The Authors acknowledge the economic support by FAIP (Federazione Associazioni Italiane Paraplegici), &#8220;Neurogel-en-Marche&#8221; Foundation (France), Fondazione &#8220;La Colonna&#8221;.

NOT: Tüm işlemler Milan Üniversitesi Gözden Geçirme Komitesi tarafından onaylanan ve Avrupa Toplulukları Yönergesi tarihli November 1986 (86/609 / EEC) ile uyumlu Laboratuvar Hayvanları İtalyan Kuralları karşılandı. Transplantasyon için hücrelerin hazırlanması 1. NOT: 5. ve bu deneyler için kültür 9. geçit arasında kullanın nöral kök hücreler; Transplantasyon için etiketli önce çoğalması ve farklılaşması yeteneği kültürleri test edin. 12 immünsitokimya ile farklılaşma derecesini belirleyin. <ol><li> 1 x 10 6 hücre / 150 ul (nakli fare başına 1 x 10 6 hücre) bir konsantrasyona kadar yeniden süspanse hücreleri. Hücrelerin bir aşırı şırınga yükleme amaçları için gerekli olduğu için, fare başına en az 1,2 x 10 6 hücre hazırlayın. </li><li> 10 ml&#39;lik bir konik şişe içinde hücreler, nöral kök hücre ortamı 13 ile 3 kez yıkayın. Her birindeYıkama adımı, santrifüj ile çökelti hücreleri (500 x g 5 dakika, RT). </li><li> Son sıkma önce hücreleri saymak. </li><li> Hücrelerinin (5 dakika için 500 x g) santrifüj ve daha sonra herhangi bir hücrelerin çıkarılması için dikkatli olmak ancak yüzer en fazla 25 ul bırakarak süpernatan aspire. </li><li> Hafif pipetle hücre peleti tekrar süspansiyon seyreltici C 1 ml ilave etmek suretiyle bir 2 x hücre süspansiyonu hazırlanır. </li><li> Bir tüp içinde Seyreltici C 1 ml PKH26 etanol boya çözeltisi 4 ul ekleyerek Seyreltici C - (6 M, 4 x 10) ve dağıtmak için iyice karıştırın hemen boyama önce, 2x boya çözeltisi hazırlanır. </li><li> Hızla 2x Boya çözeltisi, 1 ml 2x hücre süspansiyonu 1 ml ilave edilir ve hemen (mi, 1.2 x 10 7 hücre / ve 2 x 10 olacak nihai hücre yoğunluğu - 6M PKH26) pipetleme örnek karıştırın. </li><li> 1-5 dakika boyunca hücre / boya süspansiyonu inkübe edin. </li><li> (Eşit hacmi eklenerek 2 boyama durdurunmi) HBSS içinde% 1 BSA çözeltisi ile 1 dakika boyunca inkübe edin. </li><li> Santrifüj hücreleri (500 xg az 10 için) ve dikkatle süpernatant kaldırmak. </li><li> HBSS ve santrifüj (5 dakika için 500 x g), 10 ml içinde süspanse hücre topağı. </li><li> Serbest boyanın temizlenmesi için tam ortam, 10 ml hücre pelletini 2 kez daha yıkanır. </li><li> Hücre kurtarma, hücre canlılığı ve floresan yoğunluğu değerlendirmesi için tam ortam, 10 ml hücre pelletini. Hücre transplantasyonu için gerekli olan ise, yıkama ve 3.3 x 10 5 hücre / 50 ul bir konsantrasyonda bir steril fizyolojik çözelti içinde tekrar süspansiyon haline getirin. </li></ol> Cerrahi için 2. Hazırlık <ol><li> Temiz ve sterilize cerrahi cihaz. </li><li> Aseptik madde ile silerek cerrahi alanını hazırlayın. IH Darbeli aygıtını kurun. </li><li> Anestezi ekipmanı hazırlayın: VetScav Filtre, sürekli akış İndüksiyon Odası, Oksijen Gen Cihazı Tartı ile Aktif Gaz Çöpçüesyasi, Fareler Düşük Akış O 2 Metre. Indüksiyon odasına ve ameliyat sırasında kullanılan maske temizleyin. </li><li> % 2.5 oksijen (h / h) izofluran (1 l / dk) hayvanlara anestezi ve ilaç etkili olması için akış indüksiyondan sonra 5 dakika bekleyin. Bıyıkları seğirmesi olup olmadığını kontrol edin veya Kapkaççı kısma yanıt yavaş arka bacak çekme varsa. Ameliyat sırasında,% 2.0 oksijen (h / h) izofluran (1 l / dk) izofluran konsantrasyonu azaltır. </li></ol> Cerrahi ve Transplantasyon için Fareler 3. Hazırlık <ol><li> Standart koşullarda deneyler (22 ± 2 ° C,% 65 nem ve 8:00-8:00 arasında yapay ışık) önce en az 3 gün boyunca erkek yetişkin CD1 fareler (25-30 gr) tutun. NOT: sütür cerrahi hazırlık tüm prosedür yaklaşık 40 dakika sürer. <ol><li> Hayvan belirlemek için, su geçirmez, renkli mürekkep ile kuyruk işaretleyin. </li></ol></li><li> Bir Electr kullanınic kesme bel bölgesine, yaklaşık T2 düzeyinde, boyun fare dorsal saç kesmek için. </li><li> Iyodür çözeltisi ve etanol (steril su içinde% 70) ile hazırlanmış alan sterilize edin. </li><li> Bir 200 alt deri (sc) enjeksiyon ul gentamisin (steril tuzlu su çözeltisi içinde, 1 mg / ml) ile bir hayvan tedavi edin. </li><li> Buprenorfin kurumasını önlemek ve enjekte etmek için, her iki hayvan gözlere oftalmik yağlayıcı (deri altından, 0,03 mg / kg), ağrının hafifletilmesi için. </li></ol> 4. Laminektomi <ol><li> Ameliyat sırasında hipotermi sorunu önlemek için sıcak bir slayt üzerinde fare yerleştirin. Dorsal yüzü yukarı bakacak şekilde yerleştirin hayvan. </li><li> T7&#39;nin T12 ilgi bölge üzerinde bir neşter, dikey bir kesi yapmak. </li><li> (Genellikle göğüs sırt süreçleri inci 5 inci ve 6 arasındaki boşlukta bulunan) standart forseps kullanarak cilt ve yüzeyel yağ yastığı tutun. </li><li> T6 olarak teknenin altında işlem Sayısısonra T7 taşımak. </li><li> Omurganın eğrilik artırmak için fare ventral tarafında biraz altında yatağı yerleştirin. Graefe forseps ile bloke ederek omurilik hareketsiz. </li><li> Lamina temas neşter ucu dorsal yüzeyine kadar neşter kullanılarak T7 ve T10 vertebra seviyesinden bilateral paravertebral kaslar kesin. </li><li> T10 kadar T7&#39;nin kavşak kapalı kene neşter kullanın. T8 ve T9 dikenli çıkıntılar arasındaki boşlukta durdurun. Mikro makas ile T8-T9 T9-T10 arasındaki dokuları kesin. <ol><li> T9 sürecini kaldırmak için Rongeur kullanın. Dikkatle mikro makas ile kas tabakası kazınarak ile kavşak Açığa. Kemik maruz kadar devam edin. </li></ol></li><li> Lamina kasları kaldırmak ve omurlar arasındaki küçük bir boşluk açmak için forseps kullanın. Yavaşça, kemik altında mikro makas eklemek her iki tarafta lamina kesmek ve forseps ile bu kısmını kaldırın. </li><li> F lamina kaldırorceps kablosunu ortaya çıkarmak. Arkasında herhangi bir ücretsiz veya pürüzlü kemik parçaları bırakmamaya emin olun; Rongeur ile bunları kaldırmak. </li><li> Kesi yakın olabilecek periost yanı sıra herhangi bir kemik parçaları veya kasları kaldırmak için küçük bir ipucu forseps kullanın. </li><li> T9 dorsal sürecinin üst yarısını çıkarın ve IH Darbeli cihaz protokolüne devam edin. </li></ol> 5. IH Darbeli Cihaz Protokolü (Kontüzyon) <ol><li> IH Darbeli cihazın istikrar platformu ortasında fare yerleştirin. </li><li> İki ortak konumlandırma kollarından stabilizasyon platformu ile bağlanmış iki diş forseps ile hayvan (torakal vertebra için sol kol, servikal vertebra için sağ kolu) engelleyin. </li><li> Rostralinde vertebra gövdesinin (T8) yanal kenarını kavramak rostralinde kol kullanın. </li><li> T10 vertebra vücudu kavramak için aynı şekilde kaudal kolunu işleyin. </li><li> Ucu cihazın istikrar platformu yerleştirin ve alt (çap 0.75mm) dokunmadan mümkün olduğunca kord kadar yakın. </li><li> Etkisini başlatmadan önce uca üç tam döner kaldırın. </li><li> 100 mm / sn 60 kdyn bir kuvvet verecek şekilde ayarlandı