Name: a highly reproducible and straightforward method to perform in vivo ocular enucleation in the mouse after eye opening
Uploaded: 2014-10-06T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 29 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Highly Reproducible and Straightforward Method to Perform In Vivo Ocular Enucleation in the Mouse after Eye Opening at JoVE.com

We thank Ellen Ytebrouck for her valuable information regarding method application in rat. This work was supported by the Research Council of the KU Leuven (OT09/22) and the Fund for Scientific Research-Flanders (FWO Vlaanderen). Jeroen Aerts is supported by a Ph.D. fellowship of the Agency for Innovation through Science and Technology Flanders (IWT Vlaanderen) and Julie Nys by a Ph.D. grant from FWO Flanders.

Tüm deneyler KU Leuven etik araştırma komitesi tarafından onaylanmış ve Avrupa Toplulukları Konseyi Direktifi ile tam uyum içinde olduğunu gören 22 Eylül 2010 (2010/63 / AB) ve Belçikalı mevzuat (KB 29 Mayıs 2013). Her olası çaba hayvana acı en aza indirmek için ve hayvanların sayısını azaltmak için yapılmıştır. 1. Hayvan Tedavi ve anestezikler <ol><li> Ketamin hidroklorür (75 mg / ml) ve tuzlu su içinde medetomidin hidroklorür (1 mg / kg) karışımı ile karından bir enjeksiyonla fare anestezisi. </li><li> Fare tamamen sedasyon sağlamak için bir forseps ile ayak kısma refleksleri kontrol edin. </li><li> Göz kapaklarını ve bir pamuk ucu kullanarak göz çevresini dezenfekte% 70 etanol uygulayın. Ayrıca sedasyon derecesini değerlendirmek için göz kapağı refleksi kontrol edin. </li></ol> 2. Göz Çıkarma <ol><li> Emin olun hayvan bulunduğu bir düz ve kurupürüzsüz bir yüzey. </li><li> Kavisli, tırtıklı ucu (: 0.5 x 0.4 mm tercih ucu boyutu) ile bir forseps sterilize. </li><li> Yavaşça göz küresi prizden yerinden ve optik sinir ulaşılabilir kadar forseps ile canthus (gözün köşe) üzerine basın. </li><li> Gözün arkasında forseps yönlendirin. Basın ve tercihen eğrinin başında ve forseps değil çok ucuyla sıkıca optik sinir tutun. Bu prizden dünyayı kaldırmaya ve tam optik siniri kelepçe yardımcı olacaktır. </li><li> Fare düz yüzey üzerinde kalır el en az direnç ile yönünde forseps tutan dairesel hareketleri yapma. Fare, el hareketinin yönüne göre, yüzey boyunca katlanırlar. </li><li> Optik sinir iki daraltılmış kadar giderek artan bir hızla bu eylemi gerçekleştirmek (genellikle 7 ila 15 dairesel hareketler arasında, yaklaşık bir buçuk saniyede bir tam tur). Bu nedenle, müstakil küresi olduğukaldırıldı. </li></ol> 3. Post-operatif Bakım <ol><li> (Nadir) kanama durumunda, yapışkan bir kolojen ve hemostatik bir madde ile yörünge doldurun. </li><li> Intraperitoneal tuzlu su içinde atipamezol hidroklorür, 1 mg / kg enjekte edilerek anestezi Ters. </li><li> Ağrıyı gidermek için intraperitonal, her 24 saat Meloksikamın, 1 mg / kg uygulayın. </li><li> Korneanın su kaybını önlemek için kalan göze göz merhemi sürün. </li><li> Hayvan bir ısıtma plakası üzerinde geri ve vücut sıcaklığının kontrol edilmesi için ayrı bir kafes içinde yalıtım malzemesi hayvanı kaydırma sağlar. </li><li> En az 2 gün boyunca her gün fare ağırlığını ölçün. Kilo kaybı acı işaret eder ve Hayvan tamamıyla iyileşti kadar, bu durumda, meloksikam tedaviye devam edebilir. </li></ol>

