We would like to thank CSL Ltd. for supporting the purchase of the endoscopy equipment. The research in the laboratory of ME is supported by the Ludwig Institute for Cancer Research, and the laboratories of TP and ME are supported by the Victorian State Government Operational Infrastructure Support and the National Health and Medical Research Council of Australia. ME is an NHMRC Senior Research Fellow.

Tıbbi Araştırma hayvan etik kurul Walter ve Eliza Hall Enstitüsü bu protokollerin açıklanan prosedürlerin her onayladı. Deneysel Fareler hazırlanması 1. <ol><li> En az 4 cinsiyet deneysel kohortlardan oluşturun yetiştirilen ve aynı spesifik patojen free (SPF) hayvan tesisi / odada muhafaza ve otoklava yiyecek ve su ile sağlanır 6-8 haftalık C57BL / 6 fareler (M. musculus) eşleşti. dişi farelerin kullanılması farklı çizgiler, sınır kutusu numaralarından gelen farelerin eş-konut izin ve kafes-to-kafes varyasyonu azaltacaktır. </li><li> 3.0 mm çaplı endoskopi kılıf kullanarak endoskopi prosedürleri etkinleştirmek için yaş en az 6 hafta farelerin olun vardır. </li><li> Mümkün olan yerlerde bağırsak mikroflorası ile ilgili varyasyonları azaltmak için aynı rafta depolanan kafeslerden, aynı genetik arka plan fareler kullanın ve. Hayvan tesisleri arasında mikroflora varyasyonlar göz whe alınmalıdırn her bir deney için 22 uygun kontrol fareleri ve genotipleri belirlenmesi. </li><li> Kulak / burun kupürleri, dövmeler, ya da benzeri işaretle fareler kolay tanımlama için izin vermek. </li><li> Bazal deneysel ağırlıkların belirlenmesi için, Gün 0 üzerine fareler tartılır. </li><li> Endoskopi gerçekleştirin bazal kolon fenotipleri kaydetmek için Gün 0 üzerine farelerin (Bölüm 5). </li></ol> Bir Epitel Hasar ve Akut Kolit Modelinde 2. Ön-klinik Deneme <ol><li> Terapötik madde ihtiva eden bir çözelti hazırlayın, test edilecek. Oral gavaj (PO) tarafından teslim edilen terapötik, 100 ul bir maksimum hacme kadar çözüm hazırlanması. Intraperitonal (ip) enjeksiyon ile tedavi için, 200 ul bir maksimum hacme çözüm hazırlanması. NOT: uzun süreler boyunca tekrarlanan ip veya po ilaç uygulaması değişmiş fare davranışlara neden olabilir. Uzun süreli rahatsızlık önlemek için ip enjeksiyon sitesini alternatif. Po uygulama için, autoc farelere sağlamakBir &#39;tedavi&#39; olarak laved ayçiçeği tohumu sonda prosedürü ile olumsuz bir ilişki aza indirmek için. </li><li> 1. Günde çıkar (aşama 2.1&#39;de elde edilmiş) ve uygun bir araç kontrol terapötik uygulayın. Örneğin Resim (Şekil 6A), rekombinant insan (rh) iInterleukin (İL) a sahip 5 ug -11 proteini, 200 ul fosfat tamponlu tuz çözeltisi içinde çözüldü (PBS) ve kullanılan IP </li><li> . Test ediliyor tedavi reaktif kurulan farmakokinetik profili bağlı olacaktır idarelerin, zamanlaması ve sıklığını belirlemek 1 deney boyunca günde iki kez ip enjeksiyonları kullanarak profilaktik tedaviyi özetliyor Şekil. </li><li> Dışkı kıvamı ve kan varlığı da dahil olmak üzere, Monitör ve günlük her fare tartın. Tedavinin günlerde, terapötik ilaç idaresi denk olmalıdır tartı tekrarlanan kullanım nedeniyle farelere stres en aza indirmek için. </li&gt; <li> Gün 3,% 2.5 (2.5 g / 100 mi) rutin hayvan tesisine göre farelere sağlanan içme suyu DSS solüsyon hazırlanır. Yaklaşık 5 ml / fare / DSS çözeltisi günlük deney için gereklidir. hayvan tesis ortam sıcaklığı dalgalandığı eğer DSS su tüketimi değişebilir. NOT: DSS tahriş edicidir ve MSDS talimatlara uygun olarak ele alınmalıdır. </li><li> 5 Sürekli gün temiz su şişeleri fareler istenildiği kadar taze DSS sağlayın. Gün 5 akşamı, püre gıda pelet ek ve küçük petri kaplarına (100 gr gıda pelet / 10 gr protein shake / 10 ml su) sağlanan bir protein takviyesi normal içme suyu sağlamak. Bu kurumasını engeller ve ciddi kilo kaybı minimize yardımcı olur. </li><li> CO2 zehirlenmesi fareler öldürülür ve 8. gün veya sabahında, sonraki histolojik analiz için dokular toplamak farenin en fazla üç c ≥15 ağırlıkça%-kaybına uğradığı zamanİlk hangisi onsecutive gün. NOT:% 1-4 arasında DSS dozunu ayarlayın (w / v) hayvan tesisinin mikroflora ve DSS toplu bağlı. Uygun DSS dozajı ve circumvent partiden partiye varyasyonu kurmak için, rutin parti testi yürütmek. Uygun dozaj kilo kaybı (orijinal ağırlığının daha büyük olmayan% 15) göre ve kolit histopatoloji doğrulanmalıdır. </li></ol> Kronik Kolit veya Kolit-ilişkili Kanser Modeli 3. Ön-klinik Deneme <ol><li> Kronik kolit modeli için adım 3.7 başlayın. </li><li> Kolit ilişkili bir kanser (CAC) model için, Gün 1, 10 mg / kg (ağ / ağ) azoksimetan (AOM, 250 ul, ip) her fare enjekte edilir. NOT: AOM kanserojen ve MSDS talimatlara uygun olarak ele alınmalıdır. </li><li> AOM stok çözeltileri, 10 mg / ml&#39;lik miktarlar halinde hazırlandı ve -20 ° C&#39;de saklanır. Enjeksiyon gününde, AOM stok çözeltisi eritilir ve 1 mg / m seyreltildiPBS içinde l. Tekrarlanan donma ve AOM stok çözeltisi çözülme kaçınılmalıdır. </li><li> AOM dozu 8-12 mg / kg arasında ayarlanabilir. Rutin parti denemeleri partiden partiye varyasyonuna farelere toksisite aşmak için uygun AOM dozajı oluşturmak için gereklidir. </li><li> Gün 1-7 boyunca AOM uygulama ağırlıkları stabil bir sonraki olur ve bu nedenle, kilo kontrolü, bunların dışkılarında sitotoksik metabolitleri salgılamak olacaktır taşıma hayvanlar bilmek gün 1-7 sırasında ihmal edilebilir. </li><li> 7. günde, tüm yatak sitotoksik prosedürler takip değiştirilmesi gerekir. Yatak değişim işlemi tamamlandıktan sonra artık sitotoksik metabolitleri salgılayan edileceği gibi, hayvanlar, artık sitotoksik işleme prosedürleri gerektirmektedir. </li><li> 8. günde,% 2.5 (2.5 g / 100 mi) (adım 2.5 de tarif edildiği gibi), DSS çözeltisi hazırlamak ve fareler ad libitum olarak sunulmaktadır. </li><li> Karıştırdı fu dahil, deney boyunca günlük fareler tartılır ve hastalık belirtilerini izlemekr, kanlı dışkı ve az hareket hunching. </li><li> Gün 13, DSS çözüm kaldırmak ve 28. Gün 8-28 kronik kolit / CAC protokolünün bir &#39;döngüsü&#39; oluşturan gününe kadar normal içme suyu ile fareler sağlamak. </li><li> Gün 13-28 üzerinde farelerin, normal içme suyu verildiği zaman, püre gıda pelet ile fareler ve küçük petri kaplarına (100 g gıda pelet / 10 gr protein çalkalama / 10 ml su) içinde temin edilen bir proteini ek sağlar. Bu kurumasını engeller ve ciddi kilo kaybı minimize yardımcı olur. NOT: püre protein takviyeleri fareler DSS tüketim tutarlılığı sağlamak amacıyla içme suyu DSS içeren alırken temin edilmemelidir. </li><li> Gün, 20 (Bölüm 5) bireysel fare sağlığını izlemek için ikinci endoskopik muayene. </li><li> Gün 29 tekrarı üzerinde DSS döngüsü (Döngü 2:% 2.5 (v) Günleri 34-50 döneminde Günleri 29-33 ve normal içme suyu sırasında sağlanan DSS w /). </li><li> Gününde 40 thi gerçekleştirmekBireysel fare sağlığını izlemek ve tümör yükünü belirlemek için endoskopik muayene rd (Bölüm 5). </li><li> Tümör yok Günü 40 endoskopi ile görünür ise, Gün 50-72 üçüncü bir DSS döngüsü başlar (Döngü 3:% 