Ulusal Sağlık Enstitüleri Destek ve Shriners Burns Hastanesi (GM092804, DE019938 verir).

1.. Mikroakışkan Cihaz İmalatı <ol><li> Standart fotolitografik teknikleri kullanarak, bir sınıf 1.000 temiz oda ana kalıp gofret imal. Desen üreticisinin talimatlarına göre göç kanalları tanımlamak için ilk 3-mikron ince epoksi esaslı negatif Fotorezist tabaka. Desen hücre yükleme ve kemokin odaları tanımlamak için ikinci bir 50 mikron kalınlığında bir tabaka. </li><li> Polidimetilsiloksan (PDMS) cihazlar döküm desenli gofret kullanın. Şiddetle büyük plastik tartım tepsisine plastik çatal ile 5 dakika boyunca başlatıcı (2 g) ile PDMS (20 g) karıştırılır. </li><li> Dikkatle kalıp üzerine PDMS dökün. </li><li> 1 saat boyunca bir vakumlu desikatör içinde döküldü PDMS ile kalıp yerleştirerek PDMS gazdan arındırın. </li><li> Ve fırında 65 ° C&#39;ye ayarlanmış bir fırın içinde en az 3 saat boyunca PDMS mikroakışkan cihazları tedavi </li><li> 1.5 mm uç çaplı bir zımba kullanılarak merkezi WBLCs dışarı Punch. </li><li> Bir Punc kullanılarak bütün çörek şeklindeki cihazlar dışarı Punch5.0 mm uç çapı ile onu. </li><li> Yapışkan bant kullanılarak çörek aygıtlardan parçacıkları kaldırmak. </li><li> Iyonu giderilmiş su ve daha sonra kuru azot ile birlikte bir 12 oyuklu plaka durulayın. 5 dakika boyunca 60 ° C fırın içinde plaka koyun. </li><li> Oksijen plazma iki 12-yuvalı plaka tedavi; kez yalnız 35 saniye ve daha sonra tekrar başka bir 35 saniye için çörek cihazlar ile. </li><li> Dikkatlice cımbız kullanarak plakasının yuvaları içinde koyunuz. </li><li> 10 dakika boyunca 80 ° C&#39;ye set edilen bir sıcak plaka üzerinde bağlanmış aygıtlar ile Bake plakası. </li></ol> 2.. Mikroakışkan Assay hazırlanması <ol><li> Hemen oksijen plazma muamelesi, sonra, Prime mikroakışkan cihazlar, cihaz hidrofiliktir ve kılcal etkileri cihazda küçük kanalların hazırlanmasını teşvik zaman. </li><li> 5 ul fibronektin [stok çözeltisi, 1 mg / ml] ve 490 ul HBSS ile 5 ul fMLP [stok çözeltisi, 10 uM] karıştırılarak kemo-çekici bir çözüm oluşturur. </li><li> Yavaşça pipet &amp; #160; WBLC içine kemoatraktan çözeltisi, jel yükleme ucu (Şekil 1 A) kullanılmıştır. Cihazın dış çevresinde kemoatraktan Pipet ilave bir 20 ul. </li><li> 15 dakika boyunca bir desikatör içinde plaka koyun. Cihaza bir vakum uygulayarak, çözelti cihaz ve PDMS dışarı yayılan değiştiren hava yan kanal içine damlatılır. </li><li> Desikatörde plakasını çıkarın ve mikroskop altında cihaz kanal ıslanmasını onaylayın. Kemoatraktan çözüm odasına girer gibi kabarcık küçülür olarak izleyin. Resim kabarcık vakum tedavi sonrası aygıt içinde mevcut olması gerekmektedir. </li><li> WBLC yıkayın ve cihazın dışına iyice fazla kemo-çekici çözeltisi kaldırın. Bu adım, cihazın merkezi odak kemotaktik odalarına (FCCs) her birinden kemoatraktan gradyanı oluşturur. <ol><li> Şırınga, bir kör 30 G iğne ucu eklemek, PBS ile bir 1 ml şırınga doldurun. Yavaşça, şırınganın iğne ucu eklemekçörek delik merkezine. Yavaşça deliğe PBS içinde 100 ul itmek, böylece cihazın üstüne PBS formları bir damlacık. </li><li> Cihaz etrafında PBS eğimli plaka ve pipet 1 ml sıvı, kuyunun altındaki toplar, böylece. Aspire (ayrılmış nötrofiller medyada yüklenecek eğer yerine tampon kullanımı medya) taze tampon çözeltisi kullanılarak 3x toplam sıvı ve tekrar süreci 9. </li></ol></li><li> Cihazların başında sıvı altında batık kadar medya ile her iyi doldurun. Cihazlar degrade dengeye gelmesi için 15 dakika bekletin. Deney sonuçları ve sonlu eleman simülasyonlar teorik veri, bu cihazlarda gradyanlar küçük moleküller (örneğin, fMLP) ve daha büyük bir molekül ağırlığına (örneğin, IL-8) için bir kaç güne kadar 24 saat kadar kararlı olduğunu göstermektedir. </li><li> Jel yükleme ipuçlarını kullanarak, her biri yavaş yavaş bütün kan Boyu içine 2 ul kan (ya da izole edilmiş nötrofiller) pipetding odası (WBLC) (Şekil 1A). </li></ol> 3.. Numune Hazırlama Kılcal Kan itibaren İnsan Nötrofiller <ol><li> Hiçbir immünsüpresifler üzerinde sağlıklı gönüllü, parmak prick kapiller kan toplayın. Tüm hasta numuneleri yazılı bilgilendirilmiş rıza ile elde ve MGH&#39;de ve Shriners Kurumsal Değerlendirme Kurulları tarafından onaylanan prosedürleri aracılığıyla edildi. <ol><li> Parmak prick kan toplama, su ve sabunla ellerinizi yıkayın ve cilt kuru. Kan toplama tüpü (1.65 USP/50 ul kan) heparin 1 ml HBSS +% 0.2 HSA ve 10 ul Hoechst leke (32.4 uM) eklenmesi ile anti-coagulant/stain stok çözelti hazırlayın. Kan ilk damla silmekle yavaşça stok anti-koagülan ve Hoechst floresan boyası çözeltisi (10 ul) ihtiva eden Eppendorf tüpü içinde 50 ul kan toplanması, bir SurgiLance güvenlik neşter (2.2-mm derinlik, 22 G) kullanılarak parmak delin karıştırın. </li></ol></li&gt; <li> Çekirdek, floresan boyama için izin vermek için 10 dakika boyunca kan ve Hoechst leke inkübe edin. Kan toplama 1 saat içerisinde örnek çalıştırın. </li></ol> Venöz Kan itibaren İnsan Nötrofiller <ol start="3"><li> 33 USP heparin ihtiva eden tüplere periferal venöz kan 10 ml çizin. </li><li> Daha önce tarif edildiği gibi ortam ve Hoechst leke venöz kan 50 ul ekle. Çekirdek, floresan boyama için izin vermek için 10 dakika boyunca kan ve Hoechst leke inkübe edin. Kan toplama 1 saat içerisinde örnek çalıştırın. </li></ol> Kandan Nötrofil Ayrılık - Pozitif Kontrol <ol start="5"><li> , Nötrofil ayrı Heta nişasta kullanılarak 10 mi venöz bütün bir kan örneğinden ayırmak için nötrofil steril teknikler kullanmak için (6% w / v) ile, üreticinin protokolü takip edilerek, bir negatif seçim manyetik boncuk izolasyon kiti, ardından yoğunluk gradyanlı. </li><li> Bir concentr nötrofil nihai bir kısım Tekrar süspansiyon haline getirilen1X HBSS +% 0.2 insan serum albümin / ml 4000 hücre ation. Denemeyi çalıştırmak için hazır olana kadar 37 ° C hücreleri tutun. </li></ol> Nötrofil Kemotaksi Ölçümleri 4. Mikroskopi ve Görüntü Analizi <ol><li> % 5 37 ° C,% 80 nem ve CO 2 biochamber sıcaklığını ayarlayın. </li><li> Bir mikroskop (10X veya daha yüksek büyütme) zaman atlamalı görüntüleme kullanarak hemen görüntüleme başlayın. </li></ol> 5. İstatistiksel Analiz <ol><li> El ile her bir örnek olarak en az 50 nötrofil izler. </li><li> Zamanla giren FCC hücreleri (Şekil 2) sayısı. </li><li> ImageJ (NIH) (Şekil 2) kullanılarak WBLC ve FCC arasındaki kanalda nötrofil hızları hesaplayın. </li><li> Çatallanma geçmek hücrelerin sayısını sayma ve çıkış inci FCC ve hücrelere karşı çevirmek hücre sayısı arasındaki oranı hesaplayarak nötrofillerin yönünü ölçmeke cihaz. Yönlü olmayan hücreler, kemotaktik gradyanı takip eder ve bu nedenle, FCC ve çıkış kanalı (Şekil 2) doğru eşit sayıda geçiş yoktur. </li></ol>