impactor ile ezilme gerçekleştirin. </li></ol> 6. Dikişler ve Post-bakım <ol><li> Bir 4/0 emilebilir dikiş ipliğinin ile kesi sütür. Kaldırıldı lamina yerinde maruz omurilik Kapak; küçük bir iğne vasıtasıyla kesme uçlarında doku dikiş. Hemen yukarıda ve spinal kord maruz sitenin altında iki dikiş koyun. </li><li> Altta yatan kasları kapalı kısma olmadan iki veya üç Refleks klipleri kullanarak cilt kapatın. </li><li> Alt sırt enjekte tuzlu su çözeltisi, deri altından 2 ml fare ameliyat sonrasında hidratı. </li><li> Cerrahi kurtarma sırasında hipotermi önlemek için geri önceden ısıtılmış kafeste fare yerleştirin. Isıtma pedleri yerleştirin kafesleri. </li><li> Kontrol ederek akut faz sonrası yaralanma sırasında fareler Monitörboyut mesane, dikiş ve hayvan ağırlığı günde iki kez. Yavaşça (kanlı, bulutlu ya da herhangi içeren çökeltilerin olabilir idrar) idrar yolu enfeksiyonları önlemek için en mesane (7 gün boyunca günde iki kez) sıkın. </li><li> Ve antibiyotik (iki gün ameliyat sonrası sc enjeksiyonu için 2 ml) içinde bir tuzlu su çözeltisi enjeksiyon ile günde bir kez fareler tedavi (gentamisin 0.2 mi; deri altından enjeksiyon), beş gün boyunca yaralanma sonrası. </li><li> Buprenorfin ile ameliyat sonrası analjezi için fareler tedavi (0.1 mg / kg, günde iki kez), 3 gün boyunca yaralanma sonrası. </li></ol> Hücreler 7. kuyruk damarından Not: Bir sonraki adımda kuyruk venine hücreleri enjekte edilmesi için prosedür gösterilmektedir. Hücreler ayrıca, bir stereotaksik çerçeve 15-16 kullanarak, intraspinal nakli ile birlikte uygulanabilir, veya cisterna magna 17 içine edilebilir. Bu diğer hücre tipleri, mezenkimal stromal hücreleri gibi, bu yöntemle nakledilen olabilir dikkate alınması önemlidir(Örneğin, kemik iliği mezenkimal kök hücreleri, yağ kaynaklı kök hücreler, amniyotik sıvı hücreler). Ayrıca, bu tür nanoparçacıklar gibi diğer tedavi yöntemleri, omurilik yaralanması sonrası kuyruk damarından enjekte edilebilir. <ol><li> Kullanmadan önce iğne temizlemek için% 70 etanol ve PBS kullanın. Iğne ve sadece steril eldiven ile şırınga tutun. </li><li> 0.3 ml şırınga (29 G iğne ve 0.33 cc şırınga) içine deney tüpü ve yük hücreleri 75 ul hücrelerin tekrar. </li><li> Kabarcıklar hücre süspansiyonu içinde mevcut olduğundan emin olun. Hücre sedimantasyon önlemek için yatay bir pozisyonda şırınga tutun. </li><li> Kuyruk damarları genişletmek için ısı lambası altında fare yerleştirin. </li><li> Dar mavi hat olarak yanal kuyruk damarı görselleştirmek için fare süzgeç içine yavaşça çekin fareyi tut ve. </li><li> Alkollü bir bezle temizleyin kuyruk. Ven görüntülenmiştir sonra, sol elin orta parmağı ve başparmak arasında kuyruk ven kapmak. </li><li> Ufukta bir 15 ° açıyla yüzeye iğneyi getirin ve konik kadar olduğundan emin olun. </li><li> 0,33 ul / sn bir hızda hücrelere 50 ul enjekte edilir. Enjeksiyon sonrası, 10 saniye ile iğne geri çekilmesini geciktirmek. Yavaş yavaş iğne geri çekin ve hücre süspansiyonu olası efflux dikkat. </li><li> Yükler arasındaki adım 7.1 olarak şırınga temizleyin. </li></ol> 8. Davranış Testleri ve Hind Ekstremite Fonksiyon <ol><li> Açık alanda fare yerleştirin. </li><li> Basso fare ölçeği (BMS) 18 göre açık alan testi ile kontüzyon sonrası lokomotor fonksiyonunu ve arka bacak kurtarma değerlendirin. Not: nörolojik fonksiyon 4 hafta 18 yaralanma sonrası gün 3, periyodik olarak değerlendirmek gerekir. </li></ol> 9. Perfüzyon <ol><li> Deneysel periyodun sonunda, sodyum pentobarbital intraperitonal enjeksiyonu (65 mg / kg) ile hayvanlar anestetize. Değerlendirme, için ayak Kıstırmaları kullanıne anestezi düzeyi fare zararlı uyaranlara tepkisiz sadece sonra devam ve. </li><li> Bir ameliyat uçakta bir yatar pozisyonda hayvan kısıtlamaktadır. </li><li> Sadece göğüs kafesinin altında integument ve karın duvarı kesti. Karaciğerden diyaframı ayırın. </li><li> Plevra boşluğu ortaya çıkarmak için diyaframı kesmek için makas kullanın. </li><li> Yaka kemikler kadar göğüs kafesinin kenarlarını kesin. </li><li> Kılıç şeklinde kıkırdak kelepçe ve başının üzerinde hemostat yerleştirmek için hemostat kullanın. </li><li> Forseps ile bir çapraz uçakta kalp alt üçte tutun. Sol ventrikül içine iğne takın. </li><li> Kalp kelepçe bir hemostat kullanın. Bu iğneyi sabitleyen ve sızıntıyı önler. </li><li> Sağ atrium kesmek için makas kullanın. </li><li> PBS hayvan ile (18 ml / dk) pompa izin verin. (Yaklaşık 70 ml PBS karşılık gelen 3-4 dakika) tampon infüzyon süresince bu basıncı koruyun. Kalp temiz olana kadar devam edin.</li><li> Pompa boyunca tespit edici (distile su içinde% 4 paraformaldehid,% 4 PFA) izin vermek için musluğunu geçin. % 4 PFA yaklaşık 8-10 dakika boyunca (300 mi) hayvan pompalanması izin verin. Yavaş yavaş / dakika, 30 ml &#39;lik bir maksimum ulaşmak için basınç artar. Bir sertleştirilmiş karaciğer başarılı bir perfüzyon iyi göstergesidir. </li></ol> 10. Doku Toplama ve İşleme, Histoloji ve Iimmunohistochemistry <ol><li> T5 gelen L1 spinal kablolarını parçalara ayır. Sonra (4 ° C&#39;de O / N)% 4 PFA 6 ml doku sonrası düzeltmek. </li><li> Kriyo koruma ve donma sırasında kristallerin oluşumunu önlemek için, 4 ° C&#39;de 72 saat boyunca% 30 sukroz ile bir çözelti içinde, aynı doku koyun. </li><li> Hızlı kuru buz kullanarak kablosunu dondurma ve -80 ° C&#39;de saklayın. </li><li> 15 um kalınlığa sahip bir kriyostat ile bölüm ve cam slaytlar üzerine bölümleri toplamak ve bağışıklık devam eder. </li><li> Her saniye için 200 ul PBS ile bölümleri durulayınhalojenür ile (3 kez, her biri 5 dakika, OS). </li><li> 200,% 10 NGS ul ve oda sıcaklığında 1 saat için PBS içinde% 0.2 Triton X-100 ile her bir slayt geçirgenliği. </li><li> Her bir sürgü için 200 ul PBS (, 5 dakika her biri, OS 3 kez) bölümleri durulayın. </li><li> (PBS içinde% 0.1 Triton X-100,% 5 NGS), 30 dakika (RT) slaytın bloklama çözeltisi 200 ul spesifik olmayan sitesi bloke eder. </li><li> 4 ° C &#39;de O / N birincil antikor, 200 ul her bir slayt inkübe (% 5 NGS antikor seyreltik, PBS içinde% 0.1 Triton X-100). </li><li> Her bir sürgü için 200 ul PBS ile yıkayın bölümleri ile (3 kez, her biri 5 dakika, RT) yapıldı. </li><li> Oda sıcaklığında 2 saat süre ile, uygun sekonder antikor ile inkübe edin. </li><li> Her bir sürgü için 200 ul PBS ile yıkayın bölümleri ile (3 kez, her biri 5 dakika, RT) yapıldı. </li><li> 4 &#39;, 6-diamidin-2-phenilindole (DAPI) (ug / ml nihai konsantrasyon 1 ug, oda sıcaklığında 10 dakika), 200 ul Leke çekirdekleri. </li><li> FluorSave Reaktif kullanarak monte ve konfokal mikroskobu ile analiz. NOT: InKontrol belirlemeleri, birincil antikorlar çıkarılır ve aynı alt sınıfın olmayan IgG konsantrasyonuna denk konsantrasyonlar ile değiştirilmesi gerekir. Mikrotübüle bağlı protein 2 birincil antikor kullanıldı. </li></ol>

