The authors would like to acknowledge the Netherlands Organization for Scientific Research (NWO, grant 17.106.329)

Hayvan deneyleri Leiden Üniversitesi Tıp Merkezi (LUMC) hayvan koruma kurulu tarafından onaylanmıştır. Hücreler, Aletleri ve Fareler 1. Hazırlık <ol><li> Operasyondan önce bir gün, orta hatta dördüncü meme ucundan NOD / SCID gama (NTG) fareler tıraş ve tüm fareler kabaca karşılaştırılabilir ağırlıklara sahip olduğunu doğrulamak için fareler tartmak. </li><li> İki cımbız ve iki düz sivrisinek forseps (Şekil 1A) bir makas otoklavlayın. </li><li> Işlem gününde, insan göğüs adenokarsinomu (MDA-MB-231), fosfat tamponlu tuzlu su (PBS) ile bir kez enjekte edilecek hücreler, pH değeri 7.4 yıkama ve Hücreleri tripsinize edin. Hücrelerin üzerine 10 mi, serum ihtiva eden DMEM ortamı eklenerek tripsin söndürüldü. Serumsuz PBS içinde ya da ortam içinde ya da yeniden süspansiyona alınmasıyla serumun ayrılması için oda sıcaklığında, 7 dakika için 1200 rpm&#39;de hücreleri santrifüjleyin. Tamamen serum izlerini kaldırmak için tekrar santrifüj. PBS hücrelerin tekrar ya daMedya. </li><li> Bir hemasitometre ile hücre sayımı ve hücre miktarını hesaplamak. Fazla 150 ul 500.000 hücre / fareyi kullanın. PBS veya medya İsteğe, matrigel hücreleri tekrar süspansiyon. NOT: kullanılan hücre türüne bağımlı olarak hücre miktarını belirlemek. </li><li> Steril bir mikrosantrifüj tüpleri hücreleri koyun ve buz üzerinde saklayın. </li><li> 35, PBS, pH 7.4 ml% 70 etanol ile bir 50 ml konik santrifüj tüpüne sahip bir 50 ml konik santrifüj tüpü doldurun. Her tüpe pamuk bezlerden bekletin. </li></ol> 2. Ortotopik Enjeksiyon <ol><li> Steril bir ortam sağlamak için steril bir kaput içinde ameliyat. / Kg vücut ağırlığı ila 100 mg, sırasıyla 10 mg / kg, arasında bir dozda Xylazin / Ketamin karışımı enjekte deri altından ile fare anestezisi. Bir ısıtma yastığı üzerinde fare Fix. Ayak tutam tepki eksikliği anestezi başarısını onaylayın. NOT: Bir cerrahi girişimler ile çok aşina değilse, cerrahi daha uzun sürebilir. Düzenlemekanestezi buna göre doz. </li><li> Kurumasını önlemek için gözleri, farelerin gözleri oftalmik merhem sürün. </li><li> Adım 1.6 hazırlanan etanol içine batırılmış pamuklu çubukla kullanarak traş alanı temizleyin. Planlanan kesi uzak dönen dairesel bir şekilde betadin ve alkol üç kez kullanarak scrubs Alternatif yapılmalıdır. Alternatif olarak, bir dezenfektan olarak iyonoforu kullanın. </li><li> Bir makas ile dördüncü meme başı ve orta hatta arasında küçük bir kesi yapmak ve PBS pH 7.4 ile nemlendirilmiş pamuklu çubukla takarak bir cep yapmak. </li><li> Meme yağ yastığı ortaya çıkarmak için bir cımbız kullanın. Beyaz renk ile yağ yastığı gözlemleyin. </li><li> Kendi tabanından diğer cımbız ile yağ yastığı sıkıştırın; Bu yaparak, tam kolayca enjeksiyonları gerçekleştirmek için yağ yastığı (Şekil 1B) maruz kalmaktadır. </li><li> Yukarı ve aşağı pipetleme hücre homojen bir karışım. Yavaşça bir insülin şırınga içine hücre süspansiyonu 50 ul aspire ve içine enjekteyatay iğne tutarak meme yağ yastığı. Yağ yastığı şişme kontrol ederek başarılı bir enjeksiyon