<ol>
	<li>Hansson, G. K., Robertson, A. K., Soderberg-Naucler, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+and+atherosclerosis.">Inflammation and atherosclerosis.</a> Annual review of pathology. 1, 297-329 (2006).</li><li>Phillipson, M., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neutrophil+in+vascular+inflammation.">The neutrophil in vascular inflammation.</a> Nature medicine. 17, 1381-1390 (2011).</li><li>Butler, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Burn+injury+reduces+neutrophil+directional+migration+speed+in+microfluidic+devices.">Burn injury reduces neutrophil directional migration speed in microfluidic devices.</a> PloS one. 5, (2010).</li><li>Lavrentieva, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+markers+in+patients+with+severe+burn+injury.+What+is+the+best+indicator+of+sepsis.">Inflammatory markers in patients with severe burn injury. What is the best indicator of sepsis.</a> Burns : journal of the International Society for Burn Injuries. 33, 189-194 (2007).</li><li>De Filippo, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mast+cell+and+macrophage+chemokines+CXCL1/CXCL2+control+the+early+stage+of+neutrophil+recruitment+during+tissue+inflammation.">Mast cell and macrophage chemokines CXCL1/CXCL2 control the early stage of neutrophil recruitment during tissue inflammation.</a> Blood. 121, 4930-4937 (2013).</li><li>Mankovich, A. R., Lee, C. Y., Heinrich, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+effects+of+serum+heat+treatment+on+chemotaxis+and+phagocytosis+by+human+neutrophils.">Differential effects of serum heat treatment on chemotaxis and phagocytosis by human neutrophils.</a> PloS one. 8, (2013).</li><li>Palabrica, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+accumulation+promoting+fibrin+deposition+is+mediated+in+vivo+by+P-selectin+on+adherent+platelets.">Leukocyte accumulation promoting fibrin deposition is mediated in vivo by P-selectin on adherent platelets.</a> Nature. 359, 848-851 (1992).</li><li>Sackmann, E. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+kit-on-a-lid:+a+versatile+platform+for+neutrophil+chemotaxis+assays.">Microfluidic kit-on-a-lid: a versatile platform for neutrophil chemotaxis assays.</a> Blood. 120, (2012).</li><li>Jones, C. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+chambers+for+monitoring+leukocyte+trafficking+and+humanized+nano-proresolving+medicines+interactions.">Microfluidic chambers for monitoring leukocyte trafficking and humanized nano-proresolving medicines interactions.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109, 20560-20565 (2012).</li><li>Nauseef, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+human+neutrophils+from+venous+blood.">Isolation of human neutrophils from venous blood.</a> Methods Mol Biol. 412, 15-20 (2007).</li><li>Lyons, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microarray+analysis+of+human+leucocyte+subsets:+the+advantages+of+positive+selection+and+rapid+purification.">Microarray analysis of human leucocyte subsets: the advantages of positive selection and rapid purification.</a> BMC genomics. 8, (2007).</li><li>Hasenberg, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+immunomagnetic+negative+enrichment+of+neutrophil+granulocytes+from+murine+bone+marrow+for+functional+studies+in+vitro+and+in+vivo.">Rapid immunomagnetic negative enrichment of neutrophil granulocytes from murine bone marrow for functional studies in vitro and in vivo.</a> PloS one. 6, (2011).</li><li>Agrawal, N., Toner, M., Irimia, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+migration+assay+from+a+drop+of+blood.">Neutrophil migration assay from a drop of blood.</a> Lab on a chip. 8, 2054-2061 (2008).</li><li>Hoang, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+neutrophil+speed+and+directionality+during+chemotaxis,+directly+from+a+droplet+of+whole+blood.">Measuring neutrophil speed and directionality during chemotaxis, directly from a droplet of whole blood.</a> Technology. , 1-9 (2013).</li><li>Kurihara, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resolvin+D2+restores+neutrophil+directionality+and+improves+survival+after+burns.">Resolvin D2 restores neutrophil directionality and improves survival after burns.</a> FASEB journal : official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. , (2013).</li><li>Buffone, V., Meakins, J. L., Christou, N. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+function+in+surgical+patients.+Relationship+to+adequate+bacterial+defenses.">Neutrophil function in surgical patients. Relationship to adequate bacterial defenses.</a> Arch Surg. 119, 39-43 (1984).</li><li>Malawista, S. E., de Boisfleury Chevance, A., van Damme, J., Serhan, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tonic+inhibition+of+chemotaxis+in+human+plasma.">Tonic inhibition of chemotaxis in human plasma.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105, 17949-17954 (2008).</li></ol>

