış detayları için diğer dergilerde sitometri tarafından yayınlanan makalelerine bakınız). </li><li> Uygun toplama tüpleri istenilen hücre popülasyonları toplayın. 4 ℃ Mağaza, toplanan hücreler hemen ekim değilse. </li></ol> 4. Hücre Kültürü Post-sıralama <ol><li> Ile önceden kaplanmış plakalar üzerine MPM içinde &lt;10.000 hücre / cm 2 taze kriteri MECS (P0) tohum tip-I kollajen. MECS sonraki geçiş için, 3.500 tohum - ile önceden kaplanmış plakalar / matara üzerine MPM 4,000 hücre / cm 2 tip-I kollajen. </li><li> Taze% 0.2 jelatin ile kaplı plakalar üzerine EGM-2 &lt;20.000 hücre / cm 2 taze kriteri PC&#39;lerin (P0) Tohum. Bilgisayar ortamı içinde 3 oranında P2 kadar düzenli polistiren kültür levhaları üzerine aktarıldı (% 20 FBS ve% 1 P / S ile desteklenmiş DMEM): PC sonraki geçiş için, 1 hücrelerine ayrıldı. P3 yılından itibaren, tohum hücreleri 6,500 de - normal polistiren kültür plakaları / şişeleri üzerine PC ortamında 7,000 hücre / cm 2. </li><li> Normal polistiren kültür plakaları üzerine (% 20 FBS ve% 1 P / S ile desteklenmiş DMEM) ortamı içinde ac &lt;20,000 hücre / cm2 de taze kriteri ACs (P0) Tohum. Düzenli polistiren kültür plakaları / şişeleri üzerine AC ortamda 7,000 hücre / cm 2 - 6,500, sonraki komisyonlarda pasajlayarak, tohum hücreleri için. </li></ol>

