Bu çalışma Tıbbi Araştırma Konseyi araştırma hibeleri G0400268 ve MR / K018396 / 1 tarafından desteklenen ve Eylem Medical Research tarafından yapıldı. Daha fazla destek Sağlığı Araştırma University College London Hastaneleri Biyomedikal Araştırma Merkezi için Ulusal Enstitüsü tarafından sağlandı.

Bu çalışmada gerçekleştirilen tüm hayvan deneyleri, ulusal ve Avrupa mevzuatına uyduğu ve Eczacılık UCL Okulu Etik Komitesi ve İngiltere Home Office (HO) tarafından onaylanmıştır. HO projesi kapsamında yürütüldüğü bütün hayvan çalışmaları PPL 80/2243 ve PPL 70/7773 lisanslar. 1. Fare Hazırlama <ol><li> Patojen-free Wistar neonatal sıçan kullanarak tüm in vivo deneyler yürütmek. </li><li> 21 ° C, 45 - -% 55 nem, 15-20 hava değişikliği / saat ve optimum koşullarda (19 altında, - (11 haftalık kadın 9) kendi emzikli anneler ile bireysel kafeslere tüm sıçan ibrelerin (koloni başına 12 yenidoğan) saklayın 12 st ışık / karanlık döngüsü). </li></ol> 2. Bakteriyel hücrelerin hazırlanması <ol><li> Mağaza E. -80 ° C&#39;de% 20 (h / h) gliserol, E. coli K 1 stokları. Her deney için, agar plakaları Mueller-Hinton (MH) üzerine stok bakterileri plaka ve 37 ° CO / N inkübe. </li><li> Beslenme, inocu gün önceBir tek E ile MH suyu geç 10 mi E. coli K1 koloni ve kültür O / 37 ° C, 200 rpm&#39;de K. Orta kontaminasyonu için bir kontrol olarak, aşılanmamış MH suyu 10 ml hazırlamak ve 200 rpm&#39;de 37 ° C&#39;de inkübe edin. </li><li> Aktarım MH suyu 9,9 ml &#39;si içerisine göre O / N bakteri süspansiyonu, 100 ul (1: 100 hacim / hacim), ve orta üslü faz 0.6&#39; lik bir optik yoğunluğa karşı gelen, ulaşana kadar, 37 ° C, 200 rpm&#39;de inkübe 600 nm (OD 600), bir dalga boyunda ölçülmüştür. </li></ol> E. ile Yenidoğan Sıçan 3. Besleme coli K1 <ol><li> Yavaşça ağız açmak için izin, ensesinden tek elle dikey hayvan tutun. Yavaşça hayvanın ağzına Steril bir pipet ucu yerleştirin ve 30 saniyelik bir süre boyunca hayvanın ağzına aşı (~ 37 ° C) pipet 20 ul. Hemen beslendikten sonra annesine hayvan dönün. </li><li> 8 x 10 6 bakteri t beslenmiş - 4 doğrulayıno seri PBS inokulum seyreltme ve MH agar plakaları üzerine tespit ederek, her yavru. </li></ol> E. tarafından Kolonizasyon 4. Değerlendirme coli K1 <ol><li> Yavaşça ensesinden itibaren bir yandan hayvan tutun. Steril PBS içinde steril pamuk uçlu çubukla ıslatın ve sonra yavaşça perianal bölgeyi çubukla. Hemen swabbing sonra anne hayvan dönün. </li><li> Steril PBS içinde 300 ul ihtiva eden bir tüp içine pamuklu çubuk ucu ile ve buz üzerinde muhafaza edin. </li><li> PBS içinde seri seyreltme ile canlı bakteri sayısını belirlemek MacConkey agar plakaları üzerine kaplama. </li><li> Canlı E. belirleyin bakteriyofaj duyarlılık testleri ile coli K1. Steril bir mikrobiyolojik döngü kullanarak bireysel bir koloni almak, girdap karıştırma sonra tabi steril PBS, 200 ul içine batırılmış. </li><li> Düz bir çizgi MH agar üzerine steril bir mikrobiyolojik döngü, alt-kültür kullanarak. Plaka 30 saniye süreyle kurumaya, ve sonra bac 10 ul pipet izin verteriophage K1E çizgisinin merkezi üzerine (10 9 plak birim / ml (pfu / mL) oluşturulması). 37 ° C&#39;de plaka O / N inkübe edin. </li><li> Bir sonraki gün, bakteriyofaj aracılı liziz için plaka inceleyin. </li></ol> Hastalık Şiddeti 5. Değerlendirme <ol><li> Tablo 1&#39;de özetlenen yedi nokta skorlama sistemi kullanılarak 5 kez günlük - 4 her bir hayvanın hastalık şiddetini değerlendirmek. </li><li> Bir hayvan puanları 7 takım ≥3, hemen acıyı en aza indirmek için hayvan itlaf. Ölü hayvan kaydedin. </li></ol> Yenidoğan Sıçanlar ve Kan Toplama 6. Euthanization <ol><li> Yavaşça başını ve boynunu açığa bir yandan hayvan tutun. Alkollü bir bezle silerek hayvanın boynunu dezenfekte edin. Iz etanolü çıkarmak için steril PBS içinde yıkamadan önce,% 70 etanol kullanılarak makas büyük bir çift dezenfekte. </li><li> Yavaşça bir Petri kabı üzerinde doğrudan hayvan tutun. Keskin Surgi kullanarak yenidoğan işten çıkarmakKan Petri kabı içine damlalar sağlamak cal makas. Cilt florası ile kan bulaşmasını önlemek için kafa temastan kaçının. </li><li> Hemen bir steril pipet kullanılarak, kan toplamak ve 20 arasında bir konsantrasyonda, heparin, sodyum tuzu ile karıştırmak - 0.5 ml mikrosantrifüj tüpü içinde, 50 birim / ml. </li><li> PBS içinde seri seyreltme ile canlı bakteri sayısını belirlemek MacConkey agar plakaları üzerine kaplama. Canlı E. numaraların belirlenmesidir bakteriyofaj K1E için canlı bakteri duyarlılığını test ederek coli K1. </li></ol> 7. Diseksiyon <ol><li> Neonatal sıçan Dekapitasyon takiben, tüketim ve ilgi dokuları toplamak için aseptik koşullarda kullanın. % 70 etanol ve steril PBS içinde (Şekil 1 &#39;de gösterildiği gibi) tüm araçları yıkayın. </li><li> Diseksiyon kurulu temizleyin ve% 70 etanol ile tamamen karın ıslak. Sol arka bacak çivileme sırtında cesedi yerleştirin ve (i) diseksiyon kurulu düzeltmeksteril bir iğne ile operasyon masası, (ii) cesedi germe ve işlem tablosuna doğru ön bacağını bağlantılarını, (iii) işlem tablosuna, sağ arka bacak, sol ön bacağını çivileme. </li><li> Forseps kullanarak alt karın sol tarafında deri çekin, sonra küçük diseksiyon makas kullanılarak sternum alt karın cesedin sol tarafında kesti. </li><li> Sternum eksizyonu uzatın ve ardından altta yatan yapıların hiçbirinin hasar sağlanması forseps ve küçük diseksiyon makas kullanarak alt karın sternum cesedin sağ tarafında, aşağı. </li><li> Son olarak, yavaşça periton maruz İris kavisli diseksiyon forseps kullanarak alt karın sternum flep aşağı çekin. </li><li> Temel organlarının hiçbirinin hasar sağlanması, forseps ile yavaşça periton yükseltmek ve iç organları açığa dikey kesilmiş. </li></ol> 8. ToplamaGI Yolu <ol><li> Mide, ince bağırsak, çekum, kolon ve mezenterik lenf sistemi tanımlamak. </li><li> Yavaşça iki tarafında transecting tarafından mide kaldırmak, daha sonra steril forseps kullanarak steril PBS 1.6 ml içeren bir bijou içine koyun. </li><li> Rektum kolon transect. Dikkatlice steril Petri kabındaki diseksiyon forseps ve yer kullanarak cesedinden tüm bağırsak kitle çekin. Bağırsak yapısı ve mezenterik lenf yapıları ayrı kalmamanız bu nazikçe yapılır emin olun. </li></ol> GI sistemi ve mezenterik lenf Sistemin 9. Ayırma (Şekil 2) <ol><li> Gastrointestinal sistem tamamen daldırılır sağlanması, bir Petri kabı içine steril PBS, 30 ml dökün. </li><li> Mezenterik lenf sisteminin merkezi kitle tespit ve ince diseksiyon forseps kullanarak çimdik. Ince bağırsağın proksimal kısmına tespit ve ince diseksiyon forseps kullanarak çimdik. </li><li> Yavaşça Centra çekinmezenterik lenf sistemi ve iki doku kadar bunları karşıt istikametlerde distal ince bağırsağın L kütle bütünüyle birbirinden ayrılır. Bu proksimal, orta ve distal bölgelerde tekrarlanabilir toplanmasını engeller olarak, ince bağırsak gergin değil emin olmak için dikkatle bu işlemi gerçekleştirmek. 300 mezenterik lenf sistemi yerleştirin - steril PBS içinde 500 ul ve buz üzerine yerleştirin. </li></ol> GI Yolu 10. Kesit <ol><li> Kolondan gelen ince bağırsağa ayırmak için çekum de gastrointestinal sistem transeksiyonu. </li><li> 300 kolon yerleştirin - 500 ul steril PBS ve buz üzerine yerleştirin. </li><li> İnce bağırsak, yakın orta ve uzak bölgelerden gelen temsilcisi dokuları toplayın. Orta noktasından ince bağırsak hizalayın. </li><li> Daha sonra, (i) distal ince bağırsak gibi çekuma önce doku son 2 cm toplanması, (ii) 5 den doku toplamak - yakınsal ince bağırsak gibi orta noktasının üzerinde 7 cm, veOrta ince bağırsak gibi orta noktasının altında 5 cm -, (iii) 3 &#39;den gelen doku toplanır. </li></ol> 11. Karaciğer Toplama <ol><li> Mide çıkarılmasından sonra sıçan karaciğer üç lobu belirlenmesi. </li><li> Uzakta ince diseksiyon forseps kullanılarak karın boşluğundan lobları çekin. </li><li> Ince makas kullanarak herhangi takılarak ligament kesilerek karaciğer çıkarın. Buz üzerinde 500 ul steril PBS ve yer - 300 karaciğer yerleştirin. </li></ol> 12. Dalak Toplama <ol><li> Dalak tanımlayın. </li><li> Uzakta mide dalak çekin ve gastrosplenic ligament kesmek için ince makas kullanın. </li><li> Buz üzerinde 500 ul steril PBS ve yer - 300 dalak yerleştirin. </li></ol> 13. Böbrekler Toplama <ol><li> Gastrointestinal sistem ve diğer organ çıkarılmasından sonra karın boşluğunun arka görülebilir hale gelecektir böbrekleri belirlenmesi. </li><li> Kesim üreter ve herhangi takılarak ligament uince diseksiyon makas şarkı ve ince forseps kullanılarak böbrekleri kaldırın. Adrenal bezleri ve ince forseps ve diseksiyon makas kullanılarak (hala bağlıysa) herhangi bir yağ malzemelerini çıkarın. </li><li> 300-500 ul steril PBS içinde her iki böbreği koyun ve buz üzerine yerleştirin. </li></ol> 14. Beyin Toplama <ol><li> Başlarının kesilmesi işleminden sonra, kıvrık forsepsler kullanılarak dik bir konumda kafa tutun. Uzunlamasına kavisli bir forseps başka bir dizi kullanarak başınızın üstüne cilt Pinch, ve ince diseksiyon makas kullanarak bir kesi yapmak. Boyun yakın kalan cilt, yine uzunlamasına ince diseksiyon makas kesti. </li><li> Ince diseksiyon makas kullanılarak deri kanatlar kafatası ortaya ve ortadan kaldırmak her iki tarafta ince forseps kullanarak dışa doğru cilt çekin. Spinal açılış ince diseksiyon makas yerleştirin ve kürsüden doğru kafatası boyunca bir kesi yapmak. </li><li> Ince forseps kullanarak dışarıya doğru bir yönde kafatası iki bölümünü de çekin. Kafatası parçalarını kaldırmak için kesti. </li><li&gt; kürsüsünden doğru spinal açıklıktan yukarı doğru bir scooping hareket kullanan, geniş forseps kullanarak beyin çıkarın. Decapitation prosedürden herhangi bir kan çıkarmak için iki kez PBS içinde beyin yıkayın. </li></ol> 15. Doku İşleme ve Homojenizasyon <ol><li> Steril PBS içeren tüpler içine canlılığı sayım veya DNA çıkarma, yer dokuları gerektiren deneyler için. Hemen kısa dönem için% 20 gliserol ile, -20 ° C&#39;de PBS içinde seri seyreltme ve MacConkey agar plakaları üzerine kaplama veya deposu tarafından canlı bakteri sayısını belirler. DNA ekstraksiyonu, -20 ° C&#39;de mağaza dokular için. </li><li> RNA ekstraksiyonu, RNAlater çözeltisinin uygun hacim içine bir yer dokular (1 mg doku başına 10 ul) gerektiren deneyleri için, daha sonra, kısa süreli ya da -80 ° C&#39;de uzun süreli depolama -20 ° C &#39;de hemen saklayın. </li><li> 10 mi metakarn çözeltisi içinde görüntüleme gerektiren deneyler, bir yer dokularda (% 60 metanol,% 30 kloroform ve% 10 asetik asit), daha sonra da bir mağazat RT - 3 haftaya kadar (20 25 ° C). </li><li> Önce ve dokulara ilave edildikten sonra tüpler ağırlıkça karşılaştırılmasıyla doku ağırlığı hesaplayın. Bir homojenleştirici kullanılarak dokular homojenize edilir. Her numunenin homojenleştirilmesi arasında, steril PBS içinde bir kez% 70 etanol ile iki kez homojenize edici yıkayın. NOT: metakarn sabitleme müsin ilgili mukozal savunma yapılarını korumak amacıyla bağırsak örneklerinin tespiti için arzu edilir; Formalin sabitleme sistemik dokular için kullanılabilir. </li></ol>