<ol>
	<li>Toldi, J., Feh&#233;r, O., Wolff, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+plasticity+induced+by+neonatal+monocular+(and+binocular)+enucleation.">Neuronal plasticity induced by neonatal monocular (and binocular) enucleation.</a> Progress in Neurobiology. 48 (3), 191-218 (1996).</li><li>Steeves, J. K. E., Gonz&#225;lez, E. G., Steinbach, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vision+with+one+eye:+a+review+of+visual+function+following+unilateral+enucleation.">Vision with one eye: a review of visual function following unilateral enucleation.</a> Spatial vision. 21 (6), 509-529 (2008).</li><li>Van Brussel, L., Gerits, A., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+cross-modal+plasticity+in+adult+mouse+visual+cortex+following+monocular+enucleation.">Evidence for cross-modal plasticity in adult mouse visual cortex following monocular enucleation.</a> Cerebral Cortex. 21 (9), 2133-2146 (2011).</li><li>Nys, J., Aerts, J., Ytebrouck, E., Vreysen, S., Laeremans, A., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cross-modal+aspect+of+mouse+visual+cortex+plasticity+induced+by+monocular+enucleation+is+age-dependent.">The cross-modal aspect of mouse visual cortex plasticity induced by monocular enucleation is age-dependent.</a> Journal of Comparative Neurology. 522 (4), 950-970 (2014).</li><li>Mahajan, V. B., Skeie, J. M., Assefnia, A. H., Mahajan, M., Tsang, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+eye+enucleation+for+remote+high-throughput+phenotyping.">Mouse eye enucleation for remote high-throughput phenotyping.</a> Journal of Visualized Experiments. (57), e57 (2011).</li><li>Morales, B., Choi, S. -. Y., Kirkwood, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dark+rearing+alters+the+development+of+GABAergic+transmission+in+visual+cortex.">Dark rearing alters the development of GABAergic transmission in visual cortex.</a> Journal of Neuroscience. 22 (18), 8084-8090 (2002).</li><li>Chen, X. J., Rasch, M. J., Chen, G., Ye, C. Q., Wu, S., Zhang, X. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Binocular+input+coincidence+mediates+critical+period+plasticity+in+the+mouse+primary+visual+cortex.">Binocular input coincidence mediates critical period plasticity in the mouse primary visual cortex.</a> Journal of Neuroscience. 34 (8), 2940-2955 (2014).</li><li>Konur, S., Yuste, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+regulation+of+spine+and+filopodial+motility+in+primary+visual+cortex:+Reduced+effects+of+activity+and+sensory+deprivation.">Developmental regulation of spine and filopodial motility in primary visual cortex: Reduced effects of activity and sensory deprivation.</a> Journal of Neurobiology. 59 (2), 236-246 (2004).</li><li>Parrilla-Reverter, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-course+of+the+retinal+nerve+fibre+layer+degeneration+after+complete+intra-orbital+optic+nerve+transection+or+crush:+A+comparative+study.">Time-course of the retinal nerve fibre layer degeneration after complete intra-orbital optic nerve transection or crush: A comparative study.</a> Vision Research. 49 (23), 2808-2825 (2009).</li><li>Galindo-Romero, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axotomy-induced+retinal+ganglion+cell+death+in+adult+mice:+Quantitative+and+topographic+time+course+analyses.">Axotomy-induced retinal ganglion cell death in adult mice: Quantitative and topographic time course analyses.</a> Experimental Eye Research. 92 (5), 377-387 (2011).</li><li>Kanold, P. O., Kim, Y. A., GrandPre, T., Shatz, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-regulation+of+ocular+dominance+plasticity+and+NMDA+receptor+subunit+expression+in+glutamic+acid+decarboxylase-65+knock-out+mice.">Co-regulation of ocular dominance plasticity and NMDA receptor subunit expression in glutamic acid decarboxylase-65 knock-out mice.</a> The Journal of Physiology. 587 (12), 2857-2867 (2009).</li><li>Van Brussel, L., Gerits, A., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+localization+of+functional+subdivisions+in+the+visual+cortex+of+the+adult+mouse.">Identification and localization of functional subdivisions in the visual cortex of the adult mouse.</a> Journal of Comparative Neurology. 514 (1), 107-116 (2009).</li><li>Avwenagha, O., Bird, M. M., Lieberman, A. R., Yan, Q., Campbell, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+expression+of+brain-derived+neurotrophic+factor+and+tyrosine+kinase+B+mRNAs+and+distribution+and+ultrastructural+localization+of+their+proteins+in+the+visual+pathway+of+the+adult+rat.">Patterns of expression of brain-derived neurotrophic factor and tyrosine kinase B mRNAs and distribution and ultrastructural localization of their proteins in the visual pathway of the adult rat.</a> Neuroscience. 140 (3), 913-928 (2006).</li><li>Hernandes, M. S., Britto, L. R. G., Real, C. C., Martins, D. O., Lopes, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+oxygen+species+and+the+structural+remodeling+of+the+visual+system+after+ocular+enucleation.">Reactive oxygen species and the structural remodeling of the visual system after ocular enucleation.</a> Neuroscience. 170 (4), 1249-1260 (2010).</li><li>Cuyvers, A., Paulussen, M., Smolders, K., Hu, T. -. T., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+cell+proliferation+upon+enucleation+in+direct+retinal+brain+targets+in+the+visual+system+of+the+adult+mouse.">Local cell proliferation upon enucleation in direct retinal brain targets in the visual system of the adult mouse.</a> Journal of Experimental Neuroscience. 4, 1-15 (2010).</li><li>Smith, S. L., Trachtenberg, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experience-dependent+binocular+competition+in+the+visual+cortex+begins+at+eye+opening.">Experience-dependent binocular competition in the visual cortex begins at eye opening.</a> Nature Neuroscience. 10 (3), 370-375 (2007).</li><li>Toldi, J., Farkas, T., V&#246;lgyi, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+enucleation+induces+cross-modal+changes+in+the+barrel+cortex+of+rat.+A+behavioural+and+electrophysiological+study.">Neonatal enucleation induces cross-modal changes in the barrel cortex of rat. A behavioural and electrophysiological study.</a> Neuroscience Letters. 167 (1-2), 1-4 (1994).</li><li>Newton, J. R., Sikes, R. W., Skavenski, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-modal+plasticity+after+monocular+enucleation+of+the+adult+rabbit.">Cross-modal plasticity after monocular enucleation of the adult rabbit.</a> Experimental Brain Research. 144 (4), 423-429 (2002).</li><li>Lalonde, J., Chaudhuri, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+changes+in+CREB+phosphorylation+and+neuroadaptive+gene+expression+in+area+V1+of+adult+monkeys+after+monocular+enucleation.">Dynamic changes in CREB phosphorylation and neuroadaptive gene expression in area V1 of adult monkeys after monocular enucleation.</a> Molecular and Cellular Neuroscience. 35 (1), 24-37 (2007).</li><li>You, Y., Gupta, V. K., Graham, S. L., Klistorner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anterograde+degeneration+along+the+visual+pathway+after+optic+nerve+injury.">Anterograde degeneration along the visual pathway after optic nerve injury.</a> PLoS ONE. 7 (12), e52061 (2012).</li><li>Kelly, K. R., McKetton, L., Schneider, K. A., Gallie, B. L., Steeves, J. K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+anterior+visual+system+development+following+early+monocular+enucleation.">Altered anterior visual system development following early monocular enucleation.</a> NeuroImage: Clinical. 4, 72-81 (2014).</li><li>Chow, A. M., Zhou, I. Y., Fan, S. J., Chan, K. W. Y., Chan, K. C., Wu, E. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+changes+in+visual+cortex+of+neonatal+monocular+enucleated+rat:+a+proton+magnetic+resonance+spectroscopy+study.">Metabolic changes in visual cortex of neonatal monocular enucleated rat: a proton magnetic resonance spectroscopy study.</a> International Journal of Developmental Neuroscience. 29 (1), 25-30 (2011).</li><li>Dyer, R. S., Hammond, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+enucleation+in+retinal+degenerate+mice.">Effects of enucleation in retinal degenerate mice.</a> Physiology &amp; behavior. 14 (2), 207-210 (1975).</li><li>Smith, S. A., Bedi, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unilateral+eye+enucleation+in+adult+rats+causes+neuronal+loss+in+the+contralateral+superior+colliculus.">Unilateral eye enucleation in adult rats causes neuronal loss in the contralateral superior colliculus.</a> Journal of Anatomy. 190 (4), 481-490 (1997).</li><li>Gonzalez, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+monocular+enucleation+on+calbindin-D+28k+and+c-Fos+expression+in+the+lateral+geniculate+nucleus+in+rats.">Effects of monocular enucleation on calbindin-D 28k and c-Fos expression in the lateral geniculate nucleus in rats.</a> Okajimas folia anatomica Japonica. 82 (1), 9-18 (2005).</li><li>Faguet, J., Maranhao, B., Smith, S. L., Trachtenberg, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ipsilateral+eye+cortical+maps+are+uniquely+sensitive+to+binocular+plasticity.">Ipsilateral eye cortical maps are uniquely sensitive to binocular plasticity.</a> Journal of Neurophysiology. 101 (2), 855-861 (2008).</li><li>Van der Gucht, E., Hof, P. R., Van Brussel, L., Burnat, K., Arckens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurofilament+protein+and+neuronal+activity+markers+define+regional+architectonic+parcellation+in+the+mouse+visual+cortex.">Neurofilament protein and neuronal activity markers define regional architectonic parcellation in the mouse visual cortex.</a> Cerebral Cortex. 17 (12), 2805-2819 (2007).</li><li>Chaudhuri, A., Matsubara, J. A., Cynader, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+activity+in+primate+visual+cortex+assessed+by+immunostaining+for+the+transcription+factor+Zif268.">Neuronal activity in primate visual cortex assessed by immunostaining for the transcription factor Zif268.</a> Visual Neuroscience. 12 (1), 35-50 (1995).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Bizim yöntemine göre başarılı bir enüklasyonu gerçekleştirmek için, dikkat edilmesi gereken en önemli adımlar şunlardır: 1) uygun büyüklükte bir kavisli ve tırtıklı ucu ile bir forseps kullanarak; 2) düzgün ve kuru bir yüzey üzerinde enükleasyonunu yapmak; ve 3) kademeli olarak en az sürtünme ile bir yönde dairesel hareketler hızlandırılması. Etkili bir sonuç için bir eğri ve tırtıklı ucu ile karakterize uygun bir forseps kullanmak esastır (: fare: Tercih uç boyutu 0.5 x 0.4 mm; sıçan: 2.15 x 1.3 mm). Eğrilik küresi değiştirme sonrası optik sinir için kolay bir erişim sağlar ve dairesel hareketler gerçekleştirirken doğru el yerleştirilmesi için gereklidir. Optik sinir tutarken onlar gerekli tutuş olmadıklarıdan Pürüzsüz ipuçları tavsiye edilmez. Dairesel hareketleri sırasında düzgün optik siniri tutmak için başarısızlık oftalmik arter, gözün yoksul dekolmanı ve dolayısıyla kötü tekrarlanabilirlik yırtılması ile sonuçlanır.Bu nedenle, in vivo olarak bir kez uygulanması yöntemi maksimal hayvan bakımını temin etmek için işleme forseps optimizasyonu için ötenazi hayvanlar üzerinde ilk uygulama için bu tekniği tavsiye edilir. Başarılı göz enükleasyon yakın zamanda elle hayvan vücudu torna ve forseps sabit tutmak dışında aynı tekniği kullanarak bizim laboratuvar sıçan yapılmıştır. Tekniğinin bir sınırlama muhtemelen retinaya zarar verebilecek olmasıdır. Bu yüzden, bu yöntem, histoloji 5 gerçekleştirmek retina toplanması için daha az uygundur. Ayrıca, bizim yöntem küresi kaldırma veya göz kapaklarının kesmeden prizden yerinden edilmesi gerekiyor çünkü göz açma yaş sonrası sınırlıdır. Kemirgenler dahil olmak üzere farklı türlerde, Göz enükleasyon, rutin genellikle göz kapaklarının kaldırılmasını gerektirecektir alternatif yöntemleri kullanarak ve optik siniri 18,23-25 ​​kesim yapılır. Bu yöntemiids daha invaziv olma eğilimindedir ve burada açıklanan tekniğe göre daha yüksek bir öğrenme eğrisi vardır. Kaldırma veya göz kapaklarının dikilmesi için gerek kalmadan, cerrahi sonrası iyileşme süresi daha yüksek hayvan refahı ve daha tekrarlanabilir sonuçlar elde simge edilir.

