Biz editoryal yardım için Jennifer Petrosino ve David DiSilvestro teşekkür etmek istiyorum. Bu araştırma Amerikan Yumurta Kurulu ve Novo Nordisk İlaç gelen Ödülü Numarası 10040042 yanı sıra osu Gıda İnovasyon Merkezi, Ofis Uluslararası İlişkiler, İleri Fonksiyonel Gıdalar Araştırma Merkezi ve Girişimcilik yanı sıra Ödül Numarası 20020728 tarafından desteklenen Ulusal Bilim Vakfı EEC-0914790 (LJL) hibe. Tıbbi Araştırma ve NIH Yol Haritası ile Sağlık (OD) Direktörü, National Institutes Ofisi tarafından finanse edilen ve desteklenen Ulusal Araştırma Kaynakları Merkezi&#39;nden Ödülü Numarası R21OD017244 (OZ) ile UL1RR025755 (OSUCCC) tarafından desteklenmiştir açıklanan proje, NCI P30CA16058. Içeriği sadece yazarların sorumluluğundadır ve mutlaka Ulusal Araştırma Kaynakları Merkezi veya Ulusal Sağlık Enstitüleri resmi görüşlerini temsil etmemektedir.

Çalışma protokolü Ohio State Üniversitesi Etik Komiteleri tarafından onaylandı. Hayvan deneyleri IACUC protokolü tarafından kabul edildi. Tüm prosedürler laminer akışı ile seviye 2 biyogüvenlik kabini altında gerçekleştirildi. Biz tüm standart güvenlik şartlarını ve prosedürleri takip etti. mikrokapsüllerin hazırlanması için mikro-kapsülleme tekniği, 18 17 tarif edildiği gibi gerçekleştirilmiştir. Malzemelerin 1. Hazırlıklar <ol><li> Otoklava fizyolojik tuzlu su (su içinde% 0.9 NaCI) içinde% 2 sodyum alginat çözeltisi 10 ml hazırlayın. Fizyolojik tuzlu su içinde% 0.05 PLL çözeltisi hazırlayın. Bir gün önce bu çözümleri hazırlayın ve gece boyunca karıştırın. Kullanmadan önce 0.22 mikron filtre ile çözüm Filtre. </li><li> 50 mM sodyum sitrat ve% 0,9 NaCl solüsyonlarının 100 mM CaCl 2 hazırlayın ve bunları otoklav. </li><li> Tüm solüsyonlar, iğneler, elektrotlar ve beher otoklavlayın. Tıkanmasını önlemek için tel ile iyice temiz iğneler. </li><li> (102 mikrokapsüller kuyunun her cm 2 için gerekli ve kapsül 18 başına 500 hücre yaklaşık vardır edilir) kapsüller için kullanılacak hücrelerin uygun miktarda belirleyin. Iki milyondan hücre başına sodyum aljinat 1 ml kullanın. </li><li> Yüksek glikoz bir &quot;Fibroblast büyüme ortamı&quot; ihtiva eden,% 10 dana serumu, 100 U / ml penisilin / streptomisin hazırlanması (4,500 mg / L glikoz) Dulbecco&#39;nun modifiye edilmiş Eagle ortamı (DMEM). <ol><li> DMEM,% 10 fetal sığır serumu, 10 ug / ml insülin, 1 uM deksametazon, 0.5 mM 3-izobütil-1-metil ksantin ve 100 U / ml penisilin / streptomisin içeren bir &#39;farklılaştırma ortamı I&#39; hazırlayın. </li><li> DMEM içinde &#39;farklılaştırma ortamı II&#39; ihtiva eden,% 10 fetal sığır serumu, 10 ug / ml insülin, 100 U / ml penisilin / streptomisin hazırlayın. </li></ol></li><li> (RI 10 mi Radyo-immünopresipitasyon deney tamponu başına bir proteaz inhibitörü tablet ihtiva eden liziz tamponu hazırlayınPA tamponu). </li></ol> 2. Alginat, mikro-boncuklar hazırlanması (Şekil 1A) <ol><li> Hücre kültürü şişesi eski orta çıkarın. 10 ml PBS ile hücre durulayın. % 0.25 tripsin-EDTA (bir birbirine bağlı T175 şişesi başına 2 mL) ile süspansiyon içinde hücrelerin getirin. </li><li> Hemasitometre kullanarak hücre süspansiyonu hücreleri saymak. Hücre süspansiyonu 10 mi kısım kullanın ve üreticinin talimatlarına göre hücreleri sayın. 5 dakika boyunca oda sıcaklığında 480 x g&#39;de santrifüj ortamda kalan hücreler santrifüj. </li><li> Aşama 1.4 &#39;de tarif edildiği gibi, sodyum alginat hücre pelletini süspanse edin. 5 ml şırıngaya sodyum alginat hücre çözeltisi aktarın. </li><li> Bir 23-gauge iğne ekleme, çözelti içinde hava kabarcıklarını çıkarmak ve havanın 1 ml cep oluşturmak için şırınga ters. </li><li> Kapsülleyicide iğne ağzı altında 100 mM CaCl2 çözeltisi 144 ml içeren, küçük bir beher (180 mi) yerleştirin. Uç approxim ile kapsülleyicide elektrodu takın100 mM CaCl2 çözeltisinin yüzey üzerinde ulaştırılması 2.5 cm. </li><li> Sıkı şırınga pompası sodyum alginat hücre çözeltisi ihtiva eden şırınga yerleştirin. Şırınga açılması kauçuk tüp takın. Sodyum aljinat-hücreli çözüm tüp aracılığıyla yarıya girene kadar pistonu itin. 5.4 kV gerilim ayarlayın. Şırınga pompası 12.06 mm çapında ayarlayın. 3 ml / saat hız ayarlayın. Pompayı başlatın. Kapsülleyicide açın ve 5.4 kV gerilim korumak. </li><li> Kaputun penceresini kapatın ve aljinat mikro oluşumu sonuna kadar gereksiz titreşimi önlemek. Tüm çözeltisi iğne içinden geçtikten sonra, PLL ile kaplamadan önce 20 dakika daha 100 mM CaCl2 çözeltisi içinde aljinat top şeklindeki mikroboncukları katılaşır. </li></ol> PLL ile 3. Kaplama mikro boncuklar (Şekil 1B) <ol><li> Sodyum aljinat hücre top şeklindeki mikroboncukları içeren beher çıkarın ve bu Microb transferi50 ml&#39;lik bir santrifüj tüpüne EADS. Mikroboncuk pelet CaCI2 çözeltisi çıkarın. </li><li> % 0.9 NaCl, 30 ml ekleyerek aljinat-hücresi top şeklindeki mikroboncukları yıkayın. Hafifçe elinizle tüpü çalkalayın. Mikro-yerçekimi tarafından çöktürülmüş sonra 25 ml pipet ile% 0.9 NaCl çıkarın. 3 yıkama olmak üzere toplam iki kez daha tekrarlayın. </li><li> Sodyum alginat çözeltisi, her 1 ml% 0.05 PLL çözeltisi 10 ml kullanın. 10 dakika boyunca dakikada 1.000 devirlerde% 0.05 PLL ve vorteks ekleyin. Not: Genellikle, 10 dakika PLL kaplama için yeterlidir. </li><li> PLL kaplama oluşturulduktan sonra, PLL çözüm kaldırmak ve 3.2 de tarif edildiği gibi kapsülleri 3 kez yıkayın. </li></ol> Aljinat Core 4. Sökme (Şekil 1C) <ol><li> 50 mM sodyum sitrat çözeltisi 30 ml ilave edilir. 