<ol>
	<li>Harvey, D., Holt, D. E., Bedford, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+meningitis+in+the+newborn:+a+prospective+study+of+mortality+and+morbidity.">Bacterial meningitis in the newborn: a prospective study of mortality and morbidity.</a> 23 (5), 218-225 (1999).</li><li>Brouwer, M. C., Tunkel, A. R., van de Beek, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+diagnosis,+and+antimicrobial+treatment+of+acute+bacterial+meningitis.">Epidemiology diagnosis, and antimicrobial treatment of acute bacterial meningitis.</a> Clin. Microbiol. Rev. 23 (3), (2010).</li><li>Silva, L. P. A., Cavalheiro, L. G., Queir&#243;s, F., Nova, C. V., Lucena, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+of+newborn+bacterial+meningitis+and+sepsis+during+the+pregnancy+period+for+public+health+care+system+participants+in+Salvador,+Bahia,+Brazil.">Prevalence of newborn bacterial meningitis and sepsis during the pregnancy period for public health care system participants in Salvador, Bahia, Brazil.</a> J. Infect. Dis. 11 (2), 272-276 (2007).</li><li>Levy, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+immunity+of+the+newborn:+basic+mechanisms+and+clinical+correlates.">Innate immunity of the newborn: basic mechanisms and clinical correlates.</a> Nat. Rev. Immunol. 7 (5), 379-390 (2007).</li><li>Robbins, J. B., et al., Med, ., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Escherichia+coli+K1+capsular+polysaccharide+associated+with+neonatal+meningitis.">Escherichia coli K1 capsular polysaccharide associated with neonatal meningitis.</a> N. Eng. J. 290 (22), 1216-1220 (1974).</li><li>Korhonen, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=hemolysin+production,+and+receptor+recognition+of+Escherichia+coli+strains+associated+with+neonatal+sepsis+and+meningitis.">hemolysin production, and receptor recognition of Escherichia coli strains associated with neonatal sepsis and meningitis.</a> Infect. Immun. 48 (2), 486-491 (1985).</li><li>Rutishauser, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polysialic+acid+in+the+plasticity+of+the+developing+and+adult+vertebrate+nervous+system.">Polysialic acid in the plasticity of the developing and adult vertebrate nervous system.</a> Nat. Rev. Neurosci. 9 (1), 26-35 (2008).</li><li>Koedel, U., Pfister, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+experimental+bacterial+meningitis.">Models of experimental bacterial meningitis.</a> Infect. Dis. Clin. North Am. 13 (3), 549-577 (1999).</li><li>Tunkel, A. R., Scheld, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+and+pathophysiology+of+bacterial+meningiits.">Pathogenesis and pathophysiology of bacterial meningiits.</a> Clin. Microbiol. Rev. 6 (2), 118-136 (1993).</li><li>Kim, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+K1+capsule+is+the+critical+determinant+in+the+development+of+Escherichia+coli+meningitis+in+the+rat.">The K1 capsule is the critical determinant in the development of Escherichia coli meningitis in the rat.</a> J. Clin. Invest. 90 (3), 897-905 (1992).</li><li>Obata-Yasuoka, M., Ba-Thein, W., Tsukamoto, T., Yoshikawa, H., Hayashi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vaginal+Escherichia+coli+share+common+virulence+factor+profiles,+serotypes+and+phylogeny+with+other+extraintestinal+E.+coli.">Vaginal Escherichia coli share common virulence factor profiles, serotypes and phylogeny with other extraintestinal E. coli.</a> Microbiology. 148 (9), 2745-2752 (2002).</li><li>Sarff, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+Escherichia+coli+K1+in+healthy+and+diseased+newborns.">Epidemiology of Escherichia coli K1 in healthy and diseased newborns.</a> Lancet. 305 (7916), 1099-1104 (1975).</li><li>Schiffer, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review:+relation+between+invasiveness+and+the+K1+capsular+polysaccharide+of+Escherichia+coli.">A review: relation between invasiveness and the K1 capsular polysaccharide of Escherichia coli.</a> Pediatr. Res. 10 (2), 82-87 (1976).</li><li>Palmer, C., Bik, E. M., DiGuilio, D. B., Relman, D. A., Brown, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+human+infant+intestinal+microbiota.">Development of the human infant intestinal microbiota.</a> PLoS Biol. 5 (7), 1556-1573 (2007).</li><li>Nassif, X., Bourdoulous, S., Eug&#232;ne, E., Couraud, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+do+extracellular+pathogens+cross+the+blood-brain+barrier.">How do extracellular pathogens cross the blood-brain barrier.</a> Trends Microbiol. 10 (5), 227-232 (2002).</li><li>Moxon, E. R., Glode, M. P., Sutton, A., Robbins, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+infant+rat+as+a+model+of+bacterial+meningitis.">The infant rat as a model of bacterial meningitis.</a> J. Infect. Dis. 136, 186-190 (1977).</li><li>Birchenough, G. M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+innate+defenses+in+the+neonatal+gastrointestinal+tract+in+response+to+colonization+by+neuropathogenic+Escherichia+coli.">Altered innate defenses in the neonatal gastrointestinal tract in response to colonization by neuropathogenic Escherichia coli.</a> Infect. Immun. 81 (9), 3264-3275 (2013).</li><li>Ganz, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defensins:+antimicrobial+peptides+of+innate+immunity.">Defensins: antimicrobial peptides of innate immunity.</a> Nat. Rev. Immunol. 3 (9), 710-720 (2003).</li><li>Bevins, C. L., Salzman, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paneth+cells,+antimicrobial+peptides+and+maintenance+of+intestinal+homeostasis.">Paneth cells, antimicrobial peptides and maintenance of intestinal homeostasis.</a> Nat. Rev. Microbiol. 9 (5), 356-368 (2011).</li><li>Moxon, E. R., Smith, A. L., Averill, D. R., Smith, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Haemophilus+influenzae+meningitis+in+infant+rats+after+intranasal+inoculation.">Haemophilus influenzae meningitis in infant rats after intranasal inoculation.</a> J. Infect. Dis. 129 (2), 154-162 (1974).</li><li>Bortolussi, R., Ferrieri, P., Bj&#246;rkst&#233;n, B., Quie, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capsular+K1+polysaccharide+of+Escherichia+coli:+relationship+to+virulence+in+newborn+rats+and+resistance+to+phagocytosis.">Capsular K1 polysaccharide of Escherichia coli: relationship to virulence in newborn rats and resistance to phagocytosis.</a> Infect. Immun. 25 (1), 293-298 (1979).</li><li>Glode, M. P., Sutton, A., Moxon, E. R., Robbins, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+neonatal+Escherichia+coli+meningitis:+induction+of+bacteremia+and+meningitis+in+infant+rats+fed+E.+coli+K1.">Pathogenesis of neonatal Escherichia coli meningitis: induction of bacteremia and meningitis in infant rats fed E. coli K1.</a> Infect. Immun. 16 (1), 75-80 (1977).</li><li>Pluschke, G., Mercer, A., Kuse&#263;ek, B., Pohl, A., Achtman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+bacteremia+in+newborn+rats+by+Escherichia+coli+K1+is+correlated+with+only+certain+O+(lipopolysaccharide)+antigen+types.">Induction of bacteremia in newborn rats by Escherichia coli K1 is correlated with only certain O (lipopolysaccharide) antigen types.</a> Infect. Immun. 39 (2), 599-608 (1983).</li><li>Zelmer, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Administration+of+capsule-selective+endosialidase+E+minimizes+changes+in+organ+gene+expression+induced+by+experimental+systemic+infection+with+Escherichia+coli+K1.">Administration of capsule-selective endosialidase E minimizes changes in organ gene expression induced by experimental systemic infection with Escherichia coli K1.</a> Microbiology. 156 (7), 2205-2215 (2010).</li><li>Zelmer, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+expression+of+the+polysialyl+capsule+during+blood-to-brain+transit+of+neuropathogenic+Escherichia+coli+K1.">Differential expression of the polysialyl capsule during blood-to-brain transit of neuropathogenic Escherichia coli K1.</a> Microbiology. 154 (8), 2522-2532 (2008).</li><li>Mushtaq, N., Redpath, M. B., Luzio, J. P., Taylor, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+and+cure+of+systemic+Escherichia+coli+K1+infection+by+modification+of+the+bacterial+phenotype.">Prevention and cure of systemic Escherichia coli K1 infection by modification of the bacterial phenotype.</a> Antimicrob. Agents Chemother. 48 (1), 1503-1508 (2004).</li><li>Achtman, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Six+widespread+bacterial+clones+among+Escherichia+coli+K1+isolates.">Six widespread bacterial clones among Escherichia coli K1 isolates.</a> Infect. Immun. 39 (1), 315-335 (1983).</li><li>Mushtaq, N., Redpath, M. B., Luzio, J. P., Taylor, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+experimental+Escherichia+coli.+infection+with+recombinant+bacteriophage-derived+capsule+depolymerase.">Treatment of experimental Escherichia coli. infection with recombinant bacteriophage-derived capsule depolymerase.</a> J. Antimicrob. Chemother. 56 (5), 160-165 (2005).</li><li>Gross, R. J., Cheasty, T., Rowe, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+bacteriophages+specific+for+the+K1+polysaccharide+antigen+of+Escherichia+coli.">Isolation of bacteriophages specific for the K1 polysaccharide antigen of Escherichia coli.</a> J. Clin. Microbiol. 6 (6), 548-550 (1977).</li></ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarının olmadığını beyan ederim.