<ol>
	<li>. Cord Injury Statistical Center: spinal cord injury facts and figures at glance Available from: <a target="_blank" href="https://www.nscisc.uab.edu/PublicDocuments/fact_figures_docs/Facts%202013.pdf">https://www.nscisc.uab.edu/PublicDocuments/fact_figures_docs/Facts%202013.pdf</a> (2013)</li><li>Yip, P. K., Malaspina, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spinal+cord+trauma+and+the+molecular+point+of+no+return.">Spinal cord trauma and the molecular point of no return.</a> Molecular Neurodegeneration. 7, 6 (2012).</li><li>Fehlings, M. G., Cadotte, D. W., Fehlings, L. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+series+of+systematic+reviews+on+the+treatment+of+acute+spinal+cord+injury:+a+foundation+for+best+medical+practice.">A series of systematic reviews on the treatment of acute spinal cord injury: a foundation for best medical practice.</a> J Neurotrauma. 28 (8), 1329-1333 (2011).</li><li>Furlan, J. C., Noonan, V., Cadotte, D. W., Fehlings, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Timing+of+decompressive+surgery+of+spinal+cord+after+traumatic+spinal+cord+injury:+an+evidence-based+examination+of+pre-clinical+and+clinical+studies.">Timing of decompressive surgery of spinal cord after traumatic spinal cord injury: an evidence-based examination of pre-clinical and clinical studies.</a> J Neurotrauma. 28 (8), 1371-1399 (2011).</li><li>Sekhon, L. H., Fehlings, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology,+demographics,+and+pathophysiology+of+acute+spinal+cord+injury.">Epidemiology, demographics, and pathophysiology of acute spinal cord injury.</a> Spine. 26 (24), 2-12 (2001).</li><li>Gorio, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recombinant+human+erythropoietin+counteracts+secondary+injury+and+markedly+enhances+neurological+recovery+from+experimental+spinal+cord+trauma.">Recombinant human erythropoietin counteracts secondary injury and markedly enhances neurological recovery from experimental spinal cord trauma.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 99 (14), 9450-9455 (2002).</li><li>Windle, W. F., Clemente, C. D., Chambers, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+formation+of+a+glial+barrier+as+a+means+of+permitting+a+peripheral+nerve+to+grow+into+the+brain.">Inhibition of formation of a glial barrier as a means of permitting a peripheral nerve to grow into the brain.</a> J Comp Neurol. 96 (2), 359-369 (1952).</li><li>Young, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spinal+cord+contusion+models.">Spinal cord contusion models.</a> Prog Brain Res. 137, 231-255 (2002).</li><li>Stokes, B. T., Noyes, D. H., Behrmann, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+electromechanical+spinal+injury+device+with+dynamic+sensitivity.">An electromechanical spinal injury device with dynamic sensitivity.</a> J Neurotrauma. 9 (3), 187-195 (1992).</li><li>Jakeman, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Traumatic+spinal+cord+injury+produced+controlled+contusion+in+mouse.">Traumatic spinal cord injury produced controlled contusion in mouse.</a> J Neurotrauma. 17 (4), 299-319 (2000).</li><li>Sahni, V., Kessler, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell+therapies+for+spinal+cord+injury.">Stem cell therapies for spinal cord injury.</a> Nat Rev Neurol. 6, 363-372 (2010).</li><li>Marfia, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+neural+precursors+isolated+from+post+mortem+brain+yield+mostly+neurons:+an+erythropoietin-dependent+process.">Adult neural precursors isolated from post mortem brain yield mostly neurons: an erythropoietin-dependent process.</a> Neurobiol Dis. 43 (1), 86-98 (2011).</li><li>Gritti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multipotent+neural+stem+cells+reside+into+the+rostral+extension+and+olfactory+bulb+of+adult+rodents.">Multipotent neural stem cells reside into the rostral extension and olfactory bulb of adult rodents.</a> J Neurosci. 22 (2), 437-445 (2002).</li><li>Whetstone, W. D., Hsu, J. Y., Eisenberg, M., Werb, Z., Noble-Haeusslein, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> J Neurosci Res. 74 (2), 227-239 (2003).</li><li>Gonzalez-Lara, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+cellular+magnetic+resonance+imaging+to+track+the+fate+of+iron-labeled+multipotent+stromal+cells+after+direct+transplantation+in+a+mouse+model+of+spinal+cord+injury.">The use of cellular magnetic resonance imaging to track the fate of iron-labeled multipotent stromal cells after direct transplantation in a mouse model of spinal cord injury.</a> Mol Imaging Biol. 13 (4), 702-711 (2010).</li><li>Ottobrini, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Magnetic+resonance+imaging+of+stem+cell+transplantation+in+injured+mouse+spinal+cord.">Magnetic resonance imaging of stem cell transplantation in injured mouse spinal cord.</a> Cell R4. 2 (3), e963 (2014).</li><li>Janowwski, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurotransplantation+in+mice:+The+concorde-like+position+ensures+minimal+cell+leakage+and+widespread+distribution+of+cells+transplanted+into+the+cistern+magna.">Neurotransplantation in mice: The concorde-like position ensures minimal cell leakage and widespread distribution of cells transplanted into the cistern magna.</a> Neuroscience Letter. 430 (2), 169-174 (2008).</li><li>Basso, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basso+Mouse+Scale+for+locomotion+detects+differences+in+recovery+after+spinal+cord+injury+in+five+common+mouse+strains.">Basso Mouse Scale for locomotion detects differences in recovery after spinal cord injury in five common mouse strains.</a> J Neurotrauma. 23 (5), 635-659 (2006).</li><li>Hofstetter, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allodynia+limits+the+usefulness+of+intraspinal+neural+stem+cell+grafts;+directed+differentiation+improves+outcome.">Allodynia limits the usefulness of intraspinal neural stem cell grafts; directed differentiation improves outcome.</a> Nat Neurosci. 8 (3), 346-353 (2005).</li><li>Bottai, D., Madaschi, L., Di Giulio, A. M., Gorio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viability-dependent+promoting+action+of+adult+neural+precursors+in+spinal+cord+injury.">Viability-dependent promoting action of adult neural precursors in spinal cord injury.</a> Mol. Med. 14 (9-10), 634-644 (2008).</li><li>Bottai, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+stem+cells+promote+motor+recovery+and+affect+inflammatorycell+infiltration+in+spinal+cord+injured+mice.">Embryonic stem cells promote motor recovery and affect inflammatorycell infiltration in spinal cord injured mice.</a> Exp Neurol. 223 (2), 452-463 (2010).</li></ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali ilgi beyan.