5 dakika veya tüm sodyum aljinat çözülür kadar bekleyin. Aşama 3.1.1 tarif edildiği gibi üç kez yıkayın kapsüller. </li><li> % 0.9 NaCl kaldır 50 ml tüp kültür ortamı 20 ml ekleyinve bir hücre kültürü şişesine hücreleri içeren tüm kapsülleri aktarın. Standart hücre kültürü koşullarında 18 altında kapsüllü hücreleri taşıyınız. </li></ol> Vitro Uygulamaları 5. Hücreleri arasında Xenograftlarında ve Host Hücre Etkileşimleri veya metabolit Blake Kinetiği / akışını Eğitim için (Şekil 2) <ol><li> Ko-kültürler için, birbirine karışana kadar 24 oyuklu bir plaka üzerinde kültür konakçı hücreler sunar. Kültürleme preadipositler için &#39;Fibroblast Büyüme Orta&#39; kullanın. </li><li> 24 oyuklu bir plaka ihtiva eden konakçı hücreler konfluent içine aktarın mikrokapsüller. Bir tek tabaka elde etmek için mikro kapsüller (102 mikro / göz cm2) ekleyin. </li><li> Altı gün Farklılaşma Orta II öncesi adiposit Farklılaşma Orta I. ile farklılaşmayı Her 48 saat, değişim ortamını neden olur. RIPA tamponu içinde Hücreleri,. Western blot kullanılarak protein ekspresyonunu analiz etmek için durum başına 50 ug protein kullanın. </li></ol> Suların Vivo Başvurusu 6.Obezite ent (Şekil 3) <ol><li> Anestezi idamesi için oksijen ile anestezi ve% 2 izofluran uyarılması için oksijen ile% 4 izofluran karıştırın. Ayak tutam tarafından yeterli anestezi derinliği onaylayın. <ol><li> Kurumasını kornealar korumak için gözlerinin üzerinde anti-kaşıntı merhem sürün. </li></ol></li><li> Böyle yeşil floresan proteininin (GFP) olarak kalıcı yapay floresan proteini ile etiketlenmiş kapsüllü hücreleri kullanın. </li><li> 3 ml şırınga ve kapsüllü hücreleri enjekte etmek için 20 iğne kullanın. <ol><li> 0.5 x 10 6 hücre Şekil 3&#39;te gösterildiği gibi, bir gonad ve böbrekler intraperitoneal bir alanda yer almaktadır, her Iab yağ depo içine 0.2 ml PBS içinde süspansiyon haline enjekte edilir. Ortalama ağırlığı olan farelerde bu PBS hacmi ve hücre sayısı kullanın 40 gr. Farklı ağırlık ya da doza bağımlı etkileri belirlenmesi için sahip farelerde hücre sayısını ve ses düzeyini ayarlayın. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Vogeli, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+chronic+conditions:+prevalence,+health+consequences,+and+implications+for+quality,+care+management,+and+costs.">Multiple chronic conditions: prevalence, health consequences, and implications for quality, care management, and costs.</a> Journal of general internal medicine. 22, 391-395 (2007).</li><li>Vija, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cells:+Stem+cell+therapy+perspectives+for+type+1+diabetes.">Mesenchymal stem cells: Stem cell therapy perspectives for type 1 diabetes.</a> Diabetes &amp; metabolism. 35, 85-93 (2009).</li><li>Acarregui, A., Orive, G., Pedraz, J. L., Hernandez, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+applications+of+encapsulated+cells.">Therapeutic applications of encapsulated cells.</a> Methods in molecular biology. 1051, 349-364 (2013).</li><li>Chang, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Semipermeable+Microcapsules.">Semipermeable Microcapsules.</a> Science. 146, 524-525 (1964).</li><li>Elliott, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+encapsulated+porcine+islets+from+a+type+1+diabetic+patient+9.5+yr+after+xenotransplantation.">Live encapsulated porcine islets from a type 1 diabetic patient 9.5 yr after xenotransplantation.</a> Xenotransplantation. 14, 157-161 (2007).</li><li>Lim, F., Sun, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microencapsulated+islets+as+bioartificial+endocrine+pancreas.">Microencapsulated islets as bioartificial endocrine pancreas.</a> Science. 210, 908-910 (1980).</li><li>Vos, P., Spasojevic, M., Faas, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+diabetes+with+encapsulated+islets.">Treatment of diabetes with encapsulated islets.</a> Advances in experimental medicine and biology. 670, 38-53 (2010).</li><li>Cotton, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+challenges+in+cell-encapsulation+technology.">Engineering challenges in cell-encapsulation technology.</a> Trends in biotechnology. 14, 158-162 (1996).</li><li>Yach, D., Stuckler, D., Brownell, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiologic+and+economic+consequences+of+the+global+epidemics+of+obesity+and+diabetes.">Epidemiologic and economic consequences of the global epidemics of obesity and diabetes.</a> Nature medicine. 12, 62-66 (2006).</li><li>Ng, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global,+regional,+and+national+prevalence+of+overweight+and+obesity+in+children+and+adults+during+1980-2013:+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study+2013.">Global, regional, and national prevalence of overweight and obesity in children and adults during 1980-2013: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2013.</a> Lancet. 384, 766-781 (2014).</li><li>Kissebah, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relation+of+body+fat+distribution+to+metabolic+complications+of+obesity.">Relation of body fat distribution to metabolic complications of obesity.</a> The Journal of clinical endocrinology and metabolism. 54, 254-260 (1982).</li><li>Bray, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relation+of+central+adiposity+and+body+mass+index+to+the+development+of+diabetes+in+the+Diabetes+Prevention+Program.">Relation of central adiposity and body mass index to the development of diabetes in the Diabetes Prevention Program.</a> The American journal of clinical nutrition. 87, 1212-1218 (2008).</li><li>Klein, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+are+subcutaneous+adipocytes+really+good+for.">What are subcutaneous adipocytes really good for.</a> Experimental dermatology. 16, 45-70 (2007).</li><li>Tran, T. T., Yamamoto, Y., Gesta, S., Kahn, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beneficial+effects+of+subcutaneous+fat+transplantation+on+metabolism.">Beneficial effects of subcutaneous fat transplantation on metabolism.</a> Cell metabolism. 7, 410-420 (2008).