The authors gratefully acknowledge the National Science Foundation (NSF) for financial support of this work through a CAREER award (CBET-0746210) and through award CBET-1159500. We would like to thank Dr. Turkson (Univ. of Hawaii Cancer Center) and Dr. Altomare (Univ. of Central Florida College of Medicine) for assistance with cell culture.

1. Kültürleme Hücre Soyları <ol><li> En az 2 dakika süreyle sıcak su içinde soğutucu şişeleri tutarak çözülme TE 71 (fare timik epitelial hücreler), MDA-MB-231 (insan meme kanseri hücreleri), A549 (insan akciğer kanseri hücreleri) ve OVCAR3 (insan yumurtalık tümörü hücreleri) . 106 x g&#39;de 6 dakika boyunca, her bir hücre hattı ve santrifüj uygulanıp% 10 FBS ile takviye edilmiş 10 ml DMEM ortamı. </li><li> Süspansiyon aspire ve pelet 3ml medya ekleyebilirsiniz. Düzgün bir kaç kez pipetleme hücreleri karıştırın. Bu hücre çözeltisi T75 balonlarına içinde% 10 FBS ile takviye 7 mi DMEM ortamı ısıtılmış ön ekleyin ve 37 ° C&#39;de% 95 hava /% 5 CO2 nemli bir atmosferde şişeler tutun. Passage 0 olarak bu şişeyi etiketleyin. </li><li> Hücrelerin hücre birleşmesi% 80 ulaştığında, 10 dakika boyunca% 0.05 tripsin ile inkübe edilerek hücreler hasat edilir. Medya eşit miktarda ekleyerek tripsin nötralize eder. Santrifüj 106 x g&#39;de 6 dakika boyunca bu çözelti. Süspansiyon çıkarın ve buna 3 ml taze medya ekleyin. Wel Mixl, 7 mi ortam içeren bir kültür şişesine az miktarda (100 ul) aktarın. Inkübatörde kültür şişesi inkübe edin. Passage 1 olarak şişeyi etiketleyin. </li><li> Geçit 11 veya 12 kadar, kültür hücre hatları. </li></ol> Nanopartiküller 2. Fabrikasyon <ol><li> ~ 10 -6 M (düzeltilmiş) seyreltilmemiş MEH-PPV stok çözeltisi hazırlanması <ol><li> Bir şişe içinde 1 mg Poly molekül ağırlığına sahip [2-metoksi-5- (2-etilheksiloksi) -1,4-fenilenvinilen] (MEH-PPV) (ortalama Mn) 150,000-250,000 g / mol ve 3 ml tetrahidrofuran (THF) ekleyin . Sıcak bir plaka üzerinde 80 ° C&#39;de ısıtılırken 2 saat boyunca karıştırın. </li><li> 0.2 um&#39;lik bir şırınga filtresi kullanılarak yeni bir şişe içinde, yukarıda çözelti filtre. &#39;Sulandırılmamış MEH-PPV stok solüsyonu&#39; olarak bu çözüm etiketleyin. Adımlarla 2.1.3 ve 2.1.4 de açıklandığı gibi bu çözüm konsantrasyon ince ayar sonra nanoparçacık hazırlık dahil olacak. </li><li> 3 ml THF içinde seyreltilmemiş MEH-PPV stok çözeltisi 50 ul ekle. &#39;Seyreltilmiş MEH-PPV stok solüsyonu&#39; olarak bu çözüm etiketleyin. UV-vis spektroskopi ile 495 nm&#39;de absorbansı, bir 1 cm&#39;lik kuartz bir küvete transfer ve ölçün. </li><li> Seyreltilmiş MEH-PPV stok çözeltisinin absorbansı 0.17 daha yüksek ise, bir seferde birden THF 1 ml ekleyerek seyreltilmemiş MEH-PPV stok çözelti seyreltik ve 495 nm &#39;de ölçülen absorbans gelene kadar adım 2.1.3 tekrar 0.13-0.17 arasında değişmektedir. </li><li> Aşağıda gösterildiği gibi Lambert-Beer yasası kullanılarak seyreltilmiş MEH-PPV stok solüsyonu molaritesini hesaplayın. Burada, 0.15 emme protokolü geri kalanı için bir örnek olarak kullanılmıştır (örneğin., Gözlenen absorbansa göre aşağıdaki hesaplamalar ayarlayın), kullanılan MEH-PPV tükenme katsayısı 10 7 M-1 cm yol uzunluğu kullanılan -1 olduğu 1 cm. A = ε xbxc (Denklem 1) (ε - molar tükenme katsayısı, A - absorbans, b - yol uzunluğu, c - solüsyonun konsantrasyonu) 0.15 = 10 7 M-1 cm-1 x 1 cm XC (Denklem 2) c = 1.5 x 10 8 M (Denklem 3) Aşağıdaki gibi sulandırılmamış MEH-PPV stok solüsyonu konsantrasyonu bulmak için bu konsantrasyon kullanın: M 1 V = 1 M 2 V 2 (Denklem 4) 0.15 x 10 -7 M x 3050 ul = M 2 x 50 ul (Denklem 5) M = 2 9,15 x 10 7 M (Denklem 6) Bu &#39;arındırılmış sulandırılmamış MEH-PPV stok solüsyonu&#39; yoğunlaşmasıdır. </li></ol></li><li> Düzeltilmiş seyreltilmemiş MEH-PPV stok çözeltisi içinde MEH-PPV kitle hesaplanması <ol><li> Bölüm 2.1.4 &#39;de elde edilen molaritesi ve 10 6 g / mol olan MEH-PPV moleküler ağırlığı (Mw), kullanılarak, aşağıda gösterildiği gibi ayarlanır seyreltilmemiş stok çözeltisi 1 ml MEH-PPV&#39;nin kütlesi hesaplanır. M = n / V (n -. No mol, V - L hacim) (Denklem 7) Bu durumda, 1 ml MEH-PPV kütlesi und ayarlandı veiluted stok çözeltisi 9.15 x 10 -4 gr olduğunu. </li></ol></li><li> MEH-PPV içinde Karıştırma PCBM <ol><li> Fenil-Cı 61 -bütirik asit metil ester (PCBM) kütlesini hesaplanır ağırlıkça% 50 PCBM kütlesine göre tanımlanan ağırlıkça% 50 PCBM katkılı MEH-PPV çözelti yapmak için hazır MEH-PPV çözeltisi içine eklenecek MEH-PPV (yani, MEH-PPV yarısı kütle). Bölüm 2.2 elde MEH-PPV ağırlığını kullanarak. MEH-PPV x% 100 = ağırlıkça% 50 PCBM arasında PCBM / 9.15 x 10 -4 gr Kütle (Denklem 8) PCBM = 4.57 x 10 -4 gr kütlesi (Denklem 9) </li><li> Bir şişe içinde, 1 mg PCBM tartılır ve 500 ul THF ilave edin. 910,88 g / mol olarak PCBM moleküler ağırlığı kullanılarak bu çözelti içinde PCBM konsantrasyonunu hesaplamak PCBM çözeltisi = 0,001 g / l (910,88 g / Mol x 500 ul), molaritesi (Denklem 10) PCBM çözeltisinin molaritesi = 2.19 x 10 -9 mol / ul (Denklem 11) </li><li> PCBM çözeltisinin hacmini hesaplayın arındırılmış eklemek için gerekli ME sulandırılmadan&#39;H-PPV stok solüsyonu, basamak 2.3.2 hesaplanan molarite ile THF içinde ağırlıkça% 50 PCBM katkılı MEH-PPV çözelti elde etmek için 4,57 x PCBM x 1 mol / 910,88 gx 1 ul / 2.19 x 10 -9 mol = 229 ul 10 -4 gr (Denklem 12) Arındırılmış seyreltilmemiş MEH-PPV stok çözeltisi 1 ml PCBM çözeltisi 229 ul ilave edin ve iyice karıştırın. </li></ol></li><li> Çökeltme yöntemi ile nanopartiküllerin hazırlanması <ol><li> Aktarım, kendisine bağlı bir iğne ile 1 ml şırınga içine karıştırılır MEH-PPV / PCBM çözeltisi 1 mi. </li><li> Hızla 1200 rpm&#39;de karıştırıldıktan DI 4 ml su içine karıştırılır MEH-PPV / PCBM çözeltisi 1 ml enjekte edilir. Enjeksiyondan hemen sonra karıştırarak durdurun. Daha fazla işlem olmadan bu nanopartiküller kullanın. </li></ol></li></ol> Görüntüleme için Nanopartiküller ile Hücre Hatları 3. Kuluçka NOT: Tüm görüntüleme deneyleri 35 mm petri tamamlandı <ol><li> Nanoparti ve Alımhücre hatlarında kartılması <ol><li> 12. geçişine kadar Kültür hücre hatları. 35 mm Petri tabaklarda 12. geçiş kültürü hücreleri de. 24 saat sonra hücreler,% 40 konfluent olacak şekilde, 35 mm Petri kaplarına eklenir hücreleri konsantrasyonunu ayarlayın. </li><li> Bu aşamada, petri kaplarında% 10 FBS ile takviye edilmiş DMEM ortamı kaldırma iki kez 1 x DPBS hücreleri yıkayın ve Petri tabaklarına 2 ml DMEM içinde nanopartiküller süspansiyon 100 ul ilave edin. </li><li> 24 saat sonra petri gelen DMEM / nanopartiküller süspansiyon kaldırmak ve 1x DPBS 3 kez hücreleri yıkayın. Daha sonra 10 dakika süreyle% 4 paraformaldehid ile inkübe edilerek hücrelerin tespit. DPBS ile iki kez yıkanır. 