We thank Ellen Ytebrouck for her valuable information regarding method application in rat. This work was supported by the Research Council of the KU Leuven (OT09/22) and the Fund for Scientific Research-Flanders (FWO Vlaanderen). Jeroen Aerts is supported by a Ph.D. fellowship of the Agency for Innovation through Science and Technology Flanders (IWT Vlaanderen) and Julie Nys by a Ph.D. grant from FWO Flanders.

Tüm deneyler KU Leuven etik araştırma komitesi tarafından onaylanmış ve Avrupa Toplulukları Konseyi Direktifi ile tam uyum içinde olduğunu gören 22 Eylül 2010 (2010/63 / AB) ve Belçikalı mevzuat (KB 29 Mayıs 2013). Her olası çaba hayvana acı en aza indirmek için ve hayvanların sayısını azaltmak için yapılmıştır. 1. Hayvan Tedavi ve anestezikler <ol><li> Ketamin hidroklorür (75 mg / ml) ve tuzlu su içinde medetomidin hidroklorür (1 mg / kg) karışımı ile karından bir enjeksiyonla fare anestezisi. </li><li> Fare tamamen sedasyon sağlamak için bir forseps ile ayak kısma refleksleri kontrol edin. </li><li> Göz kapaklarını ve bir pamuk ucu kullanarak göz çevresini dezenfekte% 70 etanol uygulayın. Ayrıca sedasyon derecesini değerlendirmek için göz kapağı refleksi kontrol edin. </li></ol> 2. Göz Çıkarma <ol><li> Emin olun hayvan bulunduğu bir düz ve kurupürüzsüz bir yüzey. </li><li> Kavisli, tırtıklı ucu (: 0.5 x 0.4 mm tercih ucu boyutu) ile bir forseps sterilize. </li><li> Yavaşça göz küresi prizden yerinden ve optik sinir ulaşılabilir kadar forseps ile canthus (gözün köşe) üzerine basın. </li><li> Gözün arkasında forseps yönlendirin. Basın ve tercihen eğrinin başında ve forseps değil çok ucuyla sıkıca optik sinir tutun. Bu prizden dünyayı kaldırmaya ve tam optik siniri kelepçe yardımcı olacaktır. </li><li> Fare düz yüzey üzerinde kalır el en az direnç ile yönünde forseps tutan dairesel hareketleri yapma. Fare, el hareketinin yönüne göre, yüzey boyunca katlanırlar. </li><li> Optik sinir iki daraltılmış kadar giderek artan bir hızla bu eylemi gerçekleştirmek (genellikle 7 ila 15 dairesel hareketler arasında, yaklaşık bir buçuk saniyede bir tam tur). Bu nedenle, müstakil küresi olduğukaldırıldı. </li></ol> 3. Post-operatif Bakım <ol><li> (Nadir) kanama durumunda, yapışkan bir kolojen ve hemostatik bir madde ile yörünge doldurun. </li><li> Intraperitoneal tuzlu su içinde atipamezol hidroklorür, 1 mg / kg enjekte edilerek anestezi Ters. </li><li> Ağrıyı gidermek için intraperitonal, her 24 saat Meloksikamın, 1 mg / kg uygulayın. </li><li> Korneanın su kaybını önlemek için kalan göze göz merhemi sürün. </li><li> Hayvan bir ısıtma plakası üzerinde geri ve vücut sıcaklığının kontrol edilmesi için ayrı bir kafes içinde yalıtım malzemesi hayvanı kaydırma sağlar. </li><li> En az 2 gün boyunca her gün fare ağırlığını ölçün. Kilo kaybı acı işaret eder ve Hayvan tamamıyla iyileşti kadar, bu durumda, meloksikam tedaviye devam edebilir. </li></ol>