</li><li>Seale, P., Kajimura, S., Spiegelman, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+control+of+brown+adipocyte+development+and+physiological+function--of+mice+and+men.">Transcriptional control of brown adipocyte development and physiological function--of mice and men.</a> Genes &amp; development. 23, 788-797 (2009).</li><li>Kozak, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+variation+in+brown+fat+activity+and+body+weight+regulation+in+mice:+lessons+for+human+studies.">Genetic variation in brown fat activity and body weight regulation in mice: lessons for human studies.</a> Biochimica et biophysica acta. 1842, 370-376 (2014).</li><li>Zhang, X., He, H., Yen, C., Ho, W., Lee, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+biodegradable,+immunoprotective,+dual+nanoporous+capsule+for+cell-based+therapies.">A biodegradable, immunoprotective, dual nanoporous capsule for cell-based therapies.</a> Biomaterials. 29, 4253-4259 (2008).</li><li>Yang, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+prolonged+survival+of+fibroblasts+with+forced+lipid+catabolism+in+visceral+fat+following+encapsulation+in+alginate-poly-L-lysine.">The prolonged survival of fibroblasts with forced lipid catabolism in visceral fat following encapsulation in alginate-poly-L-lysine.</a> Biomaterials. 33, 5638-5649 (2012).</li><li>Chang, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Artificial+cells+with+emphasis+on+bioencapsulation+in+biotechnology.">Artificial cells with emphasis on bioencapsulation in biotechnology.</a> Biotechnology annual review. 1, 267-295 (1995).</li><li>Chang, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hybrid+artificial+cells:+microencapsulation+of+living+cells.">Hybrid artificial cells: microencapsulation of living cells.</a> ASAIO journal. 38, 128-130 (1992).</li><li>Koo, J., Chang, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secretion+of+erythropoietin+from+microencapsulated+rat+kidney+cells:+preliminary+results.">Secretion of erythropoietin from microencapsulated rat kidney cells: preliminary results.</a> The International journal of artificial organs. 16, 557-560 (1993).</li><li>Weidenauer, U., Bodmer, D., Kissel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microencapsulation+of+hydrophilic+drug+substances+using+biodegradable+polyesters.+Part+I:+evaluation+of+different+techniques+for+the+encapsulation+of+pamidronate+di-sodium+salt.">Microencapsulation of hydrophilic drug substances using biodegradable polyesters. Part I: evaluation of different techniques for the encapsulation of pamidronate di-sodium salt.</a> Journal of microencapsulation. 20, 509-524 (2003).</li><li>Smidsrod, O., Skjak-Braek, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alginate+as+immobilization+matrix+for+cells.">Alginate as immobilization matrix for cells.</a> Trends in biotechnology. 8, 71-78 (1990).</li><li>Lewinska, D., Rosinski, S., Werynski, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+process+conditions+during+impulsed+electrostatic+droplet+formation+on+size+distribution+of+hydrogel+beads.">Influence of process conditions during impulsed electrostatic droplet formation on size distribution of hydrogel beads.</a> Artificial cells, blood substitutes, and immobilization biotechnology. 32, 41-53 (2004).</li><li>Chan, E. S., Lee, B. B., Ravindra, P., Poncelet, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prediction+models+for+shape+and+size+of+ca-alginate+macrobeads+produced+through+extrusion-dripping+method.">Prediction models for shape and size of ca-alginate macrobeads produced through extrusion-dripping method.</a> Journal of colloid and interface science. 338, 62-72 (2009).</li><li>Bhujbal, S. V., Paredes-Juarez, G. A., Niclou, S. P., de Vos, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+influencing+the+mechanical+stability+of+alginate+beads+applicable+for+immunoisolation+of+mammalian+cells.">Factors influencing the mechanical stability of alginate beads applicable for immunoisolation of mammalian cells.</a> Journal of the behavior of biomedical materials. 37, 196-208 (2014).</li><li>Gushchina, L. V., Yasmeen, R., Ziouzenkova, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moderate+vitamin+A+supplementation+in+obese+mice+regulates+tissue+factor+and+cytokine+production+in+a+sex-specific+manner.">Moderate vitamin A supplementation in obese mice regulates tissue factor and cytokine production in a sex-specific manner.</a> Archives of biochemistry and biophysics. 539, 239-247 (2013).</li><li>Ziouzenkova, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinaldehyde+represses+adipogenesis+and+diet-induced+obesity.">Retinaldehyde represses adipogenesis and diet-induced obesity.</a> Nature. 13, 695-702 (2007).</li><li>Yasmeen, R., Jeyakumar, S. M., Reichert, B., Yang, F., Ziouzenkova, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+contribution+of+vitamin+A+to+autocrine+regulation+of+fat+depots.">The contribution of vitamin A to autocrine regulation of fat depots.</a> Biochimica et biophysica acta. 1821, 190-197 (2012).</li><li>Liu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miR-133a+regulates+adipocyte+browning+in+vivo.">miR-133a regulates adipocyte browning in vivo.</a> PLoS genetics. 9, e1003626 (2013).</li><li>Rao, R. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Meteorin-like+is+a+hormone+that+regulates+immune-adipose+interactions+to+increase+beige+fat+thermogenesis.">Meteorin-like is a hormone that regulates immune-adipose interactions to increase beige fat thermogenesis.</a> Cell. 157, 1279-1291 (2014).</li><li>Kir, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumour-derived+PTH-related+protein+triggers+adipose+tissue+browning+and+cancer+cachexia.">Tumour-derived PTH-related protein triggers adipose tissue browning and cancer cachexia.</a> Nature. 513, 100-104 (2014).</li></ol>