<ol>
	<li>Peault, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+and+Progenitor+Cells+in+Skeletal+Muscle+Development.">Stem and Progenitor Cells in Skeletal Muscle Development.</a> Maintenance, and Therapy. Mol Ther. 15, 867-877 (2007).</li><li>Toma, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+multipotent+adult+stem+cells+from+the+dermis+of+mammalian+skin.">Isolation of multipotent adult stem cells from the dermis of mammalian skin.</a> Nat Cell Biol. 3, 778-784 (2001).</li><li>Zuk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Adipose+Tissue+Is+a+Source+of+Multipotent+Stem+Cells.">Human Adipose Tissue Is a Source of Multipotent Stem Cells.</a> Mol. Biol. Cell. 13, 4279-4295 (2002).</li><li>Zimmerlin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal+vascular+progenitors+in+adult+human+adipose+tissue.">Stromal vascular progenitors in adult human adipose tissue.</a> Cytometry. 77, 22-30 (2010).</li><li>Reyes, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+of+endothelial+progenitors+in+human+postnatal+bone+marrow.">Origin of endothelial progenitors in human postnatal bone marrow.</a> The Journal of Clinical Investigation. 109, 337-346 (2002).</li><li>Choi, Y., Ta, M., Atouf, F., Lumelsky, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+pancreas+generates+multipotent+stem+cells+and+pancreatic+and+nonpancreatic+progeny.">Adult pancreas generates multipotent stem cells and pancreatic and nonpancreatic progeny.</a> Stem Cells. 22, 1070-1084 (2004).</li><li>Zengin, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+wall+resident+progenitor+cells:+a+source+for+postnatal+vasculogenesis.">Vascular wall resident progenitor cells: a source for postnatal vasculogenesis.</a> Development. 133, 1543-1551 (2006).</li><li>Corselli, M., Chen, C. W., Crisan, M., Lazzari, L., Peault, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+ancestors+of+adult+multipotent+stem+cells.">Perivascular ancestors of adult multipotent stem cells.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 30, 1104-1109 (2010).</li><li>Ballas, C. B., Zielske, S. P., Gerson, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+bone+marrow+stem+cells+for+cell+and+gene+therapies:+Implications+for+greater+use.">Adult bone marrow stem cells for cell and gene therapies: Implications for greater use.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 85, 20-28 (2002).</li><li>Chen, C. -. W., Corselli, M., P&#233;ault, B., Huard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Blood-Vessel-Derived+Stem+Cells+for+Tissue+Repair+and+Regeneration.">Human Blood-Vessel-Derived Stem Cells for Tissue Repair and Regeneration.</a> Journal of Biomedicine and Biotechnology. , 597439 (2012).</li><li>Zheng, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+identification+of+myogenic+endothelial+cells+in+human+skeletal+muscle.">Prospective identification of myogenic endothelial cells in human skeletal muscle.</a> Nat Biotech. 25, 1025-1034 (2007).</li><li>Okada, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myogenic+Endothelial+Cells+Purified+From+Human+Skeletal+Muscle+Improve+Cardiac+Function+After+Transplantation+Into+Infarcted+Myocardium.">Myogenic Endothelial Cells Purified From Human Skeletal Muscle Improve Cardiac Function After Transplantation Into Infarcted Myocardium.</a> Journal of the American College of Cardiology. 52, 1869-1880 (2008).</li><li>Crisan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Perivascular+Origin+for+Mesenchymal+Stem+Cells+in+Multiple+Human+Organs.">A Perivascular Origin for Mesenchymal Stem Cells in Multiple Human Organs.</a> Cell Stem Cell. 3, 301-313 (2008).</li><li>Park, T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placental+Perivascular+Cells+for+Human+Muscle+Regeneration.">Placental Perivascular Cells for Human Muscle Regeneration.</a> Stem Cells and Development. 20, 451-463 (2011).</li><li>Dellavalle, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pericytes+of+human+skeletal+muscle+are+myogenic+precursors+distinct+from+satellite+cells.">Pericytes of human skeletal muscle are myogenic precursors distinct from satellite cells.</a> Nat Cell Biol. 9, 255-267 (2007).</li><li>Dellavalle, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pericytes+resident+in+postnatal+skeletal+muscle+differentiate+into+muscle+fibres+and+generate+satellite+cells.">Pericytes resident in postnatal skeletal muscle differentiate into muscle fibres and generate satellite cells.</a> Nat Commun. 2, 499 (2011).</li><li>Chen, C. -. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+pericytes+for+ischemic+heart+repair.">Human pericytes for ischemic heart repair.</a> STEM CELLS. 31 (2), 305-316 (2012).</li><li>Corselli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tunica+adventitia+of+human+arteries+and+veins+as+a+source+of+mesenchymal+stem+cells.">The tunica adventitia of human arteries and veins as a source of mesenchymal stem cells.</a> Stem Cells and Development. 21, 1299-1308 (2012).</li><li>Campagnolo, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Adult+Vena+Saphena+Contains+Perivascular+Progenitor+Cells+Endowed+With+Clonogenic+and+Proangiogenic+Potential.">Human Adult Vena Saphena Contains Perivascular Progenitor Cells Endowed With Clonogenic and Proangiogenic Potential.</a> Circulation. 121, 1735-1745 (2010).</li><li>Katare, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+Human+Pericyte+Progenitor+Cells+Improves+the+Repair+of+Infarcted+Heart+Through+Activation+of+an+Angiogenic+Program+Involving+Micro-RNA-132+/+Novelty+and+Significance.">Transplantation of Human Pericyte Progenitor Cells Improves the Repair of Infarcted Heart Through Activation of an Angiogenic Program Involving Micro-RNA-132 / Novelty and Significance.</a> Circulation Research. 109, 894-906 (2011).</li><li>Zheng, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+myogenic+endothelial+cells+exhibit+chondrogenic+and+osteogenic+potentials+at+the+clonal+level.">Human myogenic endothelial cells exhibit chondrogenic and osteogenic potentials at the clonal level.</a> Journal of Orthopaedic Research. 31, 1089-1095 (2013).</li><li>Caplan, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=All+MSCs+Are+Pericytes.">All MSCs Are Pericytes.</a> Cell Stem Cell. 3, 229-230 (2008).</li><li>Feng, J., Mantesso, A., Sharpe, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+cells+as+mesenchymal+stem+cells.">Perivascular cells as mesenchymal stem cells.</a> Expert Opinion on Biological Therapy. 10, 1441-1451 (2010).</li><li>Tang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=White+Fat+Progenitor+Cells+Reside+in+the+Adipose+Vasculature.">White Fat Progenitor Cells Reside in the Adipose Vasculature.</a> Science. 322, 583-586 (2008).</li><li>Krautler, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Follicular+Dendritic+Cells+Emerge+from+Ubiquitous+Perivascular+Precursors.">Follicular Dendritic Cells Emerge from Ubiquitous Perivascular Precursors.</a> Cell. 150, 194-206 (2012).</li><li>Phinney, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+heterogeneity+of+mesenchymal+stem+cells:+Implications+for+cell+therapy.">Functional heterogeneity of mesenchymal stem cells: Implications for cell therapy.</a> Journal of Cellular Biochemistry.113. 113, 2806-2812 (2012).</li><li>Chen, C. -. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+multi-lineage+progenitor+cells+in+human+organs:+Regenerative+units,+cytokine+sources+or+both.">Perivascular multi-lineage progenitor cells in human organs: Regenerative units, cytokine sources or both.</a> Cytokine and Growth Factor Reviews. 20, 429-434 (2009).</li><li>Lin, C. -. S., Lue, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+Vascular+Stem+Cells.">Defining Vascular Stem Cells.</a> Stem Cells Dev. 22, 1018-1026 (2013).</li><li>Tang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+multipotent+vascular+stem+cells+contributes+to+vascular+diseases.">Differentiation of multipotent vascular stem cells contributes to vascular diseases.</a> Nat Commun. 3, 875 (2012).</li><li>Zheng, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+myogenic+stem+cells+from+cultures+of+cryopreserved+human+skeletal+muscle.">Isolation of myogenic stem cells from cultures of cryopreserved human skeletal muscle.</a> Cell Transplant. 21, 1087-1093 (2012).</li></ol>