2.5 (/ v) Günleri 56-72 döneminde Günleri 50-55 ve normal içme suyu sırasında sağlanan DSS w). Genellikle, tümörler Gün 40 olarak görünür ve bu nedenle DSS üçüncü döngü atlanabilir vardır. </li><li> Tümörler endoskopik muayene ile görünür hale kez, her fareye bir endoskopik tümör puanı (Bölüm 5) atamak ve benzeri temel tümör yüklerin ile kohortlarda bireysel fareler atayın. </li><li> (Tümörler görülebilir olduğunda ya) Günün 42, terapötik bileşik veya ilgili araç kontrolü (Bölüm 2.2 bakınız) yönetmek. doz zamanlaması terapötik farmakokinetik profili bağlı olacaktır. Bir müdahale tedavisi bir örneği şöyle sağlanmıştır yer almış tümörlerin (Şekil 2) olan farelerde, haftada üç kez ip enjekte edilmiştir. </li><li> E gerçekleştirinterapötik tedavi süresi boyunca haftada bir kez ndoscopic sınav tümör yükünü izlemek için. Genel olarak, terapötik tedavi 4 haftalık bir amacı, tedavi yanıtını izlemek için yeterli olacaktır. Tedavinin kesilmesinden sonra, farelerin bir kohort, tümör nüksü için endoskopi ile izlenebilir. </li><li> CO zehirlenmesinde 2 fareler Euthanize ve fareler fazla üç gün üst üste ≥15% kilo kaybı karşılaştığınızda veya ilk gelenden Gün 72 sabahı biyokimyasal ve / veya histolojik analiz için doku toplamak. </li></ol> Bir Sporadik Kolorektal Kanser Modeli 4. Ön-klinik Deneme <ol><li> Gün 1, 10 mg / kg AOM (adım 3.2) ile her fare ip enjekte. AOM dozu 8-12 mg / kg arasında ayarlanabilir. Rutin parti denemeleri partiden partiye varyasyonuna farelere toksisite aşmak için uygun AOM dozajı oluşturmak için gereklidir. </li><li> Her haftanın ilk gününde enjeksiyon tekrarlayınAşağıdaki 5 hafta içinde (Şekil 3). fareler tamamı 6 hafta boyunca sitotoksik güvenlik prosedürlerine göre ele alınmalıdır. </li><li> Tekrarlanan kullanım nedeniyle farelere sıkıntı en aza indirmek için AOM enjeksiyon gününde her fare tartılır. NOT: AOM kanserojen ve MSDS talimatlara uygun olarak ele alınmalıdır. </li><li> Bütün hayvanlar, bu protokol için gerekli AOM ip enjeksiyonları 6 hafta boyunca sitotoksik güvenlik prosedürlerine göre ele alınmalıdır. </li><li> Haftada 8 içinde ortaya çıkan tümörlerin (Bölüm 5) izlemek için endoskopik muayene. Tümörler görünür hale gelene kadar Endoskopik muayene iki haftada yapılmalıdır. Genel olarak, vahşi tip C57BL / 6 fare AOM ilk uygulamadan sonra yaklaşık 40 hafta tümör oluşum başlar. </li><li> Tümörler endoskopik muayene ile görünür hale kez, her fareye bir endoskopik tümör puanı atamak (Bölüm 5) ve benzeri ile bir kohort bireysel fareler atamak<html> terapötik tedavi başlamadan önce tümör yükü. </li><li> (Tümörler görülebilir ilk olduğunda ya) haftada 40 boyunca, terapötik bileşik veya ilgili araç kontrolü yönetmek. </li><li> doz zamanlaması tedavi farmakokinetik profili bağlı olacaktır (adım 2.1). Bir müdahale tedavisi bir örneği şöyle sağlanmıştır yer almış tümörlerin (Şekil 3) farelerde, haftada 3 gün ip enjekte edilmiştir. </li><li> Tümör yükünü izlemek için terapötik tedavi dönemleri süresince endoskopik muayene haftalık gerçekleştirin. Genel olarak, terapötik tedavi 4 haftalık bir amacı, tedavi yanıtı için yeterlidir. Tedavi kesilmesinden sonra farelerin bir kohort da tümör nüks için endoskopi ile izlenebilir. </li><li> CO2 zehirlenmesi fareler öldürülür ve haftada 45 veya tedavi 4 haftalık takip döneminde kolon ve tümörlerin biyokimyasal ve / veya histolojik analizi için doku toplanır. </li></ol>&gt; 5 ve_title &quot;. Endoskopik Sınavları <ol><li> endoskopi ekipmanı, standart prosedürlere 16&#39;ya göre monte edilmelidir. </li><li> Sterilize ve% 70 etanol ya da bir anti-bakteriyel madde ile endoskop probu temizleyin. </li><li> Videolar gibi iMovie gibi bir dizüstü veya masaüstü bilgisayar ve standart medya yazılımı kullanılarak kaydedilebilir. Standart bir bilgisayar monitörü, yerine tıbbi sınıf monitör, endoskopi prosedürü (Şekil 4) sırasında kolon görselleştirmek için yeterlidir. </li><li> 0,2-0,4 litre / dakika arasında bir oranda eş zamanlı olarak% 100 O2 içinde% 3 izofluran ile bir bölme içinde 5-6 fare grupları anestezisi. Ayak tutam tarafından onaylandıktan anestezi uygulanır farelerde, sonra; izofluran düzeyleri bakımından% 0.5-2 kadar değiştirilmelidir. </li><li> Odasından tek bir fare çıkarın ve bir burun-koni güvenli olarak kafa ile ventral tarafı yukarı yerleştirin. Tam anestezi izlenmelidir ve s, böylece arka bacaklar ayarlanabilir olmalıdırfare arkasında dışarı tretched. </li><li> Kuruluğunu önlemek için farelerin gözleri bir veteriner merhem yerleştirin. </li><li> Açıkça anüs ortaya çıkarmak için alt omurga karşılayan fare kuyruğu tutun. Su, bir cam kaba sert endoskop kılıfı kaydedin ve her seferinde küçük bir kabarcık boşaltılması için hava akışını ayarlamak. </li><li> Hava akımı kolon şişirmek için izin verecektir. Hava akımı çok güçlü ise, hava fare mideye basılacaktır. Hiçbir ek yağlama gerekmez. </li><li> Dikkatle rektum içine sert endoskop kılıfını takın. Genellikle, endoskop fareler eğrileri kolon işaret ve sert endoskop için erişilebilir olmadığı 3 cm kadar eklenebilir. </li><li> Endoskopi prosedürler sırasında ortak bir zorluk nedeniyle dışkı ile kolon lümeni erişim bloke olduğunu. Yavaşça feca etrafında endoskop manevra dikkatli dışkılama teşvik etmek prosedürden önce farelerin karın masaj, ya da bu kaçınınİşlem sırasında l meselesi. Peristaltizmin ayrıca kolon kas rahatlatır kadar sırasında endoskop pozisyonda tutulmalıdır, oluşabilir. </li><li> Endoskopi işleminin herhangi bir aşamasında video kaydı başlatın. Hastalık puanlama prosedürü sırasında deneyimli bir asistan tarafından kaydedilen veya video dosyalarını daha sonraki bir zaman noktasında olabilir. </li><li> Endoskopik sınav sonrasında, kendi kafesine fareler dönün ve anestezi kurtarma sırasında onları izlemek. Hayvanlar izofluran yönetmek burun konisi çıkarıldıktan sonra 2 dakika içinde genellikle uyanık ve hareketli. </li><li> Bu işlemler deneyimli bir bilim adamı tarafından gerçekleştirilen emin olun. Her endoskopi işlemi fare başına yaklaşık 2 dakika sürecektir. </li></ol> 6. Hastalık Puanlama <ol><li> (I) değişiklikleri belgeleri kolit Şiddeti murin endoskopik İndeksi (MEICS) 16, şeffaflık ile gösterilen kolon duvar kalınlığı için video skoru, kolit izlemek, (Ii) ila (iv) bir zerre moda içinde mevcut ülser ve yenilenme bölgeleri, (v) yatakları (Şekil 5a) fibrin ile gösterilen kanama dışkı kıvamı, (iii) kan damar bütünlüğü ve varlığı. </li><li> Tümör yükü izlemek için, tümör insidansı ve boyutu için videolar puan. Tümör boyutu tümör 16 (Şekil 5b) tarafından işgal kolon lümen çapına göre belirlenir. Bu, tek bir fare için her iki kolit ve tümör puanlama parametreleri kullanmak yaygındır. Endoskopi, tek tek tümörler ve kolon mukozası sağlığını kullanarak tek bir hayvanda yeni terapötiklerin başarısı için okumasını sağlayan bir süre boyunca izlenebilir. </li><li> (İsteğe bağlı) Hareketsiz görüntüleri temsili rakamlar (Şekil 6) nesil için videolar elde edilebilir. </li></ol>