No conflicts of interest declared.

Çeşitli yöntemler, kurutma, haddeleme, ve emülsiyonun 19 de dahil olmak üzere hücreleri kapsüllemek için kullanılmıştır. Bu yöntemde, aljinat taneleri daha sonra PLL ile kaplanmış ve aljinat çekirdek kapsülleme tamamlamak için çözülmüş olan, bir iğne aracılığıyla ekstrüde edilir. Bu yöntem yıldır kullanılmaktadır, ancak, arzu edilen boyut ve küresel şekle sahip tanelerin oluşumu hala zordur. kapsüllerin boyutu, sodyum aljinat çözeltisi, ekstruder çapı ve iğne ucu ve ...

Kronik hastalıkların 1 artan insidansı tedavi hücre popülasyonlarının 2 nakli çalışmalar teşvik etmiştir. Sinjenik veya allojenik kök hücreleri, bu uygulamalar 2 için en yaygın olarak kullanılan hücre tipi vardır. Bununla birlikte, bu tedaviler implantasyondan sonra farklılaşması ve kök hücre göçü kontrol izin vermez ve maliyet etkin değildir. Yararlı fonksiyonları ile genetiği değiştirilmiş hücrelerin Transplantasyon birçok hastalığın tedavisini geliştirmek öngörmektedir. Ancak genetik hücre değişiklikleri konağın bağışıklık sistemi tarafından tanınan, bu nedenle, bu tedaviler immünosupresyonu 3 gerektirir. Insülin üreten hücrelerin kapsüllenmesi Chang 4 tarafından geliştirilmiştir. teknik, bir kalsiyum klorür çözeltisi içine daldırılır alginat damlacıklar halinde hücrelerin kapsüllenmesi dayanmaktadır. Aljinat molekülleri (G) (E) manuronik ve guluronik asit oluşur ve Ca ile bağlı olabilir 2+. Jelleşme sonra, taneler, bir poli-L-lisin (PLL) çözeltisi süspanse edilir. Bu adım sırasında, PLL kapsül membran oluşturan alginat moleküllerinde G ve M bağlanır. kapsül, zarın gözeneklilik, M ve PLL konsantrasyonları, inkübasyon süresi, ve sıcaklığı değiştirilerek modüle edilebilir. PLL bağlanmasının, aynı zamanda Çeşidi ve aljinat konsantrasyonuna bağlıdır. Ca + 2 iyonları ile çapraz bağlanmış Alginat matrisler, fizyolojik bir ortamda ya da fosfat ve sitrat iyonları konsantrasyonunun ortak tampon çözeltiler içinde kararlı değildir. Bu tamponlar alginattan Ca 2 + özü ve çekirdeği sıvılaştırılması yapabilirsiniz. Aljinat çekirdeğin Sıvılaşma hücresel hareket ve büyüme için kapsül içindeki alan sağlar. Polikatyonik poli-L-lisin (APL) polianyonik Aljinatta kapsüllenmiş hücreler immünoglobülin için geçirgen olan, ancak toksin besin girişini ve çıkışını sahiptir. Bunlar APL en özellikler uzun vadeli su etkinleştirmekgenetik olarak farklı bilgisayarlar içine naklinden sonra kapsüllü hücrelerin rvival. Elliott ve diğ., Dokuz yıllık implantasyon 5 sonra, bir insan hastada kapsüllenmiş domuz pankreatik hücrelerin saptanmıştır hayatta bildirilmiştir. Kapsülleme teknikleri, mikrokapsülleme (3-800 um) ve macroencapsulation (daha büyük 1000 um) olarak sınıflandırılabilir. Mikrokapsüller macrocapsules 6 daha dayanıklıdır. Dr Chang ve 1964 yılında meslektaşları tarafından keşfedilmesinden bu yana, mikroenkapsülasyon yaygın insülin üreten hücreler anabolik, diğer hormonlar ve biyoaktif moleküllerin 7 enkapsülasyonunda kullanılmıştır. Bu tedaviler fibrozis ve bağışıklık yanıtı 8 olmak üzere konak dokusunda çeşitli zorluklarla karşı karşıya. Başlangıçta, biyopolimerlerin kalitesine ilişkin yan etkiler çözüme kavuşturuldu. Bununla birlikte, anabolik hücrelerinin nakli de hormon overpr bir sonucu olarak, örneğin fibroz gibi yan etkilere, başlatırözel bir bezin dışına oduction. Son yıllarda, obezite ve tip 2 diyabet salgın boyutlarına 9 ulaşmıştır. Yetişkin insanların% 30&#39;dan fazla dünya çapında kilolu ve 10 obez. Artan karın içi (IAB) yağ oluşumu kronik inflamasyon insidansını artırır ve tip 2 diyabet, kardiyovasküler hastalık, bazı kanserler ve diğer morbidite 11-13 teşvik etmektedir. Çeşitli türden kanıtlar IAB yağ ile ilişkili patogenez belirli adipositlerce önlenebilir önerdi. Son çalışmalar metabolizma artırmak ve in vivo 14 kemirgenlerde obezite ve insülin direnci azaltabilir IAB bölgeye deri altı adipositlere bu nakli göstermiştir. Obezite ve insülin direnci etkili azalma, ısı 15,16 şeklinde enerji dağıtma yeteneğine sahip termojenik adipositler ile ilişkilendirilmiştir. Adipositlerin termojenik modifikasyonu kararlı transfeksiyonu ile elde edilebilirBu tür eşleşmemiş protein 1 (UCP1) veya UCP1 ve diğer termojenik genlerin 15,16 ekspresyonunu düzenleyen genlerin mitokondriyal proton uncoupling, katılan genlerin. Bizim son çalışmalar aldehit dehidrojenaz 1 a1 (Aldh1a1) yetersizlik bu farelerde 17,18 obezite ve insülin direnci azaltır IAB yağ termojenik yeniden yol açtığını gösterdi. Özellikle, termojenik Aldh1a1 eksikliği kapsüllenmesi (Aldh1a1 - / -) Preadipositler Iab yağ 18 tedavisi için yeni bir terapötik fırsat düşündüren obez vahşi tip farelerde Iab yağ aynı terapötik etkisine aracılık eder. Deneysel ayarlarında, kapsüllü hücreler maliyet etkin bir şekilde 19 özel hücre popülasyonlarının etkilerini incelemek için araştırmacılar sağlar. Burada obezite bir fare modelinde termojenik katabolik hücre çizgisinin kapsüllenmesi ve laboratuar ve terapötik uygulama yöntemini tartışır. protokol t açıklarmikrokapsül üretiminde (Şekil 1) için HREE fazlar: alginat mikro (Şekil 1A), polikatyonik poli-L-lisin (PLL), mikro yüzeyi (Şekil 1B) ilgili membranlar, oluşumu ve çıkarılması oluşumu alginat çekirdekler (Şekil 1C).