Ifşa hiçbir çıkar çatışması vardır.

Bu çalışmada, kan bir damlacık (2 ul) nötrofil kemotaksisini ölçmek için microfluidic platform geliştirdi. Aktif nötrofiller göç gelen RBCs on-chip mekanik filtrasyon nötrofiller aktive ederek eserleri tanıtmak eğilimli olan bu tür yoğunluk 10 eğimleri gibi hantal hücre ayırma yöntemleri, olumlu seçimi 11 veya negatif seçimi 12, ihtiyacını circumvents. RBCs mekanik filtrasyon nötrofil göçü sondalama diğer mikroakışkan cips teknoloji ayırır. Örneğin, la...

<html> Nötrofil kaçakçılığı ateroskleroz 1, bakteriyel enfeksiyon veya sepsis 2 de dahil olmak üzere birçok enflamatuar koşulları, ilerleme ve çözünürlüğü belirlenmesinde önemli bir rol oynar, ve yaralanma 3 yakmak. Sağlık ve hastalık onların büyük katkılarından dolayı, nötrofil sayısı sıklıkla klinik ve araştırma laboratuvarlarında kabul standart kan analizinin bir parçasıdır. Ancak, en her yerde testlerden biri, enfeksiyon ve sepsis tanısında nötrofil sayısının değerini olmasına rağmen sık sık 4 sorgulanmıştır. Örneğin, yanık hastalarda nötrofil bir çalışma nötrofil sayısı ve nötrofil göç fonksiyon ilişkili olmadığı ortaya; nötrofil yalnız saymak anlamına bağışıklık durumu 3 doğru bir göstergesi değildir. Ölçülmesi daha zor olsa da, nötrofil fonksiyonel yetenek koşullarının geniş bir aralıkta daha değerli olarak önerilmiştir. t &quot;&gt; En önemlisi, nötrofil kusurları birçok geçici ve kalıcı genetik bozukluklar, büyük ölçüde yakın zamana kadar klinikte göz ardı edilmiş bir ayrım tarafından tetiklenen değildir. yanık yaralanmaları bağlamında, nötrofil göç sırasında takip edilebilir enflamatuar durum ya da enfeksiyona 3 bir göstergesi olarak bir hastanın tedavi bunlar kan geniş hacimli gerektirdiğinden. şu laboratuarda (Boyden haznesi Dunn odası, mikropipet deney) kullanılan geleneksel göç deneyler, klinik bir ortamda çevrilemeyen ve hantal zaman alıcıdır nötrofil izolasyon için gerekli kan hacmi sadece bir örnek için izin veren ve çoğu zaman da havuzu gerektirir, çünkü nötrofil izolasyon teknikleri (Tablo 1). Bu deneyler, aynı zamanda, örneğin, fare gibi küçük laboratuar hayvanları, nötrofil kemotaksis, geçici değişiklikleri izlemek için kullanılamaz Tek bir deney için, çok sayıdaki hayvandan alınan kan. Örneğin, ilgili bir çalışma mBirden çok zaman puan üzerinden ultiple koşulları ve tedaviler potansiyel mevcut kemotaksı deneyleri kullanılarak farelerin binlerce gerektirebilir. Bu hasar, enfeksiyon bağlamında bağışıklık fonksiyonunun karmaşık dinamiklerini anlamak ya da çoğu sıçangil modellerinde 5 incelenmiştir yakmak için yapılabilir temel biyolojik araştırmaları kısıtlar. Az kan hacmi gerektiren süre, hızlı sağlam bir nötrofil fonksiyonel tahlil için ihtiyacı karşılamak için, biz tam kan küçük bir damlacık doğrudan nötrofil kemotaksisini ölçen bir mikroakışkan cihaz geliştirdik. Bu serum 6 ve 7 de dahil olmak üzere platelet tüm kan içinde bir çok faktör, nötrofil fonksiyonunu etkileyen bilinmektedir. Bu, bütün kan mikroakışkan deney, bir in vitro deneyi ile 8 kemotaksis değişimlerin ölçülmesi sırasında nötrofil in vivo mikro korumak için örnek işleme en aza indirir bu nedenle faydalıdır. Bu yaklaşım, kan toplama geleneksel teknikleri kullanarak saatler nötrofil geçiş deneyleri için süreyi azaltır sadece birkaç dakika (Tablo 1). Tam kan mikroakışkan platformu, deney uzunluğu için sabit bir doğrusal gradyan kemoatraktan üreten hareketli parça ve bir dış basınç kaynağı (örn. şırınga pompası) gerektirmez. Tam kan mikroakışkan cihazın tasarımında önemli özelliği mekanik cihazın göç kanalı girmesini RBCs filtreleyen bir kırmızı kan hücresi (RBC) filtrasyon tarak birleşme olduğunu. Bu filtrasyon tarağın doğru dönüşleri muhtemel eritrosit ile tıkanmış olacağını boyut dışlama filtrasyon, ihtiyacını engeller ve bu nedenle de aktif WB göç nötrofil kemoatraktan ulaşmasını gradyanı bloke eder. 12 ya da 24 oyuklu bir plaka içerisinde, bütün kan mikroakışkan cihazın birleşme insan veya murin nötrofil kemotaksis si birden aracılarının tarama kolaylaştırırmultaneously.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:771px;" width="771">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:211px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:191px;">Company</td>
			<td style="width:179px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:191px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">Device Fabrication</td>
			<td style="width:191px;"></td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">SU8&#160;</td>
			<td style="width:191px;">Microchem</td>
			<td style="width:179px;">Y131273</td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">Polydimethylsiloxane (PDMS)</td>
			<td style="width:191px;">Ellsworth Adhesives</td>
			<td style="width:179px;">Sylgard 184 1.1 lb. Kit</td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">Standard glass slides</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:179px;">125495</td>
			<td style="width:191px;">1 X 3 inches</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">Glass-bottom plate</td>
			<td style="width:191px;">MatTek</td>