Bir göz çıkarma ve böylece geri dönüşümsüz duyusal reseptör yüzeyini (retina) tahrip, görsel yol boyunca duyusal girdi önemli bir kayıp getirir. Çocuk ve yetişkin görsel sistemdeki enüklüeasyon modeli farklı görme merkezlerinde 1-4 geliştirilmesi, plastisite ve fonksiyonlarının anlaşılmasına değerli olduğu kanıtlanmıştır. Bu duyusal yoksunluk, moleküler, hücresel ve fizyolojik sonuçları kortikal devreler baş ve deneyim böyle kapsamlı bir değişikliğe tepki olarak kendi yapısını ve işlevini değiştirmek nasıl normal gelişim düzenlenir ve nasıl kurulur içgörü sağlayabilir. Görsel yoksunluğa Farklı yöntemleri var ve bunlar bütün vizyonu ile ilgili araştırma kendi özel avantajlara sahip. Örnek koyu yetiştirme özellikle görsel olarak aktivitesi tahrik ortadan kaldırmak için, yine de, spontan retina aktivitesini etkilemez. Benzer şekilde, ameliyat dikiş iplikleri ya da göz kapağı yamalar desenli kaldır visual giriş spontan aktivitesini bozmadan ama onlar kapalı gözüyle dağılan ışık penetrasyonunu sağlar. Bu yöntemler, geri çevrilebilir ve gelişim 6-8 sırasındaki kortikal devrelerin heykel binoküler girdi desenli vizyon ve düşük seviyeli korelasyon rolünün anlaşılmasında değerli olduğu gösterilmiştir. Bu optik siniri 9,10 teşkil retina ganglion hücrelerinin girdi ilerici kaybı oluşturması nedeniyle glokom araştırmada, yetişkin hayvanlarda optik sinir ezilme modeli yaygın olarak kullanılmaktadır. Amaç geri dönüşümsüz bir kez spontan ve desenli hem vizyon kaldırmak için zaman göz ve böylece retina tamamen ve anında kaldırılır Öte yandan, enükleasyonu günü, yoksunluk uygun bir seçimdir. Ayrıca, aktivitesi haritalama çalışmaları 11,12 gürültü oranı sinyal geliştirmek için güçlü bir göz içi aktivitesi dengesizliği neden olur. Th enükleasyonuna yanıt olarak yapısal ve işlevsel değişiklikler Karşılaştırılmasıose örneğin kapak sütür olarak daha az şiddetli yöntemlerle yoksunluğu sonra da plastisite hem homeostatik ve sinaptik türleri spontan retina aktivite rolüne yeni anlayışlar ortaya olabilir. Enükleasyon doğrudan retina hedefleri trofik etkileri kaybı tetikler. Örneğin, BDNF düzeyleri anlamlı lateral genikulat nükleus (LGN&#39;nin) ve yetişkin enüklee sıçanların 13 üstün colliculus downregülasyona edilir. Yapısal biçimlenme aracılık haberci moleküller olarak işlev Reaktif oksijen türleri, aynı zamanda yetişkin farenin görme sistemi 14 subkortikal yapılarda tespit edilmiştir. Buna ek olarak, fare çalışmalarındaki farklı subkortikal görsel hedef yapılar arasında ve mikroglial Astroglial etkinleştirme bir hafta 15 sonrası belirli bir zaman dilimi içinde enükleasyonu meydana gelir. Birlikte, glial, yapı ve moleküler düzeyde farklı subkortikal yanıtlarında optik deaferentasyon sonuçlanır. Bu subkortikal rağmenetkiler, mutlaka kortikal seviyesi 16 at etkilerini ima etmez. Sonraki yoksun görsel kortekse olmayan görsel girdilerin güçlendirilmesine, diğer duyusal alanlardaki değişiklikler de dahil olmak üzere kayda değer, çapraz-modal kortikal plastisite, hem monoküler sonra ortaya (ME) 3,4,17,18 ve binoküler 1,17 (BE) enüklüeasyon. Yanı sıra görsel Nörobilimdeki katkıda gelen deafferentasyonu bir türü enükleasyonu merkezi sinir sistemi nöro-koruyucu ve 19 nörodejeneratif 20-22 özellikleri arasında bir denge incelemek için kullanılabilir. Enükleasyonu gerçekleştirmek için farklı prosedürler literatürde daha önce tarif edilmiştir. Sıçan ve farelerde in vivo ME için belirli yöntemler nedeniyle yörünge kas ve doku 23-25 ​​gereksiz kısımlara daha az açıktır. Böyle Mahajan vd gibi diğer yayınlar. (2011) 5 kullanılarak ayrıntılı bir protokol sağlar<html> genotip-fenotip ilişkisi, büyük olasılıkla otopsi incelemek için gözleri bir yüksek verimli koleksiyonu için künt diseksiyon. Amaçları için, yöntem uygun ve hızlı. Bir çok göz kendisinden daha (canlı hayvan) enükleasyonu aşağıdaki afferent görsel yolu seçmesi çalışma Ancak, bu yöntem, in vivo enükleasyonu için daha az uygundur. Böyle bir ortamda, post-enükleasyon sağkalım yüksek önem taşımaktadır. Aynı zamanda, in vivo hasar ve optik sinirin korunması ve yörünge dokusu içinde çok az uygundur. Burada, FAGUET et al birine, daha çok benzer alternatif bir yöntem mevcut enükleasyonu (2008) 26, belirli avantajlı özellikler sunmaktadır:. Hızlı bir ameliyat sonrası iyileşme ile ilişkili olduğunu ve çok düşük bir öğrenme eşiği ile karakterize edilir araştırmacılar için. Göz morfolojisi veya görsel yolu araştırmada: Genel olarak, farklı yöntemler izleyen araştırma odak bağlı olarak tamamlayıcıdır. Özetle ve_content &quot;&gt;, enükleasyon homeostatik ve çapraz-modal beyin plastisite, glial yanıt özellikleri ve akson istikrar araştırılması yönünde görüş araştırma uygulanabilir. Bu görsel yazıda, in vivo göz enükleasyon için uygulanabilir ve güvenilir bir yöntem olarak göstermek fare.