<table><tbody><tr><td>Encapsulation device (VAR V1)</td><td>Nisco</td><td>LIN-0042</td><td>None</td></tr><tr><td>KD scientific syringe pump</td><td>KD scientific</td><td>780100Y</td><td>None</td></tr><tr><td>Olympus microscope&amp;nbsp;</td><td>Olympus Optical</td><td>IX70-S8F2</td><td>None</td></tr><tr><td>Sodium alginate</td><td>Sigma</td><td>MKBP8122V</td><td>None</td></tr><tr><td>Poly-L-lysine hydrobromide (PLL)</td><td>Sigma</td><td>020M5006V</td><td>None</td></tr><tr><td>Calcium chloride</td><td>Sigma</td><td>SLBJ2662V</td><td>None</td></tr><tr><td>Sodium citrate tribasic dihydrate</td><td>Sigma</td><td>030M0200</td><td>None</td></tr><tr><td>Sodium chloride</td><td>Sigma</td><td>SLBD2595V</td><td>None</td></tr><tr><td>Mini-PROTEAN TGX Gels</td><td>Bio-Rad</td><td>456-1093</td><td>None</td></tr><tr><td>ATGL primary antibody (from rabbit)</td><td>Cell Signaling</td><td>2138S</td><td>None</td></tr><tr><td>Secondary anti body (anti rabbit)</td><td>LI-COR</td><td>926-68071</td><td>None</td></tr><tr><td>Radio-Immunoprecipitation Assay (RIPA) buffer</td><td>Boston BioProducts</td><td>D25Y6Z</td><td>None</td></tr><tr><td>Phosphate buffered saline (PBS)</td><td>Sigma</td><td>RNBD2893</td><td>None</td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td>None</td></tr><tr><td>Cortizone 10 anti-itch ointment</td><td>Cortizone 10</td><td>C4029138</td><td>None</td></tr><tr><td>Dulbecco&#039;s Modified Eagle Medium (DMEM)</td><td>Gibco</td><td>11965-092</td><td>None</td></tr><tr><td>Newborn calf serum (CS)</td><td>Sigma</td><td>N4762</td><td>None</td></tr><tr><td>Fetal bovine serum (FBS)</td><td>Sigma</td><td>F4135</td><td>None</td></tr><tr><td>3-Isobutyl-1-methylxanthine (IBMX)</td><td>Sigma</td><td>I0516</td><td>None</td></tr><tr><td>Dexamethasone</td><td>Sigma</td><td>D4902</td><td>None</td></tr><tr><td>Insulin (bovine)</td><td>Sigma</td><td>I5879</td><td>None</td></tr><tr><td>Protease inhibitor cocktail tablets</td><td>Roche</td><td>4693159001</td><td>None</td></tr></tbody></table>

encapsulation thermogenic preadipocytes for transplantation into adipose tissue depots

Hücre kapsülleme yarı geçirgen zarlar içinde canlı hücre tutmak üzere geliştirilmiştir. engrafted kapsüllü hücreler uzun süreli sağkalım elde etmek için tedavi edilen hastaya dokularında düşük molekül ağırlıklı metabolitleri alışverişi yapabilirsiniz. yarı-geçirgen zar, bağışıklık sistemi tarafından reddini önlemek için kapsüllenmiş hücrelerin engrafted sağlar. Kapsülleme işlemi insülin gibi biyolojik olarak aktif bileşiklerin, başka hormonlar ve sitokinler kontrollü bir şekilde serbest bırakılmasını sağlayacak şekilde tasarlanmıştır. Burada obez farelerin karın içi adipoz dokusunda ısı üretimi ve enerji tüketimine (termogenez) için lipitler tüketen katabolik hücrelerin kapsüllenmesi için bir yöntem tarif eder. Termojenik katabolik hücrelerin kapsüllenmesi obezitenin önlenmesi ve tedavisi için potansiyel olarak uygulanabilir ve tip 2 diyabet olabilir. Katabolik hücrelerin başka potansiyel uygulama alkoller veya diğer toksik metabolitler ve çevresel kirleticiler gelen detoksifikasyon içerebilir.