			<td style="width:179px;">P12G-1.5-14-F</td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:211px;">Harris Uni-Core, Tip Diameter 5.0mm</td>
			<td style="width:191px;">Ted Pella, Inc.</td>
			<td style="width:179px;">15081</td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:211px;">Harris Uni-Core, Tip Diameter 1.5 mm</td>
			<td style="width:191px;">Ted Pella, Inc.</td>
			<td style="width:179px;">15072</td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:211px;">Microfluidic Assay Preparation and Analysis</td>
			<td style="width:191px;"></td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">Gel-loading pipet tip</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:179px;">02-707-139</td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">Syringe</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientfic</td>
			<td style="width:179px;">309602</td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">Blunt tip needle, 30g &#189; in.</td>
			<td style="width:191px;">Brico Medical Supply</td>
			<td style="width:179px;">BN3005</td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">Vacutainer, Heparin</td>
			<td style="width:191px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;"></td>
			<td style="width:191px;"></td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">HBSS&#160;</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:211px;">Human serum albumin</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:179px;">A5843-5G</td>
			<td style="width:191px;">0.2% final concentration in HBSS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">Fibronectin</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:179px;">F0895-1MG</td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">fMLP</td>
			<td style="width:191px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:179px;">F3506-10MG</td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:211px;">SurgiLance safety lancet, 2.2mm depth, 22 gauge</td>
			<td style="width:191px;"></td>
			<td style="width:179px;">SLN240</td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">Hoescht stain</td>
			<td style="width:191px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:179px;">H3570</td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">Positive Control&#160;</td>
			<td style="width:191px;"></td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:211px;">HetaSep</td>
			<td style="width:191px;">STEMCELL Technologies Inc.</td>
			<td style="width:179px;">7906</td>
			<td style="width:191px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:211px;">EasySep Human Neutrophil Enrichment Kit</td>
			<td style="width:191px;">STEMCELL Technologies Inc.</td>
			<td style="width:179px;">19257</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;"></td>
			<td style="width:191px;"></td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">Equipment</td>
			<td style="width:191px;"></td>
			<td style="width:179px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">Plasma Asher</td>
			<td style="width:191px;">March Instruments</td>
			<td style="width:179px;">P-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">Lindberg/Blue M Oven</td>
			<td style="width:191px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:179px;">13-258-30C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:211px;">Stainless Steel Precision Tweezers</td>
			<td style="width:191px;">Techni Tool</td>
			<td style="width:179px;">758TW458</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:211px;">Bel-Art Scienceware Chemical-Resistant Vacuum Desiccator</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:179px;">08-594-15A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:211px;">Dataplate Digital Hot Plate</td>
			<td style="width:191px;">Alpha Multiservices</td>
			<td style="width:179px;">PMC 720&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:211px;">Nikon TiE inverted microscope</td>
			<td style="width:191px;">Nikon - Micro Video Instruments Inc.</td>
			<td style="width:179px;">MEA53100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:211px;">CFI Plan Fluor DL 10x na 15.2wd Objective</td>
			<td style="width:191px;">Nikon - Micro Video Instruments Inc.</td>
			<td style="width:179px;">MRH20101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:211px;">Lumen 200 with 2 Meter Light Guide for Nikon</td>
			<td style="width:191px;">Nikon - Micro Video Instruments Inc.</td>
			<td style="width:179px;">500-L200NI2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:211px;">DAPI/Hoechst/AMCA Narrow Band 32mm Exciters - 25mm Emitters</td>
			<td style="width:191px;">Chroma - Micro Video Instruments Inc.</td>
			<td style="width:179px;">31013v2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:211px;">Retiga R 2000 cooled CCD Camera 1600x1200 pixels</td>
			<td style="width:191px;">Qimaging - Micro Video Instruments Inc.</td>
			<td>RET-2000R-F-M-12-C</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microfluidic platform for measuring neutrophil chemotaxis from unprocessed whole blood