Bu yazıda (şiddetli) 70 Kdyne bir kuvvet bir Sonsuz Impactor ile travmatik omurilik yaralanması tekrarlanabilir bir model elde etmek için bir yöntem tarif. Daha büyük bir kuvvet paradigma (80 Kdyne) kullanarak, maalesef yüksek fareler mortalite ile ilişkili bir daha ciddi yaralanmalara neden olabilir. Bu sorunu önlemek için, biz bunlara fonksiyonu ve alt mortalite kademeli toparlanma ile tekrarlanabilir lezyon ilişkili bir orta kuvvet paradigma (70 Kdyne) seçin. Bu darbe platformda hayvanın doğru tespit ?...

Bir omurilik yaralanması (SKY), spor ve şiddet 1, motorlu taşıtlar kaza gibi yüksek enerjili travma nedeniyle en sık yaralanma olduğunu düşer. Şiddetli SCI, yaralanma kuvvet nörolojik fonksiyon ani kaybına neden nöral dokuyu tahrip eder veya zarar. Travmatik SKY yaş 10 ve 40 yaş arası genç erişkinlerde sık görülür. Büyük ölçüde hastanın ruhsal ve fiziksel durumu etkiler ve topluma 2 büyük ekonomik etkisi neden olur. Akut fazda tedavi yaklaşımı genellikle muhtemelen daha fazla zarar 3-4 azaltmak için kortikosteroid, cerrahi stabilizasyon ve dekompresyon yüksek doz sınırlıdır, ancak SKY sonrası lokomotor kurtarma bu yöntemlerin rolleri hala tartışmalıdır. Akut doku kaybı, travmatik yaralanma ve çok sayıda hücre tipinde 5-6 dejenerasyonu neden demiyelinasyon ve ölüm ikincil mekanizmaların harekete ek olarak. fonksiyonun geri derecesi edebilirsinizOn yaralanma yerinde 7 de bağışladı beyaz cevher ölçüde ilişkili. SCI hayvan modelleri yaralanma dokunun biyolojik yanıtları araştırmak ve potansiyel tedavileri test etmek için de olabilir. Ayrıca, bir insan patolojisinde yararlı bir hayvan modeli sadece bu durum bazı yönlerini üretmek için olan, aynı zamanda doğrudan klinik gözlem ve deney daha fazla avantajlar sağlar gerekir. Spinal kord yaralanması en yaygın kullanılan modeller cerrahi maruz omurilik 8 teslim kontüzyon veya sıkıştırma yaralanma içerir. kontrollü kilo bırak kontüzyon yaralanma gelişimi SKY araştırma tarihinin önemli bir kilometre taşını temsil etmektedir. Ohio State University, omurilik araştırma merkezi bir bilgisayar 9 tarafından kontrol etkisi parametreleri ile omurilik belirli bir sıkıştırma uyarılması için kullanılabilecek bir cihazın teknolojik zorluk izlemiştir. Bu aslında kullanım wi için tasarlanmıştırinci sıçanlar; Daha sonra farelerde 10 doğru uygulamak için modifiye edildi. Bu yaklaşım içinde avantajları yaralanma biyomekanik daha derinlemesine incelenebilir ve yaralanma parametreleri yeniden üretilebilen deneysel bir model elde etmek amacıyla, daha ayrıntılı bir şekilde tarif edilebilir ki, bu nedenle etkilerinin daha hassas olarak değerlendirilmesine imkan veren fonksiyonel iyileşme süreci üzerinde test tedaviler. Birçok çalışma SKY modellerinde 11 kök hücrelerin çeşitli nakli etkilerini değerlendirdik. Biz son zamanlarda fare donör 12-13 ölümünden sonra Alt-Ventriküler Bölgesi (SVZ) birkaç saat yetişkin nöral kök hücreler izole var. Bu prosedür SCI kür için bir rejeneratif tıp yaklaşımı avantajlı görünmektedir nöral kök hücreler olarak adlandırılan ölüm sonrası nöral öncüleri (PM-NPC), nüfusu sağlar. Bu yazıda ortaya koyacak: i) hayati izleyici PKH26 hücre etiketleme için protokol, ii) edicinik prosedür travmatik omurilik yaralanması gerçekleştirmek ve etiketli hücrelerin iii) intravenöz (iv) idaresi. Ayrıca, bu çalışmada biz nakledilen hücrelerin omurilik lezyon sitelerine göç ve mikrotübül ilişkili protein (MAP) 2 pozitif hücrelerin içine çoğunlukla ayırt olduğunu göstermektedir. Ayrıca, farklılaşma arka bacak fonksiyonunun sabit bir kurtarma teşvik eşlik eder.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="743">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:115px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:223px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">PKH26GL-1KT&#160;</td>
			<td style="width:115px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">091M0973</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;">Infinite horizon (IH) Impactor device&#160;</td>
			<td style="width:115px;">Precision Systems and Instrumentation, LLC</td>
			<td style="width:119px;">Model 0400 Serial 0171</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">Gentamycin 10mg/ml</td>
			<td style="width:115px;">Euroclone</td>
			<td style="width:119px;">ECM0011B</td>
			<td>1mg/ml in sterile saline solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">Isoflurane-Vet 250ml</td>
			<td style="width:115px;">Merial</td>
			<td style="width:119px;">B142J12A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">Blefarolin POM OFT 10g</td>
			<td style="width:115px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:287px;">Slide Warmer</td>
			<td style="width:115px;">2Biological Instruments</td>
			<td style="width:119px;">HB101-sm-402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">Scalpel, size 10</td>
			<td style="width:115px;">Lance Paragon</td>
			<td style="width:119px;">26920</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Small Graefe Forceps</td>
			<td style="width:115px;">2Biological Instruments</td>
			<td style="width:119px;">11023-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Rongeur</td>
			<td style="width:115px;">Medicon Instruments</td>
			<td style="width:119px;">07 60 07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:287px;">Micro scissors</td>
			<td style="width:115px;">2Biological Instruments</td>
			<td style="width:119px;">15000-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">Absorbable sutures (4/0)</td>
			<td style="width:115px;">Safil Quick</td>
			<td style="width:119px;">C0046203</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Hemostat</td>
			<td style="width:115px;">2Biological Instruments</td>
			<td style="width:119px;">13014-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Reflex 7 wound clip applicator</td>