Şekil 1 mikro-üretimin her aşaması mikroskop altında kontrol edilebilir olduğunu göstermektedir. Şekil 2A co-kültür nasıl adipositleri kapsüllü hücreleri tek tabaka ile gösterir. Şekil 2B adiposit / mikro kapsüller ko-kültürlerini kullanarak kantitatif çalışma temsili bir örnek olduğunu adipositler Western blot ile analiz edilmiştir bölüm 5. Lisatlar tarif edilmiştir. Kapsüllenmiş hücrelerin Bu deneyde analiz edilmemiştir. 1000 seyreltme:...

Watch this Scientific Journal Video about Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots at JoVE.com

Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots

Here, we present a protocol for encapsulation of catabolic cells, which consume lipids for heat production in intra-abdominal adipose tissue and increase energy dissipation in obese mice.

Yağ Dokusu Depolarında içine Nakli Enkapsülasyon termojenik Preadipositler

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular ...

encapsulation-thermogenic-preadipocytes-for-transplantation-into

Research

JoVE Journal

Medicine

9.3K Görüntüleme.  The Ohio State University. Here, we present a protocol for encapsulation of catabolic cells, which consume lipids for heat production in intra-abdominal adipose tissue and increase energy dissipation in obese mice.

Video: Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots

A Microphysiologic Platform for Human Fat: Sandwiched White Adipose Tissue

White adipose tissue (WAT) plays a crucial role in regulating weight and everyday health. Still, there are significant limitations to available primary culture models, all of which have failed to faithfully recapitulate the adipose microenvironment or extend WAT viability beyond two weeks. The lack of a reliable primary culture model severely impedes research in WAT metabolism and drug development. To this end we have utilized NIH's standards of a microphysiologic system to develop a novel platform for WAT primary culture called 'SWAT' (sandwiched white adipose tissue). We overcome the natural buoyancy of adipocytes by sandwiching minced WAT clusters between sheets of adipose-derived stromal cells. In this construct, WAT samples are viable over eight weeks in culture. SWAT maintains the intact ECM, cell-to-cell contacts, and physical pressures of in vivo WAT conditions; additionally, SWAT maintains a robust transcriptional profile, sensitivity to exogenous chemical signaling, and whole tissue function. SWAT represents a simple, reproducible, and effective method of primary adipose culture. Potentially, it is a broadly applicable platform for research in WAT physiology, pathophysiology, metabolism, and pharmaceutical development.

White adipose tissue (WAT) has critical deficiencies in its current primary culture models, hindering pharmacological development and metabolic studies. Here, we present a protocol to produce an adipose microphysiological system by sandwiching WAT between sheets of stromal cells. This construct provides a stable and adaptable platform for primary WAT culture.

İnsan yağı için bir Microphysiologic Platform: beyaz yağ dokusu sandviç

White adipose tissue (WAT) plays a crucial role in regulating weight and everyday health.  Still, there are significant limitations to available primary ...

Davranış

Isolation, Expansion, and Adipogenic Induction of CD34+CD31+ Endothelial Cells from Human Omental and Subcutaneous Adipose Tissue

Obesity is accompanied by an extensive remodeling of adipose tissue primarily via adipocyte hypertrophy. Extreme adipocyte growth results in a poor response to insulin, local hypoxia, and inflammation. By stimulating the differentiation of functional white adipocytes from progenitors, radical hypertrophy of the adipocyte population can be prevented and, consequently, the metabolic health of adipose tissue can be improved along with a reduction of inflammation. Also, by stimulating a differentiation of beige/brown adipocytes, the total body energy expenditure can be increased, resulting in weight loss. This approach could prevent the development of obesity co-morbidities such as type 2 diabetes and cardiovascular disease.
This paper describes the isolation, expansion, and differentiation of white and beige adipocytes from a subset of human adipose tissue endothelial cells that co-express the CD31 and CD34 markers. The method is relatively cheap and is not labor-intensive. It requires access to human adipose tissue and the subcutaneous depot is suitable for sampling. For this protocol, fresh adipose tissue samples from morbidly obese subjects [body mass index (BMI) &#62;35] are collected during bariatric surgery procedures. Using a sequential immunoseparation from the stromal vascular fraction, enough cells are produced from as little as 2&#8211;3 g of fat. These cells can be expanded in culture over 10&#8211;14 days, can be cryopreserved, and retain their adipogenic properties with passaging up to passage 5&#8211;6. The cells are treated for 14 days with an adipogenic cocktail using a combination of human insulin and the PPAR&#947; agonist-rosiglitazone.
This methodology can be used for obtaining proof of concept experiments on molecular mechanisms that drive adipogenic responses in adipose endothelial cells, or for screening new drugs that can enhance the adipogenic response directed either towards white or beige/brown adipocyte differentiation. Using small subcutaneous biopsies, this methodology can be used to screen out non-responder subjects for clinical trials aimed to stimulate beige/brown and white adipocytes for the treatment of obesity and co-morbidities.

The differentiation of white and beige adipocytes from adipose tissue vascular progenitors bears potential for metabolic improvement in obesity. We describe protocols for a CD34+CD31+ endothelial cell isolation from human fat and for a subsequent in vitro expansion and differentiation into white and beige adipocytes. Several downstream applications are discussed.