2 dakika için boya ile inkübe edilerek 300 nM DAPI ile hücrelerin Leke. DPBS ile iki kez yıkanır. Ardından görüntüleme için DPBS hücreleri tutun. </li></ol></li><li> ROS Algılama <ol><li> Kültür A549 ve bölüm 3.1.1 açıklandığı üzere Petri, hücre satır başına 6&#39;da OVCAR3 hücre hatları. EtiketPetri kapları olarak, Tablo 1 &#39;de gösterilen. </li><li> Tablo 1 &#39;de gösterilmiş ve 24 saat süreyle inkübe olarak petri kutularının üç 2 ml DMEM içinde nanopartikül süspansiyon 100 ul ekle. Hafif dozda almak 24 saat sonra hücrelerin yıkayın ve HBSS (Hank Dengeli Tuz Çözeltisi) hücreleri askıya ücretsiz medya boya olacak Petri kapları için. </li><li> 15 dakika boyunca güneş simülatörü lambayı Isınma. UV ışığı süzmek için lambanın önünde UV filtresi yerleştirin. Petri yüzeyinde 0,5 güneş (50 mW / cm 2) yoğunluğu elde etmek için lamba gücünü ayarlayarak bir referans güneş pili ile lamba kalibre edin. Bu özel kurulumda bu durum lambası verilen 218 W güç ile elde edilmiştir. </li><li> 180 J aşağıdaki hesaplamalar gösterildiği gibi / cm2 bir hafif doz sonuçlanır 60 dakika boyunca lambası (kapağın açık) altında petri kaplarına yerleştirin: 50 mW / cm2 x 3.600 saniye / 1.000 = 180 J / cm2 </li><li> HBSS çıkarın ve yıkanmadan daha petri kaplarına,% 10 FBS ile takviye edilmiş DMEM ortamı 2 mi ekleyin. 2 saat daha inkübe hücreleri. </li><li> Pozitif kontrol için 30 dakika boyunca 100 uM hidrojen peroksit (H2O 2) ile hücrelerin inkübe edin. </li><li> 37 ° C&#39;de 30 dakika boyunca boya ile inkübe edilmesi ile ROS tespit reajanı 5 uM değerinde bir nihai konsantrasyona sahip her petri hücreleri Leke. </li><li> 10 dakika boyunca% 4 paraformaldehit ile inkübe edilerek hücreleri saptamak. DPBS ile iki kez yıkanır. 2 dakika için boya ile inkübe edilerek 300 nM DAPI ile hücrelerin Leke. DPBS ile iki kez yıkanır. Ardından görüntüleme için DPBS hücreleri tutun. </li></ol></li><li> PI ve Aneksin V FITC tarafından apoptoz ve nekroz <ol><li> Kültür 5. Petri kapları her hücre hattı. Kalan 2 petri kontrol numuneleri olacak ise bu Petri üçü deney için olacaktır. E kadar nanopartiküller ile deney için 3 Petri kapları inkübebölüm 3.1.2 xplained. Kontrol numuneleri nanopartiküller ile inkübe değildir. </li><li> 24 saat inkübasyondan sonra adım 3.2.3 izleyin. </li><li> Lamba (kapağı açık) altında 3 deney petri kaplarına yerleştirilir ve 20 dakikada, 40 dakikada bir ve 60 dakikada bir bir tane çıkarın. Bu 60, 120 ve 180 ışık dozlarda J / cm2, sırasıyla (bölüm 3.2.4 hesaplama) maruz bırakıldı üç numune verir. Daha sonra, kontrol petri kutularının birine 180 J / cm2 ışık dozajını. Bu nanopartiküllerin yokluğunda tutulan ışık dozu ile kontrol edilmesidir. Işık kalan kontrol numunesine doz (hayır nanopartiküller ve uygulanan ışık dozu) uygulama yapmayınız. </li><li> % 10 FBS ile takviye edilmiş DMEM ortamı ile HBSS takın ve 4 saat boyunca inkübatör petri kapları tutmak. </li><li> 15 dakika için boya ile inkübe edilmesi ile deneysel ve annexin V FITC 20 ul kontrol petri hücreleri Leke. DPBS ile iki kez yıkanır. C Leke2 dakika boyunca boyalarla inkübe edilerek 300 nM DAPI olarak 300 nM PI (propidyum iyodür) ile arşın. DPBS ile iki kez yıkanır. Ardından görüntüleme için DPBS hücreleri tutun. </li></ol></li></ol> Nanopartiküller 4. İçsel Sitotoksisite <ol><li> 96-çukurlu levhalarda yer alan hücreler ve kültürü