<table><tbody><tr><td>Ketamine hydrochloride (Anesketin)</td><td>Dechra Veterinary Products (Eurovet)</td><td>BE-V136516</td><td></td></tr><tr><td>Medetomidine hydrochloride (Domitor)</td><td>Orion Corporation (Janssen Animal Health)</td><td>BE-V151742</td><td></td></tr><tr><td>Atipamezol hydrochloride (Antisedan)</td><td>Orion Corporation (Elanco Animal Health)</td><td>BE-V153352</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotics (cefazolin, Kefzol)</td><td>Eurocept Pharmaceuticals</td><td>BE 106267</td><td></td></tr><tr><td>Eye ointment (Fucithalmic)</td><td>Leo Pharma nv-sa</td><td>BE 144654</td><td></td></tr><tr><td>Moria MC31 Forceps - Serrated Curved</td><td>Fine Science Tools</td><td>11370-31</td><td>For application in the mouse. Any forceps with similar dimensions can be used as long as the tip is curved and serrated.</td></tr><tr><td>Narrow Pattern Forceps - curved</td><td>Fine Science Tools</td><td>11003-13</td><td>For application in the rat. Any forceps with similar dimensions can be used as long as the tip is curved and serrated.</td></tr><tr><td>Hemostatic cotton wool</td><td>Qualiphar</td><td>N/A</td><td>Other hemostatic agents are equally suitable (&lt;em&gt;e.g.&lt;/em&gt;, Viscostat, #649, Ultradent Products)</td></tr></tbody></table>

a highly reproducible and straightforward method to perform in vivo ocular enucleation in the mouse after eye opening