Yalıtım, genişleme ve Adipojenik indüksiyon CD34 + CD31 + insan Omental ve deri altı yağ dokusu endotel hücrelerden

Obesity is accompanied by an extensive remodeling of adipose tissue primarily via adipocyte hypertrophy. Extreme adipocyte growth results in a poor ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Isolation and Differentiation of Stromal Vascular Cells to Beige/Brite Cells

Brown adipocytes have the ability to uncouple the respiratory chain in mitochondria and dissipate chemical energy as heat. Development of UCP1-positive brown adipocytes in white adipose tissues (so called beige or brite cells) is highly induced by a variety of environmental cues such as chronic cold exposure or by PPAR&gamma; agonists, therefore, this cell type has potential as a therapeutic target for obesity treatment. Although most immortalized adipocyte lines cannot recapitulate the process of "browning" of white fat in culture, primary adipocytes isolated from stromal vascular fraction in subcutaneous white adipose tissue (WAT) provide a reliable cellular system to study the molecular control of beige/brite cell development. Here we describe a protocol for effective isolation of primary preadipocytes and for inducing differentiation to beige/brite cells in culture. The browning effect can be assessed by the expression of brown fat-selective markers such as UCP1.

Primary white preadipocytes isolated from white adipose tissues in mice can be differentiated into beige/brite cells. Presented here is a reliable cellular model system to study the molecular regulation of "browning" of white fat.

Bej / Brite Hücreler Stromal Vasküler Hücre İzolasyonu ve Farklılaşma

Brown adipocytes have the ability to uncouple the  respiratory chain in mitochondria and dissipate chemical energy as heat.  Development of UCP1-positive ...

Biyoloji

Three-Dimensional Culture of Vascularized Thermogenic Adipose Tissue from Microvascular Fragments

Engineering thermogenic adipose tissue (e.g., beige or brown adipose tissues) has been investigated as a potential therapy for metabolic diseases or for the design of personalized microtissues for health screening and drug testing. Current strategies are often quite complex and fail to accurately fully depict the multicellular and functional properties of thermogenic adipose tissue. Microvascular fragments, small intact microvessels comprised of arteriole, venules, and capillaries isolated from adipose tissue, serve as a single autologous source of cells that enable vascularization and adipose tissue formation. This article describes methods for optimizing culture conditions to enable the generation of three-dimensional, vascularized, and functional thermogenic adipose tissues from microvascular fragments, including protocols for isolating microvascular fragments from adipose tissue and culture conditions. Additionally, best practices are discussed, as are techniques for characterizing the engineered tissues, and sample results from both rodent and human microvascular fragments are provided. This approach has the potential to be utilized for the understanding and development of treatments for obesity and metabolic disease.

Here, we present a detailed protocol outlining the use of microvascular fragments isolated from rodent or human fat tissue as a straightforward approach to engineer functional, vascularized beige adipose tissue.

Mikrovasküler Fragmanlardan Vaskülarize Termojenik Yağ Dokusunun Üç Boyutlu Kültürü

Engineering thermogenic adipose tissue (e.g., beige or brown adipose tissues) has been investigated as a potential therapy for metabolic diseases or for ...

Biyomühendislik

Fat-Covered Islet Transplantation Using Epididymal White Adipose Tissue

Islet transplantation is a cellular replacement therapy for severe diabetes mellitus. The intraperitoneal cavity is typically the transplant site for this procedure. However, intraperitoneal islet transplantation has some limitations, including poor transplant efficacy, difficult graft detection ability, and a lack of graftectomy capability for post-transplant analysis. In this paper, "fat-covered islet transplantation", an intraperitoneal islet transplantation method that utilizes epididymal white adipose tissue, is used to assess the therapeutic effects of bioengineered islets. The simplicity of the method lies in the seeding of islets onto epididymal white adipose tissue and using the tissue to cover the islets. While this method can be categorized as an intraperitoneal islet transplantation technique, it shares characteristics with intra-adipose tissue islet transplantation. The fat-covered islet transplantation method demonstrates more robust therapeutic effects than intra-adipose tissue islet transplantation, however, including the improvement of blood glucose and plasma insulin levels and the potential for graft removal. We recommend the adoption of this method for assessing the mechanisms of islet engraftment into white adipose tissue and the therapeutic effects of bioengineered islets.

This fat-covered islet transplantation method is suitable for the detection of engrafted islets in the intraperitoneal cavity. Notably, it does not require the use of biobinding agents or suturing.

Epididim Beyaz Yağ Dokusu Kullanılarak Yağ Kaplı Adacık Nakli

Islet transplantation is a cellular replacement therapy for severe diabetes mellitus. The intraperitoneal cavity is typically the transplant site for this ...

Tıp

Human Adipose Tissue Micro-fragmentation for Cell Phenotyping and Secretome Characterization

In the past decade, adipose tissue transplants have been widely used in plastic surgery and orthopaedics to enhance tissue repletion and/or regeneration. Accordingly, techniques for harvesting and processing human adipose tissue have evolved in order to quickly and efficiently obtain large amounts of tissue. Among these, the closed system technology represents an innovative and easy-to-use system to harvest, process, and re-inject refined fat tissue in a short time and in the same intervention (intra-operatively). Adipose tissue is collected by liposuction, washed, emulsified, rinsed and minced mechanically into cell clusters of 0.3 to 0.8 mm. Autologous transplantation of mechanically fragmented adipose tissue has shown remarkable efficacy in different therapeutic indications such as aesthetic medicine and surgery, orthopedic and general surgery. Characterization of micro-fragmented adipose tissue revealed the presence of intact small vessels within the adipocyte clusters; hence, the perivascular niche is left unperturbed. These clusters are enriched in perivascular cells (i.e., mesenchymal stem cell (MSC) ancestors) and in vitro analysis showed an increased release of growth factors and cytokines involved in tissue repair and regeneration, compared to enzymatically derived MSCs. This suggests that the superior therapeutic potential of microfragmented adipose tissue is explained by a higher frequency of presumptive MSCs and enhanced secretory activity. Whether these added pericytes directly contribute to higher growth factor and cytokine production is not known. This clinically approved procedure allows the transplantation of presumptive MSCs without the need for expansion and/or enzymatic treatment, thus bypassing the requirements of GMP guidelines, and reducing the costs for cell-based therapies.