Sayım <ol><li> Ortamı çıkarmayı ve 10 dakika boyunca% 0.05 tripsin ile hücrelerin inkübasyonu takiben DPBS hücreler iki kez yıkayarak Kültür şişelerinden alınan hücreler hasat. Elde edilen hücre çözeltisine,% 10 FBS ile takviye 2 mi DMEM ortamı. Gömleklere hücre kümeleri ayırmak için düzgün bir çözüm karıştırın. </li><li> Hücre süspansiyonu 100 ul almak ve% 10 FCS ile takviye edilmiş 900 ul DMEM ortamına ilave edin. İyice karıştır. Bir hemasitometre üzerine bu süspansiyonu 10 ul yerleştirin. Hemasitometre kullanarak hücreleri sayın ve 4.1.1 4 10 x 5 hücre / ml hücre süspansiyonu konsantrasyonunu ayarlamak. </li><li> 5 96 oyuklu plakalar 0 saat, 24 saat olarak etiketlenmiş çıkarınızr, 48 saat, 72 saat ve 96 saat. Bu şekilde / oyuk 2500 tohum hücreleri Tablo 2 &#39;de gösterildiği gibi kuyu içine 5 x 10 4 hücre / ml hücre çözeltilerinin 50 ul (TE 71 ve A549) ekleyin. OVCAR3 ve MDA-MB-231 hücre hatları için aynı prosedürü yapın. </li><li> 24 saat sonra 1 x DPBS ile kuyu yıkama ve Tablo 2 &#39;de gösterildiği gibi kuyu içine nanopartiküllerin artan konsantrasyonlarda 50 ul ilave edin., 20 100 eklenerek, farklı nanopartikül konsantrasyonları hazırlayın ve DMEM 2.4.2 den nanopartikül süspansiyonu 180 ul kadar sırasıyla nihai 0.4 x 10 -4 mg / ml&#39;lik konsantrasyonlar elde nanopartikül 2 ml hacim, 2.0 x 10 -4 mg / ml ve 3.6 x 10 -4 mg / ml elde etmek. Her bir hücre hattı nanopartiküller her bir konsantrasyonu için üçlü yer alır. </li></ol></li><li> Karanlıkta, hücre canlılığını ölçen <ol><li> Hemen nanopartiküller ekledikten sonra 0 saat plakasına 10 ul MTT ekleyin. Formazan kristalleştirme için 4 saat süre ile plaka inkübeals oluşturulur. Kuyulara 50 ul çözünme çözeltisi ekleyin. Formazan kristalleri çözmek üzere, 6 saat boyunca plaka inkübe edin. </li><li> Mikro levha okuyucusu ile 570 nm&#39;de absorbans kaydederek 0 saat plakanın hücre canlılığı ölçülür. </li><li> 24 saat plaka için, 1x DPBS hücreleri yıkayın ve nanopartiküller ile her bir kuyu sonra 24 saat inkübasyon 50 ul medya ekleyebilirsiniz. MTT ekleyin ve aynı 4.2.1 ve 4.2.2 açıklanan plaka okuyun. </li><li> 48 saat, 72 saat ve 96 saat için plakalar, 1 kez DPBS hücreleri yıkayın ve nanopartiküller ile 24 saat inkübasyondan sonra kuyulara 50 ul ortamı eklenir. Kalan sürelerde inkübe hücreleri. </li><li> 4.2.1 ve 4.2.2 de açıklandığı gibi 4.2.5) belirli zaman noktalarında hücre canlılığı ölçün. </li><li> (N = 3) 3 kez tam bir deney tekrarlayın </li></ol></li></ol> 5. PDT sonra Hücre Canlılık Ölçme <ol><li> Hücrelerin sayılması ve 96 oyuklu plakalar içinde kültürlenmesi. <ol><li> 9 bir dizi EtiketTE 71 + A549 plakaları ve OVCAR3 + MDA-MB-231 plakaları hem Tablo 3 &#39;de gösterildiği gibi 6 oyuklu plakalar. 4.1.3 gösterilen plakaların düzeni aynı olacaktır. </li><li> 4.1.2 Tablo 2 &#39;de gösterildiği gibi, aynı düzeni ile Bölüm 4.1&#39;de açıklandığı gibi 96-yuvalı plakalar Seed. </li><li> 24 saat plakalarına nanopartiküller ekledikten sonra, 4.1.4&#39;de açıklandığı gibi. </li><li> Nanopartiküllerin ilave edildikten sonra 24 saat 1x DPBS hücreleri yıkayın ve her bir oyuğa 50 ul HBSS ekleyin. </li><li> 3.2.3 açıklandığı üzere, ilgili ışık dozlarla plakaları ışın tedavisi. </li><li> % 10 FBS ile takviye edilmiş 50 ul DMEM ortamı ile HBSS değiştirin ve PDT sonra ilgili süreler boyunca inkübe edin. </li><li> 