<ol>
	<li>Tenesa, A., Dunlop, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+into+the+aetiology+of+colorectal+cancer+from+genome-wide+association+studies.">New insights into the aetiology of colorectal cancer from genome-wide association studies.</a> Nat Rev Genet. 10, 353-358 (2009).</li><li>Rustgi, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+hereditary+colon+cancer.">The genetics of hereditary colon cancer.</a> Genes Dev. 21, 2525-2538 (2007).</li><li>Rutter, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Severity+of+inflammation+is+a+risk+factor+for+colorectal+neoplasia+in+ulcerative+colitis.">Severity of inflammation is a risk factor for colorectal neoplasia in ulcerative colitis.</a> Gastroenterology. 126, 451-459 (2004).</li><li>Eaden, J. A., Abrams, K. R., Mayberry, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+risk+of+colorectal+cancer+in+ulcerative+colitis:+a+meta-analysis.">The risk of colorectal cancer in ulcerative colitis: a meta-analysis.</a> Gut. 48, 526-535 (2001).</li><li>Lakatos, P. L., Lakatos, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risk+for+colorectal+cancer+in+ulcerative+colitis:+changes,+causes+and+management+strategies.">Risk for colorectal cancer in ulcerative colitis: changes, causes and management strategies.</a> World J Gastroenterol. 14, 3937-3947 (2008).</li><li>Xiang, B., Snook, A. E., Magee, M. S., Waldman, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=+Colorectal+cancer+immunotherapy."> Colorectal cancer immunotherapy.</a> Discov Med. 15, 301-308 (2013).</li><li>Feng, Q. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-EGFR+and+anti-VEGF+agents:+Important+targeted+therapies+of+colorectal+liver+metastases.">Anti-EGFR and anti-VEGF agents: Important targeted therapies of colorectal liver metastases.</a> World J Gastroenterol. 20, 4263-4275 (2014).</li><li>Dinarello, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-inflammatory+Agents:+Present+and+Future.">Anti-inflammatory Agents: Present and Future.</a> Cell. 140, 935-950 (2010).</li><li>Grivennikov, S. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenoma-linked+barrier+defects+and+microbial+products+drive+IL-23/IL-17-mediated+tumour+growth.">Adenoma-linked barrier defects and microbial products drive IL-23/IL-17-mediated tumour growth.</a> Nature. 491, 254-258 (2012).</li><li>Putoczki, T., Thiem, S., Loving, A., Busuttil, R. A., Wilson, N. A., Ziegler, P., Nguyen, P., Preaudet, A., Farid, R., Edwards, K., Boglev, Y., Luwor, R. B., Jarnicki, A. J., Horst, D., Boussioutas, A., Heath, J., Sieber, O., Nash, A., Greten, F., McKenzie, B. S., Ernst, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-11+is+the+dominant+IL-6+family+cytokine+during+gastrointestinal+tumorigenesis+and+can+be+targeted+therapeutically.">Interleukin-11 is the dominant IL-6 family cytokine during gastrointestinal tumorigenesis and can be targeted therapeutically.</a> Cancer Cell. 24, 257-271 (2013).</li><li>Perse, M., Cerar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dextran+sodium+sulphate+colitis+mouse+model:+traps+and+tricks.">Dextran sodium sulphate colitis mouse model: traps and tricks.</a> J Biomed Biotechnol. 2012, 718617 (2012).</li><li>Rose, W. A., Sakamoto, K., Leifer, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multifunctional+role+of+dextran+sulfate+sodium+for+in+vivo+modeling+of+intestinal+diseases.">Multifunctional role of dextran sulfate sodium for in vivo modeling of intestinal diseases.</a> BMC Immunol. 13, 41 (2012).</li><li>Laroui, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dextran+sodium+sulfate+(DSS)+induces+colitis+in+mice+by+forming+nano-lipocomplexes+with+medium-chain-length+fatty+acids+in+the+colon.">Dextran sodium sulfate (DSS) induces colitis in mice by forming nano-lipocomplexes with medium-chain-length fatty acids in the colon.</a> PLoS One. 7, e32084 (2012).</li><li>Miyazawa, F., Olijnyk, O. R., Tilley, C. J., Tamaoki, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+between+dextran+sulfate+and+Escherichia+coli+ribosomes.">Interactions between dextran sulfate and Escherichia coli ribosomes.</a> Biochim Biophys Acta. 145, 96-104 (1967).</li><li>Peterson, L. W., Artis, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+epithelial+cells:+regulators+of+barrier+function+and+immune+homeostasis.">Intestinal epithelial cells: regulators of barrier function and immune homeostasis.</a> Nat Rev Immunol. 14, 141-153 (2014).</li><li>Neufert, C., Becker, C., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+inducible+mouse+model+of+colon+carcinogenesis+for+the+analysis+of+sporadic+and+inflammation-driven+tumor+progression.">An inducible mouse model of colon carcinogenesis for the analysis of sporadic and inflammation-driven tumor progression.</a> Nat Protoc. 2, 1998-2004 (2007).</li><li>Schwitalla, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+p53+in+Enterocytes+Generates+an+Inflammatory+Microenvironment+Enabling+Invasion+and+Lymph+Node+Metastasis+of+Carcinogen-Induced+Colorectal+Tumors.">Loss of p53 in Enterocytes Generates an Inflammatory Microenvironment Enabling Invasion and Lymph Node Metastasis of Carcinogen-Induced Colorectal Tumors.</a> Cancer Cell. 23, 93-106 (2013).</li><li>Fiala, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigations+into+the+metabolism+and+mode+of+action+of+the+colon+carcinogens+1,2-dimethylhydrazine+and+azoxymethane.">Investigations into the metabolism and mode of action of the colon carcinogens 1,2-dimethylhydrazine and azoxymethane.</a> 40, 2436-2445 (1977).</li><li>Chen, J., Huang, X. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+signal+pathways+in+azoxymethane-induced+colon+cancer+and+preventive+implications.">The signal pathways in azoxymethane-induced colon cancer and preventive implications.</a> Cancer Biol Ther. 8, 1313-1317 (2009).