			<td style="width:115px;">2Biological Instruments</td>
			<td style="width:119px;">12031-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">7mm Reflex wound clips</td>
			<td style="width:115px;">2Biological Instruments</td>
			<td style="width:119px;">12032-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">NGS</td>
			<td style="width:115px;">Euroclone</td>
			<td>ECS0200D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">Triton X 100</td>
			<td style="width:115px;">Merck Millipore</td>
			<td style="width:119px;">1086431000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:287px;">Anti Microtubule Assocoated Protein&#160; (MAP) 2</td>
			<td style="width:115px;">Millipore</td>
			<td style="width:119px;">AB5622</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Alexa Fluor 488</td>
			<td style="width:115px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;">A11008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">FluorSave Reagent&#160;</td>
			<td style="width:115px;">Calbiochem</td>
			<td style="width:119px;">345789</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">Neural stem cells medium</td>
			<td style="width:115px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>DMEM-F12 medium (Euroclone) containing 2 mm l-glutamine (Euroclone), 0.6% glucose (Sigma-Aldrich), 9.6 gm/ml putrescine (Sigma-Aldrich), 6.3 ng/ml progesterone (Sigma-Aldrich), 5.2 ng/ml sodium selenite (Sigma-Aldrich), 0.025 mg/ml insulin (Sigma-Aldrich), 0.1 mg/ml transferrin (Sigma-Aldrich), and 2 &#956;g/ml heparin (sodium salt, grade II; Sigma-Aldrich), bFGF (human recombinant, 10 ng/mL; Life Technologies) and EGF (human recombinant, 20 ng/mL; Life Technologies)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">DMEM-F12</td>
			<td style="width:115px;">Euroclone</td>
			<td style="width:119px;">ASM5002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">l-glutamine</td>
			<td style="width:115px;">Euroclone</td>
			<td style="width:119px;">ECB3000D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">glucose</td>
			<td style="width:115px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">G8270-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">putrescine</td>
			<td style="width:115px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P5780-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">progesterone</td>
			<td style="width:115px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P6149-1MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">Sodium-selenite</td>
			<td style="width:115px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">S9133-1MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">transferrin</td>
			<td style="width:115px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">T 5391</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">Insulin</td>
			<td style="width:115px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">I1882</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">Heparin sodium-salt</td>
			<td style="width:115px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">H0200000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">bFGF</td>
			<td style="width:115px;">Life Technology</td>
			<td style="width:119px;">PHG0024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">h-EGF</td>
			<td style="width:115px;">Life Technology</td>
			<td style="width:119px;">PHG6045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">Syringe 0.33cc 29G</td>
			<td style="width:115px;">Terumo</td>
			<td style="width:119px;">MYJECTOR&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:287px;">buprenorphine</td>
			<td style="width:115px;">Schering Plough SpA</td>
			<td style="width:119px;">TEMGESIC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:287px;">eye gel</td>
			<td style="width:115px;">Bausch &#38; Lomb</td>
			<td style="width:119px;">LIPOSIC</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

neural stem cell transplantation in experimental contusive model of spinal cord injury

Omurilik yaralanması nörolojik işlev bozukluklarının bir kompleks ile karakterize bir klinik yıkıcı durumdur. Spinal kord yaralanması hayvan modelleri yaralanma biyolojik yanıtları araştırmak ve potansiyel tedavilerin test etmek hem de kullanılabilir. Ameliyatla açığa omuriliğe verilen kontüzyon veya Sıkıştırma yaralanması patoloji en yaygın olarak kullanılan modeldir. Bu raporda deneysel kontüzyon özel yaralanma parametrelerinin tanımı ile bir tekrarlanabilir yaralanma hayvan modelinin oluşturulmasını sağlar Sonsuz Horizon (İH) Darbeli cihazı kullanılarak yapılır. Kök hücre nakli genellikle bu zayıflatıcı durumu kür için bir potansiyel olarak yararlı bir strateji olarak kabul edilir. Çeşitli çalışmalar kök hücre nakli çeşitli etkileri değerlendirilmiştir. Burada CD1 farelerinden hücre kuyruk damarı enjeksiyonu takiben, omurilik yaralanması için adapte edilmiş bir yöntemi göstermektedir. I) hücre etiketleme wi: Kısacası, biz prosedürleri sağlamakhayati izleyicinin inci, ii) farelerin ameliyat öncesi bakım, bir Kontuzif omurilik yaralanması iii) yürütme, ve ölüm sonrası nöral öncüleri iv) intravenöz. Bu çürük modeli rejeneratif tıp yaklaşımı etkinliğini ve kök hücre nakli güvenliğini değerlendirmek için kullanılabilir.

nakledilen hücrelerin toplam sayısı 1 x 10 6 hücre olup, kuyruk damarından birbirini takip eden üç enjeksiyon bölündü. Bu fosfat tampon çözeltisi içinde 50 ul (PBS) içinde 3.3 x 10 5 hücre tatbik. İlk enjeksiyon ikinci 6 saat sonra, yaralanma sonrası 30 dakika içinde yapılan ve lezyon sonrası son 18 saat oldu. AM-NPC uygulanması için omurilik yaralanması sonrasında 18 saatlik bir süre seçimi şu anda 14 ile kan-beyin bariyerinin geçirgenliğinin en iyi belirlen...