<ol>
	<li>Toldi, J., Feh&#233;r, O., Wolff, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+plasticity+induced+by+neonatal+monocular+(and+binocular)+enucleation.">Neuronal plasticity induced by neonatal monocular (and binocular) enucleation.</a> Progress in Neurobiology. 48 (3), 191-218 (1996).</li><li>Steeves, J. K. E., Gonz&#225;lez, E. G., Steinbach, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vision+with+one+eye:+a+review+of+visual+function+following+unilateral+enucleation.">Vision with one eye: a review of visual function following unilateral enucleation.</a> Spatial vision. 21 (6), 509-529 (2008).</li><li>Van Brussel, L., Gerits, A., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+cross-modal+plasticity+in+adult+mouse+visual+cortex+following+monocular+enucleation.">Evidence for cross-modal plasticity in adult mouse visual cortex following monocular enucleation.</a> Cerebral Cortex. 21 (9), 2133-2146 (2011).</li><li>Nys, J., Aerts, J., Ytebrouck, E., Vreysen, S., Laeremans, A., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cross-modal+aspect+of+mouse+visual+cortex+plasticity+induced+by+monocular+enucleation+is+age-dependent.">The cross-modal aspect of mouse visual cortex plasticity induced by monocular enucleation is age-dependent.</a> Journal of Comparative Neurology. 522 (4), 950-970 (2014).</li><li>Mahajan, V. B., Skeie, J. M., Assefnia, A. H., Mahajan, M., Tsang, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+eye+enucleation+for+remote+high-throughput+phenotyping.">Mouse eye enucleation for remote high-throughput phenotyping.</a> Journal of Visualized Experiments. (57), e57 (2011).</li><li>Morales, B., Choi, S. -. Y., Kirkwood, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dark+rearing+alters+the+development+of+GABAergic+transmission+in+visual+cortex.">Dark rearing alters the development of GABAergic transmission in visual cortex.</a> Journal of Neuroscience. 22 (18), 8084-8090 (2002).</li><li>Chen, X. J., Rasch, M. J., Chen, G., Ye, C. Q., Wu, S., Zhang, X. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Binocular+input+coincidence+mediates+critical+period+plasticity+in+the+mouse+primary+visual+cortex.">Binocular input coincidence mediates critical period plasticity in the mouse primary visual cortex.</a> Journal of Neuroscience. 34 (8), 2940-2955 (2014).</li><li>Konur, S., Yuste, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+regulation+of+spine+and+filopodial+motility+in+primary+visual+cortex:+Reduced+effects+of+activity+and+sensory+deprivation.">Developmental regulation of spine and filopodial motility in primary visual cortex: Reduced effects of activity and sensory deprivation.</a> Journal of Neurobiology. 59 (2), 236-246 (2004).</li><li>Parrilla-Reverter, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-course+of+the+retinal+nerve+fibre+layer+degeneration+after+complete+intra-orbital+optic+nerve+transection+or+crush:+A+comparative+study.">Time-course of the retinal nerve fibre layer degeneration after complete intra-orbital optic nerve transection or crush: A comparative study.</a> Vision Research. 49 (23), 2808-2825 (2009).</li><li>Galindo-Romero, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axotomy-induced+retinal+ganglion+cell+death+in+adult+mice:+Quantitative+and+topographic+time+course+analyses.">Axotomy-induced retinal ganglion cell death in adult mice: Quantitative and topographic time course analyses.</a> Experimental Eye Research. 92 (5), 377-387 (2011).</li><li>Kanold, P. O., Kim, Y. A., GrandPre, T., Shatz, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-regulation+of+ocular+dominance+plasticity+and+NMDA+receptor+subunit+expression+in+glutamic+acid+decarboxylase-65+knock-out+mice.">Co-regulation of ocular dominance plasticity and NMDA receptor subunit expression in glutamic acid decarboxylase-65 knock-out mice.</a> The Journal of Physiology. 587 (12), 2857-2867 (2009).</li><li>Van Brussel, L., Gerits, A., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+localization+of+functional+subdivisions+in+the+visual+cortex+of+the+adult+mouse.">Identification and localization of functional subdivisions in the visual cortex of the adult mouse.</a> Journal of Comparative Neurology. 514 (1), 107-116 (2009).</li><li>Avwenagha, O., Bird, M. M., Lieberman, A. R., Yan, Q., Campbell, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+expression+of+brain-derived+neurotrophic+factor+and+tyrosine+kinase+B+mRNAs+and+distribution+and+ultrastructural+localization+of+their+proteins+in+the+visual+pathway+of+the+adult+rat.">Patterns of expression of brain-derived neurotrophic factor and tyrosine kinase B mRNAs and distribution and ultrastructural localization of their proteins in the visual pathway of the adult rat.</a> Neuroscience. 140 (3), 913-928 (2006).</li><li>Hernandes, M. S., Britto, L. R. G., Real, C. C., Martins, D. O., Lopes, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+oxygen+species+and+the+structural+remodeling+of+the+visual+system+after+ocular+enucleation.">Reactive oxygen species and the structural remodeling of the visual system after ocular enucleation.</a> Neuroscience. 170 (4), 1249-1260 (2010).</li><li>Cuyvers, A., Paulussen, M., Smolders, K., Hu, T. -. T., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+cell+proliferation+upon+enucleation+in+direct+retinal+brain+targets+in+the+visual+system+of+the+adult+mouse.">Local cell proliferation upon enucleation in direct retinal brain targets in the visual system of the adult mouse.</a> Journal of Experimental Neuroscience. 4, 1-15 (2010).</li><li>Smith, S. L., Trachtenberg, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experience-dependent+binocular+competition+in+the+visual+cortex+begins+at+eye+opening.">Experience-dependent binocular competition in the visual cortex begins at eye opening.</a> Nature Neuroscience. 10 (3), 370-375 (2007).</li><li>Toldi, J., Farkas, T., V&#246;lgyi, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+enucleation+induces+cross-modal+changes+in+the+barrel+cortex+of+rat.+A+behavioural+and+electrophysiological+study.">Neonatal enucleation induces cross-modal changes in the barrel cortex of rat. A behavioural and electrophysiological study.</a> Neuroscience Letters. 167 (1-2), 1-4 (1994).</li><li>Newton, J. R., Sikes, R. W., Skavenski, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-modal+plasticity+after+monocular+enucleation+of+the+adult+rabbit.">Cross-modal plasticity after monocular enucleation of the adult rabbit.</a> Experimental Brain Research. 144 (4), 423-429 (2002).</li><li>Lalonde, J., Chaudhuri, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+changes+in+CREB+phosphorylation+and+neuroadaptive+gene+expression+in+area+V1+of+adult+monkeys+after+monocular+enucleation.">Dynamic changes in CREB phosphorylation and neuroadaptive gene expression in area V1 of adult monkeys after monocular enucleation.</a> Molecular and Cellular Neuroscience. 35 (1), 24-37 (2007).</li><li>You, Y., Gupta, V. K., Graham, S. L., Klistorner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anterograde+degeneration+along+the+visual+pathway+after+optic+nerve+injury.">Anterograde degeneration along the visual pathway after optic nerve injury.</a> PLoS ONE. 7 (12), e52061 (2012).</li><li>Kelly, K. R., McKetton, L., Schneider, K. A., Gallie, B. L., Steeves, J. K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+anterior+visual+system+development+following+early+monocular+enucleation.">Altered anterior visual system development following early monocular enucleation.</a> NeuroImage: Clinical. 4, 72-81 (2014).</li><li>Chow, A. M., Zhou, I. Y., Fan, S. J., Chan, K. W. Y., Chan, K. C., Wu, E. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+changes+in+visual+cortex+of+neonatal+monocular+enucleated+rat:+a+proton+magnetic+resonance+spectroscopy+study.">Metabolic changes in visual cortex of neonatal monocular enucleated rat: a proton magnetic resonance spectroscopy study.</a> International Journal of Developmental Neuroscience. 29 (1), 25-30 (2011).</li><li>Dyer, R. S., Hammond, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+enucleation+in+retinal+degenerate+mice.">Effects of enucleation in retinal degenerate mice.</a> Physiology &amp; behavior. 14 (2), 207-210 (1975).</li><li>Smith, S. A., Bedi, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unilateral+eye+enucleation+in+adult+rats+causes+neuronal+loss+in+the+contralateral+superior+colliculus.">Unilateral eye enucleation in adult rats causes neuronal loss in the contralateral superior colliculus.</a> Journal of Anatomy. 190 (4), 481-490 (1997).</li><li>Gonzalez, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+monocular+enucleation+on+calbindin-D+28k+and+c-Fos+expression+in+the+lateral+geniculate+nucleus+in+rats.">Effects of monocular enucleation on calbindin-D 28k and c-Fos expression in the lateral geniculate nucleus in rats.</a> Okajimas folia anatomica Japonica. 82 (1), 9-18 (2005).</li><li>Faguet, J., Maranhao, B., Smith, S. L., Trachtenberg, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ipsilateral+eye+cortical+maps+are+uniquely+sensitive+to+binocular+plasticity.">Ipsilateral eye cortical maps are uniquely sensitive to binocular plasticity.</a> Journal of Neurophysiology. 101 (2), 855-861 (2008).</li><li>Van der Gucht, E., Hof, P. R., Van Brussel, L., Burnat, K., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurofilament+protein+and+neuronal+activity+markers+define+regional+architectonic+parcellation+in+the+mouse+visual+cortex.">Neurofilament protein and neuronal activity markers define regional architectonic parcellation in the mouse visual cortex.</a> Cerebral Cortex. 17 (12), 2805-2819 (2007).</li><li>Chaudhuri, A., Matsubara, J. A., Cynader, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+activity+in+primate+visual+cortex+assessed+by+immunostaining+for+the+transcription+factor+Zif268.">Neuronal activity in primate visual cortex assessed by immunostaining for the transcription factor Zif268.</a> Visual Neuroscience. 12 (1), 35-50 (1995).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Bizim yöntemine göre başarılı bir enüklasyonu gerçekleştirmek için, dikkat edilmesi gereken en önemli adımlar şunlardır: 1) uygun büyüklükte bir kavisli ve tırtıklı ucu ile bir forseps kullanarak; 2) düzgün ve kuru bir yüzey üzerinde enükleasyonunu yapmak; ve 3) kademeli olarak en az sürtünme ile bir yönde dairesel hareketler hızlandırılması. Etkili bir sonuç için bir eğri ve tırtıklı ucu ile karakterize uygun bir forseps kullanmak esastır (: fare: Tercih uç boyutu 0.5 x 0.4 mm; sıçan: 2.15 x 1.3 mm). Eğrilik küresi değiştirme sonrası optik sinir için kolay bir erişim sağlar ve dairesel hareketler gerçekleştirirken doğru el yerleştirilmesi için gereklidir. Optik sinir tutarken onlar gerekli tutuş olmadıklarıdan Pürüzsüz ipuçları tavsiye edilmez. Dairesel hareketleri sırasında düzgün optik siniri tutmak için başarısızlık oftalmik arter, gözün yoksul dekolmanı ve dolayısıyla kötü tekrarlanabilirlik yırtılması ile sonuçlanır.Bu nedenle, in vivo olarak bir kez uygulanması yöntemi maksimal hayvan bakımını temin etmek için işleme forseps optimizasyonu için ötenazi hayvanlar üzerinde ilk uygulama için bu tekniği tavsiye edilir. Başarılı göz enükleasyon yakın zamanda elle hayvan vücudu torna ve forseps sabit tutmak dışında aynı tekniği kullanarak bizim laboratuvar sıçan yapılmıştır. Tekniğinin bir sınırlama muhtemelen retinaya zarar verebilecek olmasıdır. Bu yüzden, bu yöntem, histoloji 5 gerçekleştirmek retina toplanması için daha az uygundur. Ayrıca, bizim yöntem küresi kaldırma veya göz kapaklarının kesmeden prizden yerinden edilmesi gerekiyor çünkü göz açma yaş sonrası sınırlıdır. Kemirgenler dahil olmak üzere farklı türlerde, Göz enükleasyon, rutin genellikle göz kapaklarının kaldırılmasını gerektirecektir alternatif yöntemleri kullanarak ve optik siniri 18,23-25 ​​kesim yapılır. Bu yöntemiids daha invaziv olma eğilimindedir ve burada açıklanan tekniğe göre daha yüksek bir öğrenme eğrisi vardır. Kaldırma veya göz kapaklarının dikilmesi için gerek kalmadan, cerrahi sonrası iyileşme süresi daha yüksek hayvan refahı ve daha tekrarlanabilir sonuçlar elde simge edilir.