Burada açıklanan hayvan modeli doğal olarak insanlarda enfeksiyonlara meydana gelen belirgin özellikleri yeniden amaçlanmıştır önceki çalışmaları üzerine inşa edilmiştir. Yenidoğan rat başlangıçta H. nedeniyle bebek menenjit çalışmaya istihdam edildi tür enfeksiyon sağlam bir model için önemli kriterleri yerine b influenza tip. Böylece, ilgili patojenin giriş portal doğal insan enfeksiyonu bunu yansıtmalıdır ve tekrarlanabilir bir terapötik müdahale için izin vermek için yeterli bir süre benzer patolojiye neden olmaktadır. Teknikler işleminin uygulanabilirliğinin sınırlandırmamalıdır kullanılmış ve hastalık sonucu 20 yol açmamalıdırlar. H. modeli Moxon ve arkadaşları tarafından geliştirilen bebek farelerde influenza menenjit bu kriterleri 20 karşılamaktadır; üst solunum yolları ve bu önemli özelliği mukoza zarlarının kolonizasyonu olmayan travmasının sıçan yavrularından çoğaltılmış sonra doğal enfeksiyon meydanaBurun geçişlerinin zarları üzerine bakterilerin tik uygulanmasını kapsamaktadır. Önemli olarak, enfeksiyonun yaşa bağlı doğası modelinde tekrarlanmıştır. Aynı grup, aynı zamanda E. non-invaziv bir model geliştirmek için ilk idi Yenidoğan sıçan 22 coli K1 NBM. Patojen-free Sprague-Dawley yavrular oral gastrik tüp aracılığıyla 10 Ağustos - 10 Ekim bakterileri besleyerek kolonize edildi; aşı bu nedenle bize göre istihdam bundan çok daha yüksekti. Üç K1 suşları incelenmiş olan kolonizasyon, C94 (O7: K1: H-), EC3&#39;ün (O1: K1: H-) ve LH (O75: K1: H 3), nispeten yüksek bir oranda (48-74%) arasında meydana gelen hayvanlar K1-beslenen, ancak bakteriyemi, menenjit ve mortalite insidansı değişken ve kolonizasyon oranlarının anlamlı olarak daha düşüktü. E. klonal doğası coli K1 deneysel enfeksiyon geç 23 kurulmuş ve sadece Ø18 olduğu açıktır: K1 ve, bir dereceye kadar, O7: K1 serotipi edebiliyoruzsürekli sistemik enfeksiyona neden. Bu nedenle, neuropathogenic E. patojenez için bu araştırmalar için K1 soyu A192PP: E. coli K1 hastalık oluşturma geliştirilmiş Ø18 kullanımına dayanmaktadır. E. karşılaştırılması tarafından mukoza yüzeylerine zararlardan dolayı kesinlikle eski yöntem kullanılarak ölüm aşırı sayılarını Achtman grubunun 23 tarafından kullanıldığı gibi Glöde ve arkadaşları 22, ve bir damla besleme kullanılan metod ile kullanılabilir ortaya çıktığı gibi bir mide tüpü aracılığıyla yenidoğan sıçanlarda, coli K1 beslenmesi gastrik tüp. Kolonizasyon oranları, bu iki yöntem ile benzer olduğu için, bu iletişim de tarif edildiği gibi, bu, steril bir ucu ile bir pipet kullanılarak, bakterilerin besleme az invaziv yöntemi kullanmak tavsiye edilir. Çalışmalarımızda kullanılan E. coli A192PP Ø18 olduğu: K1. Bu klinik suş E. daha öldürücü türevidir Başlangıçta septisemi 27 olan bir hastadan elde edildi Coli A192 </&gt; sup. Soyunun artan hastalık oluşturma yeni doğmuş sıçanlarda 26 boyunca bir seri pasaj olarak elde edildi. 2 gün eski hayvanlara 28 uygulandığında gerilme% 100 bakteriyemi ve mortalite ile, yaşa bağlı bir hastalık şiddetini ortaya çıkarmaktadır. Buna karşılık, 9 gün eski hayvanlar hastalığa karşı dirençlidir. K1 spesifik litik bakteriyofaj, E. ayırt etmek için kullanılabilir Diğer E. Coli K1 coli 29 suşları. Bu çalışmada, bakteriyofaj K1E için canlı bakterilerin duyarlılık E. saflığını kontrol (i) için kullanılmalıdır E. coli K1 süspansiyonlar hayvanlara yem olarak hazırlanmıştır, ve (ii) E. ayırt etmek için perianal sürüntü, kan ve doku örneklerinde canlılığını hesaplamak için diğer koliform gelen coli K1. Koloni E. ise E. coli K1, bu bakteriyofaj K1E lize duyarlı olacaktır ve bakteri üremesi bakteriyofaj inokülasyon yerinde önlenir. Koloni E. değilse coli K1, o b olacakKİE bakteriyofaj liziz dirençli, e ve bakteriyofaj inokülasyon yerinde bakteri büyümesinin bir alan olmalıdır. Bu hayvan modelleri doğal olarak oluşan hastalığın tüm özelliklerini yansıtmıyor olabileceği akılda tutulmalıdır. Mevcut model E dışındaki neuropathogenic bakterilerin hastalık oluşturma özelliklerini incelemek üzere değiştirilebilir E. coli A192PP ve kolonize aşı boyutunda farklılıklar yerleştirilebilir. Tekniğinin gelecek uygulamaları çok ihtiyaç duyulan ilaçların değerlendirilmesi durumu tedavi etmek ve kolonizasyon ve doku işgali konak yanıtının ayrıntılarını ortaya çıkarmak için içerebilir. Burada açıklanan yöntem basit ama etkili. 10 Tek yavrular - 12 yavruların test veya kontrol grubu olarak istihdam edildi ve bu kapsamda-çöp yaklaşım tekrarlanabilirlik ve istatistiksel geçerlilik yüksek derecede sağlar. Bu yavrular herhangi bir prosedüründe sonra en kısa sürede kendi doğal annelerine iade edilir zorunludurE ve yavrular bu nedenle farklı müdahaleler geçiren hayvanlar ihtiva etmemelidir. Bu beslenen aşı aksi yavrular sunulan kültürünü reddetmek olacaktır ısındı olması önemlidir. Yavrular hızlı bir şekilde karmaşık Mikrobiyota geliştirmek ve doğum iki gün içinde GI bebek ve yetişkin bağırsağında en bol bulunan mikroplar olarak kurulan filum bakterilerin geniş bir yelpazesi ile kolonize olur. E. beslenen değil yavrular coli A192PP E. taşımak yok kolonizasyon oranlarının coli K1 GI bölgesinde 17 ve bu nedenle saptanması nispeten basittir. Bununla birlikte, neus E. kolonize tespiti için QPCR yöntem tabanlı coli K1 geleneksel kültür yöntemleri olduğunu çok daha hassas ve şiddetle 17 tavsiye edilir.