onaylayın. </li><li> Yavaşça yağ yastığı bırakın. </li><li> Bir iğne sürücüsünü kullanarak kesi sütür. Üç saat yönünde, saat yönünün tersine ve saat yönünde iğne sürücü etrafında dikiş çevirerek atar olun. Dikiş başına iki düğüm kullanılmalıdır. NOT: knot aksi fareler sütür açabilirsiniz sıkı olduğundan emin olun. </li><li> Ameliyattan sonra, ağrıyı dindirmek amacıyla 0.05-0.1 mg / kg vücut ağırlığı, deri altından böyle Temgesic gibi, bir analjezik enjekte. </li><li> Onlar bilinci kazanmak ve sternum recumbence korumak kadar sahipsiz hayvanlar bırakmayın. Onlar tamamen iyileşti kadar farklı kafeslere içine tüm hayvanları yerleştirin. </li><li> , Sterilite korumak Otoklavlanmış kafesleri ve su kullanın. Temiz bir atmosfer tutmak için her üç günde kafesleri değiştirin. </li></ol> Analiz için 3. Hasat Organları <ol><li> AtHasat gün, 8 hafta hücrelerinin implante edilmesinden sonra, her bir fare için 3 mi Bouin çözeltisi ile 15 ml konik santrifüj tüpleri doldurun. Buna ek olarak, fare başına 5 ml formalin çözeltisi ile doldurulmuş iki adet 15 ml tüpler kullanmaktadır. </li><li> 10 mg&#39;lık bir dozda, Xylazin /, ketamin enjekte edilerek hayvanlar anestezi / 100 mg / kg vücut ağırlığı deri altına kg. Hayvan ayak tutam çekilme refleksi kaybeder kadar bekleyin. </li><li> Bir baz iğne ile hayvan Fix. Makasla uzun, dikey orta hat kesi olun. Sağ ön bacak altında ve arka bacak üzerinde iki yatay kesiler yapmak. Tabanına cilt iğneleyerek tümörü Açığa. Bir kumpas kullanarak tümör hacmini ölçün. </li><li> Makas kullanılarak cilt tümörü ayırmak. Ek Bileşen RNA izolasyonu için sıvı azot içinde bir tümör parçası dondurma. Parafine aşağıdaki immunohistokimyasal gerçekleştirmek için formalin ile dolu konik santrifüj tüpüne, diğer kısmı koyun. </li><li> Yavaşça akciğerleri çıkar. YerleştirinBouin solüsyonu içine akciğer bıraktı. 3 gün boyunca çözelti içinde akciğer tutun. Çıplak gözle açıkça yüzeysel metastatik odaklar gözlemleyin. İsteğe bağlı olarak, hematoksilen ve eozin (H &amp; E) boyama kullanarak Mikrometastaz doğrulamak için formalin içine doğru akciğer yerleştirin. NOT: Akciğer metastazı meme kanseri sık görülen rağmen, bir de metastaz analiz etmek kemik, karaciğer, beyin ve dalak toplamak isteyebilirsiniz. metastatik alanda hücreler yoğun ve morfolojik olarak farklı olan ve bu nedenle, akciğer dokusundan kolayca ayırt edilebilir. </li><li> Bir gün hasattan sonra, 15 ml tüpler gelen formalin solüsyonu aspire ve% 70 etanol ile değiştirin. Parafin dokuları embed ve immunohistokimyasal çalışmalar yapmak. </li><li> Kan analizi için, makasla göğüs boşluğuna açılır. Kalp delinerek 450 ul kan çekiniz. % 3.2 sodyum sitrat 50 ul ihtiva eden bir mikrosantrifüj tüpü içinde kan örneği yerleştirin. Kan toplandıktan sonra, 10 mi 2,000 xg&#39;de uydurmayın. Bir sonraki kullanıma kadar -20 ° C &#39;de plazma numuneleri saklayın. NOT: Orada yaygın uygulamada 20 kullanılan birçok diğer kan toplama teknikleri ve kullanılması gereken tekniği deney düzeneği ve bilim seçimine bağlıdır. Kan örneği gerekli değilse, hayvan protokolü veya kurum kurallarına göre göre hayvan euthanize. </li></ol>