Bir göz çıkarma ve böylece geri dönüşümsüz duyusal reseptör yüzeyini (retina) tahrip, görsel yol boyunca duyusal girdi önemli bir kayıp getirir. Çocuk ve yetişkin görsel sistemdeki enüklüeasyon modeli farklı görme merkezlerinde 1-4 geliştirilmesi, plastisite ve fonksiyonlarının anlaşılmasına değerli olduğu kanıtlanmıştır. Bu duyusal yoksunluk, moleküler, hücresel ve fizyolojik sonuçları kortikal devreler baş ve deneyim böyle kapsamlı bir değişikliğe tepki olarak kendi yapısını ve işlevini değiştirmek nasıl normal gelişim düzenlenir ve nasıl kurulur içgörü sağlayabilir. Görsel yoksunluğa Farklı yöntemleri var ve bunlar bütün vizyonu ile ilgili araştırma kendi özel avantajlara sahip. Örnek koyu yetiştirme özellikle görsel olarak aktivitesi tahrik ortadan kaldırmak için, yine de, spontan retina aktivitesini etkilemez. Benzer şekilde, ameliyat dikiş iplikleri ya da göz kapağı yamalar desenli kaldır visual giriş spontan aktivitesini bozmadan ama onlar kapalı gözüyle dağılan ışık penetrasyonunu sağlar. Bu yöntemler, geri çevrilebilir ve gelişim 6-8 sırasındaki kortikal devrelerin heykel binoküler girdi desenli vizyon ve düşük seviyeli korelasyon rolünün anlaşılmasında değerli olduğu gösterilmiştir. Bu optik siniri 9,10 teşkil retina ganglion hücrelerinin girdi ilerici kaybı oluşturması nedeniyle glokom araştırmada, yetişkin hayvanlarda optik sinir ezilme modeli yaygın olarak kullanılmaktadır. Amaç geri dönüşümsüz bir kez spontan ve desenli hem vizyon kaldırmak için zaman göz ve böylece retina tamamen ve anında kaldırılır Öte yandan, enükleasyonu günü, yoksunluk uygun bir seçimdir. Ayrıca, aktivitesi haritalama çalışmaları 11,12 gürültü oranı sinyal geliştirmek için güçlü bir göz içi aktivitesi dengesizliği neden olur. Th enükleasyonuna yanıt olarak yapısal ve işlevsel değişiklikler Karşılaştırılmasıose örneğin kapak sütür olarak daha az şiddetli yöntemlerle yoksunluğu sonra da plastisite hem homeostatik ve sinaptik türleri spontan retina aktivite rolüne yeni anlayışlar ortaya olabilir. Enükleasyon doğrudan retina hedefleri trofik etkileri kaybı tetikler. Örneğin, BDNF düzeyleri anlamlı lateral genikulat nükleus (LGN&#39;nin) ve yetişkin enüklee sıçanların 13 üstün colliculus downregülasyona edilir. Yapısal biçimlenme aracılık haberci moleküller olarak işlev Reaktif oksijen türleri, aynı zamanda yetişkin farenin görme sistemi 14 subkortikal yapılarda tespit edilmiştir. Buna ek olarak, fare çalışmalarındaki farklı subkortikal görsel hedef yapılar arasında ve mikroglial Astroglial etkinleştirme bir hafta 15 sonrası belirli bir zaman dilimi içinde enükleasyonu meydana gelir. Birlikte, glial, yapı ve moleküler düzeyde farklı subkortikal yanıtlarında optik deaferentasyon sonuçlanır. Bu subkortikal rağmenetkiler, mutlaka kortikal seviyesi 16 at etkilerini ima etmez. Sonraki yoksun görsel kortekse olmayan görsel girdilerin güçlendirilmesine, diğer duyusal alanlardaki değişiklikler de dahil olmak üzere kayda değer, çapraz-modal kortikal plastisite, hem monoküler sonra ortaya (ME) 3,4,17,18 ve binoküler 1,17 (BE) enüklüeasyon. Yanı sıra görsel Nörobilimdeki katkıda gelen deafferentasyonu bir türü enükleasyonu merkezi sinir sistemi nöro-koruyucu ve 19 nörodejeneratif 20-22 özellikleri arasında bir denge incelemek için kullanılabilir. Enükleasyonu gerçekleştirmek için farklı prosedürler literatürde daha önce tarif edilmiştir. Sıçan ve farelerde in vivo ME için belirli yöntemler nedeniyle yörünge kas ve doku 23-25 ​​gereksiz kısımlara daha az açıktır. Böyle Mahajan vd gibi diğer yayınlar. (2011) 5 kullanılarak ayrıntılı bir protokol sağlar<html> genotip-fenotip ilişkisi, büyük olasılıkla otopsi incelemek için gözleri bir yüksek verimli koleksiyonu için künt diseksiyon. Amaçları için, yöntem uygun ve hızlı. Bir çok göz kendisinden daha (canlı hayvan) enükleasyonu aşağıdaki afferent görsel yolu seçmesi çalışma Ancak, bu yöntem, in vivo enükleasyonu için daha az uygundur. Böyle bir ortamda, post-enükleasyon sağkalım yüksek önem taşımaktadır. Aynı zamanda, in vivo hasar ve optik sinirin korunması ve yörünge dokusu içinde çok az uygundur. Burada, FAGUET et al birine, daha çok benzer alternatif bir yöntem mevcut enükleasyonu (2008) 26, belirli avantajlı özellikler sunmaktadır:. Hızlı bir ameliyat sonrası iyileşme ile ilişkili olduğunu ve çok düşük bir öğrenme eşiği ile karakterize edilir araştırmacılar için. Göz morfolojisi veya görsel yolu araştırmada: Genel olarak, farklı yöntemler izleyen araştırma odak bağlı olarak tamamlayıcıdır. Özetle ve_content &quot;&gt;, enükleasyon homeostatik ve çapraz-modal beyin plastisite, glial yanıt özellikleri ve akson istikrar araştırılması yönünde görüş araştırma uygulanabilir. Bu görsel yazıda, in vivo göz enükleasyon için uygulanabilir ve güvenilir bir yöntem olarak göstermek fare.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ketamine hydrochloride (Anesketin)</td>
			<td>Dechra Veterinary Products (Eurovet)</td>
			<td>BE-V136516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine hydrochloride (Domitor)</td>
			<td>Orion Corporation (Janssen Animal Health)</td>
			<td>BE-V151742</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atipamezol hydrochloride (Antisedan)</td>
			<td>Orion Corporation (Elanco Animal Health)</td>
			<td>BE-V153352</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Meloxicam (Metacam)</td>
			<td>Boehringer Ingelheim Vetmedica</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye ointment (Fucithalmic)</td>
			<td>Leo Pharma nv-sa</td>
			<td>BE 144654</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moria MC31 Forceps - Serrated Curved</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11370-31</td>
			<td>For application in the mouse. Any forceps with similar dimensions can be used as long as the tip is curved and serrated.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Narrow Pattern Forceps - Curved</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11003-13</td>
			<td>For application in the rat. Any forceps with similar dimensions can be used as long as the tip is curved and serrated.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostatic cotton wool</td>
			<td>Qualiphar</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Other hemostatic agents are equally suitable (e.g. Viscostat, #649, Ultradent Products)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a highly reproducible and straightforward method to perform in vivo ocular enucleation in the mouse after eye opening