J.H. received remuneration from Cook MyoSite, Inc. for consulting services and for royalties received from technology licensing during the period that the above research was performed. All other authors have no conflict of interest to disclose.

HBVSC alt popülasyonlarının belirlenmesi ve arıtma MSC ontogenezimizin anlama büyük bir ilerlemeyi temsil. MSC perivasküler kaynağını ve dokuya özel ön-madde hücreleri ve kan damarları, 22-25 arasındaki ilişkiyi gösteren gittikçe artan kanıtlar vardır. Buna ek olarak, daha fazla kapasite MSC heterojenlik ve vasküler hücre biyolojisi 26 anlaşılmasını yardımcı hBVSCs homojen bir yapıda yapıdadır izole etmek. Son birkaç yıl içinde, MECler,...

Insan iskelet kası kök / projenitör hücrelerin klinik cazip bir kaynak olarak kabul edilmiştir. İskelet kası sadece uydu hücreleri ve kas elde edilen kök hücreler (MDSCs) 1 olmak üzere miyogenik atalarıdır, iskelet miyoblastları, aynı zamanda ilkel miyogenik kök hücreleri, taahhüt değil içerir. Rejeneratif tıpta insan kas türetilmiş kök / projenitör hücrelerinin otolog veya allojenik, geniş kullanım alanı, klinik öncesi hayvan modellerinde hem de klinik çalışmalarda araştırılmıştır. Kas kök / progenitör hücrelerin rejeneratif uygulamaları kalp krizi hastalarında yaralı kalbi tamir etmek Duchenne müsküler distrofi (DMD) hastalarda distrofik kas yenileyici arasında değişir. Kemik iliğinden elde edilen multipotent yetişkin projenitör hücreler (MAPCs) ve yağ elde edilen kök hücreleri (ADSCs), yetişkin kök / dahil olmak üzere mezenşimal kök / stromal hücreleri (MSC&#39;ler) ve diğer multipotent öncü hücre popülasyonlarının keşfinden beriprogenitör hücreler yoğun tarihinden 1-9 kadar incelenmiştir. Bununla birlikte, yerinde onların yerli kimliği ve yerelleştirme retrospektif izolasyon yöntemleri örtülü durumdadır. Son zamanlarda, sıralama floresan-aktive edilmiş hücre (FACS) kullanılmasıyla, ve diğer gruplar tanımlanır ve ileriye dönük olan kan, insan iskelet kası içindeki gemiler ve çok sayıda başka organlardan izole edilebilen saf hale multipotent öncü hücre popülasyonları: kas kaynaklı endotel hücreleri (MECler), perisitlerin (PC), ve adventisyal hücreleri (Klimalar) 10. Intima tabakasında, tunika medya ve tunika adventitianın: insan kan damarı türetilmiş kök hücreler (hBVSCs) Bu üç alt-popülasyonları bulunduğunu sırasıyla kan damarlarının üç yapısal tabakalar bulunabilir. Klimalar geniş arter ve venlerin adventita tabakasında lokalize ise daha spesifik, MECler ve PC&#39;ler kılcal kılcal tespit edilir. (C MECS: Her öncül hücre alt hücre yüzey antijenleri benzersiz bir bileşimini ifadeD34 + / 56 + / 144 + / 45 -), PC&#39;ler (CD146 + / 34 - / 45 - / 56 -) ve Klimalar (CD34 + / - 31/45 - / 56 - / 146 -). Bu hBVSC altkümenin ileri karakterizasyonu üç öncü hücre popülasyonları iskelet Miyogenesis, osteogenezi, kondrogenez ve adipogenesis dahil tipik MKH&#39;lerin, benzer mezodermal gelişim potansiyelleri sahip olduğunu ortaya koydu. Tüm hBVSC alt kümeler CD44, CD73, CD90 ve CD105, taze ve kültür gibi klasik MSC belirteçler, sergilerler. Topluca bu kanıt parçaları MKH&#39;lerin damar kökeni destekledi. Ayrıca, MECS, PC&#39;ler ve komisyonlarda, terapötik kapasiteleri son zamanlarda ayrı çalışmalarda ortaya konmuştur. Yetişkin insan kas biyopsileri sıralanır MECler yaralı ve distrofik iskelet kasları ve onarım yaralı miyokardiyumu daha verimli iskelet miyoblastları ve vasküler endo yeniden gösterildiendotel hücreleri (EC). Farklı insan organlarından saflaştırılmış PC&#39;ler de onarım / yaralı ve distrofik iskelet kasları yeniden ve uydu hücre havuzu 13-16 katkıda gösterilmiştir. Çok yakın bir zamanda, insan iskelet kasından türetilmiş PC&#39;ler etkin dolaylı parakrin ve direkt hücresel etkileşimler 17 vasıtasıyla miyokard enfarktüsü tamir olduğunu göstermiştir. ACS, diğer taraftan, ya da olması ile doğrudan eksplante kan damarlarından izole edilebilir veya insan adipoz doku ve iskelet kası, FACS ile saflaştırılmıştır. Komisyonlarda, dikkate değer bir pro-anjiyojenik etkisi, fare arka kol veya bacak iskemisi-19 modelinde gösterilmiştir. Ayrıca, ACS iskemik doku tamirinde 20 ACS en güçlü terapötik potansiyelini gösteren daha etkin bir şekilde geleneksel bir MSC daha miyokard enfarktüsü onarmak için gösterilmiştir. Eşzamanlı mevcut arıtma protokolü hibe, MECler, PC&#39;ler prospektif saflaştırılması veTek bir insan iskelet kası biyopsisi vaskulatürden ACs. Bu bize çalışma ve / veya farklı terapötik amaçlar için uygun hBVSC subpopülasyonu seçim yapmanızı sağlar. Ayrıca, bu yeni teknik, ayrıca, rejeneratif tıp için multipotent öncü hücrelerin ideal bir kaynak yapma, insan iskelet kasından elde edilebilir kök / progenitör hücrelerin repertuar genişletir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="697">