Nötrofiller kanda enfeksiyonları ve sayıları karşı korunmada önemli bir rol oynamaktadır sıklıkla klinikte ölçülür. Düşük nötrofil enfeksiyonlar için yüksek riskler için bir uyarı işareti ise kandaki yüksek nötrofil, genellikle devam eden enfeksiyonların bir göstergesidir. Görevlerini başarmak için, nötrofiller de enfeksiyonları oluşabilir dokulara, hayatlarının çoğunu kandan etkili hareket edebilmek için var. Sonuç olarak, göç nötrofillerin yeteneğinde herhangi bir kusur nötrofiller kanda uygun bir sayıda mevcut olsa bile, enfeksiyon risklerini artırabilir. Ancak, klinikte nötrofil göç yeteneğini ölçmek, zaman alıcı, zor bir görev, bir büyük kan hacmi, ve uzman bilgi gerektirir. Bu sınırlamaları çözmek için, çevresi, işlenmemiş kan tek bir damlacık gerektirir, nötrofil göçü için sağlam bir mikroakışkan tahlilleri tasarlanmıştırnötrofil ayrılması için ihtiyaç delikleri, ve bir basit mikroskop ölçmek kolaydır. Bu deneyde, nötrofil kemoatraktan kaynağına doğru, küçük kanallar aracılığıyla, kan damlacık tarafından doğrudan geçiş. Aynı kanallardan kırmızı kan hücrelerinin granül akışını önlemek için, seçici olarak, kırmızı kan hücrelerinin ilerlemesini bloke eden döner dik açı ile mekanik filtreler uygulanmıştır. Biz parmak prick ve venöz kandan toplanan kan damlacıklarının nötrofil göçü karşılaştırarak tahlil valide. Biz de saflaştırılmış Nötrofillerin örneklerinden nötrofil göçü ile bu tam kan (WB) kaynaklar karşılaştırılmış ve üç kaynaklar arasında tutarlı hız ve yönlendirme bulundu. Bu mikroakışkan platformu sağlık ve hastalık nötrofil fonksiyonlarının anlayışımızı ilerletmek yardımcı olmak için klinik ve araştırma ortamında insan nötrofil göç çalışmayı sağlayacaktır.

Tam kan (WB) nötrofil kemotaksi deneyi, fMLP gradyanı (Film S1) karşı nötrofil birikimini ölçülmesiyle doğrulandı. Sonuçlar nötrofiller (mavi) aktif olarak tam kan (Şekil 3A ve Film S1) dışına göç mümkün iken eritrositler filtrasyon tarak tarafından tuzak olduğunu onaylayın. Bütün kan mikroakışkan cihaz tarafından oluşturulan duyarlı doğrusal bir kemo-çekici gradyanı (yeşil) FITC-işaretli dekstran (Şekil 3A ek) kullan...

Watch this Scientific Journal Video about Microfluidic Platform for Measuring Neutrophil Chemotaxis from Unprocessed Whole Blood at JoVE.com

Microfluidic Platform for Measuring Neutrophil Chemotaxis from Unprocessed Whole Blood

Bu protokol, sağlam tekrarlanabilirlik ile, bütün haldeki kan, bir damla, insan nötrofil kemotaksisi ölçmek için tasarlanmış bir tahlil göstermektedir. Bu yaklaşım, nötrofil ayrılması için ihtiyaç dışı eden ve deney hazırlama zaman sadece birkaç dakika gerektirir. Mikroakışkan çip bebeklerde veya örnek hacmi sınırlıdır küçük memeliler, zamanla nötrofil kemotaksisinin tekrarlanan ölçü sağlar.