<ol>
	<li>Aaronson, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+factors+and+cancer.">Growth factors and cancer.</a> Science. 254 (5035), 1146-1153 (1991).</li><li>Bao, L., Matsumura, Y., Baban, D., Sun, Y., Tarin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+inoculation+site+and+Matrigel+on+growth+and+metastasis+of+human+breast+cancer+cells.">Effects of inoculation site and Matrigel on growth and metastasis of human breast cancer cells.</a> Br. J. Cancer. 70 (2), 228-232 (1994).</li><li>Brouxhon, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+antibody+against+the+ectodomain+of+E-cadherin+(DECMA-1)+suppresses+breast+carcinogenesis:+involvement+of+the+HER/PI3K/Akt/mTOR+and+IAP+pathways.">Monoclonal antibody against the ectodomain of E-cadherin (DECMA-1) suppresses breast carcinogenesis: involvement of the HER/PI3K/Akt/mTOR and IAP pathways.</a> Clin. Cancer Res. 19 (12), 3234-3246 (2013).</li><li>Dobie, K. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variegated+transgene+expression+in+mouse+mammary+gland+is+determined+by+the+transgene+integration+locus.">Variegated transgene expression in mouse mammary gland is determined by the transgene integration locus.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 93 (13), 6659-6664 (1996).</li><li>Ewens, A., Mihich, E., Ehrke, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distant+metastasis+from+subcutaneously+grown+E0771+medullary+breast+adenocarcinoma.">Distant metastasis from subcutaneously grown E0771 medullary breast adenocarcinoma.</a> Anticancer Res. 25 (6B), 3905-3915 (2005).</li><li>Fidler, I. J., Naito, S., Pathak, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+implantation+is+essential+for+the+selection,+growth+and+metastasis+of+human+renal+cell+cancer+in+nude+mice+[corrected.">Orthotopic implantation is essential for the selection, growth and metastasis of human renal cell cancer in nude mice [corrected.</a> Cancer Metastasis Rev. 9 (2), 149-165 (1990).</li><li>Fridman, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+tumor+growth+of+both+primary+and+established+human+and+murine+tumor+cells+in+athymic+mice+after+coinjection+with+Matrigel.">Enhanced tumor growth of both primary and established human and murine tumor cells in athymic mice after coinjection with Matrigel.</a> J. Natl. Cancer Inst. 83 (11), 769-774 (1991).</li><li>Fynan, T. M., Reiss, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resistance+to+inhibition+of+cell+growth+by+transforming+growth+factor-beta+and+its+role+in+oncogenesis.">Resistance to inhibition of cell growth by transforming growth factor-beta and its role in oncogenesis.</a> Crit Rev. Oncog. 4 (5), 493-540 (1993).</li><li>Huang, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trypsin-induced+proteome+alteration+during+cell+subculture+in+mammalian+cells.">Trypsin-induced proteome alteration during cell subculture in mammalian cells.</a> J. Biomed. Sci. 17, 36 (2010).</li><li>Iorns, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+mouse+model+for+the+study+of+human+breast+cancer+metastasis.">A new mouse model for the study of human breast cancer metastasis.</a> PLoS. One. 7 (10), e47995 (2012).</li><li>Jessani, N., Niessen, S., Mueller, B. M., Cravatt, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breast+cancer+cell+lines+grown+in+vivo:+what+goes+in+isn't+always+the+same+as+what+comes+out.">Breast cancer cell lines grown in vivo: what goes in isn't always the same as what comes out.</a> Cell Cycle. 4 (2), 253-255 (2005).</li><li>Kalluri, R., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+basics+of+epithelial-mesenchymal+transition.">The basics of epithelial-mesenchymal transition.</a> J. Clin. Invest. 119 (6), 1420-1428 (2009).</li><li>Kocaturk, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternatively+spliced+tissue+factor+promotes+breast+cancer+growth+in+a+beta1+integrin-dependent+manner.">Alternatively spliced tissue factor promotes breast cancer growth in a beta1 integrin-dependent manner.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 110, 11517-11522 (2013).</li><li>Lowe, S. W., Lin, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptosis+in+cancer.">Apoptosis in cancer.</a> Carcinogenesis. 21 (3), 485-495 (2000).</li><li>Meek, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+p53+response+to+DNA+damage.">The p53 response to DNA damage.</a> DNA Repair (Amst). 3 (8-9), 1049-1056 (2004).</li><li>Meek, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+suppression+by+p53:+a+role+for+the+DNA+damage+response).">Tumor suppression by p53: a role for the DNA damage response).</a> Nat. Rev. Cancer. 9 (10), 714-723 (2009).</li><li>Miller, F. R., Medina, D., Heppner, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preferential+growth+of+mammary+tumors+in+intact+mammary+fatpads.">Preferential growth of mammary tumors in intact mammary fatpads.</a> Cancer Res. 41 (10), 3863-3867 (1981).</li><li>Mueller, B. M., Ruf, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Requirement+for+binding+of+catalytically+active+factor+VIIa+in+tissue+factor-dependent+experimental+metastasis.">Requirement for binding of catalytically active factor VIIa in tissue factor-dependent experimental metastasis.</a> J. Clin. Invest. 101 (7), 1372-1378 (1998).</li><li>Paoli, P., Giannoni, E., Chiarugi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anoikis+molecular+pathways+and+its+role+in+cancer+progression.">Anoikis molecular pathways and its role in cancer progression.</a> Biochim. Biophys. Acta. 1833 (12), 3481-3498 (2013).</li><li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals.">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> J. Pharmacol. Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).</li><li>Shay, J. W., Zou, Y., Hiyama, E., Qright, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Telomerase+and+cancer.">Telomerase and cancer.</a> Hum. Mol. Genet.. 10 (7), 677-685 (2001).</li><li>Sporn, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+war+on+cancer.">The war on cancer.</a> Lancet. 347 (9012), 1377-1381 (1996).</li><li>Tao, K., Fang, M., Alroy, J., Sahagian, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imagable+4T1+model+for+the+study+of+late+stage+breast+cancer.">Imagable 4T1 model for the study of late stage breast cancer.</a> BMC. Cancer. 8, 228 (2008).</li><li>Versteeg, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protease-activated+receptor+(PAR)+2,+but+not+PAR1,+signaling+promotes+the+development+of+mammary+adenocarcinoma+in+polyoma+middle+T+mice.">Protease-activated receptor (PAR) 2, but not PAR1, signaling promotes the development of mammary adenocarcinoma in polyoma middle T mice.</a> Cancer Res. 68 (17), 7219-7227 (2008).</li><li>Versteeg, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+tissue+factor+signaling+suppresses+tumor+growth.">Inhibition of tissue factor signaling suppresses tumor growth.</a> Blood. 111 (1), 190-199 (2008).</li><li>Wagner, K. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+breast+cancer:+quo+vadis,+animal+modeling?.">Models of breast cancer: quo vadis, animal modeling?.</a> Breast Cancer Res. 6 (1), 31-38 (2004).</li><li>Weigelt, B., Peterse, J. L., van't Veer, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breast+cancer+metastasis:+markers+and+models.">Breast cancer metastasis: markers and models.</a> Nat. Rev. Cancer. 5 (8), 591-602 (2005).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