</li><li>Bollrath, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=gp130-mediated+Stat3+activation+in+enterocytes+regulates+cell+survival+and+cell-cycle+progression+during+colitis-associated+tumorigenesis.">gp130-mediated Stat3 activation in enterocytes regulates cell survival and cell-cycle progression during colitis-associated tumorigenesis.</a> Cancer Cell. 15, 91-102 (2009).</li><li>Becker, C., Fantini, M. C., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+resolution+colonoscopy+in+live+mice.">High resolution colonoscopy in live mice.</a> Nat Protoc. 1, 2900-2904 (2006).</li><li>Ivanov, I. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+intestinal+Th17+cells+by+segmented+filamentous+bacteria.">Induction of intestinal Th17 cells by segmented filamentous bacteria.</a> Cell. 139, 485-498 (2009).</li><li>Thiem, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mTORC1+inhibition+restricts+inflammation-associated+gastrointestinal+tumorigenesis+in+mice.">mTORC1 inhibition restricts inflammation-associated gastrointestinal tumorigenesis in mice.</a> J Clin Invest. 123, 767-781 (2013).</li><li>Stuart, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+inhibition+of+Jak+activity+inhibits+progression+of+gastrointestinal+tumors+in+mice.">Therapeutic inhibition of Jak activity inhibits progression of gastrointestinal tumors in mice.</a> Mol Cancer Ther. 13, 468-474 (2014).</li><li>De Robertis, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+AOM/DSS+murine+model+for+the+study+of+colon+carcinogenesis:+From+pathways+to+diagnosis+and+therapy+studies.">The AOM/DSS murine model for the study of colon carcinogenesis: From pathways to diagnosis and therapy studies.</a> J Carcinog. 10, 9 (2011).</li><li>Viennois, E., Chen, F., Laroui, H., Baker, M. T., Merlin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dextran+sodium+sulfate+inhibits+the+activities+of+both+polymerase+and+reverse+transcriptase:+lithium+chloride+purification,+a+rapid+and+efficient+technique+to+purify+RNA.">Dextran sodium sulfate inhibits the activities of both polymerase and reverse transcriptase: lithium chloride purification, a rapid and efficient technique to purify RNA.</a> BMC Res Notes. 6, 350 (2013).</li><li>Kerr, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dextran+sodium+sulfate+inhibition+of+real-time+polymerase+chain+reaction+amplification:+a+poly-A+purification+solution.">Dextran sodium sulfate inhibition of real-time polymerase chain reaction amplification: a poly-A purification solution.</a> Inflamm Bowel Dis. 18, 344-348 (2012).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Farelerde barsak hastalığı patolojisi güvenilir ve yeniden üretilebilir bir indüksiyon hatları yöntemler açıklanmaktadır üç protokol de. Rutin endoskopik izleme ve burada özetlenen müdahale stratejileri ile kombine edildiğinde, bu protokoller terapötik etkinliği içine güçlü klinik öncesi fikir verecektir. Bizim laboratuvarlar rutin tedavilerin yeni 10,23,24 başarısını izlemek için bu protokollerin hepsi kullanın. Bir klinik öncesi hayvan modeli seçerek yeni tedavi ajanlarının test zaman düşünceler vardır. Bu insan hastalığı için model alaka ve terapötik hedefin önerilen eylem tümör mikro katkısını içermektedir. Burada oluşturulan bağırsak hastalığı modellerinde terapötik müdahale için üç protokolleri sağlar. Bu modeller tekrarlanabilir ve hastalık oluşturmak için reaktiflerin teslim yönetmek kolaydır. Önemlisi, modeller son derece ilgili olanBirden yüzleri ve kolit başlangıç ​​ve tümör başlaması ve ilerlemesi aşamalarına. Araştırmacılar ölçüde 25 değişebilir DSS ve / veya AOM tarafından uyarılan hastalık yatkınlık gibi, dikkate deney tasarlama kullanılan fare suşlarının genetik geçmişini almalıdır. Buna ek olarak, farklı mikrobiyal topluluklar bakteriler tarafından metabolize edilir AOM bağlamında farklı metabolik kapasitelerine sahip olabilir. Biz tek bir deneyde (ticari satıcılardan dahil) farklı hayvan tesisleri içine doğmuş farelerin farklı kohortlarını kullanarak karşı dikkatli olun. Benzer şekilde, farklı tesislerden kullanılan farelerde farklı mikroflora farklı konak yanıtları epitel bariyer hasarı 11-kaynaklı DSS için ortaya çıkarabilir. Ayrıca, (örneğin, RNA saflaştırma için) doku uygun analiz, daha sonraki moleküler analizde 26,27 etkileyecek ters transkriptazı inhibe etmek için, DSS yeteneği yana dikkate alınmalıdır. <p class = &quot;jove_content&quot;&gt; Fare endoskopi art arda bireysel fare hastalığın başlamasını ve ilerlemesini izlemek için bir kesme kenarı tekniğidir. video kaydetmek ve hareketsiz görüntüleri ayıklamak için yeteneği birden hastalık parametreleri ve tümörlerin kolay izleme imkanı sağlamaktadır. Hayvan refahı geliştirmeye ek olarak, endoskopik izleme de geleneksel hastalık sonucu izlemek için farklı zaman noktalarında itlaf edildi deneysel farelerin birden kohortlarda, ihtiyacını azaltır. MEICS puanlama sistemi histopatolojik analiz için bir alternatifi değildir, ancak alternatif canlı farelerde hayvan sağlığı ve mukozal hasarı izlemek anlamına gelir sağlar. Fare endoskopi özel bir laboratuar tekniği ve tüm işlemler farelerin uygun manipülasyon ve kullanım sağlamak için, yanı sıra hastalık puanlama için kullanılan görüntülerin tutarlı kaliteyi sağlamak için eğitimli personel tarafından yapılmalıdır. Nitelikli kişisel elinde, biz endoskopi tumo az veya hiç hasar uyardığını buldukintra-tümöral kanamaya neden olur rs. Bu ilk tümör yükünü belirlemek için bir yol sağlar ve terapötik ilaç uygulamasından önce benzer tümör yüklerin hayvanların grup kohortlarda için bize izin verir çünkü özetlenen tedavi protokolleri için, biz, endoskopi çok avantajlıdır düşünün. Farelerin Sıralı izleme zamanında başarısız deneyler sonlandırma seçeneği ile, erken yeni tedavilerin etkinliğini belirlemek için araştırmacılar sağlar. Iltihaplı bağırsak hastalığı ve kolorektal kanserler önceden daha iyi anlaşılması olarak, tedavi için yeni hedeflerin belirlenmesi edilecektir. Uygun hayvan modelleri en umut verici yeni tedaviler klinik çalışmalarda doğru hareket sağlamak için ayrılmaz olacaktır.