İşlenmemiş kandan Nötrofil Kemotaksis Ölçüm mikroakışkan Platformu

Neutrophils play an essential role in protection against infections and their numbers in the blood are frequently measured in the clinic. Higher ...

microfluidic-platform-for-measuring-neutrophil-chemotaxis-from

Research

JoVE Journal

Bioengineering

11.2K Görüntüleme.  Massachusetts General Hospital.  Bu protokol, sağlam tekrarlanabilirlik ile, bütün haldeki kan, bir damla, insan nötrofil kemotaksisi ölçmek için tasarlanmış bir tahlil göstermektedir. Bu yaklaşım, nötrofil ayrılması için ihtiyaç dışı eden ve deney hazırlama zaman sadece birkaç dakika gerektirir. Mikroakışkan çip bebeklerde veya örnek hacmi sınırlıdır küçük memeliler, zamanla nötrofil kemotaksisinin tekrarlanan ölçü sağlar. 

Video: Microfluidic Platform for Measuring Neutrophil Chemotaxis from Unprocessed Whole Blood

High-throughput Protein Expression Generator Using a Microfluidic Platform

Rapidly increasing fields, such as systems biology, require the development and implementation of new technologies, enabling high-throughput and high-fidelity measurements of large systems. Microfluidics promises to fulfill many of these requirements, such as performing high-throughput screening experiments on-chip, encompassing biochemical, biophysical, and cell-based assays1. Since the early days of microfluidics devices, this field has drastically evolved, leading to the development of microfluidic large-scale integration2,3. This technology allows for the integration of thousands of micromechanical valves on a single device with a postage-sized footprint (Figure 1). We have developed a high-throughput microfluidic platform for generating in vitro expression of protein arrays (Figure 2) named PING (Protein Interaction Network Generator). These arrays can serve as a template for many experiments such as protein-protein 4, protein-RNA5 or protein-DNA6 interactions.
The device consist of thousands of reaction chambers, which are individually programmed using a microarrayer. Aligning of these printed microarrays to microfluidics devices programs each chamber with a single spot eliminating potential contamination or cross-reactivity Moreover, generating microarrays using standard microarray spotting techniques is also very modular, allowing for the arraying of proteins7, DNA8, small molecules, and even colloidal suspensions. The potential impact of microfluidics on biological sciences is significant. A number of microfluidics based assays have already provided novel insights into the structure and function of biological systems, and the field of microfluidics will continue to impact biology.

We present a microfluidic approach for the expression of protein arrays. The device consists of thousands of reaction chambers controlled by micro-mechanical valves. The microfluidic device is mated to a microarray-printed gene library. These genes are then transcribed and translated on-chip, resulting in a protein array ready for experimental use.

Bir mikroakışkan Platform kullanarak Yüksek throughput Protein Ekspresyonu Jeneratör

Rapidly increasing fields, such as systems biology, require the development and implementation of new technologies, enabling high-throughput and ...

Biyomühendislik

Cell Squeezing as a Robust, Microfluidic Intracellular Delivery Platform

Rapid mechanical deformation of cells has emerged as a promising, vector-free method for intracellular delivery of macromolecules and nanomaterials. This technology has shown potential in addressing previously challenging applications; including, delivery to primary immune cells, cell reprogramming, carbon nanotube, and quantum dot delivery. This vector-free microfluidic platform relies on mechanical disruption of the cell membrane to facilitate cytosolic delivery of the target material. Herein, we describe the detailed method of use for these microfluidic devices including, device assembly, cell preparation, and system operation. This delivery approach requires a brief optimization of device type and operating conditions for previously unreported applications. The provided instructions are generalizable to most cell types and delivery materials as this system does not require specialized buffers or chemical modification/conjugation steps. This work also provides recommendations on how to improve device performance and trouble-shoot potential issues related to clogging, low delivery efficiencies, and cell viability.

Rapid mechanical deformation of cells has emerged as a promising, vector-free method for intracellular delivery of macromolecules and nanomaterials. This protocol provides detailed steps on how to use the system for a broad range of applications.

Sağlam, mikroakışkan Hücre içi Delivery Platform olarak hücre Sıkma

Rapid mechanical deformation of cells has emerged as a promising, vector-free method for intracellular delivery of macromolecules and nanomaterials. This ...

The Multi-organ Chip - A Microfluidic Platform for Long-term Multi-tissue Coculture

The ever growing amount of new substances released onto the market and the limited predictability of current in vitro test systems has led to a high need for new solutions for substance testing. Many drugs that have been removed from the market due to drug-induced liver injury released their toxic potential only after several doses of chronic testing in humans. However, a controlled microenvironment is pivotal for long-term multiple dosing experiments,&#160;as even minor alterations in extracellular conditions may greatly influence the cell physiology. We focused within our research program on the generation of a microengineered bioreactor, which can be dynamically perfused by an on-chip pump and combines at least two culture spaces for multi-organ applications. This circulatory system mimics the in vivo conditions of primary cell cultures better and assures a steadier,&#160;more quantifiable extracellular relay of signals to the cells. 
For demonstration purposes, human liver equivalents, generated by aggregating differentiated HepaRG cells with human hepatic stellate cells in hanging drop plates, were cocultured with human skin punch biopsies for up to 28 days inside the microbioreactor. The use of cell culture inserts enables the skin to be cultured at an air-liquid interface, allowing topical substance exposure. The microbioreactor system is capable of supporting these cocultures at near physiologic fluid flow and volume-to-liquid ratios, ensuring stable and organotypic culture conditions. The possibility of long-term cultures enables the repeated exposure to substances. Furthermore, a vascularization of the microfluidic channel circuit using human dermal microvascular endothelial cells yields a physiologically more relevant vascular model.

Here, we present a protocol to coculture primary cells, tissue models and punch biopsies in a microfluidic multi-organ chip for up to 28 days. Human dermal microvascular endothelial cells, liver aggregates and skin biopsies were successfully combined in a common media circulation.