Enükleasyon ya da bir göz cerrahi olarak çıkarılması genel olarak sinir deafferentasyonu için bir model olarak kabul edilebilir. Bu memeli görsel sistemin 1-4 boyunca görsel, çapraz modal ve gelişimsel plastisite farklı yönlerini incelemek için değerli bir araç sağlar. Burada, biz yetişkinler kadar 20 gün eski farelerde doğrulandığında fare birinin kaldırılması veya her iki gözünde, bir zarif ve basit tekniği göstermektedir. Kısaca, bir dezenfekte eğri forseps göz arkasında optik sinir kilitlemek için kullanılır. Daha sonra, dairesel hareketler optik sinir daraltıyor ve göz küresinin kaldırmak için yapılır. Bu tekniğin avantajları hiçbir kanama minimal yüksek tekrarlanabilirlik, hızlı ameliyat sonrası iyileşme ve deneyci için çok düşük bir öğrenme eşiği vardır. Bu nedenle, hayvan büyük miktarda manipüle ve çaba en az bir miktarı ile işlenebilir. Tekniğinin doğası hafif hasarı uyarabilirİşlem sırasında retina. Mahajan diğ ile karşılaştırıldığında, bu yan etki bu yöntem daha az uygun hale getirir. (2011) 5, amaç toplamak ve retina dokusu analiz ise. Göz küresi göz kapaklarını çıkarmadan prizden yerinden edilmesi gerekiyor çünkü: - Ayrıca, bizim yöntem sonrası göz açma yaş (13 ve sonrası P10 fare) ile sınırlıdır. Bu yazıda anlatılan in vivo enükleasyon tekniği geçtiğimiz günlerde başarıyla sıçanlarda küçük değişikliklerle uygulanan ve genel kemirgen afferent görsel yolu incelemek için yararlı görünür olmuştur.