Sistemik bakteriyel enfeksiyonlar refahı ve yenidoğanın hayatta kalması için büyük bir tehdittir; Erken bebekler özellikle hassastır. Sık sık bakteriyel sepsis ile ilişkili neonatal bakteriyel menenjit (NBM), yaşamın ilk birkaç haftasında mortalite ve morbidite önemli bir kaynak olmaya devam ediyor ve sorun cephe antibakteriyel ilaçlara 1,2 direnç sürekli evrim ile şiddetlenir. NBM olgusu yüksek, tıbbi, sosyal ve ekonomik yükü 3 taşıyan acil bir tıbbi durumdur; Sonuç olarak, enfeksiyonun yükünü azaltmak için, yeni tedavi ve, özellikle de, bu yeni profilaktik stratejileri için acil bir ihtiyaç vardır. NBM bazı özellikleri sıradışı: gelişmiş ülkelerde, Escherichia coli ve B grubu streptokok hemen hemen her zaman koruyucu bir polisakarit ca varlığı ile ilişkili vakaların büyük çoğunluğunda ve NBM ortaya çıkarmak için bu soyların kapasitesinden sorumlubağışıklık tanıma kaçmasına patojeni sağlayan psule 4 işler. Neuroinvasive E. - (85% 80) çok yüksek bir oranı coli K1 kapsülü 5,6, nöronal plastisite 7 modülatörlerini ev sahipliği yapısal özdeş olan bir α-2,8-bağlı polysialic asit polimeri ifade eder. Yeni tedavi ve NBM yönelik profilaktiklerde ve ilgili bakteriyemi ve sepsis değerlendirilmesi açık bir şekilde, özellikle güçlü bir yaş-bağımlılık ve enfeksiyonunun doğal yolu, insan yenidoğanlarda hastalığın başlıca özelliklerini taklit eden enfeksiyonun sağlam bir hayvan modelinde yararlanacak . Gram-pozitif ve Gram-negatif bakteriyel menenjit modelleri geniş bir yelpazede 8,9 mevcuttur ve bu ölçüde, bu enfeksiyonların patogenezi, patofizyolojisi ve tedavi seçenekleri hakkındaki bilgimizi genişletilmiş var. Bu durumda, fare, sıçan, tavşan ve maymun deneysel enfeksiyonları n menenjit incelemek için kullanılmıştıreonate ve yetişkin. Ancak, bu modellerin birçoğu kolonizasyon sitesinden yayılması doğal süreçlerini atlayarak bir yapay patogenezi yaratarak, enfeksiyon başlaması için bakterilerin direkt intrasisteraal veya deri altı enjeksiyon kullanır. Bazı durumlarda inokülasyon Bu yöntemler patolojisinde önemli değişikliklere yol açtı; Örneğin, E. deri altına coli K1 suşları yenidoğan ve yetişkinlerde 10 hem de bakteriyemi ve merkezi sinir sistemi (MSS) işgali üreten, doğal enfeksiyon ile ilişkili yaş bağımlılık ortadan kaldırmıştır. E. yatkınlık coli NBM de bebeğin anneden etkenin dikey geçiş kritik bağımlı veya doğumdan hemen 11 sonradır. E. maternal türetilmiş coli K1 bakteriler doğumda steril ama hızla karmaşık bir mikrobiyotasını 14 kazanır Yenidoğan gastrointestinal (GI) yolu 11-13, kolonize. Kolonize yenidoğanlarda, E. coliK1 bakterilerin kan-beyin ya da kan-beyin-omurilik sıvısı engellerin 9,15 arasında merkezi sinir sistemini girmeden önce sistemik dolaşıma bağırsak lümeninden translokasyonunda kapasitesine sahiptir. Deneysel enfeksiyon sağlam modellerinin tasarımı dikkate bu ayrıntıları almalıdır. Farenin yaygın bakteriyel menenjit 8 bazı şekillerinin çalışma için kullanılmış olmasına rağmen, bunlar, neonatal enfeksiyon çalışmalar için uygun değildir: bunlar, sistemik enfeksiyon ile aşırı insan bebeklerin 16 güçlü bir yaş bağımlılık özelliği göstermezler. Bundan başka, α-defensinler, E. tarafından sistemik işgaline karşı koruma sağlayan GI bölgesinin önemli peptidler E. coli K1 17, yüksek insanlarda ve farelerde, Paneth hücreleri ve nötrofillerde ama farelerde 18 olarak ifade edilmiştir. Bir diğer bulunmayan çoğaltma, yedekleme ve fare defensin heterojenlikten ve ilgili cryptidin genlerin dikkate değer bir derecede olduğunu19 imals. Yenidoğan sıçan başlangıçta Moxon tarafından kullanılan ve coworkers 20 intranazal inokülasyon aşağıdaki Hemofilus influenza menenjiti patogenezi araştırmak için, insanda bu yenidoğan patojenin kolonizasyonu doğal siteyi kopyalayan ve sonra yaşa bağlı E. için uyarlandı coli K1 bakteriyemi ve menenjit. BORTOLUSSI ve diğ., Bakteriyel inokulum 21 çalışan intraperitoneal enjeksiyon enfeksiyon başlatmak için, ancak önemli Glöde çalışma ve Gl kolonizasyonundan sonra enfeksiyonunun doğal yolu ile paralel 22 kullanılan oral gastrik besleme coworkers. Gastrik tüp mukozal yüzeylere zarar verebilir gibi, prosedür yenidoğanlarda 23 inokulum beslenmedir için rafine oldu. Burada, gastrointestinal sistem kolonizasyonu ve açıklanan duyarlı sıçan yavrularında enfeksiyonu izleme prosedürleri için yöntem; ayrıca, modelin terapötik ve önleyici uygulamalar tartışılmaktadır.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1042">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Pathogen-free Wistar rats (12 x neonate, 1 x lactating mother)</td>
			<td>Harlan, UK</td>
			<td>www.harlan.com</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>E. coli K1 A192PP</td>
			<td>Taylor lab</td>
			<td>www.ucl.ac.uk</td>
			<td>Mushtaq et al. 2004</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacteriophage K1E</td>
			<td>Taylor lab</td>
			<td>www.ucl.ac.uk</td>
			<td>Mushtaq et al. 2004</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol&#160;</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>www.sigmaaldrich.com</td>
			<td>G5516</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mueller-Hinton Agar</td>
			<td>Oxoid, UK</td>
			<td>www.oxoid.com</td>
			<td>CM0337</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mueller-Hinton Broth</td>
			<td>Oxoid, UK</td>
			<td>www.oxoid.com</td>
			<td>CM0405</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MacConkey Agar</td>
			<td>Oxoid, UK</td>
			<td>www.oxoid.com</td>
			<td>CM0007</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>www.sigmaaldrich.com</td>
			<td>P4417</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 100%</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>www.sigmaaldrich.com</td>
			<td>E7023</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin Sodium Salt</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>www.sigmaaldrich.com</td>
			<td>84020 
			Prepare 20-50 units/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAlater Solution</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>www.sigmaaldrich.com</td>
			<td>R0901 
			10&#181;l/mg tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic Acid</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>www.sigmaaldrich.com</td>
			<td>320099</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>www.sigmaaldrich.com</td>
			<td>C2432</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>www.sigmaaldrich.com</td>
			<td>322415</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton-tipped swabs</td>
			<td>Fisher Scientific, UK</td>
			<td>www.fisher.co.uk</td>
			<td>11542483</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcotip Swabs</td>
			<td>Scientific Laboratory Supplies, UK</td>
			<td>www.scientificlabs.co.uk</td>
			<td>SWA1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>www.sigmaaldrich.com</td>
			<td>P5856</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30mL Universal Tube</td>
			<td>AlphaLaboratories, UK</td>
			<td>www.alphalabs.co.uk</td>
			<td>CW3890</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.5ml microcentrifuge tubes</td>
			<td>StarLab, UK</td>
			<td>www.starlab.co.uk</td>
			<td>I1405-1500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5ml microcentrifuge tubes</td>
			<td>StarLab, UK</td>
			<td>www.starlab.co.uk</td>
			<td>I1415-1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.1&#181;l calibrated loops</td>
			<td>StarLab, UK</td>
			<td>www.starlab.co.uk</td>
			<td>E1412-0112</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-shaped spreaders</td>
			<td>StarLab, UK</td>
			<td>www.starlab.co.uk</td>
			<td>E1412-1005</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cuvettes</td>
			<td>Fisher Scientific, UK</td>
			<td>www.fisher.co.uk</td>
			<td>10594175</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps straight with fine points</td>
			<td>Fisher Scientific, UK</td>
			<td>www.fisher.co.uk</td>
			<td>12780036</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps straight with blunt tips</td>
			<td>Fisher Scientific, UK</td>
			<td>www.fisher.co.uk</td>
			<td>12391369</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps watchmaker&#39;s curved with very fine points&#160;</td>
			<td>Fisher Scientific, UK</td>
			<td>www.fisher.co.uk</td>
			<td>12740926</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors straight with very fine points</td>
			<td>Fisher Scientific, UK</td>
			<td>www.fisher.co.uk</td>
			<td>12972055</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laboratory Scissors</td>
			<td>VWR, UK</td>
			<td>www.vwr.com</td>
			<td>USBE4251</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25g Syringe Needles</td>
			<td>Greiner Bio-One Ltd</td>
			<td>www.greinerbioone.com</td>
			<td>N2525</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LAMBDA 25 UV/Vis Spectrophotometers</td>
			<td>PerkinElmer, UK</td>
			<td>www.perkinelmer.co.uk</td>
			<td>L60000BB</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unitemp Incubator</td>
			<td>B&#38;T, UK</td>
			<td></td>
			<td>OP958</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multitron shaking incubator</td>
			<td>INFORS HT, UK</td>
			<td>www.infors-ht.com</td>
			<td>AJ118</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra-Turrax T-10 homogenizer</td>
			<td>IKA Werke</td>
			<td>www.ika.com</td>
			<td>0003737000</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