Çok organ Chip - Uzun vadeli Çok doku kokültürü için mikroakışkan Platformu

The ever growing amount of new substances released onto the market and the limited predictability of current in vitro test systems has led to a high need ...

Controlled Microfluidic Environment for Dynamic Investigation of Red Blood Cell Aggregation

Blood, as a non-Newtonian biofluid, represents the focus of numerous studies in the hemorheology field. Blood constituents include red blood cells, white blood cells and platelets that are suspended in blood plasma. Due to the abundance of the RBCs (40% to 45% of the blood volume), their behavior dictates the rheological behavior of blood especially in the microcirculation. At very low shear rates, RBCs are seen to assemble and form entities called aggregates, which causes the non-Newtonian behavior of blood. It is important to understand the conditions of the aggregates formation to comprehend the blood rheology in microcirculation. The protocol described here details the experimental procedure to determine quantitatively the RBC aggregates in microcirculation under constant shear rate, based on image processing. For this purpose, RBC-suspensions are tested and analyzed in 120 x 60 &#181;m poly-dimethyl-siloxane (PDMS) microchannels. The RBC-suspensions are entrained using a second fluid in order to obtain a linear velocity profile within the blood layer and thus achieve a wide range of constant shear rates. The shear rate is determined using a micro Particle Image Velocimetry (&#181;PIV) system, while RBC aggregates are visualized using a high speed camera. The videos captured of the RBC aggregates are analyzed using image processing techniques in order to determine the aggregate sizes based on the images intensities.

The protocol described details an experimental procedure to quantify Red Blood Cell (RBC) aggregates under a controlled and constant shear rate, based on image processing techniques. The goal of this protocol is to relate RBC aggregate sizes to the corresponding shear rate in a controlled microfluidic environment.

Kırmızı Kan Hücresi Toplama Dinamik Soruşturma Kontrollü mikroakışkan Çevre

Blood, as a non-Newtonian biofluid, represents the focus of numerous studies in the hemorheology field. Blood constituents include red blood cells, white ...

A Microfluidic Platform for High-throughput Single-cell Isolation and Culture

Studying the heterogeneity of single cells is crucial for many biological questions, but is technically difficult. Thus, there is a need for a simple, yet high-throughput, method to perform single-cell culture experiments. Here, we report a microfluidic chip-based strategy for high-efficiency single-cell isolation (~77%) and demonstrate its capability of performing long-term single-cell culture (up to 7 d) and cellular heterogeneity analysis using clonogenic assay. These applications were demonstrated with KT98 mouse neural stem cells, and A549 and MDA-MB-435 human cancer cells. High single-cell isolation efficiency and long-term culture capability are achieved by using different sizes of microwells on the top and bottom of the microfluidic channel. The small microwell array is designed for precisely isolating single-cells, and the large microwell array is used for single-cell clonal culture in the microfluidic chip. This microfluidic platform constitutes an attractive approach for single-cell culture applications, due to its flexibility of adjustable cell culture spaces for different culture strategies, without decreasing isolation efficiency.

Here, we present a protocol for isolating and culturing single cells with a microfluidic platform, which utilizes a new microwell design concept to allow for high-efficiency single cell isolation and long-term clonal culture.

Yüksek verim Tek hücreli İzolasyonu ve Kültür mikroakışkan Platformu

Studying the heterogeneity of single cells is crucial for many biological questions, but is technically difficult. Thus, there is a need for a simple, yet ...

Fully Automated Centrifugal Microfluidic Device for Ultrasensitive Protein Detection from Whole Blood

Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) is a promising method to detect small amount of proteins in biological samples. The devices providing a platform for reduced sample volume and assay time as well as full automation are required for potential use in point-of-care-diagnostics. Recently, we have demonstrated ultrasensitive detection of serum proteins, C-reactive protein (CRP) and cardiac troponin I (cTnI), utilizing a lab-on-a-disc composed of TiO2 nanofibrous (NF) mats. It showed a large dynamic range with femto molar (fM) detection sensitivity, from a small volume of whole blood in 30 min. The device consists of several components for blood separation, metering, mixing, and washing that are automated for improved sensitivity from low sample volumes. Here, in the video demonstration, we show the experimental protocols and know-how for the fabrication of NFs as well as the disc, their integration and the operation in the following order: processes for preparing TiO2 NF mat; transfer-printing of TiO2 NF mat onto the disc; surface modification for immune-reactions, disc assembly and operation; on-disc detection and representative results for immunoassay. Use of this device enables multiplexed analysis with minimal consumption of samples and reagents. Given the advantages, the device should find use in a wide variety of applications, and prove beneficial in facilitating the analysis of low abundant proteins.

This protocol demonstrates how to achieve femto molar detection sensitivity of proteins in 10 &#181;L of whole blood within 30 min. This can be achieved by using electrospun nanofibrous mats integrated in a lab-on-a-disc, which offers high surface area as well as effective mixing and washing for enhanced signal-to-noise ratio.

Tüm Blood adlı ultrasensitive Protein Algılama için Tam Otomatik Santrifüj mikroakışkan Cihazı

Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) is a promising method to detect small amount of proteins in biological samples. The devices providing a platform ...