Şekil 1, tarif edilen protokol kullanılarak, gözün başarılı bir şekilde uzaklaştırıldığını göstermektedir ve kanama yokluğu veya yörünge dokusu veya göz soket (Şekil 1A, 1B) herhangi bir fiziksel hasar ile karakterize edilir. Bundan başka, göz çıkarıldı bütünüyle dokunulmamış dünya (Şekil 1C) göstergesi olan bir düz kornea, koroid ve optik diski vardır. Protokolümüz göz ve mekanik çevirme arkasında optik sinirin sıkılmasına içine aldığı, kaldırılan gözün optik sinir retina (Şekil 1D) tabanında kısıtlıdır. Çevredeki beyin alanına (Şekil 1E) herhangi bir zarar vermeden temiz bir kesim optik sinir açıklanan prosedür sonuçlarını Sahne. Tek gözlü enüklüeasyon, eşleme aktivitesi (Şekil 2) ile kombinasyon halinde, bir keskin karşı Visua işlevsel ya da göz spesifik bir giriş bölgeleri ifade sağlarmaymunlar 28 gibi yüksek mertebeden memelilerde fare 12,27 hatta göz baskınlığı sütunların l korteks. Fareler deney, biri kaldırılması (ME) ya da her iki gözün hedef görsel uyarı ve zif268 mRNA veya c-fos protein ekspresyon düzeylerinin saptanması ile birlikte (BE), görsel kortekse 12,27 bölgesel nöronal aktivasyonunu ortaya çıkarmak için uygulanan . Görsel olarak uyarılmış kontrollere (Şekil 2A) aksine, BE farenin görsel giriş (Şekil 2B) eksikliği tamamlamak için bağlı görsel korteksteki temel aktivite gösterdi. Gibi, olmayan görsel korteksin (yani. Daha ön bölüm ve daha posterior bölümlerinde işitsel kortekste somatosensori korteks) ile görsel arasındaki sınırları ortaya çıkarılmıştır. Bir haftalık sağkalım süresi ile ME farelerin Sonuçları kontralateral görme korteksi göz spesifik giriş bölgeleri görüntülendi. İki tahrik monocularly bölge hipoaktif ve medi bulunduğuEl ve merkezi binoküler bölgesinde (Şekil 2C) lateral. <img alt="Şekil 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51936/51936fig1highres.jpg" width="500" /> Göz soket, kaldırılır ve gözün optik sinirin sonrası enüklüeasyon devletin Şekil 1. Kalitatif değerlendirme. Kavisli bir forseps (A) herhangi bir kanama veya hasar göz soket (B) gözlenen ile gözün çıkarılmasından sonra. , Kornea ve koroid (C, D) normal bir görünüm ile yansıtılan çıkarılan göz tamamı ile faal olduğu. Optik sinir o göz (D) bırakır optik diskte daraltılır. Beynin ventral kısmının incelenmesi temiz bir kesim ve optik sinirin (yıldız) ve diğer yapıların (E) belirgin bir hasar ortaya koymaktadır. C, D Ölçek çubukları: 1 mm. E&#39;deki ölçek çizgisi: 5 mm. A: ön; L: sol; P: Posterior; R: sağ. Şekil enükleasyonla ortaya olarak fare görme korteksi 2. Fonksiyonel göz giriş özgü alt bölümleri. Gözleri ve korteks bağlamak siyah ve gri çizgiler retina afferentlerinden ve göz spesifik giriş bölgelerin üzerinde geçişini temsil eder. Sinirsel aktivite kontrolü (A) koronal bölümleri ¨orsellestirilen, (B) BE, ve zif268 (gri skala) in situ hibridizasyon (ISH) radyoaktif ME (C) farenin Bregma seviyesi etrafında -3.40 mm. Kontrol hayvanlarında (A), her iki yarıküre içindeki görsel korteks görsel uyarı aşağıdaki yüksek aktivitesini ekspres eder. Bir veya her iki göz (ler) kesilip zaman, sinyal aktivitesi belirgin bir azalmaya yol yoksun kortikal mukabil bölümlerine görülebilir. Monocularly (C) farenin yüksek AÇTI bir bölgeyi gösteriyor enükleekaldırılan göze karşı monoküler bölgelerinde bir azalma sinyali ile çevrili görsel korteksin binoküler bölgesinde vity. Ölçek çizgisi: 2 mm olmuştur. Van Brussel ark 12 izni ile yayımlanmaktadır.