	<tbody>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:257px;">Collagenase Type 1</td>
			<td style="width:99px;">Sigma</td>
			<td style="width:148px;">C5894</td>
			<td style="width:193px;">Sterile vial</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:257px;">Collagenase Type 2</td>
			<td style="width:99px;">Sigma</td>
			<td style="width:148px;">C1764</td>
			<td style="width:193px;">Sterile vial</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:257px;">Collagenase Type 4</td>
			<td style="width:99px;">Sigma</td>
			<td style="width:148px;">C1889</td>
			<td style="width:193px;">Sterile vial</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:257px;">Anti-human CD34 APC</td>
			<td style="width:99px;">BD Pharmingen</td>
			<td style="width:148px;">555824</td>
			<td style="width:193px;">Keep sterile</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:257px;">Anti-human CD45 APC-Cy7</td>
			<td style="width:99px;">BD Pharmingen</td>
			<td style="width:148px;">557833</td>
			<td style="width:193px;">Keep sterile</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:257px;">Anti-human CD56 PE-Cy7</td>
			<td style="width:99px;">BD Pharmingen&#160;</td>
			<td style="width:148px;">557747</td>
			<td style="width:193px;">Keep sterile</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:257px;">Anti-human CD144 PE</td>
			<td style="width:99px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:148px;">A07481</td>
			<td style="width:193px;">Keep sterile</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:257px;">Anti-human CD146 FITC</td>
			<td style="width:99px;">AbD Serotec</td>
			<td style="width:148px;">MCA2141F</td>
			<td style="width:193px;">Keep sterile</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:257px;">FACSAria II Flow Cytometer</td>
			<td style="width:99px;">Becton-Dickinson</td>
			<td style="width:148px;"></td>
			<td style="width:193px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:257px;">EGM-2 Complete Medium</td>
			<td style="width:99px;">Lonza</td>
			<td style="width:148px;">CC-3162</td>
			<td style="width:193px;">For culturing PCs (only P0)</td>
		</tr>
		<tr height="64">
			<td height="64" style="height:64px;width:257px;">DMEM high glucose (1X), liquid, with L-glutamine, without sodium pyruvate</td>
			<td style="width:99px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:148px;">11965</td>
			<td style="width:193px;">For culturing PCs</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:257px;">DMEM high glucose (1X), liquid, with L-glutamine, with sodium pyruvate</td>
			<td style="width:99px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:148px;">11995</td>
			<td style="width:193px;">For culturing MECs and ACs</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:257px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:99px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:148px;">10437-028</td>
			<td style="width:193px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:257px;">Heat-inactivated horse serum</td>
			<td style="width:99px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:148px;">26050-088</td>
			<td style="width:193px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:257px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:99px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:148px;">15140-122</td>
			<td style="width:193px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:257px;">Antibiotic-Antimycotic (100X)</td>
			<td style="width:99px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:148px;">15240-062</td>
			<td style="width:193px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:257px;">Trypsin-EDTA 0.5%(10X)</td>
			<td style="width:99px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:148px;">15400-054</td>
			<td style="width:193px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:257px;">Dulbecco&#8217;s PBS without calcium and magnesium</td>
			<td style="width:99px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:148px;">14190-250</td>
			<td style="width:193px;"></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:257px;">Chick embryo extract</td>
			<td style="width:99px;">Accurate Chemical</td>
			<td style="width:148px;">CE650T-10</td>
			<td style="width:193px;">Filter before use</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of blood-vessel-derived multipotent precursors from human skeletal muscle