Meme kanseri hücrelerinin Ortotopik enjeksiyon kanser büyüme tüm yönleriyle incelemek için güçlü bir modeldir. Farelerin meme yağ tabanına bu hücrelerin implantasyonu dikkatli bir şekilde tümör büyümesi değişimi önlemek için gerçekleştirilmelidir. En önemlisi, her bir fare için hücreler ile aynı miktarda enjekte önemlidir. Bunu yapmak için, bir titizlikle hücrelerin canlılığını etkileyen hücrelere trypsinize gerekir. Cansız hücreler canlı hücre sayısının belirlenmesi için yara...

Kanser yüzyıllar boyunca için çalışmalara konu olmuştur çok karmaşık bir hastalıktır. Meme kanseri en sık görülen kanser türüdür; kadınlarda görülür, ancak düzensiz de erkeklerde 27 oluşabilir. hastalığın başlıca olarak vücuttaki hücrelerin sonsuz büyümesine yol açar kontrol mekanizması yönetim hücre bölünmesi kaybına neden olur. Bu arızalar çeşitli mekanizmalarla neden olabilir: Birincisi, sağlıklı hücreler kanser hücrelerinin kendi büyüme faktörlerini yapmak ve böylece daha yüksek bir çoğalma hızı 1 elde büyüme faktörü reseptörlerinin ifadesini artırmak ise çoğalmaya için çevredeki hücrelerden büyüme sinyalleri gerekir; ikinci olarak, kanser hücreleri, anti-proliferatif sinyaller 8 daha az duyarlı olan; üçüncü olarak, aynı zamanda gerekli olan vücut hücre ölümü, hücre sayısını dengelemeye; Bununla birlikte, kanser hücreleri, programlanmış hücre ölümü kaçmak apoptoz 14 olarak adlandırılan; Dördüncü, hücreler, hücre dışı matrislerin bağlısırayla hayatta ama tümör hücreleri bağlanma ihtiyacı olmadan büyüme ve anoikis 19 direnç gösterebilir; Beşinci, telomeraz aktivasyonu telomer kısalması circumvents ve replikatif yaşlılıkla 21 önler; son ama en az değil, değişmiş genetik içeriği 15,16 mitoz sonuçları takiben DNA kalite kontrol atlama. Bu deregüle çoğalmasında bir rol oynar onkojenlerinin veya tümör bastırıcıları tespit etmek amacıyla, farelerde tümör büyümesi deneyler çok önemlidir. Primer tümör büyümesi genellikle ana ölüm nedeni değildir. Bir ikincil site birincil siteden kanser hücrelerinin göçü, metastaz denir, çoğu kanser hastalarında 22 önde gelen ölüm nedenidir. Metastaz ikincil site bağışıklık saldırı, ekstravazasyon ve büyümeyi kaçınarak, dolaşımı yoluyla seyahat, tümör hücresi istilasını, intravasation gerektirir. Mezenkimal geçiş (EMT) epitel önemli bir süreç olduğunumetastaz ve metastaz hücresinin 12 için ön koşul olan yüksek motilite ve invaziv hücreleri, verimli gen ifadesi profilleri bir anahtar içerir. Kanserli süreci kanser hücreleri, stromal hücreler ve pro- ve anti-enflamatuar hücreler arasında karşılıklı etkileşimler de dahil olmak üzere çeşitli işlemlerden oluşan bir kombinasyonun elde edilen gibi, kanser için bir in vitro yaklaşım, genellikle, kanserli süreci içine tam fikir vermez. Benzer şekilde, tümör damar sistemini etkileyen anti-kanser tedavileri, genellikle bu şekilde in vivo kullanımı yaklaşımları kaçınılmazdır, in vitro incelenmiştir edilemez. Meme kanseri ilerlemesini incelemek için, farklı deneysel yöntemler geliştirilmiştir. En yaygın olarak kullanılan model, farelerde 5 içine, göğüs kanseri hücrelerinin deri altına enjeksiyondur. Bu deney düzeneğinde, araştırmacı, in vitro olarak bir seçim hücre hattına değişiklikler geniş bir katabilmektedir (örnuyarılması, proteinlerin aşağı doğru düzenleme) ile deri altına hücreleri enjekte edilir. Bu yöntem basittir ve enjeksiyon işlemi fareler üzerinde ameliyat gerek kalmadan basit olmasına rağmen, tümör enjekte edildiği de site meme kanseri gelişimi ile sonuçlanabilir yerel meme tümörü çevre ve bu ortamda olmadığını temsil etmez insan patolojisinde gözlenenden farklıdır. İkincisi, genetiği fareler meme kanseri ilerlemesini incelemek için bir in vivo aracı olarak sıkça kullanılır. Bu modelde, Oncogene (yani PyMT, Neu) sentezleme spontan meme tümör s oluşumuna yol açan, bir göğüs doku spesifik promotör ile tahrik edilir. Bu deneysel kurulum süresi 3 tümör boyutu kontrol ederken uyuşturucu veya antikorlar enjekte ederek hastalığın tedavi yönünü incelemek için yararlıdır. Ancak, eksik veya ayrıca ins verebilir ilgi bir gen mutasyona diğer fare suşları ile bu farelerin üremememe tümör büyümesi 24 farklı proteinlerin rolünü içine ights. Bu modelin olumsuz tümör boyutu ve sayısının varyasyon eğilimli olmasıdır. Ayrıca, transgen ekspresyonu seviyesi, genomu içinde entegre yeri değişir ve başka bir 4 bir fare suşundan değiştirebilir. Insan hastalıklarında, hücrelerinin sadece bir alt popülasyonu onkojenini ifade eden tümör baskılayıcı seviyeleri 26 üretimini azalttığı ise, bu modelde, transgenin ifadesi epitelyal kökenli tüm hücreler tarafından elde edilebilir. Metastazı araştırmak için göğüs kanseri hücreleri de damar içine enjekte edilebilir 25 (model deneysel metastaz olarak da adlandırılır). Ancak, bu yaklaşım sadece kısmen metastatik süreci özetlediği; Bu tümör hücreleri istila eder ve intravasate için gereksinimi önlediği, ve tümör hücreleri hali hazırda dolaşımda mevcut olduğu noktadan başlar. Bizim çalışmamızda, biz ortotopik Inject kullanıniyon modeli meme kanseri ilerlemesinde 13 ilgi genleri çalışma. İnsan meme kanseri hücrelerinde protein aşırı ifade eden ve NOD / SCID y (NTG) farelerin meme yağ pedi içine enjekte edilir. Enjekte hücre hattında çok hızlı ve farklı genetik değişiklikler, bu patolojik ilgili sitelere de metastaz birincil tümör büyümesi meme kanseri ilerlemesinde tüm süreci kapsayan izin verir, ve aynı zamanda iyi bir deneysel model sunar: Bu yöntem birçok yönden avantajlıdır Hastalığın erken ya da geç aşamalarında terapötik tedavilerin etkisini incelemek için. Ayrıca, bu model birini kullanarak genetiği değiştirilmiş fareler veya hücreleri kullanılarak hastalığın ilerlemesinde kanser hücresi kaynaklı proteinlerin karşı stromal rolünü araştırmak. Deri altı enjeksiyonlar, uygulaması daha kolay olmakla birlikte, ortotopik modeller daha tümörijenik daha metastatik kanser hücre popülasyonuna neden olmaktadır. Böylece sonuçlar, deri altına enjeksiyon vasıtasıyla eldes yalancı negatif ya da tümör büyümesini incelemek için ortotopik modellerin kullanımını teşvik 6,17 yalancı pozitif ya olabilir.