Watch this Scientific Journal Video about A Highly Reproducible and Straightforward Method to Perform In Vivo Ocular Enucleation in the Mouse after Eye Opening at JoVE.com

A Highly Reproducible and Straightforward Method to Perform In Vivo Ocular Enucleation in the Mouse after Eye Opening

Ayrıca enüklüeasyon denilen gözlerin kaldırılması, geri dönüşümsüz kısmi (monoküler) veya tam (binoküler) görme kaybına neden olduğundan memeli görme sistemi boyunca görsel, çapraz modal ve gelişimsel plastisite yönlerini incelemek için yararlı bir strateji sağlar. Burada vivo enükleasyonuna gerçekleştirmek için son derece tekrarlanabilir ve basit bir yaklaşım açıklar.

A Çok Reproducible ve Kolay Yöntem gerçekleştir<em&gt; In Vivo</emGöz açılışı sonrası Mouse&gt; Göz Enükleasyon

Enucleation or the surgical removal of an eye can generally be considered as a model for nerve deafferentation. It provides a valuable tool to study the ...

a-highly-reproducible-straightforward-method-to-perform-vivo-ocular

Research

JoVE Journal

Biology

A Highly Reproducible and Straightforward Method to Perform In Vivo Ocular Enucleation in the Mouse after Eye Opening

23.1K Görüntüleme.  KU Leuven - University of Leuven.  Ayrıca enüklüeasyon denilen gözlerin kaldırılması, geri dönüşümsüz kısmi (monoküler) veya tam (binoküler) görme kaybına neden olduğundan memeli görme sistemi boyunca görsel, çapraz modal ve gelişimsel plastisite yönlerini incelemek için yararlı bir strateji sağlar. Burada vivo enükleasyonuna gerçekleştirmek için son derece tekrarlanabilir ve basit bir yaklaşım açıklar. 

Video: A Highly Reproducible and Straightforward Method to Perform In Vivo Ocular Enucleation in the Mouse after Eye Opening

Pyrosequencing: A Simple Method for Accurate Genotyping

Pharmacogenetic research benefits first-hand from the abundance of information provided by the completion of the Human Genome Project. With such a tremendous amount of data available comes an explosion of genotyping methods. Pyrosequencing(R) is one of the most thorough yet simple methods to date used to analyze polymorphisms. It also has the ability to identify tri-allelic, indels, short-repeat polymorphisms, along with determining allele percentages for methylation or pooled sample assessment. In addition, there is a standardized control sequence that provides internal quality control. This method has led to rapid and efficient single-nucleotide polymorphism evaluation including many clinically relevant polymorphisms. The technique and methodology of Pyrosequencing is explained.


Pyrosequencing(R) is one of the most thorough yet simple methods to date used to analyze polymorphisms. This method has led to rapid and efficient single-nucleotide polymorphism evaluation including many clinically relevant polymorphisms. The technique and methodology of Pyrosequencing is explained.

Pyrosequencing: Doğru Genotiplendirme için Basit Bir Yöntem

Pharmacogenetic research benefits first-hand from the abundance of information provided by the completion of the Human Genome Project. With such a ...

Biyoloji

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models. This paper describes the development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, treatment of cancer via oral delivery of drugs, and monitoring of tumor cell behavior in response to drug treatment in real time using in vivo imaging system. In this orthotopic model, ovarian tumor cells expressing luciferase are applied topically by injecting them directly into the mouse bursa where each ovary is enclosed. Upon injection of D-luciferin, a substrate of firefly luciferase, luciferase-expressing cells generate bioluminescence signals. This signal is detected by the in vivo imaging system and allows for a non-invasive means of monitoring tumor growth, distribution, and regression in individual animals. Drug administration via oral gavage allows for a maximum dosing volume of 10 mL/kg body weight to be delivered directly to the stomach and closely resembles delivery of drugs in clinical treatments. Therefore, techniques described here, development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, oral delivery of drugs, and in vivo imaging, are useful for better understanding of human ovarian cancer and treatment and will improve targeting this disease.

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Orthotopic animal models of ovarian cancer replicate better human disease and therefore enhance our understanding of cancer progression and tumor response to therapy. A mouse model receives an intrabursal injection of luciferase-expressing ovarian tumor cells. Treatment is administered via oral gavage. Tumor growth is monitored by in vivo imaging system.

In vivo Görüntüleme ve Yumurtalık Kanseri Ortotopik Fare Modeli Tedavi Tedaviler

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Validation of a Mouse Model to Disrupt LINC Complexes in a Cell-specific Manner

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the Nucleoskeleton and Cytoskeleton (LINC complexes). These protein scaffolds span the nuclear envelope and connect the interior of the nucleus to components of the surrounding cytoplasmic cytoskeleton. LINC complexes consist of two evolutionary-conserved protein families, Sun proteins and Nesprins that harbor C-terminal molecular signature motifs called the SUN and KASH domains, respectively. Sun proteins are transmembrane proteins of the inner nuclear membrane whose N-terminal nucleoplasmic domain interacts with the nuclear lamina while their C-terminal SUN domains protrudes into the perinuclear space and interacts with the KASH domain of Nesprins. Canonical Nesprin isoforms have a variable sized N-terminus that projects into the cytoplasm and interacts with components of the cytoskeleton. This protocol describes the validation of a dominant-negative transgenic mouse strategy that disrupts endogenous SUN/KASH interactions in a cell-type specific manner. Our approach is based on the Cre/Lox system that bypasses many drawbacks such as perinatal lethality and cell nonautonomous phenotypes that are associated with germline models of LINC complex inactivation. For this reason, this model provides a useful tool to understand the role of LINC complexes during development and homeostasis in a wide array of tissues.

Nuclear envelope proteins play a central role in many basic biological processes and have been implicated in a variety of human diseases. This protocol describes a new Cre/Lox-based mouse model that allows for the spatiotemporal control of LINC complexes disruption.