Here, we present human adipose tissue enzyme-free micro-fragmentation using a closed system device. This new method allows the obtainment of sub-millimeter clusters of adipose tissue suitable for in vivo transplantation, in vitro culture, and further cell isolation and characterization.

Hücre Fenotimi ve Sekretom Karakterizasyonu için İnsan Yağ Dokusu Mikro-parçalanma

In the past decade, adipose tissue transplants have been widely used in plastic surgery and orthopaedics to enhance tissue repletion and/or regeneration. ...

Preparation of Adipose Progenitor Cells from Mouse Epididymal Adipose Tissues

Obesity and metabolic disorders such as diabetes, heart disease, and cancer, are all associated with dramatic adipose tissue remodeling. Tissue-resident adipose progenitor cells (APCs) play a key role in adipose tissue homeostasis and can contribute to the tissue pathology. The growing use of single cell analysis technologies &#8211; including single-cell RNA-sequencing and single-cell proteomics &#8211; is transforming the stem/progenitor cell field by permitting unprecedented resolution of individual cell expression changes within the context of population- or tissue-wide changes. In this article, we provide detailed protocols to dissect mouse epididymal adipose tissue, isolate single adipose tissue-derived cells, and perform fluorescence activated cell sorting (FACS) to enrich for viable Sca1+/CD31-/CD45-/Ter119- APCs. These protocols will allow investigators to prepare high quality APCs suitable for downstream analyses such as single cell RNA sequencing.

We present a simple method to isolate highly viable adipose progenitor cells from mouse epididymal fat pads using fluorescence activated cell sorting.

Fare Epidididimal Yağ Dokularından Yağ Progenitör Hücrelerinin Hazırlanması

Obesity and metabolic disorders such as diabetes, heart disease, and cancer, are all associated with dramatic adipose tissue remodeling. Tissue-resident ...

<meta charset="utf8"></head><body>İnsan SATMVEC'leri: İzolasyon ve Adiposit Çapraz Konuşma Çalışmaları

Studying Adipose Endothelial Cell/Adipocyte Cross-Talk in Human Subcutaneous Adipose Tissue

Microvascular endothelial cells (MVECs) have many critical roles, including control of vascular tone, regulation of thrombosis, and angiogenesis. Significant heterogeneity in endothelial cell (EC) genotype and phenotype depends on their vascular bed and host disease state. The ability to isolate MVECs from tissue-specific vascular beds and individual patient groups offers the opportunity to directly compare MVEC function in different disease states. Here, using subcutaneous adipose tissue (SAT) taken at the time of insertion of cardiac implantable electronic devices (CIED), we describe a method for the isolation of a pure population of functional human subcutaneous adipose tissue MVEC (hSATMVEC) and an experimental model of hSATMVEC-adipocyte cross-talk.
hSATMVEC were isolated following enzymatic digestion of SAT by incubation with anti-CD31 antibody-coated magnetic beads and passage through magnetic columns. hSATMVEC were grown and passaged on gelatin-coated plates. Experiments used cells at passages 2-4. Cells maintained classic features of EC morphology until at least passage 5. Flow cytometric assessment showed 99.5% purity of isolated hSATMVEC, defined as CD31+/CD144+/CD45-. Isolated hSATMVEC from controls had a population doubling time of approximately 57 h, and active proliferation was confirmed using a cell proliferation imaging kit. Isolated hSATMVEC function was assessed using their response to insulin stimulation and angiogenic tube-forming potential. We then established an hSATMVEC-subcutaneous adipocyte co-culture model to study cellular cross-talk and demonstrated a downstream effect of hSATMVEC on adipocyte function.
hSATMVEC can be isolated from SAT taken at the time of CIED insertion and are of sufficient purity to both experimentally phenotype and study hSATMVEC-adipocyte cross-talk.

<meta charset="utf8"></head><body>Yazar Spotlight: Deri Altı Yağ Dokusu Mikrovasküler Yüzey Çalışmaları ile Kardiyometabolik Hastalıklara Bakış

Here, we describe a protocol for isolating, culturing, and phenotyping microvascular endothelial cells from human subcutaneous adipose tissue (hSATMVECs). Additionally, we describe an experimental model of hSATMVEC-adipocyte cross-talk.

Yağ Dokusu Depolarında içine Nakli Enkapsülasyon termojenik Preadipositler

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

İnsan yağı için bir Microphysiologic Platform: beyaz yağ dokusu sandviç

Yalıtım, genişleme ve Adipojenik indüksiyon CD34 + CD31 + insan Omental ve deri altı yağ dokusu endotel hücrelerden

Bej / Brite Hücreler Stromal Vasküler Hücre İzolasyonu ve Farklılaşma

Mikrovasküler Fragmanlardan Vaskülarize Termojenik Yağ Dokusunun Üç Boyutlu Kültürü

Epididim Beyaz Yağ Dokusu Kullanılarak Yağ Kaplı Adacık Nakli

Hücre Fenotimi ve Sekretom Karakterizasyonu için İnsan Yağ Dokusu Mikro-parçalanma

Fare Epidididimal Yağ Dokularından Yağ Progenitör Hücrelerinin Hazırlanması

İnsan Subkutan Yağ Dokusunda Adipoz Endotel Hücresi/Adiposit Çapraz Konuşmasının İncelenmesi

İnsan Subkutan Yağ Dokusunda Adipoz Endotel Hücresi/Adiposit Çapraz Konuşmasının İncelenmesi

İnsan Subkutan Yağ Dokusunda Adipoz Endotel Hücresi/Adiposit Çapraz Konuşmasının İncelenmesi