<table><tbody><tr><td>Bouin&#039;s solution</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT10132</td><td>Used for investigating the metastasis on lungs</td></tr><tr><td>Formalin solution</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT501128</td><td>Used to fix the tissues</td></tr><tr><td>Matrigel, growth factor reduced</td><td>Corning</td><td>356230</td><td>Cells can be resuspended in matrigel for injection</td></tr><tr><td>Mosquito forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>13008-12</td><td>Used for stiching</td></tr><tr><td>Angled forceps</td><td>Electron microscopy sciences</td><td>72991-4c</td><td>These make the exposure of mammary fat pad easier</td></tr><tr><td>Scissors</td><td>B Braun Medicals</td><td>BC056R</td><td>Used to cut open the mice</td></tr><tr><td>Straight forceps</td><td>B Braun Medicals</td><td>BD025R</td><td>This is used to open up the skin to expose mammary fat pad</td></tr><tr><td>NOD scid gamma mice</td><td>Charles River</td><td>005557</td><td>Experimental animal used for experiment</td></tr><tr><td>MDA-MB-231</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>92020424</td><td>Experimental cells used for injections</td></tr><tr><td>Oculentum simplex</td><td>Teva Pharmachemie</td><td></td><td>Opthalmic ointment used to prevent drying out of eyes</td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Fischer Scientific</td><td>19-898-859</td><td>Ionophore, used to disinfect the surgical area</td></tr><tr><td>Xylazin/Ketamine</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X1251, K2753</td><td>Use injected anesthesia as 10mg/kg and 100mg/kg body weight respectively</td></tr><tr><td>Temgesic</td><td>Schering-Plough</td><td></td><td>Use the painkiller as 0.05-0.1 mg/kg body weight</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Life sciences</td><td>11995</td><td>For trypsin neutralization,use media with serum(FBS:media 1:10 volume); for injection, use media with no serum</td></tr><tr><td>Buffered sodium citrate</td><td>Aniara</td><td>A12-8480-10</td><td>Use the volume ratio as citrate:blood; 1:9</td></tr></tbody></table>

orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth.

<html> Meme kanseri büyüme modelini bir bolluk kullanılarak farelerde incelenebilir. Meme kanseri hücrelerinin genetik manipülasyon yeni tümör bastırıcılarının keşfetmek için onkojenik ilerlemesi veya yardım katılan proteinlerin fonksiyonları içgörüler sağlayabilir. Buna ek olarak, farklı genotipleri olan farelere kanser hücreleri enjekte stromal bölmesinde öneminin daha iyi anlaşılmasını sağlayabilir. Birçok model hastalığın ilerlemesi bazı yönlerini araştırmak için yararlı olabilir ama tüm kanser sürecini özetlemek yok. Buna karşılık, meme kanseri hücrelerinin daha iyi farelerin meme yağ tabanına kadar engraftmınt hastalığı ve uygun stromal bölmesinde varlığı ve bu nedenle daha iyi taklit eden, insan kanser hastalığı yerini tartışıldı. Bu makalede, biz orthotopically farelere meme kanseri hücrelerini implante ve analiz etmek dokuları toplamak için nasıl açıklamak için nasıl açıklamak: 14px; line-height:. 28px; &quot;&gt; tümör çevre ve uzak organlara metastaz bu modeli kullanarak, birçok kanser yönleri (büyüme, anjiyogenez ve metastaz) tümör hücrelerinin büyümesi için uygun bir ortam sağlayarak basit incelenebilir.