non-invasive model of neuropathogenic escherichia coli infection in the neonatal rat

Istihdam enfeksiyon modeli doğal enfeksiyon temel özelliklerini çoğaltır eğer hayvan sahibi ve bakteriyel patojen arasındaki etkileşimlerin incelenmesi anlamlıdır. Bu protokolünün neonatal sıçanda neuropathogenic Escherichia coli K1 sistemik enfeksiyon oluşturulması ve değerlendirme usulleri tarif etmektedir. Mide-bağırsak yolunun kolonizasyonu enfeksiyonun bağırsak lenf kan-beyin istikameti boyunca patojenin yayılmasına yol açar ve model güçlü bir yaş bağımlılığını gösterir. E. A suşu coli Ø18: yenidoğan sıçan için geliştirilmiş virülansa K1 kolonizasyon derece yüksek oranları, kan bölmesi ve koroid pleksus üzerinden transit aşağıdaki menenjlerin işgaline translokasyonu üretir. Insan vücudunda gibi, merkezi sinir sistemi penetrasyon iltihaptan ve değişmez ölümcül sonucu ile eşlik eder. Model mekanizmasının çalışmalar için kanıtlanmış bir tedavi yaklaşımıdırpatogenezi, terapötik müdahalelerin değerlendirilmesi ve bakteriyel virulans değerlendirilmesi için.