4.2.1 ve 4.2.2 açıklandığı gibi, her bir zaman süresinden sonra, hücre canlılığı ölçülür. </li></ol></li></ol> 6. Floresan Mikroskopi <ol><li> Nanopartiküllerin Uptake <ol><li> Mikroskop a lambaları açınnd görüntüleme önce lazer 30 dakika. Mikroskop sahnede (bölüm 3.1 açıklandığı gibi) sabit hücreleri içeren petri koyun. </li><li> . Tablo 4 de gösterildiği gibi filtre kullanarak nanopartiküller ve DAPI floresans toplamak ImageJ yazılım faz kontrastı, nanoparçacık ve DAPI görüntü Yerleşimi. </li></ol></li><li> ROS Algılama <ol><li> Görüntüleme önce mikroskop 30 dakika lambaların açın. Mikroskop sahnede (bölüm 3.2&#39;de açıklandığı gibi) hücreleri içeren petri koyun. </li><li> . Tablo 4 de gösterildiği gibi filtre kullanarak saptama reaktif maddesi nanopartiküller, DAPI ve ROS floresans toplamak ImageJ yazılım faz kontrastı, nanoparçacık, DAPI ve ROS tespit reajanı görüntü Yerleşimi. </li></ol></li><li> PI ve Aneksin V FITC tarafından apoptoz ve nekroz <ol><li> Görüntüleme önce mikroskop 30 dakika lambaların açın. Açıklandığı gibi (hücreleri içeren Petri kabı koyunmikroskop sahnede bölüm 3.3). </li><li> . Tablo 4&#39;te gösterildiği gibi filtreler kullanılarak nanopartiküller, DAPI, PI ve Annexin V FITC gelen floresan toplayın ImageJ yazılım faz kontrast, nanoparçacık, DAPI, PI ve Annexin V FITC görüntüleri Yerleşimi. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Dolmans, D., Fukumura, D., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photodynamic+therapy+for+cancer.">Photodynamic therapy for cancer.</a> Nat Rev Cancer. 3 (5), 380-387 (2003).</li><li>Dougherty, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photodynamic+therapy.">Photodynamic therapy.</a> J Natl Cancer Inst. 90 (12), 889-905 (1998).</li><li>Ferrari, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+nanotechnology:+Opportunities+and+challenges.">Cancer nanotechnology: Opportunities and challenges.</a> Nat Rev Cancer. 5 (3), 161-171 (2005).</li><li>Oleinick, N. L., Morris, R. L., Belichenko, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+apoptosis+in+response+to+photodynamic+therapy:+what,+where,+why,+and+how.">The role of apoptosis in response to photodynamic therapy: what, where, why, and how.</a> Photochem Photobiol Sci. 1 (1), 1-21 (2002).</li><li>Ormond, A., Freeman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dye+Sensitizers+for+Photodynamic+Therapy.">Dye Sensitizers for Photodynamic Therapy.</a> Materials. 6 (3), 817-840 (2013).</li><li>Pass, H. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photodynamic+Therapy+in+Oncology+-+Mechanisms+and+Clinical+Use.">Photodynamic Therapy in Oncology - Mechanisms and Clinical Use.</a> J Natl Cancer Inst. 85 (6), 443-456 (1993).</li><li>Sariciftci, N. S., Smilowitz, L., Heeger, A. J., Wudl, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoinduced+electron+transfer+from+a+conducting+polymer+to+buckminsterfullerene.">Photoinduced electron transfer from a conducting polymer to buckminsterfullerene.</a> Science. 258 (5087), 1474-1476 (1992).</li><li>Sperandio, F. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoinduced+electron-transfer+mechanisms+for+radical-enhanced+photodynamic+therapy+mediated+by+water-soluble+decacationic+C-70+and+C84O2+Fullerene+Derivatives.">Photoinduced electron-transfer mechanisms for radical-enhanced photodynamic therapy mediated by water-soluble decacationic C-70 and C84O2 Fullerene Derivatives.