Mezenkimal kök / stromal hücreler (MKH) keşfinden beri, yerli kimliği ve MKH&#39;lerin yerelleştirme kültürü retrospektif izolasyon örtülü durumdadır. Son zamanlarda, floresans ile aktive edilen hücre tasnif (FACS) kullanılmasıyla, ve diğer araştırmacılar, ileriye dönük, insan iskelet kası ve damar sistemi ile bağlantılı multipotent öncü hücrelerinin üç alt-popülasyonunu tespit ve saflaştırıldı. Bu üç hücre popülasyonları: intima, media ve adventisya: Miyojenik endotel hücreleri (MECler), perisitler (PC&#39;ler) ve adventisyal hücreleri (ACs), kan damarlarının üç yapısal katmanları sırasıyla lokalize. Bu insan kan-damar kaynaklı kök hücre (hBVSC) Tüm klasik MSC işaretleri ifade ama aynı zamanda tipik MSC&#39;Iere benzer mezodermal gelişim potansiyelleri sahip nüfusun, sadece. Daha önce, MECler, PC&#39;ler ve Klimalar farklı protokoller yoluyla izole edilmiştir ve daha sonra ayrı çalışmada karakterize. Geçerli izolasyon protocol, seçici hücre yüzey belirteçleri içinde izolasyon sürecine değişiklikler ve ayarlamalar yaparak, bize aynı anda tek bir insan kas biyopsisi ile FACS tarafından üç hBVSC subpopülasyonunun arındırmak için izin verir. Bu yeni yöntem, sadece birden BVSC alt popülasyonlarının izolasyonu düzene değil, aynı zamanda farklı tedavi amaçlı hBVSCs gelecekte klinik uygulamalarını kolaylaştırmak değil.