E. Burada anlatılan coli K1 sistemik enfeksiyon modeli insanlarda doğal enfeksiyon özellikleri birçok çoğaltır. Bakterileri, gastrointestinal sistem kolonize beynin 24 bağlantılı iltihap ile organa özgü hastalığı sağlamadan önce mezenterik lenf düğümleri üzerinden kan bölmesine transloke, sindirilen. Önemlisi, model, güçlü bir yaş bağımlılık görüntüler; Şekil 3&#39;te görüldüğü gibi, iki gün yaşlı (P2) sıçan yavruları invaziv hastalığa son derece duyarlı olan, ancak yedi günlük bir süre içinde hayvanlar enfeksiyon giderek daha dirençli olur, ama sistem kolonizasyonu 17 GI değil. Kan bölmesine GI kolonizasyon sitesinden geçiş sonra, bakteriler koroid pleksus 25 ağırlıklı olarak merkezi sinir sistemini girmeden önce floresan mikroskobu (Şekil 4) tarafından alınan kan örneklerinde görülebilir. Bazı hayvanlarda, bu gibi diğer ana organların yaygın invazyonakciğer, dalak ve böbrek 25. Dokulardaki bakteri sayısı tek yavruların 25 arasında ama esas olarak değişebilir biyolojik yük mevcut olan ya da organ tutulumuna konusunda tekrarlanabilirliği yüksek olduğu için mevcut olarak skorlanmıştır zaman. Tek bir test kohort olarak 12 yavrular bir çöp ile, G * Güç Yazılımı kullanarak güç hesapları bu örneklem büyüklüğü altı kohortundan hayvanları ve eğer tüm&gt;% 99 olasılık kullanarak hayatta dayalı bir etkisi bulma% 98.6 olasılık eşittir tespit oniki dikkate alınır. Bu model, özellikle yeni doğan bakteriyel enfeksiyonların tedavisi için uygun yeni maddelerin değerlendirilmesi için elverişlidir ve selektif bir şekilde bakteriyel yüzey 24-26 den K1 kapsül kaldırır EndoE depolimeraz kapsülün terapotik potansiyelini değerlendirmek üzere prosedüründe kullanılmıştır. Ayrıca konak-bakteri etkileşimlerini pat üzerinde etkisi araştırmak için kullanılan olabilirE. patogenezinde immün sisteme E. coli neuropathogens; Bu bağlamda o, E. çalışmalar için istihdam edilmiştir coli A192PP kolonizasyon ve yaygınlaştırma. Bu ispat edilmiştir, E. E. coli A192PP hücreleri, çok sayıda P2, P5 ve P9 yavruların GI bölgesinde devam; Bu üç grupta kolonizasyon zamansal yönleri (Şekil 5) çok benzer ve çoğaltmak ve bağırsak içinde nüfus yoğunluğunu korumak için bakterilerin kapasitesini yansıtır. Klinik izolat A192 ve hastalık oluşturma hayvan kullanımı için çok küçük bir fazlalık sağlamak amacıyla, yeni doğmuş sıçanlarda bir seri pasaj olarak geliştirilmiştir. E. coli A192,% 100 verimle P2 yenidoğan sıçanlar hayvanların kolonize% 35 bakteriyemi ortaya çıkardı ve% 25 27 öldürücü etkisi yarattı. Pasajlamaya türevi A192PP, gastrointestinal sistem kolonize bakteriyemi üretir ve tüm P2 yavrular ölüme neden olmaktadır. Bu sistem, di ölümcüllüğünü araştırmak için kullanılabilecektirfferent K1 kolonizasyon sitesinden CNS ve diğer organ sistemlerini işgal etme kapasitesine göre suşları. Bu bağlamda, Plüschke ve arkadaşları 23 95 E. kapasitesini belirlemek için bir yenidoğan sıçan enfeksiyon modeli kullanılır coli K1 gut kolonizasyon sonrası bakteriyemi neden insan kaynaklı suşları; ve E. klonal doğasını destekleyen, kolonizasyon ve invazif yeteneği hem de etkinliği geniş varyasyonlar gözlemlenmiştir coli K1 neuropathogens. <img alt="Şekil 1," fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/52018/52018fig1highres.jpg" width="600" /> Şekil doku toplama 1. Malzemeler: (A) terazi, (B) gerekli ortamı içeren önceden tartılmış tüpler, (C) operasyon masası, cetvel ve hayvan aşağı pin iğneler, (D)% 70 (v / v) etanol ve PBS, doku toplama ekipmanı sterilize etmek <ssterilizasyonu için trong&gt; (E) dokuları korumak için hayvanın başı kesildikten için makas ve makas ve cımbız ve çeşitli boyut ve şekillerde, (F), buz içinde bıçakları büyük bir çift de dahil olmak üzere doku toplama takımı (G)% 70 (h / h) etanol operasyon masa ve çevreler. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52018/52018fig1highres.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 2," fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/52018/52018fig2highres.jpg" width="600" /> Şekil 2. GI bölgesinin ayrılması ve mezenterik lenf sistemi. (A) Kavrama ince diseksiyon forseps ile mezenterik lenf sisteminin merkezi kitle. (B) Kavrama ince bağırsağın proksimal ve zıt yönlerde çekin. (C) GI ve mezenterik lenf sistemi tamamen separat olacake. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52018/52018fig2highres.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 3," fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52018/52018fig3highres.jpg" width="500" /> E. oral uygulaması sonraki dokuz gün (sayfa 9) iki gün (P2) arasında değişen yenidoğan sıçan yavrularından Şekil 3. Yaşam coli A192PP, sistemik enfeksiyon güçlü bir yaş bağımlılık gösteren. Her grup 24 yenidoğanlar temsil eder. <img alt="Şekil 4," fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/52018/52018fig4highres.jpg" width="600" /> E. Şekil 4. Floresan görüntüleri P2 yavru bir kan yaymasında coli A192PP hücreleri bakteri oral uygulanmasından sonra enfekte. bakteri yüzeyinde lipopolisakkaritin O antijeni st oldutavşan anti-Ø18 poliklonal antikoru ve Alexa546-konjuge keçi-anti-tavşan ikinci antikoruyla ained. K1 kapsül EndoE-GFP reaktif ile görüntülendi. Hemen hemen kan örneklerinde saptanan tüm bakteriler koruyucu K1 kapsülü görüntülenir. Görüntüler Dr Andrea ZELMER tarafından esir edildi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52018/52018fig4highres.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 5," fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52018/52018fig5highres.jpg" width="500" /> Şekil 5. E. bakteriyel inokulum. DNA coli A192PP bağırsak kolonizasyonu aşağıdaki İdarenin tüm bağırsak ve E. çıkarılmıştır polysialyltransferase (neus) genini hedef kantitatif polimeraz zincir reaksiyonu (qPCR) ile tespit E. coli K 1 koloni oluşturan birim / gr (CFU / g), doku başka bir yerde 17 tarif edildiği gibi </sus&gt;. LOD: algılama sınırı. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td> Özellik </td><td> Sağlıklı </td><td> Sağlıksız </td></tr><tr><td> Derinin rengi </td><td> Pembe </td><td> Sarı / Soluk </td></tr><tr><td> Çeviklik (doğrulma refleksi) </td><td> Pup hemen geri yerleştirme tersine </td><td> Geriye yerleştirme (&gt; 3 sn) tersine çevirmede zorluk veya elde edemez </td></tr><tr><td> Karın üzerinde hafif bir basınç </td><td> Ses yok </td><td> Ajitasyon Ses </td></tr><tr><td> Mide / süt hattı </td><td> Görünür ve beyaz </td><td> Görünür değil </td></tr><tr><td> Sıcaklık </td><td> Sıcak </td><td> Nispeten soğuk * </td></tr><tr><td> Ağırlık </td><td> Günde 1.5-2 g Kazanç </td><td> Hiçbir kilo alma veya kilo kaybı </td></tr><tr><td> Kafese yerleştirildi Davranış </td><td> Annesine karşı hamle ve f başlareeding </td><td> Annesine karşı hareket ve beslenme zorluklar gösterir olamaz </td></tr></tbody></table> Tablo 1. Yedi-noktalı puanlama sistemi: Listelenen ilk üç puanları genellikle gözlenen ilk işaretleridir. * Sistemik enfeksiyon deneyim yükselmiş vücut sıcaklığında (&gt; 2 ° C) ile Yenidoğanlar. Ancak nedeniyle hayvanların çeviklik eksikliği vücut ısısını korumak için annelerini ulaşmak için, sağlıksız hayvanların çöp ayrı düşebilirler ve çıplak elle soğuk hissedebilirsiniz.

Watch this Scientific Journal Video about Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat at JoVE.com

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Burada bir prosedür, Escherichia coli K1 kültürleri ile neonatal sıçanda sistemik enfeksiyon kurulması için tarif edilmiştir. Bu non-invazif prosedür da koroid pleksusa de mide-bağırsak yolunun kolonizasyonu, sistemik dolaşıma patojenin translokasyonu ve merkezi sinir sisteminin istilası izin verir.

Neuropathogenic olmayan İnvaziv Modeli<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Yenidoğan Sıçan Enfeksiyon

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

non-invasive-model-neuropathogenic-escherichia-coli-infection

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

10.8K Görüntüleme.  University College London.  Burada bir prosedür, Escherichia coli K1 kültürleri ile neonatal sıçanda sistemik enfeksiyon kurulması için tarif edilmiştir. Bu non-invazif prosedür da koroid pleksusa de mide-bağırsak yolunun kolonizasyonu, sistemik dolaşıma patojenin translokasyonu ve merkezi sinir sisteminin istilası izin verir. 

Video: Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

Two-photon (2P) microscopy is a high resolution imaging technique that has been broadly adapted by biologists. The value of 2P microscopy is that it provides rich spatiotemporal information regarding cell behaviors within intact tissues and in live mice. Leukocyte recruitment plays a significant role in host defense against infection and when unchecked, can contribute to inflammatory and autoimmune diseases. Studying leukocyte recruitment in vivo is technically challenging since cells are moving rapidly within vessels located deep within light scattering tissues. To date, most intravital imaging studies require surgical preparation to expose the blood vessels and tissues. To avoid the tissue damage and inflammation induced by surgery itself, here, we describe a non-invasive single-cell imaging approach that can be used to study leukocyte trafficking in the mouse footpad and phalanges. We discuss the technical aspects of our 2P imaging preparation and walk the reader through a typical experiment from initial set up to execution and data collection.

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

Here, we describe a non-invasive two-photon (2P) microscopy approach to study leukocyte homing in the mouse footpad. We discuss the technical aspects of our tissue imaging preparation and walk the reader through a typical experiment from initial set up to execution and data collection.

Lökosit Homing Göç ve non-invaziv Görüntüleme In vivo</em

Two-photon (2P) microscopy is a high resolution imaging technique that has been broadly adapted by biologists.  The value of 2P microscopy is that it ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Following Cell-fate in E. coli After Infection by Phage Lambda

The system comprising bacteriophage (phage) lambda and the bacterium E. coli has long served as a paradigm for cell-fate determination1,2. Following the simultaneous infection of the cell by a number of phages, one of two pathways is chosen: lytic (virulent) or lysogenic (dormant)3,4. We recently developed a method for fluorescently labeling individual phages, and were able to examine the post-infection decision in real-time under the microscope, at the level of individual phages and cells5. Here, we describe the full procedure for performing the infection experiments described in our earlier work5. This includes the creation of fluorescent phages, infection of the cells, imaging under the microscope and data analysis. The fluorescent phage is a "hybrid", co-expressing wild- type and YFP-fusion versions of the capsid gpD protein. A crude phage lysate is first obtained by inducing a lysogen of the gpD-EYFP (Enhanced Yellow Fluorescent Protein) phage, harboring a plasmid expressing wild type gpD. A series of purification steps are then performed, followed by DAPI-labeling and imaging under the microscope. This is done in order to verify the uniformity, DNA packaging efficiency, fluorescence signal and structural stability of the phage stock. The initial adsorption of phages to bacteria is performed on ice, then followed by a short incubation at 35&deg;C to trigger viral DNA injection6. The phage/bacteria mixture is then moved to the surface of a thin nutrient agar slab, covered with a coverslip and imaged under an epifluorescence microscope. The post-infection process is followed for 4 hr, at 10 min interval. Multiple stage positions are tracked such that ~100 cell infections can be traced in a single experiment. At each position and time point, images are acquired in the phase-contrast and red and green fluorescent channels. The phase-contrast image is used later for automated cell recognition while the fluorescent channels are used to characterize the infection outcome: production of new fluorescent phages (green) followed by cell lysis, or expression of lysogeny factors (red) followed by resumed cell growth and division. The acquired time-lapse movies are processed using a combination of manual and automated methods. Data analysis results in the identification of infection parameters for each infection event (e.g. number and positions of infecting phages) as well as infection outcome (lysis/lysogeny). Additional parameters can be extracted if desired.