Microfluidic Platform with Multiplexed Electronic Detection for Spatial Tracking of Particles

Microfluidic processing of biological samples typically involves differential manipulations of suspended particles under various force fields in order to spatially fractionate the sample based on a biological property of interest. For the resultant spatial distribution to be used as the assay readout, microfluidic devices are often subjected to microscopic analysis requiring complex instrumentation with higher cost and reduced portability. To address this limitation, we have developed an integrated electronic sensing technology for multiplexed detection of particles at different locations on a microfluidic chip. Our technology, called Microfluidic CODES, combines Resistive Pulse Sensing with Code Division Multiple Access to compress 2D spatial information into a 1D electrical signal. In this paper, we present a practical demonstration of the Microfluidic CODES technology to detect and size cultured cancer cells distributed over multiple microfluidic channels. As validated by the high-speed microscopy, our technology can accurately analyze dense cell populations all electronically without the need for an external instrument. As such, the Microfluidic CODES can potentially enable low-cost integrated lab-on-a-chip devices that are well suited for the point-of-care testing of biological samples.

We demonstrate a microfluidic platform with an integrated surface electrode network that combines resistive pulse sensing (RPS) with code division multiple access (CDMA), to multiplex detection and sizing of particles in multiple microfluidic channels.

Parçacıkların Mekansal Takip için Çoklanmış Elektronik Algılama ile mikroakışkan Platformu

Microfluidic processing of biological samples typically involves differential manipulations of suspended particles under various force fields in order to ...

Imaging the Root Hair Morphology of Arabidopsis Seedlings in a Two-layer Microfluidic Platform

Root hairs increase root surface area for better water uptake and nutrient absorption by the plant. Because they are small in size and often obscured by their natural environment, root hair morphology and function are difficult to study and often excluded from plant research. In recent years, microfluidic platforms have offered a way to visualize root systems at high resolution without disturbing the roots during transfer to an imaging system. The microfluidic platform presented here builds on previous plant-on-a-chip research by incorporating a two-layer device to confine the Arabidopsis thaliana main root to the same optical plane as the root hairs. This design enables the quantification of root hairs on a cellular and organelle level and also prevents z-axis drifting during the addition of experimental treatments. We describe how to store the devices in a contained and hydrated environment, without the need for fluidic pumps, while maintaining a gnotobiotic environment for the seedling. After the optical imaging experiment, the device may be disassembled and used as a substrate for atomic force or scanning electron microscopy while keeping fine root structures intact.

Imaging the Root Hair Morphology of Arabidopsis Seedlings in a Two-layer Microfluidic Platform

This article demonstrates how to culture Arabidopsis thaliana seedlings in a two-layer microfluidic platform that confines the main root and root hairs to a single optical plane. This platform can be used for real-time optical imaging of fine root morphology as well as for high-resolution imaging by other means.

Kök saç Morfoloji Arabidopsis fidan bir iki katlı mikrosıvısal platformda görüntüleme

Root hairs increase root surface area for better water uptake and nutrient absorption by the plant. Because they are small in size and often obscured by ...

A Microfluidic Platform for Longitudinal Imaging in Caenorhabditis elegans

In the last decade, microfluidic techniques have been applied to study small animals, including the nematode Caenorhabditis elegans, and have proved useful as a convenient live imaging platform providing capabilities for precise control of experimental conditions in real time. In this article, we demonstrate live imaging of individual worms employing WormSpa, a previously-published custom microfluidic device. In the device, multiple worms are individually confined to separate chambers, allowing multiplexed longitudinal surveillance of various biological processes. To illustrate the capability, we performed proof-of-principle experiments in which worms were infected in the device with pathogenic bacteria, and the dynamics of expression of immune response genes and egg laying were monitored continuously in individual animals. The simple design and operation of this device make it suitable for users with no previous experience with microfluidic-based experiments. We propose that this approach will be useful for many researchers interested in longitudinal observations of biological processes under well-defined conditions.

A Microfluidic Platform for Longitudinal Imaging in Caenorhabditis elegans

In this article, we demonstrate live imaging of individual worms employing a custom microfluidic device. In the device, multiple worms are individually confined to separate chambers, allowing multiplexed longitudinal surveillance of various biological processes.

Boyuna Imaging'de Caenorhabditis elegans için bir mikrosıvısal Platform

In the last decade, microfluidic techniques have been applied to study small animals, including the nematode Caenorhabditis elegans, and have proved ...

An Ultrahigh-throughput Microfluidic Platform for Single-cell Genome Sequencing

Sequencing technologies have undergone a paradigm shift from bulk to single-cell resolution in response to an evolving understanding of the role of cellular heterogeneity in biological systems. However, single-cell sequencing of large populations has been hampered by limitations in processing genomes for sequencing. In this paper, we describe a method for single-cell genome sequencing (SiC-seq) which uses droplet microfluidics to isolate, amplify, and barcode the genomes of single cells. Cell encapsulation in microgels allows the compartmentalized purification and tagmentation of DNA, while a microfluidic merger efficiently pairs each genome with a unique single-cell oligonucleotide barcode, allowing &gt;50,000 single cells to be sequenced per run. The sequencing data is demultiplexed by barcode, generating groups of reads originating from single cells. As a high-throughput and low-bias method of single-cell sequencing, SiC-seq will enable a broader range of genomic studies targeted at diverse cell populations.

Single-cell sequencing reveals genotypic heterogeneity in biological systems, but current technologies lack the throughput necessary for the deep profiling of community composition and function. Here, we describe a microfluidic workflow for sequencing &gt;50,000 single-cell genomes from diverse cell populations.

Tek hücreli genom sıralama için bir üretilen iş Ultrahigh mikrosıvısal Platform

Sequencing technologies have undergone a paradigm shift from bulk to single-cell resolution in response to an evolving understanding of the role of ...