Kolorektal kanser (CRC) malignite dünya çapında 1 4. en sık nedenidir. Bu hastalığın ailesel bazda anlayışımızda önemli ilerlemeye rağmen, genetik yatkınlık, sadece CRC olguların 2 ~ 20% katkıda bulunmaktadır. kalan kronik inflamasyon dahil çok sayıda dış ve çevresel faktörlere, atfedilir. İnsanlarda, kronik inflamasyon ve kolon kanseri arasındaki bağlantı ülseratif kolit kolit ilişkili kolon kanseri (CAC) gelişme riski daha yüksektir (UC) hasta, belirgin bir enflamatuar hastalık 3 süresi, kapsamı ve şiddetine bağlı olarak -5. Buna göre, yeni tedaviler bağışıklık tepkisini ve enflamatuar tümör mikroçevresinin 6-8 büyüme teşvik faktörlerin ilişkili üretimini kontrol etmek geliştirilmektedir. Terapötik etkinliğini karakterize etmek için uygun olan klinik öncesi hayvan modellerinde için giderek artan bir gereksinim vardırgelişimi ve hastalığın ilerlemesine karşı bu ilaçlar. Fare model tümden enflamatuar mikro-ortam daha açık enflamasyon 9,10 yokluğunda, CRC ilerlemesine katkıda bulunduğu gösterilmiştir. Bu modeller, epitel yaralanması, akut ve kronik iltihaplı bağırsak hastalığı (IBD), 11,12 model farelerin içme suyu temin polisakarit dekstran sülfat sodyum (DSS) kullanımını, içerir. DSS mukozal hasarı ve kolit indüklediği mekanizması tam olarak anlaşılmamıştır, ancak, bazı çalışmalar DSS hücre içinde hücresel ters transkriptaz ve ribonükleaz faaliyetlerini inhibe eden veya kolon zar zarar epitel gelen füzyonu nano lipid kompleksleri oluşumuna neden olduğu gösterilmiştir 13,14. Standart DSS modeline değişiklikler de kolon epitel hücreleri, doku homeostazisini ve kirecin muntazam aralıklar ile devam hangi mekanizmaları içine önemli fikir vermişGeç mukozal bağışıklık tepkileri 15. Azoksimetan (AOM) verildi ve tek başına, ya da DSS ile birlikte, epitel mukozası ve inflamatuar ve stromal mikroçevresinin 16,17 somatik mutasyonlar arasındaki etkileşimi inceleyen bir model sağlar. AOM doğrudan DNA mutasyonlarının sonuçlanmaz kanserojen 1,2-dimentihidrazin (DMH) bir metabolitidir. Bunun yerine, AOM MAM glukuronik asit ile konjüge edilmiş ve daha sonra, safra salgıları 18 barsak taşınır karaciğer, sitokrom izoform CYP2E1 ile (MAH) methylazoxymethanol için hidrolize edilir. Bakteriyel β-glukuronidaz, DNA alkilleme sonuçlanan MAM bozulması ve epitel hücreleri 19 mutasyonların birikimine katkıda bulunduğu düşünülmektedir. En AOM uyarmalı kolon tümörleri proteozomal degradati dayanıklı protein işleme, gen kodlayıcı β-katenin missense mutasyonu taşıyankanonik Wnt sinyal yolunun 20-anormal aktivasyonu ile sonuçlanır, üzerinde. AOM aktivitesi DSS tarafından ortaya mukozal hasar ile kombine edildiğinde, yanıtı şifa izleyen yara Mutajenize epitel büyüme ve genişleme için elverişli bir mikro oluşturur. Bu modelin bir varyasyonunda, tek başına bir kaç haftalık bir süre boyunca AOM tekrarlanan uygulama DDS ile indüklenen kolit 10,17 yokluğunda, sporadik kolorektal kanser modellemek için de kullanılabilir. Bu iki tamamlayıcı model bir pro-enflamatuar tümörün mikro 10 ile bağlantılı olan, her ikisi de sırasıyla CAC ve sporadik CRC çalışma deneysel ayarları sağlar. farelerde seri endoskopinin kullanımı Becker ve arkadaşları 21 tarafından öncülük ve kolit ve tümör ilerlemesi boyuna izlenmesini sağlar edildi. Burada DSS-kaynaklı mukozal hasar ve / veya AOM-aracılı tu dayalı üç klinik öncesi protokolleri sağlamakmor indüksiyon tekrarlanabilir özel kolon patolojileri ikna etmek. İlk protokol İBH ile ilişkili histopatolojik özellikleri birçok ortaya çıkarmak için DSS yönetimine tepki akut mukozal hasar uyarılması açıklar. İkinci protokol yaygın İBH hastada inflamasyon fişekleri taklit DSS yaklaşık üç ardışık döngü dayanır ve AOM kaynaklı mutasyonlarla bağlantılı olarak gerçekleştirilebilir. Nihai protokol AOM-kaynaklı sporadik epitel mutasyonlara dayanır. Bu protokollerin her biri için, biz yeni ilaçların etkinliğini izlemek için geliştirdik profilaktik ve terapötik müdahale yöntemlerini içerecek şekilde ilgili standart prosedürleri genişletin.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1021">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Name of Material/ Equipment</td>
			<td style="width:112px;">Company</td>
			<td style="width:119px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:509px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:281px;">Dextran Sulfate Sodium (MW 36,000-50,000)</td>
			<td style="width:112px;">MP Biochemicals</td>
			<td style="width:119px;">160110</td>
			<td>Requires batch testing.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Azoxymethane</td>
			<td style="width:112px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">A5486-100MG</td>
			<td>Requires batch testing.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Vanilla Protein Shake</td>
			<td style="width:112px;">N/A</td>
			<td style="width:119px;">N/A</td>
			<td>Available from hospital pharmacies.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Isoflourane</td>
			<td style="width:112px;">PPC</td>
			<td style="width:119px;">M60303</td>
			<td>This is a restricted reagent, which should be stored under lock and key.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">70% Ethanol</td>
			<td style="width:112px;">N/A</td>
			<td style="width:119px;">N/A</td>
			<td>Standard lab reagent.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;"></td>
			<td style="width:112px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Coloview miniendoscopic system</td>
			<td style="width:112px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Endovision Tricam</td>
			<td style="width:112px;">Karl Storz</td>
			<td style="width:119px;">20212001-020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:281px;">Xenon 175 light source with anti-fog pump</td>
			<td style="width:112px;">Karl Storz</td>
			<td style="width:119px;">20134001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">HOPKINS straight Forward Telescope</td>
			<td style="width:112px;">Karl Storz</td>
			<td style="width:119px;">64301AA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Endoscopic Sheath (total diameter 3 mm)</td>
			<td style="width:112px;">Kalr Stroz</td>
			<td style="width:119px;">61029C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Fubre Optic Light Cable</td>
			<td style="width:112px;">Kalr Stroz</td>
			<td style="width:119px;">69495ND</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Computer and media player software</td>
			<td style="width:112px;">MAC, imovies</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Scale</td>
			<td style="width:112px;">Any</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Any scale suitable for weighing mice.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