Watch this Scientific Journal Video about Neural Stem Cell Transplantation in Experimental Contusive Model of Spinal Cord Injury at JoVE.com

Neural Stem Cell Transplantation in Experimental Contusive Model of Spinal Cord Injury

Omurilik yaralanması ciddi morbidite ve mortalitesi yüksek bir neden travmatik bir durumdur. Bu çalışmada detaylı olarak nöral kök hücrelerin bir nakli ardından farelerde omurilik yaralanması bir kontüzyon modelini tarif.

Omurilik Yaralanması Deneysel Kontuzif Modelinde Sinir Kök Hücre Nakli

Spinal cord injury is a devastating clinical condition, characterized by a complex of neurological dysfunctions. Animal models of spinal cord injury can ...

neural-stem-cell-transplantation-experimental-contusive-model-spinal

Research

JoVE Journal

Medicine

12.8K Görüntüleme.  University of Milan.  Omurilik yaralanması ciddi morbidite ve mortalitesi yüksek bir neden travmatik bir durumdur. Bu çalışmada detaylı olarak nöral kök hücrelerin bir nakli ardından farelerde omurilik yaralanması bir kontüzyon modelini tarif. 

Video: Neural Stem Cell Transplantation in Experimental Contusive Model of Spinal Cord Injury

Intraspinal Cell Transplantation for Targeting Cervical Ventral Horn in Amyotrophic Lateral Sclerosis and Traumatic Spinal Cord Injury

Respiratory compromise due to phrenic motor neuron loss is a debilitating consequence of a large proportion of human traumatic spinal cord injury (SCI) cases 1 and is the ultimate cause of death in patients with the motor neuron disorder, amyotrophic laterals sclerosis (ALS) 2.
ALS is a devastating neurological disorder that is characterized by relatively rapid degeneration of upper and lower motor neurons. Patients ultimately succumb to the disease on average 2-5 years following diagnosis because of respiratory paralysis due to loss of phrenic motor neuron innnervation of the diaphragm 3. The vast majority of cases are sporadic, while 10% are of the familial form. Approximately twenty percent of familial cases are linked to various point mutations in the Cu/Zn superoxide dismutase 1 (SOD1) gene on chromosome 21 4. Transgenic mice 4,5 and rats 6 carrying mutant human SOD1 genes (G93A, G37R, G86R, G85R) have been generated, and, despite the existence of other animal models of motor neuron loss, are currently the most highly used models of the disease.
Spinal cord injury (SCI) is a heterogeneous set of conditions resulting from physical trauma to the spinal cord, with functional outcome varying according to the type, location and severity of the injury 7. Nevertheless, approximately half of human SCI cases affect cervical regions, resulting in debilitating respiratory dysfunction due to phrenic motor neuron loss and injury to descending bulbospinal respiratory axons 1. A number of animal models of SCI have been developed, with the most commonly used and clinically-relevant being the contusion 8.
Transplantation of various classes of neural precursor cells (NPCs) is a promising therapeutic strategy for treatment of traumatic CNS injuries and neurodegeneration, including ALS and SCI, because of the ability to replace lost or dysfunctional CNS cell types, provide neuroprotection, and deliver gene factors of interest 9.
Animal models of both ALS and SCI can model many clinically-relevant aspects of these diseases, including phrenic motor neuron loss and consequent respiratory compromise 10,11. In order to evaluate the efficacy of NPC-based strategies on respiratory function in these animal models of ALS and SCI, cellular interventions must be specifically directed to regions containing therapeutically relevant targets such as phrenic motor neurons. We provide a detailed protocol for multi-segmental, intraspinal transplantation of NPCs into the cervical spinal cord ventral gray matter of neurodegenerative models such as SOD1G93A mice and rats, as well as spinal cord injured rats and mice 11.

Neural precursor transplantation is a promising strategy for protecting and/or replacing lost/dysfunctional cervical phrenic motor neurons in spinal cord injury (SCI) and the motor neuron disorder, amyotrophic laterals sclerosis (ALS). We provide a protocol for cell delivery to cervical spinal cord ventral horn in rodent models of ALS and SCI.

Amyotrophic Lateral Sclerosis ve Travmatik Spinal Kord Yaralanması Servikal Ventral Horn Hedefleme intraspinal Hücre Transplantasyonu

Respiratory compromise due to phrenic motor neuron loss is a debilitating consequence of a large proportion of human traumatic spinal cord injury (SCI) ...

Tıp

Acute and Chronic Tactile Sensory Testing after Spinal Cord Injury in Rats

Spinal cord injury (SCI) impairs sensory systems causing allodynia1-8. To identify cellular and molecular causes of allodynia, sensitive and valid sensory testing in rat SCI models is needed. However, until recently, no single testing approach had been validated for SCI so that standardized methods have not been implemented across labs. Additionally, available testing methods could not be implemented acutely or when severe motor impairments existed, preventing studies of the development of SCI-induced allodynia3. Here we present two validated sensory testing methods using von Frey Hair (VFH) monofilaments which quantify changes in tactile sensory thresholds after SCI4-5. One test is the well-established Up-Down test which demonstrates high sensitivity and specificity across different SCI severities when tested chronically5. The other test is a newly-developed dorsal VFH test that can be applied acutely after SCI when allodynia develops, prior to motor recovery4-5. Each VFH monofilament applies a calibrated force when touched to the skin of the hind paw until it bends. In the up-down method, alternating VFHs of higher or lower forces are used on the plantar L5 dermatome to delineate flexor withdrawal thresholds. Successively higher forces are applied until withdrawal occurs then lower force VFHs are used until withdrawal ceases. The tactile threshold reflects the force required to elicit withdrawal in 50% of the stimuli. For the new test, each VFH is applied to the dorsal L5 dermatome of the paw while the rat is supported by the examiner. The VFH stimulation occurs in ascending order of force until at least 2 of 3 applications at a given force produces paw withdrawal. Tactile sensory threshold is the lowest force to elicit withdrawal 66% of the time. Acclimation, testing and scoring procedures are described. Aberrant trials that require a retest and typical trials are defined. Animal use was approved by Ohio State University Animal Care and Use Committee.

We describe two tactile sensory testing methods for acute or chronic periods of spinal cord injury in rats. These validated procedures can detect the development and maintenance of allodynia-like sensations.

Sıçanlarda Spinal Kord Yaralanma sonrası Akut ve Kronik Dokunsal Duyu Testi

Spinal cord injury (SCI) impairs sensory systems causing allodynia1-8. To identify cellular and molecular causes of allodynia, sensitive and valid sensory ...