&quot;Ortotopik meme kanseri modeli&quot; başarılı bir şekilde uygulanması, memenin yağlı pedine hücrelerin uygun enjeksiyon dayanmaktadır. Bu tür hücreler ya da sızıntı kesin aşılama gibi deneysel hatalar tümör boyutu veya kontrol tamponu (Şekil 2A) ile enjekte edilmiş bir meme yağ tabanına benzeyen bir yapının oluşumuna yol açar, bir tümörün da yokluğunda varyasyonlara neden olabilir. Tümör büyüme oranı enjekte edilen hücre çizgisinin doğasına bağlı olduğu, ve...

Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth. at JoVE.com

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

Kanser tümörü çevreleyen dokunun hem de yerel pro- ve anti-inflamatuar aracılar tarafından etkilenir kompleks bir hastalıktır. Bu nedenle, daha çok deri altı modellere göre ortotrop enjeksiyon modelleri, bir şekilde daha iyi taklit eden insan patoloji kanser ilerlemesinin incelemek için yararlı olabilir.

Farelerin Meme Fat Pad içine Meme Kanseri Hücreleri Ortotopik Enjeksiyon Tümör Büyüme Eğitim için.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

orthotopic-injection-breast-cancer-cells-into-mammary-fat-pad-mice-to

Research

JoVE Journal

Medicine

78.8K Görüntüleme.  Leiden University Medical Center.  Kanser tümörü çevreleyen dokunun hem de yerel pro- ve anti-inflamatuar aracılar tarafından etkilenir kompleks bir hastalıktır. Bu nedenle, daha çok deri altı modellere göre ortotrop enjeksiyon modelleri, bir şekilde daha iyi taklit eden insan patoloji kanser ilerlemesinin incelemek için yararlı olabilir. 

Video: Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, xenografts, genetic manipulation, chemical reagents induction, etc.) have various pathological characters and play important roles in investigating certain aspects of diseases. Although no single model can totally mimic the whole human disease progression, orthotopic organs disease models with a proper stromal environment play an irreplaceable role in understanding diseases and screening for potential drugs. In this article, we describe how to implant breast cancer cells into the mammary fat pad in a simple, less invasive, and easy-to-handle way, and follow the metastasis to distant organs. With the proper features of primary tumor growth, breast and nipple pathological changes, and a high occurrence of other organs&#39; metastasis, this model maximumly mimics human breast cancer progression. Primary tumor growth in situ, long-distant metastasis, and the tumor microenvironment of breast cancer can be investigated by using this model.

Here, we present a protocol to implant breast cancer cells into the mammary fat pad in a simple, less invasive, and easy-to-handle way, and this mouse orthotopic breast cancer model with a proper mammary fat pad environment can be used to investigate various aspects of cancer.

Fareler meme yağ yastığı içine meme kanser hücrelerinin Orthotopic enjeksiyon

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, ...

Kanser Araştırmaları

Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland

Breast cancer is a heterogeneous disease, possibly due to complex interactions between different cells of origins and oncogenic events. Mouse models are instrumental in gaining insights into these complex processes. Although many mouse models have been developed to study contributions of various oncogenic events and cells of origin to breast tumorigenesis, these models are often not cell-type or organ specific or cannot induce the initiation of mammary tumorigenesis in a temporally controlled manner. Here we describe a protocol to generate a new type of breast cancer mouse models based on the intraductal injection of Cre-expressing adenovirus (Ad-Cre) into mouse mammary glands (MGs). Due to the direct injection of Ad-Cre into mammary ducts, this approach is MG specific, without any unwanted cancer induction in other organs. The intraductal injection procedure can be performed in mice at different stages of their MG development (thus, it permits temporal control of cancer induction, starting from ~3-4 weeks of age). The cell-type specificity can be achieved by using different cell-type-specific promoters to drive Cre expression in the adenoviral vector. We show that luminal and basal mammary epithelial cells (MECs) can be tightly targeted for Cre/loxP-based genetic manipulation via an intraductal injection of Ad-Cre under the control of the Keratin 8 or Keratin 5 promoter, respectively. By incorporating a conditional Cre reporter (e.g., Cre/loxP-inducible Rosa26-YFP reporter), we show that MECs targeted by Ad-Cre, and tumor cells derived from them, can be traced by following the reporter-positive cells after intraductal injection.

The goal of this protocol is to describe a new breast cancer modeling approach based on the intraductal injection of Cre-expressing adenovirus into mouse mammary glands. This approach allows both cell-type- and organ-specific manipulation of oncogenic events in a temporally controlled manner.

CRE-ifade Adenovirus fare mammary bezi içine bir Intraductal enjeksiyon yoluyla meme kanseri modelleme

Breast cancer is a heterogeneous disease, possibly due to complex interactions between different cells of origins and oncogenic events. Mouse models are ...