Enükleasyon ya da bir göz cerrahi olarak çıkarılması genel olarak sinir deafferentasyonu için bir model olarak kabul edilebilir. Bu memeli görsel sistemin 1-4 boyunca görsel, çapraz modal ve gelişimsel plastisite farklı yönlerini incelemek için değerli bir araç sağlar. Burada, biz yetişkinler kadar 20 gün eski farelerde doğrulandığında fare birinin kaldırılması veya her iki gözünde, bir zarif ve basit tekniği göstermektedir. Kısaca, bir dezenfekte eğri forseps göz arkasında optik sinir kilitlemek için kullanılır. Daha sonra, dairesel hareketler optik sinir daraltıyor ve göz küresinin kaldırmak için yapılır. Bu tekniğin avantajları hiçbir kanama minimal yüksek tekrarlanabilirlik, hızlı ameliyat sonrası iyileşme ve deneyci için çok düşük bir öğrenme eşiği vardır. Bu nedenle, hayvan büyük miktarda manipüle ve çaba en az bir miktarı ile işlenebilir. Tekniğinin doğası hafif hasarı uyarabilirİşlem sırasında retina. Mahajan diğ ile karşılaştırıldığında, bu yan etki bu yöntem daha az uygun hale getirir. (2011) 5, amaç toplamak ve retina dokusu analiz ise. Göz küresi göz kapaklarını çıkarmadan prizden yerinden edilmesi gerekiyor çünkü: - Ayrıca, bizim yöntem sonrası göz açma yaş (13 ve sonrası P10 fare) ile sınırlıdır. Bu yazıda anlatılan in vivo enükleasyon tekniği geçtiğimiz günlerde başarıyla sıçanlarda küçük değişikliklerle uygulanan ve genel kemirgen afferent görsel yolu incelemek için yararlı görünür olmuştur.

Şekil 1, tarif edilen protokol kullanılarak, gözün başarılı bir şekilde uzaklaştırıldığını göstermektedir ve kanama yokluğu veya yörünge dokusu veya göz soket (Şekil 1A, 1B) herhangi bir fiziksel hasar ile karakterize edilir. Bundan başka, göz çıkarıldı bütünüyle dokunulmamış dünya (Şekil 1C) göstergesi olan bir düz kornea, koroid ve optik diski vardır. Protokolümüz göz ve mekanik çevirme arkasında optik sinirin sıkılmasına içine aldığı, kaldırılan gözün optik sinir retina (Şekil 1D) tabanında kısıtlıdır. Çevredeki beyin alanına (Şekil 1E) herhangi bir zarar vermeden temiz bir kesim optik sinir açıklanan prosedür sonuçlarını Sahne. Tek gözlü enüklüeasyon, eşleme aktivitesi (Şekil 2) ile kombinasyon halinde, bir keskin karşı Visua işlevsel ya da göz spesifik bir giriş bölgeleri ifade sağlarmaymunlar 28 gibi yüksek mertebeden memelilerde fare 12,27 hatta göz baskınlığı sütunların l korteks. Fareler deney, biri kaldırılması (ME) ya da her iki gözün hedef görsel uyarı ve zif268 mRNA veya c-fos protein ekspresyon düzeylerinin saptanması ile birlikte (BE), görsel kortekse 12,27 bölgesel nöronal aktivasyonunu ortaya çıkarmak için uygulanan . Görsel olarak uyarılmış kontrollere (Şekil 2A) aksine, BE farenin görsel giriş (Şekil 2B) eksikliği tamamlamak için bağlı görsel korteksteki temel aktivite gösterdi. Gibi, olmayan görsel korteksin (yani. Daha ön bölüm ve daha posterior bölümlerinde işitsel kortekste somatosensori korteks) ile görsel arasındaki sınırları ortaya çıkarılmıştır. Bir haftalık sağkalım süresi ile ME farelerin Sonuçları kontralateral görme korteksi göz spesifik giriş bölgeleri görüntülendi. İki tahrik monocularly bölge hipoaktif ve medi bulunduğuEl ve merkezi binoküler bölgesinde (Şekil 2C) lateral. <img alt="Şekil 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51936/51936fig1highres.jpg" width="500" /> Göz soket, kaldırılır ve gözün optik sinirin sonrası enüklüeasyon devletin Şekil 1. Kalitatif değerlendirme. Kavisli bir forseps (A) herhangi bir kanama veya hasar göz soket (B) gözlenen ile gözün çıkarılmasından sonra. , Kornea ve koroid (C, D) normal bir görünüm ile yansıtılan çıkarılan göz tamamı ile faal olduğu. Optik sinir o göz (D) bırakır optik diskte daraltılır. Beynin ventral kısmının incelenmesi temiz bir kesim ve optik sinirin (yıldız) ve diğer yapıların (E) belirgin bir hasar ortaya koymaktadır. C, D Ölçek çubukları: 1 mm. E&#39;deki ölçek çizgisi: 5 mm. A: ön; L: sol; P: Posterior; R: sağ. Şekil enükleasyonla ortaya olarak fare görme korteksi 2. Fonksiyonel göz giriş özgü alt bölümleri. Gözleri ve korteks bağlamak siyah ve gri çizgiler retina afferentlerinden ve göz spesifik giriş bölgelerin üzerinde geçişini temsil eder. Sinirsel aktivite kontrolü (A) koronal bölümleri ¨orsellestirilen, (B) BE, ve zif268 (gri skala) in situ hibridizasyon (ISH) radyoaktif ME (C) farenin Bregma seviyesi etrafında -3.40 mm. Kontrol hayvanlarında (A), her iki yarıküre içindeki görsel korteks görsel uyarı aşağıdaki yüksek aktivitesini ekspres eder. Bir veya her iki göz (ler) kesilip zaman, sinyal aktivitesi belirgin bir azalmaya yol yoksun kortikal mukabil bölümlerine görülebilir. Monocularly (C) farenin yüksek AÇTI bir bölgeyi gösteriyor enükleekaldırılan göze karşı monoküler bölgelerinde bir azalma sinyali ile çevrili görsel korteksin binoküler bölgesinde vity. Ölçek çizgisi: 2 mm olmuştur. Van Brussel ark 12 izni ile yayımlanmaktadır.