Following Cell-fate in E. coli After Infection by Phage Lambda

This article describes the procedure for preparing a fluorescently-labeled version of bacteriophage lambda, infection of E. coli bacteria, following the infection outcome under the microscope, and analysis of infection results.

Hücre-kaderi ardından<em&gt; E. coli</em&gt; Faj Lambda tarafından Enfeksiyon Sonrası

The system comprising bacteriophage (phage) lambda and the bacterium E. coli has long served as a paradigm for cell-fate determination1,2. Following the ...

Non-invasive Imaging of Disseminated Candidiasis in Zebrafish Larvae

Disseminated candidiasis caused by the pathogen Candida albicans is a clinically important problem in hospitalized individuals and is associated with a 30 to 40% attributable mortality6. Systemic candidiasis is normally controlled by innate immunity, and individuals with genetic defects in innate immune cell components such as phagocyte NADPH oxidase are more susceptible to candidemia7-9. Very little is known about the dynamics of C. albicans interaction with innate immune cells in vivo. Extensive in vitro studies have established that outside of the host C. albicans germinates inside of macrophages, and is quickly destroyed by neutrophils10-14. In vitro studies, though useful, cannot recapitulate the complex in vivo environment, which includes time-dependent dynamics of cytokine levels, extracellular matrix attachments, and intercellular contacts10, 15-18. To probe the contribution of these factors in host-pathogen interaction, it is critical to find a model organism to visualize these aspects of infection non-invasively in a live intact host. 
The zebrafish larva offers a unique and versatile vertebrate host for the study of infection. For the first 30 days of development zebrafish larvae have only innate immune defenses2, 19-21, simplifying the study of diseases such as disseminated candidiasis that are highly dependent on innate immunity. The small size and transparency of zebrafish larvae enable imaging of infection dynamics at the cellular level for both host and pathogen. Transgenic larvae with fluorescing innate immune cells can be used to identify specific cells types involved in infection22-24. Modified anti-sense oligonucleotides (Morpholinos) can be used to knock down various immune components such as phagocyte NADPH oxidase and study the changes in response to fungal infection5. In addition to the ethical and practical advantages of using a small lower vertebrate, the zebrafish larvae offers the unique possibility to image the pitched battle between pathogen and host both intravitally and in color. 
The zebrafish has been used to model infection for a number of human pathogenic bacteria, and has been instrumental in major advances in our understanding of mycobacterial infection3, 25. However, only recently have much larger pathogens such as fungi been used to infect larva5, 23, 26, and to date there has not been a detailed visual description of the infection methodology. Here we present our techniques for hindbrain ventricle microinjection of prim25 zebrafish, including our modifications to previous protocols. Our findings using the larval zebrafish model for fungal infection diverge from in vitro studies and reinforce the need to examine the host-pathogen interaction in the complex environment of the host rather than the simplified system of the Petri dish5.

The rapid development, small size and transparency of zebrafish are tremendous advantages for the study of innate immune control of infection1-4. Here we demonstrate techniques for infecting zebrafish larvae using the fungal pathogen Candida albicans by microinjection, methodology recently used to implicate phagocyte NADPH oxidase activity in control of fungal dimorphism5.

Zebra balığı Larva yılında Dissemine Kandidiyazis non-invaziv Görüntüleme

Disseminated candidiasis caused by the pathogen Candida albicans is a clinically important problem in hospitalized individuals and is associated with a 30 ...

Non-invasive Optical Imaging of the Lymphatic Vasculature of a Mouse

The lymphatic vascular system is an important component of the circulatory system that maintains fluid homeostasis, provides immune surveillance, and mediates fat absorption in the gut. Yet despite its critical function, there is comparatively little understanding of how the lymphatic system adapts to serve these functions in health and disease1. Recently, we have demonstrated the ability to dynamically image lymphatic architecture and lymph "pumping" action in normal human subjects as well as in persons suffering lymphatic dysfunction using trace administration of a near-infrared fluorescent (NIRF) dye and a custom, Gen III-intensified imaging system2-4. NIRF imaging showed dramatic changes in lymphatic architecture and function with human disease. It remains unclear how these changes occur and new animal models are being developed to elucidate their genetic and molecular basis. In this protocol, we present NIRF lymphatic, small animal imaging5,6 using indocyanine green (ICG), a dye that has been used for 50 years in humans7, and a NIRF dye-labeled cyclic albumin binding domain (cABD-IRDye800) peptide that preferentially binds mouse and human albumin8. Approximately 5.5 times brighter than ICG, cABD-IRDye800 has a similar lymphatic clearance profile and can be injected in smaller doses than ICG to achieve sufficient NIRF signals for imaging8. Because both cABD-IRDye800 and ICG bind to albumin in the interstitial space8, they both may depict active protein transport into and within the lymphatics. Intradermal (ID) injections (5-50 &mu;l) of ICG (645 &mu;M) or cABD-IRDye800 (200 &mu;M) in saline are administered to the dorsal aspect of each hind paw and/or the left and right side of the base of the tail of an isoflurane-anesthetized mouse. The resulting dye concentration in the animal is 83-1,250 &mu;g/kg for ICG or 113-1,700 &mu;g/kg for cABD-IRDye800. Immediately following injections, functional lymphatic imaging is conducted for up to 1 hr using a customized, small animal NIRF imaging system. Whole animal spatial resolution can depict fluorescent lymphatic vessels of 100 microns or less, and images of structures up to 3 cm in depth can be acquired9. Images are acquired using V++ software and analyzed using ImageJ or MATLAB software. During analysis, consecutive regions of interest (ROIs) encompassing the entire vessel diameter are drawn along a given lymph vessel. The dimensions for each ROI are kept constant for a given vessel and NIRF intensity is measured for each ROI to quantitatively assess "packets" of lymph moving through vessels.

Recently developed imaging techniques using near-infrared fluorescence (NIRF) may help elucidate the role the lymphatic system plays in cancer metastasis, immune response, wound repair, and other lymphatic-associated diseases.

Bir Mouse Lenfatik damarları Non-invaziv Optik Görüntüleme

The lymphatic  vascular system is an important component of the circulatory system that  maintains fluid homeostasis, provides immune surveillance, and ...

Culturing Microglia from the Neonatal and Adult Central Nervous System

Microglia are the resident macrophage-like cells of the central nervous system (CNS) and, as such, have critically important roles in physiological and pathological processes such as CNS maturation in development, multiple sclerosis, and spinal cord injury. Microglia can be activated and recruited to action by neuronal injury or stimulation, such as axonal damage seen in MS or ischemic brain trauma resulting from stroke. These immunocompetent members of the CNS are also thought to have roles in synaptic plasticity under non-pathological conditions. We employ protocols for culturing microglia from the neonatal and adult tissues that are aimed to maximize the viable cell numbers while minimizing confounding variables, such as the presence of other CNS cell types and cell culture debris. We utilize large and easily discernable CNS components (e.g. cortex, spinal cord segments), which makes the entire process feasible and reproducible. The use of adult cells is a suitable alternative to the use of neonatal brain microglia, as many pathologies studied mainly affect the postnatal spinal cord. These culture systems are also useful for directly testing the effect of compounds that may either inhibit or promote microglial activation. Since microglial activation can shape the outcomes of disease in the adult CNS, there is a need for in vitro systems in which neonatal and adult microglia can be cultured and studied.

We outline methods for the efficient and quick isolation/culture of viable microglia from the neonatal cerebral cortex and adult spinal cord. The dissection and plating of cortical microglia can be accomplished within 90 minutes, with the subsequent microglial harvest taking place ~ 10 days following the initial dissection.

Yenidoğan ve Erişkin Merkezi sinir sisteminin Kültüre Mikroglia

Microglia are the resident macrophage-like cells of the central nervous system (CNS) and, as such, have critically important roles in physiological and ...