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less aggressive breast tumors, the 5-year survival rate of TNBC patients is 77% due to their characteristic drug-resistant phenotype and metastatic burden. Toward this end, murine models have been established aimed at identifying novel therapeutic strategies limiting TNBC tumor growth and metastatic spread. This work describes a practical guide for the TNBC orthotopic model where MDA-MB-231 breast cancer cells suspended in a basement membrane matrix are implanted in the fourth mammary fat pad, which closely mimics the cancer cell behavior in humans. Measurement of tumors by caliper, lung metastasis assessment via in vivo and ex vivo imaging, and molecular detection are discussed. This model provides an excellent platform to study therapeutic efficacy and is especially suitable for the study of the interaction between the primary tumor and distal metastatic sites.

This work presets an advanced protocol to accurately assess tumor loading by detection of green fluorescent protein and bioluminescence signals as well as the integration of quantitative molecular detection technique.

Ortotopik Meme Kanseri Modeli Kullanarak Üçlü Negatif Meme Kanseri Eğitimi

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less ...

Orthotopic Transplantation of Breast Tumors as Preclinical Models for Breast Cancer

Preclinical models that faithfully recapitulate tumor heterogeneity and therapeutic response are critical for translational breast cancer research. Immortalized cell lines are easy to grow and genetically modify to study molecular mechanisms, yet the selective pressure from cell culture often leads to genetic and epigenetic alterations over time. Patient-derived xenograft (PDX) models faithfully recapitulate the heterogeneity and drug response of human breast tumors. PDX models exhibit a relatively short latency after orthotopic transplantation that facilitates the investigation of breast tumor biology and drug response. The transplantable genetically engineered mouse models allow the study of breast tumor immunity. The current protocol describes the method to orthotopically transplant breast tumor fragments into the mammary fat pad followed by drug treatments. These preclinical models provide valuable approaches to investigate breast tumor biology, drug response, biomarker discovery and mechanisms of drug resistance.

Patient-derived xenograft (PDX) models and transplantable genetically engineered mouse models faithfully recapitulate human disease and are preferred models for basic and translational breast cancer research. Here, a method is described to orthotopically transplant breast tumor fragments into the mammary fat pad to study tumor biology and evaluate drug response.

Meme Kanseri için Preklinik Modeller Olarak Meme Tümörlerinin Ortopedik Transplantasyonu

Preclinical models that faithfully recapitulate tumor heterogeneity and therapeutic response are critical for translational breast cancer research. ...

Ultrasound Imaging-guided Intracardiac Injection to Develop a Mouse Model of Breast Cancer Brain Metastases Followed by Longitudinal MRI

Breast cancer brain metastasis, occurring in 30% of breast cancer patients at stage IV, is associated with high mortality. The median survival is only 6 months. It is critical to have suitable animal models to mimic the hemodynamic spread of the metastatic cells in the clinical scenario. Here, we are introducing the use of small animal ultrasound imaging to guide an accurate injection of brain tropical breast cancer cells into the left ventricle of athymic nude mice. Longitudinal MRI is used to assessing intracranial initiation and growth of brain metastases. Ultrasound-guided intracardiac injection ensures not only an accurate injection and hereby a higher successful rate but also significantly decreased mortality rate, as compared to our previous manual procedure. In vivo high resolution MRI allows the visualization of hyperintense multifocal lesions, as small as 310 &#181;m in diameter on T2-weighted images at 3 weeks post injection. Follow-up MRI reveals intracranial tumor growth and increased number of metastases that distribute throughout the whole brain.

A breast cancer brain metastasis mouse model is established with ultrasound imaging-guided intracardiac injection of MDA-MB231/Br-GFP cells. Development of multifocal intracranial metastases has been monitored longitudinally using high-resolution 9.4 T MRI.

Boyuna MRG Ardından Meme Kanseri Beyin Metastaz bir Fare Modeli geliştirmek için ultrason görüntüleme eşliğinde intrakardiyak enjeksiyon

Breast cancer brain metastasis, occurring in 30% of breast cancer patients at stage IV, is associated with high mortality. The median survival is only 6 ...

Tıp

In Vivo Imaging to Measure Spontaneous Lung Metastasis of Orthotopically-injected Breast Tumor Cells

Metastasis remains the primary cause of cancer-related death. The succession of events that characterize the metastatic cascade presents multiple opportunities for therapeutic intervention, and the ability to accurately model them in mice is critical to evaluate their effects. Here, a step-by-step protocol is presented for the establishment of orthotopic primary breast tumors and the subsequent monitoring of the establishment and growth of metastatic lesions in the lung using in vivo bioluminescence imaging. This methodology allows for the evaluation of treatment or its biological effects along the entire range of metastatic development, from primary tumor escape to outgrowth in the lungs. Breast orthotopic tumors are generated in mice via injection of a luciferase-labeled cell suspension in the 4th mammary gland. Tumors are allowed to grow and disseminate for a specific amount of time and are then surgically resected. Upon resection, spontaneous lung metastasis is detected, and the growth over time is monitored using in vivo bioluminescence imaging. At the desired experimental endpoint, lung tissue can be collected for downstream analysis. The treatment of established, clinically evident metastasis is critical to improve outcomes for stage IV cancer patients, and it can be evaluated through tail vein models of experimental lung metastasis. However, metastatic dissemination occurs early in breast cancer, and many patients have latent, subclinical disseminated disease after surgery. Utilization of spontaneous models such as this one provides the opportunity to study the whole spectrum of the disease, especially the systemic effects driven by treatment of the primary tumor such as pre-metastatic niche priming, and evaluate treatments on dormant and subclinical disease after surgery.