Watch this Scientific Journal Video about A Highly Reproducible and Straightforward Method to Perform In Vivo Ocular Enucleation in the Mouse after Eye Opening at JoVE.com

A Highly Reproducible and Straightforward Method to Perform In Vivo Ocular Enucleation in the Mouse after Eye Opening

Ayrıca enüklüeasyon denilen gözlerin kaldırılması, geri dönüşümsüz kısmi (monoküler) veya tam (binoküler) görme kaybına neden olduğundan memeli görme sistemi boyunca görsel, çapraz modal ve gelişimsel plastisite yönlerini incelemek için yararlı bir strateji sağlar. Burada vivo enükleasyonuna gerçekleştirmek için son derece tekrarlanabilir ve basit bir yaklaşım açıklar.

A Çok Reproducible ve Kolay Yöntem gerçekleştir<em&gt; In Vivo</emGöz açılışı sonrası Mouse&gt; Göz Enükleasyon

Enucleation or the surgical removal of an eye can generally be considered as a model for nerve deafferentation. It provides a valuable tool to study the ...

a-highly-reproducible-straightforward-method-to-perform-vivo-ocular

Research

JoVE Journal

Biology

A Highly Reproducible and Straightforward Method to Perform In Vivo Ocular Enucleation in the Mouse after Eye Opening

23.3K Görüntüleme.  KU Leuven - University of Leuven.  Ayrıca enüklüeasyon denilen gözlerin kaldırılması, geri dönüşümsüz kısmi (monoküler) veya tam (binoküler) görme kaybına neden olduğundan memeli görme sistemi boyunca görsel, çapraz modal ve gelişimsel plastisite yönlerini incelemek için yararlı bir strateji sağlar. Burada vivo enükleasyonuna gerçekleştirmek için son derece tekrarlanabilir ve basit bir yaklaşım açıklar. 

Video: A Highly Reproducible and Straightforward Method to Perform In Vivo Ocular Enucleation in the Mouse after Eye Opening

Mouse Eye Enucleation for Remote High-throughput Phenotyping

The mouse eye is an important genetic model for the translational study of human ophthalmic disease. Blinding diseases in humans, such as macular degeneration, photoreceptor degeneration, cataract, glaucoma, retinoblastoma, and diabetic retinopathy have been recapitulated in transgenic mice.1-5 Most transgenic and knockout mice have been generated by laboratories to study non-ophthalmic diseases, but genetic conservation between organ systems suggests that many of the same genes may also play a role in ocular development and disease. Hence, these mice represent an important resource for discovering new genotype-phenotype correlations in the eye. Because these mice are scattered across the globe, it is difficult to acquire, maintain, and phenotype them in an efficient, cost-effective manner. Thus, most high-throughput ophthalmic phenotyping screens are restricted to a few locations that require on-site, ophthalmic expertise to examine eyes in live mice. 6-9 An alternative approach developed by our laboratory is a method for remote tissue-acquisition that can be used in large or small-scale surveys of transgenic mouse eyes. Standardized procedures for video-based surgical skill transfer, tissue fixation, and shipping allow any lab to collect whole eyes from mutant animals and send them for molecular and morphological phenotyping. In this video article, we present techniques to enucleate and transfer both unfixed and perfusion fixed mouse eyes for remote phenotyping analyses.

The dissection technique illustrates enucleation of the mouse eye for tissue fixation to perform phenotyping in high-throughput screens.

Uzaktan Yüksek throughput fenotipleme için Fare Göz Enükleasyon

The mouse eye is an important genetic model for the translational study of human ophthalmic disease. Blinding diseases in humans, such as macular ...

Tıp

Video-oculography in Mice

Eye movements are very important in order to track an object or to stabilize an image on the retina during movement. Animals without a fovea, such as the mouse, have a limited capacity to lock their eyes onto a target. In contrast to these target directed eye movements, compensatory ocular eye movements are easily elicited in afoveate animals1,2,3,4. Compensatory ocular movements are generated by processing vestibular and optokinetic information into a command signal that will drive the eye muscles. The processing of the vestibular and optokinetic information can be investigated separately and together, allowing the specification of a deficit in the oculomotor system. The oculomotor system can be tested by evoking an optokinetic reflex (OKR), vestibulo-ocular reflex (VOR) or a visually-enhanced vestibulo-ocular reflex (VVOR). The OKR is a reflex movement that compensates for "full-field" image movements on the retina, whereas the VOR is a reflex eye movement that compensates head movements. The VVOR is a reflex eye movement that uses both vestibular as well as optokinetic information to make the appropriate compensation. The cerebellum monitors and is able to adjust these compensatory eye movements. Therefore, oculography is a very powerful tool to investigate brain-behavior relationship under normal as well as under pathological conditions (f.e. of vestibular, ocular and/or cerebellar origin).
Testing the oculomotor system, as a behavioral paradigm, is interesting for several reasons. First, the oculomotor system is a well understood neural system5. Second, the oculomotor system is relative simple6; the amount of possible eye movement is limited by its ball-in-socket architecture ("single joint") and the three pairs of extra-ocular muscles7. Third, the behavioral output and sensory input can easily be measured, which makes this a highly accessible system for quantitative analysis8. Many behavioral tests lack this high level of quantitative power. And finally, both performance as well as plasticity of the oculomotor system can be tested, allowing research on learning and memory processes9.
Genetically modified mice are nowadays widely available and they form an important source for the exploration of brain functions at various levels10. In addition, they can be used as models to mimic human diseases. Applying oculography on normal, pharmacologically-treated or genetically modified mice is a powerful research tool to explore the underlying physiology of motor behaviors under normal and pathological conditions. Here, we describe how to measure video-oculography in mice8.