Fare Modeli Doğrulanması Hücre-spesifik şekilde LINC kompleksler bozacak

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the ...

Filtration Isolation of Nucleic Acids:  A Simple and Rapid DNA Extraction Method

FINA, filtration isolation of nucleic acids, is a novel extraction method which utilizes vertical filtration via a separation membrane and absorbent pad to extract cellular DNA from whole blood in less than 2 min. The blood specimen is treated with detergent, mixed briefly and applied by pipet to the separation membrane. The lysate wicks into the blotting pad due to capillary action, capturing the genomic DNA on the surface of the separation membrane. The extracted DNA is retained on the membrane during a simple wash step wherein PCR inhibitors are wicked into the absorbent blotting pad. The membrane containing the entrapped DNA is then added to the PCR reaction without further purification. This simple method does not require laboratory equipment and can be easily implemented with inexpensive laboratory supplies. Here we describe a protocol for highly sensitive detection and quantitation of HIV-1 proviral DNA from 100 &#181;l whole blood as a model for early infant diagnosis of HIV that could readily be adapted to other genetic targets.

We describe here a simple and rapid paper-based DNA extraction method of HIV proviral DNA from whole blood detected by quantitative PCR. This protocol can be extended for use in detecting other genetic markers or using alternative amplification methods.

Nükleik Asitlerin süzülmesi İzolasyonu: basit ve hızlı DNA izolasyonu,

FINA, filtration isolation of nucleic acids, is a novel extraction method which utilizes vertical filtration via a separation membrane and absorbent pad ...

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a versatile analytical tool for characterizing viscoelastic mechanical properties for a variety of materials ranging from hard (plastic, glass, metal, etc.) surfaces to cells on any substrate. It has been widely used to measure the stiffness of cells, but less frequently used to measure the stiffness of aortas. In this paper, we will describe the procedures for using AFM in contact mode to measure the ex vivo elastic modulus of unloaded mouse arteries. We describe our procedure for isolation of mouse aortas, and then provide detailed information for the AFM analysis. This includes step-by-step instructions for alignment of the laser beam, calibration of the spring constant and deflection sensitivity of the AFM probe, and acquisition of force curves. We also provide a detailed protocol for data analysis of the force curves.

Measuring the Stiffness of Ex Vivo Mouse Aortas Using Atomic Force Microscopy

We present detailed protocols for isolation of aortas from mouse and measurement of their elastic modulus using atomic force microscopy.

sertliği ölçme<em&gt; Ex Vivo</emAtomik Kuvvet Mikroskobu Kullanma&gt; Fare aorta

Arterial stiffening is a significant risk factor and biomarker for cardiovascular disease and a hallmark of aging. Atomic force microscopy (AFM) is a ...

A Method for Islet Transplantation to the Omentum in Mouse

Islet transplantation has been proposed to be a potential treatment for type 1 diabetes. Recent compelling evidence indicates that intravascular islet infusion is far from ideal and therefore, the omentum is re-emerging as a potentially valuable site for islet transplantation. This experiment requires the isolation of high quality islets and the implantation of the islets to the diabetic recipients. Transplantation to the omentum requires surgical steps that can be better demonstrated visually. Here, the detailed steps for this procedure are presented. Two methods of mixing the isolated islets with hydrogel before placing the mixture into the omental pouch of diabetic mice are described here. Different hydrogels are used for the different conditions. Blood glucose levels of diabetic mouse recipients of syngeneic islets in the omentum were monitored for up to 35 days. Some animals were sacrificed after 14 days to perform immuno-histochemical analysis. This pre-clinical transplantation approach can be used as preliminary data leading up to translation to clinical transplantation.

A method for the omental transplantation of islets in a mouse is introduced. The isolated islets are mixed with hydrogel and the mixture is placed into the omental pouch of a diabetic mouse. Then, the blood glucose is monitored, and immuno-histochemical analysis is performed.

Adacık nakli için Mouse omentumun için bir yöntemi

Islet transplantation has been proposed to be a potential treatment for type 1 diabetes. Recent compelling evidence indicates that intravascular islet ...

Efficient Dissection and Culture of Primary Mouse Retinal Pigment Epithelial Cells

Eye disorders affect millions of people worldwide, but the limited availability of human tissues hinders their study. Mouse models are powerful tools to understand the pathophysiology of ocular diseases because of their similarities with human anatomy and physiology. Alterations in the retinal pigment epithelium (RPE), including changes in morphology and function, are common features shared by many ocular disorders. However, successful isolation and culture of primary mouse RPE cells is very challenging. This paper is an updated audiovisual version of the protocol previously published by Fernandez-Godino et al. in 2016 to efficiently isolate and culture primary mouse RPE cells. This method is highly reproducible and results in robust cultures of highly polarized and pigmented RPE monolayers that can be maintained for several weeks on Transwells. This model opens new avenues for the study of the molecular and cellular mechanisms underlying eye diseases. Moreover, it provides a platform to test therapeutic approaches that can be used to treat important eye diseases with unmet medical needs, including inherited retinal disorders and macular degenerations.

This protocol, which was originally reported by Fernandez-Godino et al. in 20161, describes a method to efficiently isolate and culture mouse RPE cells, which form a functional and polarized RPE monolayer within one week on Transwell plates. The procedure takes approximately 3 hours.

Birincil Fare Retina Pigment Epitel Hücrelerinin Verimli Diseksiyonu ve Kültürü

Eye disorders affect millions of people worldwide, but the limited availability of human tissues hinders their study. Mouse models are powerful tools to ...