non-invasive assessment of the efficacy of new therapeutics for intestinal pathologies using serial endoscopic imaging of live mice

Animal models of inflammatory bowel disease (IBD) and colorectal cancer (CRC) have provided significant insight into the cell intrinsic and extrinsic mechanisms that contribute to the onset and progression of intestinal diseases. The identification of new molecules that promote these pathologies has led to a flurry of activity focused on the development of potential new therapies to inhibit their function. As a result, various pre-clinical mouse models with an intact immune system and stromal microenvironment are now heavily used. Here we describe three experimental protocols to test the efficacy of new therapeutics in pre-clinical models of (1) acute mucosal damage, (2) chronic colitis and/or colitis-associated colon cancer, and (3) sporadic colorectal cancer. We also outline procedures for serial endoscopic examination that can be used to document the therapeutic response of an individual tumor and to monitor the health of individual mice. These protocols provide complementary experimental platforms to test the effectiveness of therapeutic compounds shown to be well tolerated by mice.

Ağırlık kaybı rutin farelerin genel sağlık izlemek için kullanılır kolit ile ilişkili hastalık izlemek için standart bir parametre olarak kullanılır. Hayvanlar DSS içeren su tatbik ederken, genellikle kendi ağırlığı korumak ve normal içme suyu iade edildiğinde, yalnızca gevşek ağırlık başlar. Kabul edilebilir kilo kaybı parametreleri kurumun hayvan etik kurul göre kurulmuş olmalıdır. Uzun süreli ishal ile bağlantılı su kaybını önlemek püre rutin olarak kullanmak için (besin peletleri püresi ve içme suyu ile karıştırılmış), normal içme suyuna ilave olarak bir protein shake ile takviye edilmiştir. Alternatif bir anestezi, ketamin / ksilazin ve benzeri maddeler kullanılabilir ve böylece, eğer izofluran ekipman mevcut değildir. Nedeniyle endoskop sert doğası, bu işlemler sadece fare kolon en uzak 3 cm görselleştirme için izin verir. Ile Yeni endoskoplar<html> (esneklik ve floresan dahil) ek yetenekleri deney ihtiyaçlarına bağlı olarak mevcuttur. DSS zararlı etkileri öncelikle orta kolonda görülen hafif patoloji ile farelerin distal kolon, sınırlı olduğundan Ancak, sert endoskop bireysel farelerin mukozal sağlığı izleme engel değildir. Akut DDS ile indüklenen kolit profilaktik tedavisi için bir protokol açıklar, ancak bu protokol kolayca müdahale tedavi stratejileri test etmek için modifiye edilebilir. epitel hasarı ve kolit hafifletmek üzere tasarlanmış bir ilacın etkinliği, tek tek farelerde uzunlamasına izlenir ve tanımlanan puanlama parametreleri (Şekil 5) göre belirlenebilir. Bu deneysel protokol sırasında belirli zaman noktalarında farelerin seçilmesini gerektiren geleneksel deney tasarımları avantajlıdır, ve zaman içinde bir muameleye hastalık yanıtının karakterizasyonu izin vermez. <html> t &quot;&gt; insanlarda yapılan klinik çalışmalar bireysel hasta tedavilere yanıt ne kadar farklı tümörler önemli değişkenlik sermiştir. Burada anlatılan prosedürler genel tümör yükü, hem de kurs boyunca bireysel tümörlerin tedavi yanıtını izlemek için bir araç sağlar Bir deneyin. Kanser modelleri için özetlenen müdahale protokolleri dikkate tümör başlaması üzerine bir tedavinin etkilerini yapmayız dikkate almak önemlidir. profilaktik protokoller, tümörler endoskopi ile görünür hale ne zaman önce verilen tedavi ile, Bu bilgileri elde etmek için gereklidir. Burada belirtilen protokoller ilerlemesi üzerindeki terapötik etkileri hakkında bilgi, tümörlerin (tümör boyutu ile ölçülen). Tümör regresyonu de görülebilir tümörler sayısında bir azalma ile belirtilir. g &quot;/&gt; Şekil 1:., Akut kolon hasarının bir model uygulamanın profilaktik bir uygulama tedavinin etkinliğini izleme (a) &#39;deneysel protokol baştan tamamlanma 8 gün gerektirir. Tedavi profilaktik tedavileri için Gün 1 (b) tatbik edilmektedir. DSS Deneysel protokol 3. gün içme suyu (c) &#39;de temin edilmiştir. Endoskop hayvanlarda hastalık ilerlemesini izlemek için (d) &#39;de gerçekleştirilir. Önerilen zamannoktaları aşılamadan Gün 5 ve 8 (hastalık yükünü belirlemek için) Gün 0 (işlenmemiş) ve Gün 2 (sağlık izleme) içerir. Deney, vahşi tip fare (f) zaman içerisinde hastalık artar dizisinde Gün 8 (e) sabah sonlandırılır. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/52383/52383fig2highres.jpg" /> Şekil 2: Bir Model o müdahale tedavisinin etkinliğini izlemef kanser kolit ile ilişkili. (a) Deneysel protokol baştan tamamlanması 72 gün gerektirir. (B) &#39;Terapötik müdahale tedaviler için Gün 46 kurulan tümörleri olan farelere tatbik edilmektedir. AOM (c) 1. günde enjekte edilir ve DSS 8. Endoskop (d) &#39;hayvanlarda hastalık ilerlemesini izlemek için gerçekleştirilir gününde başlayarak, deney protokolü üç döngü boyunca içme suyu sağlanmıştır. Önerilen zamannoktaları aşılamadan (grup hayvanlara tümör yüküne göre) Gün (işlenmemiş) 0, Gün 20 (sağlık kontrolü) ve Gün 40 içermektedir. Endoskop hastalığı sonuçlarını izlemek için bir terapötik tedavi boyunca haftada bir gerçekleştirilir. Deney (e) itibaren gün 40 artar bir vahşi tip fare (f) tümör yükü de Gün 72. sabah sonlandırılır. <img alt="Şekil 3,"src = &quot;/ files / ftp_upload / 52.383 / 52383fig3highres.jpg&quot; /&gt; Şekil 3:. Spontan kolorektal kanser modelinde müdahale tedavinin etkinliğini izleme deneysel protokol, (a) baştan tamamlanma&gt; 50 hafta gerekir. (B) &#39;Terapötik müdahale tedavileri için kurulan tümörleri olan farelere tatbik edilmektedir. AOM (c) deney protokolü boyunca ve bundan haftalarca sonra birbirini takip eden 6 enjeksiyonlar için 1. günde enjekte edilmiştir. Endoskop (d), hayvanlarda, hastalığın ilerlemesini izlemek için gerçekleştirilir. Önerilen zamannoktaları aşılamadan iki haftada orada (tümör yükünü kurmak için) sonra Günü 0 (işlenmemiş) ve Hafta 8 (tümör izleme) ve içerir. Endoskop tedavi açısından izlemek için tedavi süresi boyunca haftada bir gerçekleştirilir. Deney (e) itibaren Hafta 40 artar bir vahşi tip fare (f) tümör yükü içinde Hafta 50 içinde sona ermektedir. </<html> p&gt; <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/52383/52383fig4highres.jpg" width="650" /> Şekil 4:. Donatımı set-up ekipman bireysel adet endoskopik birimi için deneysel set-up (a), belirtti. tek tek bileşenlerin katı endoskop (b) göstermektedir. Ölçek çubuğu = 2.5 cm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52383/52383fig4highres.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/52383/52383fig5highres.jpg" width="650" /> Şekil 5:. Endoskopi ile Puanlama hastalığı parametreleri bir taslak (a) Kolit Şiddeti Murin Endoskopik Endeksi (MEICS) olarak. Bireysel tümör puanlama parametreleri bir taslak (b).es / ftp_upload / 52.383 / 52383fig5highres.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için burayı tıklayınız. <img alt="Şekil 6," src="/files/ftp_upload/52383/52383fig6highres.jpg" width="650" /> Şekil 6: Temsilcisi tedavi tedaviler Temsilcisi kilo kaybı, endoskopik görüntüleri ve puanları:. (A) Akut mukozal hasar DSS-kaynaklı (b) sıralı takip geliştirilen AOM / DSS protokolü takip geliştirilen Tümörler (c) Tümörler.. AOM protokolü. Grup başına n = 3 fare. * P &lt;0.05, *** p &lt;0.001 (Student T-testi). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52383/52383fig6highres.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Non-invasive Assessment of the Efficacy of New Therapeutics for Intestinal Pathologies Using Serial Endoscopic Imaging of Live Mice at JoVE.com

Non-invasive Assessment of the Efficacy of New Therapeutics for Intestinal Pathologies Using Serial Endoscopic Imaging of Live Mice

We describe methods for longitudinal monitoring of the efficacy of therapeutics for the treatment of colonic pathologies in mice using a rigid endoscope. This protocol can be readily used for the characterization of the therapeutic response of an individual tumor in live mice and also for monitoring potential disease relapse.

Canlı Fareler Seri endoskopik Görüntüleme kullanma Bağırsak Patolojilerde Yeni Therapeutics Etkinliğinin Non-invaziv Değerlendirme

Animal models of inflammatory bowel disease (IBD) and colorectal cancer (CRC) have provided significant insight into the cell intrinsic and extrinsic ...

non-invasive-assessment-efficacy-new-therapeutics-for-intestinal

Research

JoVE Journal

Medicine

9.9K Görüntüleme.  The Walter and Eliza Hall Institute for Medical Research. We describe methods for longitudinal monitoring of the efficacy of therapeutics for the treatment of colonic pathologies in mice using a rigid endoscope. This protocol can be readily used for the characterization of the therapeutic response of an individual tumor in live mice and also for monitoring potential disease relapse.

Video: Non-invasive Assessment of the Efficacy of New Therapeutics for Intestinal Pathologies Using Serial Endoscopic Imaging of Live Mice

Magnetic Resonance Derived Myocardial Strain Assessment Using Feature Tracking

Purpose: An accurate and practical method to measure parameters like strain in myocardial tissue is of great clinical value, since it has been shown, that strain is a more sensitive and earlier marker for contractile dysfunction than the frequently used parameter EF. Current technologies for CMR are time consuming and difficult to implement in clinical practice. Feature tracking is a technology that can lead to more automization and robustness of quantitative analysis of medical images with less time consumption than comparable methods.
Methods: An automatic or manual input in a single phase serves as an initialization from which the system starts to track the displacement of individual patterns representing anatomical structures over time. The specialty of this method is that the images do not need to be manipulated in any way beforehand like e.g. tagging of CMR images.
Results: The method is very well suited for tracking muscular tissue and with this allowing quantitative elaboration of myocardium and also blood flow.
Conclusions: This new method offers a robust and time saving procedure to quantify myocardial tissue and blood with displacement, velocity and deformation parameters on regular sequences of CMR imaging. It therefore can be implemented in clinical practice.

An accurate and practical method to measure parameters like strain in myocardial tissue is of great clinical value, since it has been shown, that strain is a more sensitive and earlier marker for contractile dysfunction than the frequently used parameter EF.

Özellik Takibi Manyetik Rezonans Türetilmiş Miyokard Gerinim Değerlendirmesi

Purpose: An accurate and practical method to measure parameters like strain in myocardial tissue is of great clinical value, since it has been shown, that ...