Video-oculography is a very quantitative method to investigate ocular motor performance as well as motor learning. Here, we describe how to measure video-oculography in mice. Applying this technique on normal, pharmacologically-treated or genetically modified mice is a powerful research tool to explore the underlying physiology of motor behaviors.

Farelerde Video-oculography

Eye movements are very important in order to track an object or to stabilize an image on the retina during movement. Animals without a fovea, such as the ...

Nörobilim

In vivo-like Organotypic Murine Retinal Wholemount Culture

Targeted ablations of genes and analysis of animal models is the classical strategy for enrolling specific retinal gene function. However, transgenic, retina-specific or conditional knockout mouse models often display early lethality or suffer from severe malformations, preventing an analysis beyond embryonic or early postnatal stages.
Primary cell culture is an alternative to investigate the effects of exogenously applied recombinant factors, overexpression of genes or siRNA-mediated gene knockdown in a controlled environment. Dissociated cell culture has the advantage that the endogenous signals reaching the target cells are reduced, thereby facilitating the identification of exogenously triggered effects after pharmacological manipulation. However, important cell-cell interactions are initially destroyed by enzymatic digestion or mechanical dissociation, even if re-aggregated retinospheroid cultures1 are used.
By contrast, organotypic retinal wholemount cultures provide a system close to the physiological in vivo situation with neuronal interactions and connections still preserved2-5.
In this video article we provide a step by step demonstration of (1) the establishment of in vivo-like organotypic retinal wholemount cultures including dissection peculiarities of embryonic, postnatal and adult murine eyes and (2) a dissociation and cytospin procedure for analysis of neuronal apoptosis and retinal cell proliferation in organotypic wholemounts, e.g. after culture in the presence of exogenously applied recombinant factors.

In vivo-like Organotypic Murine Retinal Wholemount Culture

This video article demonstrates the establishment of organotypic retinal wholemount cultures and a cytospin procedure for analysis of exogenously induced effects. Organotypic retinal wholemount cultures mimic the in vivo situation and significantly facilitate the accessibility of murine retinas for experimental manipulations while circumventing the disadvantages of classical murine animal models.

Organotipik murin Retina Wholemount Kültür in vivo

Targeted ablations of genes and analysis of animal models is the classical strategy for enrolling specific retinal gene function. However, transgenic, ...

Biyoloji

Monocular Visual Deprivation and Ocular Dominance Plasticity Measurement in the Mouse Primary Visual Cortex

Monocular visual deprivation is an excellent experimental paradigm to induce primary visual cortical response plasticity. In general, the response of the cortex to the contralateral eye to a stimulus is much stronger than the response of the ipsilateral eye in the binocular segment of the mouse primary visual cortex (V1). During the mammalian critical period, suturing the contralateral eye will result in a rapid loss of responsiveness of V1 cells to contralateral eye stimulation. With the continuing development of transgenic technologies, more and more studies are using transgenic mice as experimental models to examine the effects of specific genes on ocular dominance (OD) plasticity. In this study, we introduce detailed protocols for monocular visual deprivation and calculate the change in OD plasticity in mouse V1. After monocular deprivation (MD) for 4 days during the critical period, the orientation tuning curves of each neuron are measured, and the tuning curves of layer four neurons in V1 are compared between stimulation of the ipsilateral and contralateral eyes. The contralateral bias index (CBI) can be calculated using each cell&#39;s ocular OD score to indicate the degree of OD plasticity. This experimental technique is important for studying the neural mechanisms of OD plasticity during the critical period and for surveying the roles of specific genes in neural development. The major limitation is that the acute study cannot investigate the change in neural plasticity of the same mouse at a different time.

Here, we present detailed protocols for monocular visual deprivation and ocular dominance plasticity analysis, which are important methods for studying the neural mechanisms of visual plasticity during the critical period and the effects of specific genes on visual development.

Fare Birincil Görsel Kortekste Monoküler Görme Yoksunluğu ve Oküler Baskınlık Plastisite Ölçümü

Monocular visual deprivation is an excellent experimental paradigm to induce primary visual cortical response plasticity. In general, the response of the ...

Gelişim Biyolojisi

Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant for targeting neovascular glaucoma, a sight-threatening complication of diabetic retinopathy. This method is based on the induction of iris vascular response by a series of self-sealing uveal punctures on BALB/c mice and takes advantage of the postpartum maturation of mouse ocular vasculature. Mouse pups undergo uveal punctures from postnatal day 12.5, when the pups naturally open their eyes, until postnatal day 24.5. Due to the transparency of the cornea, iris vasculature can be analyzed easily through time by noninvasive in vivo methods. Furthermore, the semitransparent iris of BALB/c mice can be flatmounted for detailed immunohistologic analysis with minimal non-specific background staining. In this model, angiogenesis is mainly driven by the inflammatory and plasminogen activating systems. The puncture-induced model is the first to induce iris neovascularization in small rodents, and has the advantage of allowing direct noninvasive in vivo analysis of the angiogenic process. Moreover, the model can be combined with angiogenic modulating substances, which highlights its potential in the study of angiogenesis with an in vivo perspective.

Iris neovascularization, a common complication of ischemic retinal disease, may lead to sight-threatening neovascular glaucoma. Here, we describe a murine protocol for inducing experimental iris neovascularization that may be used for noninvasive evaluation of angiogenesis-modulating substances.

Delici cisim kaynaklı Iris neovaskülarizasyon Rubeosis Iridis bir fare modeli olarak

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant ...

Implantation of a Cranial Window for Repeated In Vivo Imaging in Awake Mice

To fully understand the cellular physiology of neurons and glia in behaving animals, it is necessary to visualize their morphology and record their activity in vivo in behaving mice. This paper describes a method for the implantation of a chronic cranial window to allow for the longitudinal imaging of brain cells in awake, head-restrained mice. In combination with genetic strategies and viral injections, it is possible to label specific cells and regions of interest with structural or physiological markers. This protocol demonstrates how to combine viral injections to label neurons in the vicinity of GCaMP6-expressing astrocytes in the cortex for simultaneous imaging of both cells through a cranial window. Multiphoton imaging of the same cells can be performed for days, weeks, or months in awake, behaving animals. This approach provides researchers with a method for viewing cellular dynamics in real time and can be applied to answer a number of questions in neuroscience.