<meta charset="utf8"></head><body>Ortotopik Olarak Enjekte Edilen Meme Tümörü Hücrelerinin Spontan Akciğer Metastazını Ölçmek için İn Vivo Görüntüleme

The manuscript describes a methodology for the establishment as well as longitudinal growth monitoring of spontaneous lung metastasis from orthotopically-injected breast tumors, amenable to intervention at all stages of the metastatic cascade.

In vivo (İn canlı) Ortotopik Olarak Enjekte Edilen Meme Tümörü Hücrelerinin Spontan Akciğer Metastazını Ölçmek için Görüntüleme

Metastasis remains the primary cause of cancer-related death. The succession of events that characterize the metastatic cascade presents multiple ...

<meta charset="utf8"></head><body>Meme kanseri hasta kaynaklı ksenogreftlerin yüksek verimli dissosiyasyonu ve ortotopik implantasyonu

High-Throughput Dissociation and Orthotopic Implantation of Breast Cancer Patient-Derived Xenografts

Patient-derived xenografts (PDXs) provide a clinically relevant method for recapitulating tumor-involved cell types and the tumor microenvironment, which is essential for advancing knowledge of breast cancer (BC). Additionally, PDX models enable the study of BC systemic effects, which is not possible using in vitro models. Traditional methods for implanting BC xenografts typically involve anesthesia and sterile surgical procedures, which are time-consuming, invasive, and limit the scalability of PDX models in BC research. This protocol describes a simple and scalable method for the orthotopic implantation of BC PDXs in mice. The immunodeficient mouse strain NOD.Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) was used for PDX engraftment. Human BC samples obtained from IRB-consented patients were mechanically and enzymatically dissociated, then resuspended in a solution of basement membrane extract (BME) and RPMI 1640. Animals were restrained by scruffing, and depilatory cream was applied to remove hair from the fat pads at the fourth inguinal nipple, followed by injection. Approximately 2 million cells in a 100 &#181;L suspension were bilaterally injected orthotopically into the mammary fat pads using a 26 G needle. Notably, no anesthetic was required, and the total procedure time was under 5 min, from cell preparation to injection. After a growth period of several months, tumors were excised and processed for authentication. Validation included receptor status assessment using immunohistochemistry with specific antibodies for traditional BC receptors (i.e., ER, PR, HER2). Tumor morphology was confirmed with hematoxylin and eosin (H&amp;E) staining, which was interpreted by a pathologist. Genetic similarity to the patient sample was verified through bulk RNA sequencing and short tandem repeat (STR) analysis. This approach to PDX engraftment and validation supports the rigorous development of models and high-throughput tumor implantation, enabling well-powered studies across various BC subtypes.

This protocol describes an efficient, non-surgical method for the orthotopic implantation of breast cancer patient-derived xenografts in mice. The technique involves enzymatic tumor dissociation followed by direct injection into the mammary fat pads, enabling high-throughput implantation. Comprehensive validation ensures model fidelity, facilitating rigorous studies across various breast cancer subtypes.

Meme kanseri hasta kaynaklı ksenogreftlerin yüksek verimli dissosiyasyonu ve ortotopik implantasyonu

Patient-derived xenografts (PDXs) provide a clinically relevant method for recapitulating tumor-involved cell types and the tumor microenvironment, which ...

Farelerin Meme Fat Pad içine Meme Kanseri Hücreleri Ortotopik Enjeksiyon Tümör Büyüme Eğitim için.

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Fareler meme yağ yastığı içine meme kanser hücrelerinin Orthotopic enjeksiyon

CRE-ifade Adenovirus fare mammary bezi içine bir Intraductal enjeksiyon yoluyla meme kanseri modelleme

Ortotopik Meme Kanseri Modeli Kullanarak Üçlü Negatif Meme Kanseri Eğitimi

Meme Kanseri için Preklinik Modeller Olarak Meme Tümörlerinin Ortopedik Transplantasyonu

Boyuna MRG Ardından Meme Kanseri Beyin Metastaz bir Fare Modeli geliştirmek için ultrason görüntüleme eşliğinde intrakardiyak enjeksiyon

In vivo (İn canlı) Ortotopik Olarak Enjekte Edilen Meme Tümörü Hücrelerinin Spontan Akciğer Metastazını Ölçmek için Görüntüleme

In vivo (İn canlı) Ortotopik Olarak Enjekte Edilen Meme Tümörü Hücrelerinin Spontan Akciğer Metastazını Ölçmek için Görüntüleme

Meme kanseri hasta kaynaklı ksenogreftlerin yüksek verimli dissosiyasyonu ve ortotopik implantasyonu

Meme kanseri hasta kaynaklı ksenogreftlerin yüksek verimli dissosiyasyonu ve ortotopik implantasyonu

Meme kanseri hasta kaynaklı ksenogreftlerin yüksek verimli dissosiyasyonu ve ortotopik implantasyonu