Tıp

Non-invasive Imaging of Acute Allograft Rejection after Rat Renal Transplantation Using 18F-FDG PET

The number of patients with end-stage renal disease, and the number of kidney allograft recipients continuously increases. Episodes of acute cellular allograft rejection (AR) are a negative prognostic factor for long-term allograft survival, and its timely diagnosis is crucial for allograft function 1. At present, AR can only be definitely diagnosed by core-needle biopsy, which, as an invasive method, bares significant risk of graft injury or even loss. Moreover, biopsies are not feasible in patients taking anticoagulant drugs and the limited sampling site of this technique may result in false negative results if the AR is focal or patchy. As a consequence, this gave rise to an ongoing search for new AR detection methods, which often has to be done in animals including the use of various transplantation models.
Since the early 60s rat renal transplantation is a well-established experimental method for the examination and analysis of AR 2. We herein present in addition small animal positron emission tomography (PET) using 18F-fluorodeoxyglucose (FDG) to assess AR in an allogeneic uninephrectomized rat renal transplantation model and propose graft FDG-PET imaging as a new option for a non-invasive, specific and early diagnosis of AR also for the human situation 3. Further, this method can be applied for follow-up to improve monitoring of transplant rejection 4.

Non-invasive Imaging of Acute Allograft Rejection after Rat Renal Transplantation Using 18F-FDG PET

We herein present a rat renal transplantation model to non-invasively assess acute allograft rejection using positron emission tomography with 18F-fluorodeoxyglucose.

Sıçan Böbrek Nakli sonra Akut Allogreft Reddi non-invaziv Görüntüleme Kullanımı<sup&gt; 18</sup&gt; F-FDG PET

The number of patients with end-stage renal  disease, and the number of kidney allograft recipients continuously increases.  Episodes of acute cellular ...

Non-invasive Optical Measurement of Cerebral Metabolism and Hemodynamics in Infants

Perinatal brain injury remains a significant cause of infant mortality and morbidity, but there is not yet an effective bedside tool that can accurately screen for brain injury, monitor injury evolution, or assess response to therapy. The energy used by neurons is derived largely from tissue oxidative metabolism, and neural hyperactivity and cell death are reflected by corresponding changes in cerebral oxygen metabolism (CMRO2). Thus, measures of CMRO2 are reflective of neuronal viability and provide critical diagnostic information, making CMRO2 an ideal target for bedside measurement of brain health.
Brain-imaging techniques such as positron emission tomography (PET) and single-photon emission computed tomography (SPECT) yield measures of cerebral glucose and oxygen metabolism, but these techniques require the administration of radionucleotides, so they are used in only the most acute cases.
Continuous-wave near-infrared spectroscopy (CWNIRS) provides non-invasive and non-ionizing radiation measures of hemoglobin oxygen saturation (SO2) as a surrogate for cerebral oxygen consumption. However, SO2 is less than ideal as a surrogate for cerebral oxygen metabolism as it is influenced by both oxygen delivery and consumption. Furthermore, measurements of SO2 are not sensitive enough to detect brain injury hours after the insult 1,2, because oxygen consumption and delivery reach equilibrium after acute transients 3. We investigated the possibility of using more sophisticated NIRS optical methods to quantify cerebral oxygen metabolism at the bedside in healthy and brain-injured newborns. More specifically, we combined the frequency-domain NIRS (FDNIRS) measure of SO2 with the diffuse correlation spectroscopy (DCS) measure of blood flow index (CBFi) to yield an index of CMRO2 (CMRO2i) 4,5.
With the combined FDNIRS/DCS system we are able to quantify cerebral metabolism and hemodynamics. This represents an improvement over CWNIRS for detecting brain health, brain development, and response to therapy in neonates. Moreover, this method adheres to all neonatal intensive care unit (NICU) policies on infection control and institutional policies on laser safety. Future work will seek to integrate the two instruments to reduce acquisition time at the bedside and to implement real-time feedback on data quality to reduce the rate of data rejection.

We combined frequency-domain near-infrared spectroscopy measures of cerebral hemoglobin oxygenation with diffuse correlation spectroscopy measures of cerebral blood flow index to estimate an index of oxygen metabolism. We tested the utility of this measure as a bedside screening tool to evaluate the health and development of the newborn brain.

Bebeklerde Serebral Metabolizma ve Hemodinamiğin Noninvaziv Optik Ölçüm

Perinatal brain injury remains a significant cause of infant mortality  and morbidity, but there is not yet an effective bedside tool that can  accurately ...

Intranasal Administration of CNS Therapeutics to Awake Mice

Intranasal administration is a method of delivering therapeutic agents to the central nervous system (CNS). It is non-invasive and allows large molecules that do not cross the blood-brain barrier access to the CNS. Drugs are directly targeted to the CNS with intranasal delivery, reducing systemic exposure and thus unwanted systemic side effects1. Delivery from the nose to the CNS occurs within minutes along both the olfactory and trigeminal neural pathways via an extracellular route and does not require drug to bind to any receptor or axonal transport2. Intranasal delivery is a widely publicized method and is currently being used in human clinical trials3.
Intranasal delivery of drugs in animal models allows for initial evaluation of pharmacokinetic distribution and efficacy. With mice, it is possible to administer drugs to awake (non-anesthetized) animals on a regular basis using a specialized intranasal grip. Awake delivery is beneficial because it allows for long-term chronic dosing without anesthesia, it takes less time than with anesthesia, and can be learned and done by many people so that teams of technicians can dose large numbers of mice in short periods. Efficacy of therapeutics administered intranasally in this way to mice has been demonstrated in a number of studies including insulin in diabetic mouse models 4-6 and deferoxamine in Alzheimer's mouse models. 7,8
The intranasal grip for mice can be learned, but is not easy and requires practice, skill, and a precise grip to effectively deliver drug to the brain and avoid drainage to the lung and stomach. Mice are restrained by hand using a modified scruff in the non-dominant hand with the neck held parallel to the floor, while drug is delivered with a pipettor using the dominant hand. It usually takes 3-4 weeks of acclimating to handling before mice can be held with this grip without a stress response. We have prepared this JoVE video to make this intranasal delivery technique more accessible.

A method to intranasally administer drugs to awake mice for the purpose of targeting the brain is described. This method allows for repeat dosing over long periods using intranasal administration of drug without anesthesia, and nose-to-brain delivery with minimal systemic exposure.

Uyanık Fare CNS Therapeutics İntranazal İdaresi

Intranasal administration is a method of delivering  therapeutic agents to the central nervous system (CNS). It is  non-invasive and allows large ...

Non-invasive Assessment of Microvascular and Endothelial Function

The authors have utilized capillaroscopy and forearm blood flow techniques to investigate the role of microvascular dysfunction in pathogenesis of cardiovascular disease. Capillaroscopy is a non-invasive, relatively inexpensive methodology for directly visualizing the microcirculation. Percent capillary recruitment is assessed by dividing the increase in capillary density induced by postocclusive reactive hyperemia (postocclusive reactive hyperemia capillary density minus baseline capillary density), by the maximal capillary density (observed during passive venous occlusion). Percent perfused capillaries represents the proportion of all capillaries present that are perfused (functionally active), and is calculated by dividing postocclusive reactive hyperemia capillary density by the maximal capillary density. Both percent capillary recruitment and percent perfused capillaries reflect the number of functional capillaries. The forearm blood flow (FBF) technique provides accepted non-invasive measures of endothelial function: The ratio FBFmax/FBFbase is computed as an estimate of vasodilation, by dividing the mean of the four FBFmax values by the mean of the four FBFbase values. Forearm vascular resistance at maximal vasodilation (FVRmax) is calculated as the mean arterial pressure (MAP) divided by FBFmax. Both the capillaroscopy and forearm techniques are readily acceptable to patients and can be learned quickly.
The microvascular and endothelial function measures obtained using the methodologies described in this paper may have future utility in clinical patient cardiovascular risk-reduction strategies. As we have published reports demonstrating that microvascular and endothelial dysfunction are found in initial stages of hypertension including prehypertension, microvascular and endothelial function measures may eventually aid in early identification, risk-stratification and prevention of end-stage vascular pathology, with its potentially fatal consequences.

Capillaroscopy is a non-invasive, relatively inexpensive methodology for directly visualizing the microcirculation. The forearm blood flow technique provides accepted non-invasive measures of endothelial function.

Mikrovasküler ve Endotel Fonksiyonu Noninvaziv Değerlendirilmesi

The authors have utilized capillaroscopy and forearm blood flow techniques to investigate the role of microvascular dysfunction in pathogenesis of ...