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

The aquatic pathogen, Streptococcus iniae, is responsible for over 100 million dollars in annual losses for the aquaculture industry and is capable of causing systemic disease in both fish and humans. A better understanding of S. iniae disease pathogenesis requires an appropriate model system. The genetic tractability and the optical transparency of the early developmental stages of zebrafish allow for the generation and non-invasive imaging of transgenic lines with fluorescently tagged immune cells. The adaptive immune system is not fully functional until several weeks post fertilization, but zebrafish larvae have a conserved vertebrate innate immune system with both neutrophils and macrophages. Thus, the generation of a larval infection model allows the study of the specific contribution of innate immunity in controlling S. iniae infection.
The site of microinjection will determine whether an infection is systemic or initially localized. Here, we present our protocols for otic vesicle injection of zebrafish aged 2-3 days post fertilization as well as our techniques for fluorescent confocal imaging of infection. A localized infection site allows observation of initial microbe invasion, recruitment of host cells and dissemination of infection. Our findings using the zebrafish larval model of S. iniae infection indicate that zebrafish can be used to examine the differing contributions of host neutrophils and macrophages in localized bacterial infections. In addition, we describe how photolabeling of immune cells can be used to track individual host cell fate during the course of infection.

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Here, we present a protocol for the generation and imaging of a localized bacterial infection in the zebrafish otic vesicle.

Bir Zebra balığı Larva Modeli Doğuştan Bağışıklık Tepki Non-invaziv Görüntüleme<em&gt; Streptococcus iniae</em&gt; Enfeksiyon

The aquatic pathogen, Streptococcus iniae, is responsible for over 100 million dollars in annual losses for the aquaculture industry and is capable of ...

One-step Negative Chromatographic Purification of Helicobacter pylori Neutrophil-activating Protein Overexpressed in Escherichia coli in Batch Mode

Helicobacter pylori neutrophil-activating protein (HP-NAP) is a major virulence factor of Helicobacter pylori (H. pylori). It plays a critical role in H. pylori-induced gastric inflammation by activating several innate leukocytes including neutrophils, monocytes, and mast cells. The immunogenic and immunomodulatory properties of HP-NAP make it a potential diagnostic and vaccine candidate for H. pylori and a new drug candidate for cancer therapy. In order to obtain substantial quantities of purified HP-NAP used for its clinical applications, an efficient method to purify this protein with high yield and purity needs to be established.
In this protocol, we have described a method for one-step negative chromatographic purification of recombinant HP-NAP overexpressed in Escherichia coli (E. coli) by using diethylaminoethyl (DEAE) ion-exchange resins (e.g., Sephadex) in batch mode. Recombinant HP-NAP constitutes nearly 70% of the total protein in E. coli and is almost fully recovered in the soluble fraction upon cell lysis at pH 9.0. Under the optimal condition at pH 8.0, the majority of HP-NAP is recovered in the unbound fraction while the endogenous proteins from E. coli are efficiently removed by the resin.
This purification method using negative mode batch chromatography with DEAE ion-exchange resins yields functional HP-NAP from E. coli in its native form with high yield and purity. The purified HP-NAP could be further utilized for the prevention, treatment, and prognosis of H. pylori-associated diseases as well as cancer therapy.

One-step Negative Chromatographic Purification of Helicobacter pylori Neutrophil-activating Protein Overexpressed in Escherichia coli in Batch Mode

A high yield method for one-step negative purification of recombinant Helicobacter pylori neutrophil-activating protein (HP-NAP) overexpressed in Escherichia coli by using diethylaminoethyl resins in batch mode is described. HP-NAP purified by this method is beneficial for the development of vaccines, drugs, or diagnostics for H. pylori-associated diseases.

Tek adımlı olumsuz Kromatografik arıtma<em&gt; Helicobacter pylori</em&gt; Nötrofil-aktive protein aşın<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Toplu Modunda

Helicobacter pylori neutrophil-activating protein (HP-NAP) is a major virulence factor of Helicobacter pylori (H. pylori). It plays a critical role in H. ...

Detection of Enterohemorrhagic Escherichia Coli Colonization in Murine Host by Non-invasive In Vivo Bioluminescence System

Enterohemorrhagic E. coli (EHEC) O157:H7, which is a foodborne pathogen that causesdiarrhea, hemorrhagic colitis (HS), and hemolytic uremic syndrome (HUS), colonize to the intestinal tract of humans. To study the detailed mechanism of EHEC colonization in vivo, it is essential to have animal models to monitor and quantify EHEC colonization. We demonstrate here a mouse-EHEC colonization model by transforming the bioluminescent expressing plasmid to EHEC to monitor and quantify EHEC colonization in living hosts. Animals inoculated with bioluminescence-labeled EHEC show intense bioluminescent signals in mice by detection with a non-invasive in vivo imaging system. After 1 and 2 days post infection, bioluminescent signals could still be detected in infected animals, which suggests that EHEC colonize in hosts for at least 2 days. We also demonstrate that these bioluminescent EHEC locate to mouse intestine, specifically in the cecum and colon, from ex vivo images. This mouse-EHEC colonization model may serve as a tool to advance the current knowledge of the EHEC colonization mechanism.

Detection of Enterohemorrhagic Escherichia Coli Colonization in Murine Host by Non-invasive In Vivo Bioluminescence System

A detailed protocol of a mouse model for enterohemorrhagic E. coli (EHEC) colonization by using bioluminescence-labeled bacteria is presented. The detection of these bioluminescent bacteria by a non-invasive in vivo imaging system in live animals can advance our current understanding of EHEC colonization.

Non-invaziv Vivo içinde Bioluminescence sistemi tarafından fare konak Enterohemorrhagic Escherichia Coli kolonizasyon algılama

Enterohemorrhagic E. coli (EHEC) O157:H7, which is a foodborne pathogen that causesdiarrhea, hemorrhagic colitis (HS), and hemolytic uremic syndrome ...

Overexpression and Purification of Human Cis-prenyltransferase in Escherichia coli

Prenyltransferases (PT) are a group of enzymes that catalyze chain elongation of allylic diphosphate using isopentenyl diphosphate (IPP) via multiple condensation reactions. DHDDS (dehydrodolichyl diphosphate synthase) is a eukaryotic long-chain cis-PT (forming cis double bonds from the condensation reaction) that catalyzes chain elongation of farnesyl diphosphate (FPP, an allylic diphosphate) via multiple condensations with isopentenyl diphosphate (IPP). DHDDS is of biomedical importance, as a non-conservative mutation (K42E) in the enzyme results in retinitis pigmentosa, ultimately leading to blindness. Therefore, the present protocol was developed in order to acquire large quantities of purified DHDDS, suitable for mechanistic studies. Here, the usage of protein fusion, optimized culture conditions and codon-optimization were used to allow the overexpression and purification of functionally active human DHDDS in E. coli. The described protocol is simple, cost-effective and time sparing. The homology of cis-PT among different species suggests that this protocol may be applied for other eukaryotic cis-PT as well, such as those involved in natural rubber synthesis.

Overexpression and Purification of Human Cis-prenyltransferase in Escherichia coli

A simple protocol for overexpression and purification of codon-optimized, human cis-prenyltransferase, under non-denaturing conditions, from Escherichia coli, is described, along with an enzymatic activity assay. This protocol can be generalized for production of other cis- prenyltransferase proteins in quantity and quality suitable for mechanistic studies.

Aşırı Ezme ve İnsanın Saflaştırılması<em&gt; Cis</em&gt; -prenıltransferaz in<em&gt; Escherichia coli</em

Prenyltransferases (PT) are a group of enzymes that catalyze chain elongation of allylic diphosphate using isopentenyl diphosphate (IPP) via multiple ...

A Facile Protocol to Generate Site-Specifically Acetylated Proteins in Escherichia Coli

Post-translational modifications that occur at specific positions of proteins have been shown to play important roles in a variety of cellular processes. Among them, reversible lysine acetylation is one of the most widely distributed in all domains of life. Although numerous mass spectrometry-based acetylome studies have been performed, further characterization of these putative acetylation targets has been limited. One possible reason is that it is difficult to generate purely acetylated proteins at desired positions by most classic biochemical approaches. To overcome this challenge, the genetic code expansion technique has been applied to use the pair of an engineered pyrrolysyl-tRNA synthetase variant, and its cognate tRNA from Methanosarcinaceae species, to direct the cotranslational incorporation of acetyllysine at the specific site in the protein of interest. After first application in the study of histone acetylation, this approach has facilitated acetylation studies on a variety of proteins. In this work, we demonstrated a facile protocol to produce site-specifically acetylated proteins by using the model bacterium Escherichia coli as the host. Malate dehydrogenase was used as a demonstration example in this work.

A Facile Protocol to Generate Site-Specifically Acetylated Proteins in Escherichia Coli

Genetic code expansion serves as a powerful tool to study a wide range of biological processes, including protein acetylation. Here we demonstrate a facile protocol to exploit this technique for generating homogeneously acetylated proteins at specific sites in Escherichia coli cells.

Escherichia Coli proteinler Site-Specifically oluşturmak için Facile iletişim kuralı Acetylated

Post-translational modifications that occur at specific positions of proteins have been shown to play important roles in a variety of cellular processes. ...