Implantation of a Cranial Window for Repeated In Vivo Imaging in Awake Mice

Presented here is a protocol for the implantation of a chronic cranial window for the longitudinal imaging of brain cells in awake, head-restrained mice.

Uyanık Farelerde Tekrarlanan In Vivo Görüntüleme için Kraniyal Pencerenin İmplantasyonu

To fully understand the cellular physiology of neurons and glia in behaving animals, it is necessary to visualize their morphology and record their ...

Akson Rejenerasyon Çalışmaları için Kornea Duyusal Fiber Hasar Protokolleri

Three Strategies to Induce Neurotrophic Keratitis and Nerve Regeneration in Murine Cornea

The cornea is a transparent tissue that covers the eye and is crucial for clear vision. It is the most innervated tissue in the body. This innervation provides sensation and trophic function to the eye and contributes to preserving corneal integrity. The pathological disruption of this innervation is termed neurotrophic keratitis. This can be triggered by injury to the eye, surgery, or disease. In this study, we propose three different protocols for inflicting damage on the innervation in ways that recapitulate the three types of cases generally encountered in the clinic.
The first method consists in making an abrasion of the epithelium with an ophthalmic burr. This involves the removal of the epithelial layer, the free nerve endings, and the subbasal plexus in a manner similar to the photorefractive keratectomy surgery performed in the clinic. The second method&#160;only targets the innervation by sectioning it at the periphery with a biopsy punch, maintaining the integrity of the epithelium. This method is similar to the first steps of lamellar keratoplasty and leads to a degeneration of the innervation followed by regrowth of the axons in the central cornea. The last method damages the innervation of a transgenic mouse model using a multiphoton microscope, which specifically localizes the site of cauterization of the fluorescent nerve fibers. This method inflicts the same damage as photokeratitis, an overexposure to UV light.
This study describes different options for investigating the physiopathology of corneal innervation, particularly the degeneration and regeneration of the axons. Promoting regeneration is crucial for avoiding such complications as epithelium defects or even perforation of the cornea. The proposed models can help test new pharmacological molecules or gene therapy that enhance nerve regeneration and limit disease progression.

Yazar Spotlight: Yenilikçi Modellerle Kornea İnnervasyonu Araştırmalarını Geliştirme 

Here, we propose three different methods of damaging the sensory fibres innervating the cornea. These methods facilitate the study of axon regeneration in mice. These three methods, which are adaptable to other animal models, are ideal for the study of corneal innervation physiology and regeneration.

Murin Korneasında Nörotrofik Keratit ve Sinir Rejenerasyonunu İndüklemek için Üç Strateji

The cornea is a transparent tissue that covers the eye and is crucial for clear vision. It is the most innervated tissue in the body. This innervation ...

Microdissection of the Rodent Eye

The ocular micro-dissection of the rodent eye involves the segmentation of the enucleated eyeball with the attached nictitating membrane, or third eyelid, to obtain the anterior and posterior eyecups. With this technique, the sub-parts of the eye, including the corneal tissue, neural tissue, retinal pigment epithelial (RPE) tissue, and lens, can be obtained for wholemounts, cryo-sectioning, and/or single-cell suspensions of a specific ocular tissue. The presence of the third eyelid presents unique and significant advantages, as it benefits the maintenance of the orientation of the eye, which is important for understanding eye physiology following any localized intervention or in studies involving ocular analysis relating to the eye&#39;s spatial topography.
In this method, we enucleated the eyeball at the socket along with the third eyelid by carefully and slowly cutting through the extraocular muscles and severing the optic nerve. The eyeball was pierced through the corneal limbus using a microblade.&#160;The incision was used as the point of entry, allowing for cutting along the corneal-scleral junction by inserting micro-scissors through the incision point. Small and continuous cuts along the circumference were made until the cups separated. These could be further dissected by gently peeling the translucent layer of the neural retina using Colibri suturing forceps to obtain the neural retina and RPE layers. Further, three/four equidistant cuts were made from the periphery perpendicularly to the optic center until the optic nerve was reached. This opened the hemispherical cups into a floret shape so that they fell flat and could be easily mounted. This technique has been used in our lab for corneal wholemounts and retinal sections. The presence of the third eyelid delineates the nasal-temporal orientation, which allows for the study of various cell therapy interventions post-transplantation and, thus, the targeted physiological validation vital for visualization and accurate representation in such studies.

This paper presents a protocol for ocular micro-dissection in rodents. The process involves the enucleation of the eyeball along with the nictitating membrane (i.e., the third eyelid). This is then followed by the separation of the posterior and anterior eye cups.

Kemirgen Gözün Mikrodiseksiyonu

The ocular micro-dissection of the rodent eye involves the segmentation of the enucleated eyeball with the attached nictitating membrane, or third eyelid, ...

A Çok Reproducible ve Kolay Yöntem gerçekleştir

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Uzaktan Yüksek throughput fenotipleme için Fare Göz Enükleasyon

Farelerde Video-oculography

Organotipik murin Retina Wholemount Kültür in vivo

Fare Birincil Görsel Kortekste Monoküler Görme Yoksunluğu ve Oküler Baskınlık Plastisite Ölçümü

Delici cisim kaynaklı Iris neovaskülarizasyon Rubeosis Iridis bir fare modeli olarak

Uyanık Farelerde Tekrarlanan In Vivo Görüntüleme için Kraniyal Pencerenin İmplantasyonu

Murin Korneasında Nörotrofik Keratit ve Sinir Rejenerasyonunu İndüklemek için Üç Strateji

Murin Korneasında Nörotrofik Keratit ve Sinir Rejenerasyonunu İndüklemek için Üç Strateji

Murin Korneasında Nörotrofik Keratit ve Sinir Rejenerasyonunu İndüklemek için Üç Strateji

Kemirgen Gözün Mikrodiseksiyonu