FACS parametrelerinin ilk boyanmamış kontrol, negatif kontroller ve tek renkli pozitif kontrollerden elde edilen verilere dayalı düzeltilir. Ölü hücrelerin çıkarıldıktan sonra, floresan-etiketli hücre süspansiyonu, negatif ve pozitif hücresi yüzey işaretleyici bir dizi seçenek tabi tutulur. İlk olarak, CD45 + hücreleri, CD56 + ve CD56 önce kapılı - hücrelerin CD45 ayrılır - fraksiyonu. CD56 + CD34 +-fraksiyon CD144 seçimine tabi tutulur bur...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Blood-vessel-derived Multipotent Precursors from Human Skeletal Muscle at JoVE.com

Isolation of Blood-vessel-derived Multipotent Precursors from Human Skeletal Muscle

Rejeneratif uygulamalar için idealdir insan iskelet kası liman birkaç çok-soy öncü nüfus içindeki kan damarları. Intima gelen Miyojenik endotel hücreleri, medya perisitler ve adventisyanın gelen adventisyal hücreler: Bu izolasyon yöntemi, kan damarlarının üç yapısal katmanları sırasıyla üç multipotent öncü hücre popülasyonlarının eşzamanlı arınma sağlar.

İnsan İskelet Kası Kan-damar-türevli Multipotent Öncüleri İzolasyonu

Since the discovery of mesenchymal stem/stromal cells (MSCs), the native identity and localization&#160;of MSCs have been obscured by their retrospective ...

isolation-blood-vessel-derived-multipotent-precursors-from-human

Research

JoVE Journal

Biology

11.6K Görüntüleme.  University of Pittsburgh.  Rejeneratif uygulamalar için idealdir insan iskelet kası liman birkaç çok-soy öncü nüfus içindeki kan damarları. Intima gelen Miyojenik endotel hücreleri, medya perisitler ve adventisyanın gelen adventisyal hücreler: Bu izolasyon yöntemi, kan damarlarının üç yapısal katmanları sırasıyla üç multipotent öncü hücre popülasyonlarının eşzamanlı arınma sağlar. 