A Contusive Model of Unilateral Cervical Spinal Cord Injury Using the Infinite Horizon Impactor

While the majority of human spinal cord injuries occur in the cervical spinal cord, the vast majority of laboratory research employs animal models of spinal cord injury (SCI) in which the thoracic spinal cord is injured. Additionally, because most human cord injuries occur as the result of blunt, non-penetrating trauma (e.g. motor vehicle accident, sporting injury) where the spinal cord is violently struck by displaced bone or soft tissues, the majority of SCI researchers are of the opinion that the most clinically relevant injury models are those in which the spinal cord is rapidly contused.1 Therefore, an important step in the preclinical evaluation of novel treatments on their way to human translation is an assessment of their efficacy in a model of contusion SCI within the cervical spinal cord. Here, we describe the technical aspects and resultant anatomical and behavioral outcomes of an unilateral contusive model of cervical SCI that employs the Infinite Horizon spinal cord injury impactor.
Sprague Dawley rats underwent a left-sided unilateral laminectomy at C5. To optimize the reproducibility of the biomechanical, functional, and histological outcomes of the injury model, we contused the spinal cords using an impact force of 150 kdyn, an impact trajectory of 22.5&deg; (animals rotated at 22.5&deg;), and an impact location off of midline of 1.4 mm. Functional recovery was assessed using the cylinder rearing test, horizontal ladder test, grooming test and modified Montoya's staircase test for up to 6 weeks, after which the spinal cords were evaluated histologically for white and grey matter sparing.
The injury model presented here imparts consistent and reproducible biomechanical forces to the spinal cord, an important feature of any experimental SCI model. This results in discrete histological damage to the lateral half of the spinal cord which is largely contained to the ipsilateral side of injury. The injury is well tolerated by the animals, but does result in functional deficits of the forelimb that are significant and sustained in the weeks following injury. The cervical unilateral injury model presented here may be a resource to researchers who wish to evaluate potentially promising therapies prior to human translation.

A reliable and repeatable way to produce a cervical unilateral spinal cord injury using the Infinite Horizon impactor is described. The method takes advantage of a custom designed frame and clamp to stabilize the spine. The standardized procedure and biomechanical injury parameters result in sufficient and sustained injuries.

Sonsuz Horizon Darbeli kullanarak tek taraflı Servikal Spinal Kord Yaralanması bir Contusive Modeli

While the majority of human spinal cord injuries occur in the cervical spinal cord, the vast majority of laboratory research employs animal models of ...

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Stem cell transplantation protocols are finding their way into clinical practice1,2,3. Getting better results, making the protocols more robust, and finding new sources for implantable cells are the focus of recent research4,5. Investigating the effectiveness of cell therapies is not an easy task and new tools are needed to investigate the mechanisms involved in the treatment process6. We designed an experimental protocol of ischemia/reperfusion in order to allow the observation of cellular connections and even subcellular mechanisms during ischemia/reperfusion injury and after stem cell transplantation and to evaluate the efficacy of cell therapy. H9c2 cardiomyoblast cells were placed onto cell culture plates7,8. Ischemia was simulated with 150 minutes in a glucose free medium with oxygen level below 0.5%. Then, normal media and oxygen levels were reintroduced to simulate reperfusion. After oxygen glucose deprivation, the damaged cells were treated with transplantation of labeled human bone marrow derived mesenchymal stem cells by adding them to the culture. Mesenchymal stem cells are preferred in clinical trials because they are easily accessible with minimal invasive surgery, easily expandable and autologous. After 24 hours of co-cultivation, cells were stained with calcein and ethidium-homodimer to differentiate between live and dead cells. This setup allowed us to investigate the intercellular connections using confocal fluorescent microscopy and to quantify the survival rate of postischemic cells by flow cytometry. Confocal microscopy showed the interactions of the two cell populations such as cell fusion and formation of intercellular nanotubes. Flow cytometry analysis revealed 3 clusters of damaged cells which can be plotted on a graph and analyzed statistically. These populations can be investigated separately and conclusions can be drawn on these data on the effectiveness of the simulated therapeutical approach.

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

We demonstrate how to set up an in vitro ischemia/reperfusion model and how to evaluate the effect of stem cell therapy on postischemic cardiac cells.

Bir Kök Hücre Nakli In vitro Simüle İskemi / Reperfüzyon Modeli

Stem cell transplantation protocols are finding their way into clinical practice1,2,3. Getting better results, making the protocols more robust, and ...

A Contusion Model of Severe Spinal Cord Injury in Rats

The translational potential of novel treatments should be investigated in severe spinal cord injury (SCI) contusion models. A detailed methodology is described to obtain a consistent model of severe SCI. Use of a stereotactic frame and computer controlled impactor allows for creation of reproducible injury. Hypothermia and urinary tract infection pose significant challenges in the post-operative period. Careful monitoring of animals with daily weight recording and bladder expression allows for early detection of post-operative complications. The functional results of this contusion model are equivalent to transection models. The contusion model can be utilized to evaluate the efficacy of both neuroprotective and neuroregenerative approaches.

A contusion model of severe spinal cord injury is described. Detailed pre-operative, operative and post-operative steps are described to obtain a consistent model.

Sıçanlarda Şiddetli Spinal Kord Yaralanması bir bere modeli

The translational potential of novel treatments should be investigated in severe spinal cord injury (SCI) contusion models. A detailed methodology is ...

A Novel Vertebral Stabilization Method for Producing  Contusive Spinal Cord Injury

Clinically-relevant animal cervical spinal cord injury (SCI) models are essential for developing and testing potential therapies; however, producing reliable cervical SCI is difficult due to lack of satisfactory methods of vertebral stabilization. The conventional method to stabilize the spine is to suspend the rostral and caudal cervical spine via clamps attached to cervical spinous processes. &#160;However, this method of stabilization fails to prevent tissue yielding during the contusion as the cervical spinal processes are too short to be effectively secured by the clamps (Figure 1). &#160;Here we introduce a new method to completely stabilize the cervical vertebra at the same level of the impact injury. &#160;This method effectively minimizes movement of the spinal column at the site of impact, which greatly improves the production of consistent SCIs. &#160;We provide visual description of the equipment (Figure 2-4), methods, and a step-by-step protocol for the stabilization of the cervical 5 vertebra (C5) of adult rats, to perform laminectomy (Figure 5) and produce a contusive SCI thereafter. &#160;Although we only demonstrate a cervical hemi-contusion using the NYU/MASCIS impactor device, this vertebral stabilization technique can be applied to other regions of the spinal cord, or be adapted to other SCI devices. &#160;Improving spinal cord exposure and fixation through vertebral stabilization may be valuable for producing consistent and reliable injuries to the spinal cord. &#160;This vertebral stabilization method can also be used for stereotactic injections of cells and tracers, and for imaging using two-photon microscopy in various neurobiological studies.

Vertebral stabilization is necessary for minimizing variability, and for producing consistent experimental spinal cord injuries.&#160; Using a customized stabilizing apparatus in conjunction with the NYU/MASCIS impactor device, we have demonstrated here the proper equipment and procedure for generating reproducible hemi-contusive cervical (C5) spinal cord injuries in adult rats.