Non-invasive Imaging and Analysis of Cerebral Ischemia in Living Rats Using Positron Emission Tomography with 18F-FDG

Stroke is the third leading cause of death among Americans 65 years of age or older1. The quality of life for patients who suffer from a stroke fails to return to normal in a large majority of patients2, which is mainly due to current lack of clinical treatment for acute stroke. This necessitates understanding the physiological effects of cerebral ischemia on brain tissue over time and is a major area of active research. Towards this end, experimental progress has been made using rats as a preclinical model for stroke, particularly, using non-invasive methods such as 18F-fluorodeoxyglucose (FDG) coupled with Positron Emission Tomography (PET) imaging3,10,17. Here we present a strategy for inducing cerebral ischemia in rats by middle cerebral artery occlusion (MCAO) that mimics focal cerebral ischemia in humans, and imaging its effects over 24 hr using FDG-PET coupled with X-ray computed tomography (CT) with an Albira PET-CT instrument. A VOI template atlas was subsequently fused to the cerebral rat data to enable a unbiased analysis of the brain and its sub-regions4. In addition, a method for 3D visualization of the FDG-PET-CT time course is presented. In summary, we present a detailed protocol for initiating, quantifying, and visualizing an induced ischemic stroke event in a living Sprague-Dawley rat in three dimensions using FDG-PET.

Non-invasive Imaging and Analysis of Cerebral Ischemia in Living Rats Using Positron Emission Tomography with 18F-FDG

Brain damage resulting from cerebral ischemia may be non-invasively imaged and studied in rats using pre-clinical positron emission tomography coupled with the injectable radioactive probe, 18F-fluorodeoxyglucose. Further, the use of modern software tools that include volume of interest (VOI) brain templates dramatically increase the quantitative information gleaned from these studies.

Pozitron Emisyon Tomografi ile kullanma Non-invaziv Görüntüleme ve Serebral iskemi Analizi Yaşam Sıçanlarda<sup&gt; 18</sup&gt; F-FDG

Stroke is the third leading cause of death among Americans 65 years of age or older1. The quality of life for patients who suffer from a stroke fails to ...

Murine Model for Non-invasive Imaging to Detect and Monitor Ovarian Cancer Recurrence

Epithelial ovarian cancer is the most lethal gynecologic malignancy in the United States. Although patients initially respond to the current standard of care consisting of surgical debulking and combination chemotherapy consisting of platinum and taxane compounds, almost 90% of patients recur within a few years. In these patients the development of chemoresistant disease limits the efficacy of currently available chemotherapy agents and therefore contributes to the high mortality. To discover novel therapy options that can target recurrent disease, appropriate animal models that closely mimic the clinical profile of patients with recurrent ovarian cancer are required. The challenge in monitoring intra-peritoneal (i.p.) disease limits the use of i.p. models and thus most xenografts are established subcutaneously. We have developed a sensitive optical imaging platform that allows the detection and anatomical location of i.p. tumor mass. The platform includes the use of optical reporters that extend from the visible light range to near infrared, which in combination with 2-dimensional X-ray co-registration can provide anatomical location of molecular signals. Detection is significantly improved by the use of a rotation system that drives the animal to multiple angular positions for 360 degree imaging, allowing the identification of tumors that are not visible in single orientation. This platform provides a unique model to non-invasively monitor tumor growth and evaluate the efficacy of new therapies for the prevention or treatment of recurrent ovarian cancer.

We describe a non-invasive animal imaging platform that allows the detection, quantification, and monitoring of ovarian cancer growth and recurrence. This intra-peritoneal xenograft model mimics the clinical profile of patients with ovarian cancer.

Non-invaziv Görüntüleme için fare modeli Algılama ve Monitör Yumurtalık Kanseri nüks için

Epithelial ovarian cancer is the most lethal gynecologic malignancy in the United States. Although patients initially respond to the current standard of ...

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Mouse models are widely used to study pathogenesis of human diseases and to evaluate diagnostic procedures as well as therapeutic interventions preclinically. However, valid assessment of pathological alterations often requires histological analysis, and when performed ex vivo, necessitates death of the animal. Therefore in conventional experimental settings, intra-individual follow-up examinations are rarely possible. Thus, development of murine endoscopy in live mice enables investigators for the first time to both directly visualize the gastrointestinal mucosa and also repeat the procedure to monitor for alterations. Numerous applications for in vivo murine endoscopy exist, including studying intestinal inflammation or wound healing, obtaining mucosal biopsies repeatedly, and to locally administer diagnostic or therapeutic agents using miniature injection catheters. Most recently, molecular imaging has extended diagnostic imaging modalities allowing specific detection of distinct target molecules using specific photoprobes. In conclusion, murine endoscopy has emerged as a novel cutting-edge technology for diagnostic experimental in vivo imaging and may significantly impact on preclinical research in various fields.

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Small animal imaging techniques allow serial diagnostic examinations and therapeutic interventions in vivo. Recently, the scope of applications has significantly widened and currently includes assessment of colonic tumor development, wound healing and monitoring of inflammation. This protocol illustrates these diverse potential applications of murine endoscopy.

Murin için Endoskop<em&gt; In Vivo</em&gt; Karsinojenez ve bağırsak Değerlendirilmesi Multimodaller Görüntüleme Yara İyileşmesi ve İltihap

Mouse models are widely used to study pathogenesis of human diseases and to evaluate diagnostic procedures as well as therapeutic interventions ...

Non-invasive Assessment of Dorsiflexor Muscle Function in Mice

Assessment of skeletal muscle contractile function is an important measurement for both clinical and research purposes. Numerous conditions can negatively affect skeletal muscle. This can result in a loss of muscle mass (atrophy) and/or loss of muscle quality (reduced force per unit of muscle mass), both of which are prevalent in chronic disease, muscle-specific disease, immobilization, and aging (sarcopenia). Skeletal muscle function in animals can be evaluated by a range of different tests. All tests have limitations related to the physiological testing environment, and the selection of a specific test often depends on the nature of the experiments. Here, we describe an in vivo, non-invasive technique involving a helpful and easy assessment of force frequency-curve (FFC) in mice that can be performed on the same animal over time. This permits monitoring of disease progression and/or efficacy&#160;of a potential therapeutic treatment.

Measurement of rodent skeletal muscle contractile function is a useful tool that can be used to track disease progression as well as efficacy of therapeutic intervention. We describe here the non-invasive, in vivo assessment of the dorsiflexor muscles that can be repeated over time in the same mouse.

Non-invaziv Dorsiflexor kas fonksiyonu farelerde değerlendirilmesi

Assessment of skeletal muscle contractile function is an important measurement for both clinical and research purposes. Numerous conditions can negatively ...

A Novel Non-invasive Method for the Detection of Elevated Intra-compartmental Pressures of the Leg

Acute Compartment Syndrome is a devastating consequence of musculoskeletal trauma. Currently the diagnosis is based on clinical signs and symptoms, and while adjuncts such as invasive intra-compartmental pressure measurements are often used to corroborate the physical exam findings, there remains no reliable objective test to aid in the decision to perform a decompressive fasciotomy. In a cadaver model of compartment syndrome, an ultrasound (US) based method has been shown to be a reliable measurement of increased intra-compartmental pressure. An absolute pressure of &#62;100 mbar or a difference of 50 mbar in the CFFP between the legs can be considered pathologic. Using an ultrasound transducer, coupled with a pressure sensor, the pressure needed to flatten the superficial fascia of the anterior compartment of lower legs (Compartment Fascia Flattening Pressure [CFFP]) can be measured. The CFFP of the injured leg is compared to the CFFP of the uninjured leg. This US measured index can then serve as an adjunct to the physical exam in evaluating injured lower extremities and assessing the need for decompressive fasciotomy. The advantages of this protocol include: being a non-invasive method and an easily reproducible technique.

An ultrasound probe coupled with a pressure sensor is used to assess the intra-compartmental pressure of the leg by directly measuring the compartment fascia flattening pressure (CFFP). This non-invasive protocol will provide reliable assessment of the pressure inside the anterior muscular compartment of the lower leg.

Bir roman non-invaziv yöntem yüksek Intra-bölmeli basınç tespiti için bacak

Acute Compartment Syndrome is a devastating consequence of musculoskeletal trauma. Currently the diagnosis is based on clinical signs and symptoms, and ...