A Highly Scalable Approach to Perform Ecological Surveys of Selfing Caenorhabditis Nematodes

Caenorhabditis elegans is one of the major model organisms in biology, but only recently have researchers focused on its natural ecology. The relative sparsity of information about C. elegans in its natural context comes from the challenges involved in the identification of the small nematode in nature. Despite these challenges, an increasing focus on the ecology of C. elegans has caused a wealth of new information regarding its life outside of the laboratory. The intensified search for C. elegans in nature has contributed to the discovery of many new Caenorhabditis species and revealed that congeneric nematodes frequently cohabitate in the wild, where they feed on microbial blooms associated with rotting plant material. The identification of new species has also revealed that the androdioecious mating system of males and self-fertilizing hermaphrodites has evolved three times independently within Caenorhabditis. The other two selfing species, C. briggsae and C. tropicalis, share the experimental advantages of C. elegans and have enabled comparative studies into the mechanistic basis of important traits, including self-fertilization. Despite these advances, much remains to be learned about the ecology and natural diversity of these important species. For example, we still lack functional information for many of their genes, which might only be attained through an understanding of their natural ecology. To facilitate ecological research of selfing Caenorhabditis nematodes, we developed a highly scalable method to collect nematodes from the wild. Our method makes use of mobile data collection platforms, cloud-based databases, and the R software environment to enhance researchers&#39; ability to collect nematodes from the wild, record associated ecological data, and identify wild nematodes using molecular barcodes.

A Highly Scalable Approach to Perform Ecological Surveys of Selfing Caenorhabditis Nematodes

This protocol can be used to perform large-scale ecological surveys of selfing Caenorhabditis nematodes. The primary advantage of this method is the efficient organization and analysis of ecological and molecular data associated with the nematodes collected from nature.

Kendinden Çıkan Caenorhabditis Nematodlarının Ekolojik Araştırmalarını Gerçekleştirmek için Yüksek Oranda Ölçeklenebilir Bir Yaklaşım

Caenorhabditis elegans is one of the major model organisms in biology, but only recently have researchers focused on its natural ecology. The relative ...

In Vitro Method to Study Sex-Based Differences in Conjunctival Goblet Cells

Dry eye is a multi-factorial disease affecting ocular surface health, with a profoundly higher prevalence in women. Disruption of the gel-forming mucin that is secreted by conjunctival goblet cells (CGCs) onto the ocular surface contributes to multiple ocular surface diseases. The elimination of exogenous sex hormones is essential to obtain consistent results during in vitro study of sex-based differences in CGCs. This paper describes a method to minimize the presence of exogenous hormones in the study of sex-based differences in CGCs while maintaining their physiological function. CGCs from postmortem human donors of both sexes were cultured from pieces of the conjunctiva in RPMI medium with 10% fetal bovine serum (FBS) (referred to as the complete medium) until confluency. Nearly 48 h before the start of the experiments, CGCs were transferred to RPMI medium without phenol red or FBS but with 1% BSA (referred to as phenol-red-free medium). The normal cellular function was studied by measuring the increase in intracellular [Ca2+] ([Ca2+]i) after carbachol (Cch, 1 x 10-4 M) stimulation using fura 2/acetoxymethyl (AM) microscopy. The result shows that CGCs maintained normal function in the phenol-red-free media after 48 h. No significant difference in [Ca2+]i response was observed between phenol red-free RPMI medium and complete medium upon Cch stimulation. Therefore, we recommend using the phenol-red free RPMI medium with 1% BSA to eliminate exogenous hormones without altering the normal function of CGCs in the study of sex-based differences.

In Vitro Method to Study Sex-Based Differences in Conjunctival Goblet Cells

Phenol red-free/fetal bovine serum-free medium is a better option than advanced RPMI to eliminate exogenous hormones without altering the normal function of conjunctival goblet cells in the study of sex-based differences.

In Vitro Konjonktival Goblet Hücrelerinde Cinsiyete Dayalı Farklılıkları İnceleme Yöntemi

Dry eye is a multi-factorial disease affecting ocular surface health, with a profoundly higher prevalence in women. Disruption of the gel-forming mucin ...

Retina Dejenerasyonunun Modellenmesi ve Analizi

LipidUNet-Machine Learning-Based Method of Characterization and Quantification of Lipid Deposits Using iPSC-Derived Retinal Pigment Epithelium

The retinal pigment epithelium (RPE) is a monolayer of hexagonal cells located at the back of the eye. It provides nourishment and support to photoreceptors and choroidal capillaries, performs phagocytosis of photoreceptor outer segments (POS), and secretes cytokines in a polarized manner for maintaining the homeostasis of the outer retina. Dysfunctional RPE, caused by mutations, aging, and environmental factors, results in the degeneration of other retinal layers and causes vision loss. A hallmark phenotypic feature of degenerating RPE is intra and sub-cellular lipid-rich deposits. These deposits are a common phenotype across different retinal degenerative diseases. To reproduce the lipid deposit phenotype of monogenic retinal degenerations in vitro, induced pluripotent stem cell-derived RPE (iRPE) was generated from patients&#39; fibroblasts. Cell lines generated from patients with Stargardt and Late-onset retinal degeneration (L-ORD) disease were fed with POS for 7 days to replicate RPE physiological function, which caused POS phagocytosis-induced pathology in these diseases. To generate a model for age-related macular degeneration (AMD), a polygenic disease associated with alternate complement activation, iRPE was challenged with alternate complement anaphylatoxins. The intra and sub-cellular lipid deposits were characterized using Nile Red, boron-dipyrromethene (BODIPY), and apolipoprotein E (APOE). To quantify the density of lipid deposits, a machine learning-based software, LipidUNet, was developed. The software was trained on maximum-intensity projection images of iRPE on culture surfaces. In the future, it will be trained to analyze three-dimensional (3D) images and quantify the volume of lipid droplets. The LipidUNet software will be a valuable resource for discovering drugs that decrease lipid accumulation in disease models.

Yazar Spotlight: Yaşa Bağlı Makula Dejenerasyonunun Patogenezini Çözmek ve Potansiyel Tedavileri Keşfetmek 

Degenerative eye diseases that affect the retinal pigment epithelium layer of the eye have monogenic and polygenic origins. Several disease models and a software application, LipidUNet, have been developed to study mechanisms of disease, as well as potential therapeutic interventions.

LipidUNet-Machine Learning Tabanlı iPSC Kaynaklı Retinal Pigment Epiteli Kullanılarak Lipid Birikintilerinin Karakterizasyonu ve Nicelleştirilmesi Yöntemi