Kontuzif omurilik hasarın üretmek için Yeni Bir Omurga Stabilizasyon Yöntemi

Clinically-relevant animal cervical spinal cord injury (SCI) models are essential for developing and testing potential therapies; however, producing ...

Controlled Cortical Impact Model for Traumatic Brain Injury

Every year over a million Americans suffer a traumatic brain injury (TBI). Combined with the incidence of TBIs worldwide, the physical, emotional, social, and economical effects are staggering. Therefore, further research into the effects of TBI and effective treatments is necessary. The controlled cortical impact (CCI) model induces traumatic brain injuries ranging from mild to severe. This method uses a rigid impactor to deliver mechanical energy to an intact dura exposed following a craniectomy. Impact is made under precise parameters at a set velocity to achieve a pre-determined deformation depth. Although other TBI models, such as weight drop and fluid percussion, exist, CCI is more accurate, easier to control, and most importantly, produces traumatic brain injuries similar to those seen in humans. However, no TBI model is currently able to reproduce pathological changes identical to those seen in human patients. The CCI model allows investigation into the short-term and long-term effects of TBI, such as neuronal death, memory deficits, and cerebral edema, as well as potential therapeutic treatments for TBI.

Traumatic brain injuries (TBIs) remain a serious health problem. Using the controlled cortical impact surgery model, research on the effects of TBI and possible treatment methods may be performed.

Travmatik Beyin Hasarı için Kontrollü Kortikal Etki Modeli

Every year over a million Americans suffer a traumatic brain injury (TBI).  Combined with the incidence of TBIs worldwide, the physical, emotional, ...

A Radio-telemetric System to Monitor Cardiovascular Function in Rats with Spinal Cord Transection and Embryonic Neural Stem Cell Grafts

High thoracic or cervical spinal cord injury (SCI) can lead to cardiovascular dysfunction. To monitor cardiovascular parameters, we implanted a catheter connected to a radio transmitter into the femoral artery of rats that underwent a T4 spinal cord transection with or without grafting of embryonic brainstem-derived neural stem cells expressing green fluorescent protein. Compared to other methods such as cannula insertion or tail-cuff, telemetry is advantageous to continuously monitor blood pressure and heart rate in freely moving animals. It is also capable of long term multiple data acquisitions. In spinal cord injured rats, basal cardiovascular data under unrestrained condition and autonomic dysreflexia in response to colorectal distension were successfully recorded. In addition, cardiovascular parameters before and after SCI can be compared in the same rat if a transmitter is implanted before a spinal cord transection. One limitation of the described telemetry procedure is that implantation in the femoral artery may influence the blood supply to the ipsilateral hindlimb.

We present a protocol for using a radio-telemetric system to record cardiovascular parameters in T4 spinal cord transected rats eight weeks after embryonic brainstem neural stem cell grafting into the lesion site. Telemetry is an advanced technique to accurately evaluate cardiovascular function in conscious freely moving spinal cord injured rats.

A Radyo-telemetrik Sistemi Omurilik transeksiyonu ve Embriyonik Nöral Hücre Greftler Kök Sıçanlarda Kardiyovasküler Fonksiyonu Monitör

High thoracic or cervical spinal cord injury (SCI) can lead to cardiovascular dysfunction. To monitor cardiovascular parameters, we implanted a catheter ...

Synergetic Use of Neural Precursor Cells and Self-assembling Peptides in Experimental Cervical Spinal Cord Injury

Spinal cord injuries (SCI) cause serious neurological impairment and psychological, economic, and social consequences for patients and their families. Clinically, more than 50% of SCI affect the cervical spine1. As a consequence of the primary injury, a cascade of secondary mechanisms including inflammation, apoptosis, and demyelination occur finally leading to tissue scarring and development of intramedullary cavities2,3. Both represent physical and chemical barriers to cell transplantation, integration, and regeneration. Therefore, shaping the inhibitory environment and bridging cavities to create a supportive milieu for cell transplantation and regeneration is a promising therapeutic target4. Here, a contusion/compression model of cervical SCI using an aneurysm clip is described. This model is more clinically relevant than other experimental models, since complete transection or ruptures of the cord are rare. Also in comparison to the weight drop model, which in particular damage the dorsum columns, circumferential compression of the spinal cord appears advantageous. Clip closing force and duration can be adjusted to achieve different injury severity. A ring spring facilitates precise calibration and constancy of clip force. Under physiological conditions, synthetic self-assembling peptides (SAP) self-assemble into nanofibers and thus, are appealing for application in SCI5. They can be injected directly into the lesion minimizing damage to the cord. SAPs are biocompatible structures erecting scaffolds to bridge intramedullary cavities and thus, equip the damaged cord for regenerative treatments. K2(QL)6K2 (QL6) is a novel SAP introduced by Dong et al.6 In comparison to other peptides, QL6 self-assembles into &#946;-sheets at neutral pH6.14 days after SCI, after the acute stage, SAPs are injected into the center of the lesion and neural precursor cells (NPC) are injected into adjacent dorsal columns. In order to support cell survival, transplantation is combined with continuous subdural administration of growth factors by osmotic micro pumps for 7 days.

Treating cervical spinal cord injury with both self-assembling peptides (SAP) and neural precursor cells (NPC), together with growth factors, is a promising approach to promote regeneration and recovery. A contusion/compression aneurysm clip rat model of cervical SCI and combined treatment involving SAP injection and NPC transplantation is established.

Deneysel Servikal Spinal Kord Yaralanmalarında Sinir Öncü Hücreler ve Öz-montaj Peptitler sinerjik Kullanımı

Spinal cord injuries (SCI) cause serious neurological impairment and psychological, economic, and social consequences for patients and their families. ...

Calibrated Forceps Model of Spinal Cord Compression Injury

Compression injuries of the murine spinal cord are valuable animal models for the study of spinal cord injury (SCI) and spinal regenerative therapy. The calibrated forceps model of compression injury is a convenient, low cost, and very reproducible animal model for SCI. We used a pair of modified forceps in accordance with the method published by Plemel et al. (2008) to laterally compress the spinal cord to a distance of 0.35 mm. In this video, we will demonstrate a dorsal laminectomy to expose the spinal cord, followed by compression of the spinal cord with the modified forceps. In the video, we will also address issues related to the care of paraplegic laboratory animals. This injury model produces mice that exhibit impairment in sensation, as well as impaired hindlimb locomotor function. Furthermore, this method of injury produces consistent aberrations in the pathology of the SCI, as determined by immunohistochemical methods. After watching this video, viewers should be able to determine the necessary supplies and methods for producing SCI of various severities in the mouse for studies on SCI and/or treatments designed to mitigate impairment after injury.

Spinal cord injury models should be highly reproducible. We demonstrate that the calibrated forceps compression model of spinal cord injury is an easy to use surgical method for generating reproducible injuries to the murine spinal cord.

Omurilik Sıkıştırma Yaralanma Kalibre Forseps Modeli

Compression injuries of the murine spinal cord are valuable animal models for the study of spinal cord injury (SCI) and spinal regenerative therapy. The ...