</a> Nanomed-Nanotechnol. 9 (4), 570-579 (2013).</li><li>Fan, J. Q., Fang, G., Zeng, F., Wang, X. D., Wu, S. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Water-Dispersible+Fullerene+Aggregates+as+a+Targeted+Anticancer+Prodrug+with+both+Chemo-+and+Photodynamic+Therapeutic+Actions.">Water-Dispersible Fullerene Aggregates as a Targeted Anticancer Prodrug with both Chemo- and Photodynamic Therapeutic Actions.</a> Small. 9 (4), 613-621 (2013).</li><li>Grynyuk, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoexcited+fullerene+C-60+disturbs+prooxidant-antioxidant+balance+in+leukemic+L1210+cells.">Photoexcited fullerene C-60 disturbs prooxidant-antioxidant balance in leukemic L1210 cells.</a> Materialwiss Werkstofftech. 44 (2-3), 139-143 (2013).</li><li>Liu, X. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Separately+doped+upconversion-C-60+nanoplatform+for+NIR+imaging-guided+photodynamic+therapy+of+cancer+cells.">Separately doped upconversion-C-60 nanoplatform for NIR imaging-guided photodynamic therapy of cancer cells.</a> Chem Commun. 49 (31), 3224-3226 (2013).</li><li>Trpkovic, A., Todorovic-Markovic, B., Trajkovic, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicity+of+pristine+versus+functionalized+fullerenes:+mechanisms+of+cell+damage+and+the+role+of+oxidative+stress.">Toxicity of pristine versus functionalized fullerenes: mechanisms of cell damage and the role of oxidative stress.</a> Arch Toxicol. 86 (12), 1809-1827 (2012).</li><li>Chen, Z. Y., MA, L. J., Liu, Y., Chen, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+Functionalized+Fullerenes+in+Tumor+Theranostics.">Applications of Functionalized Fullerenes in Tumor Theranostics.</a> Theranostics. 2 (3), 238-250 (2012).</li><li>Park, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bulk+heterojunction+solar+cells+with+internal+quantum+efficiency+approaching+100%.">Bulk heterojunction solar cells with internal quantum efficiency approaching 100%.</a> Nat Photonics. 3 (5), 297-302 (2009).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Nanopartiküller imalatı sırasında nanoparçacık alımını sağlamak için bazı kritik önlemler korumak için gerekli oldu. Bu solüsyonun konsantrasyonu oluşturulmuştur nanopartiküllerin büyüklüğü belirlemede önemli bir rol oynadığı görülmüştür gibi THF (ağırlıkça% 50 PCBM ile harmanlanmış) bir 10 -6 M MEH-PPV çözelti DI su içine enjekte etmek için hazırlanmıştır. Konsantrasyon UV-vis spektroskopi ile kontrol edilmiştir. Protokol aşamasında olduğunu ilk bu çözümü...

Fotodinamik Terapi (PDT) photosensitizers hedef dokuya uygulanır ve foto ışığa maruz kaldığında reaktif oksijen türlerinin (ROS) oluşturur. Böyle tekli oksijen ve süperoksit olarak ROS türleri oksidatif stres, hücre ve dokuların 1-4 sonraki yapısal hasara neden olabilir. Nedeniyle uygulama kolaylığı için bu yöntem etkin incelenmiş ve klinik çalışmalar yer 5,6 almış. Bununla birlikte, bu (azalmış biyolojik ve potansiyel akut toksisite yol açar) hassaslaştırıcı karanlık hassaslaştırıcıların toksisitesi, gün ışığına (nedeniyle hassasiyetini seçici olmayan dağılıma), hastanın duyarlılığı ve hidrofobiklik kadar önemli sorunlar devam ediyor. Burada fabrikasyon ve in-vitro PDT için yeni nesil ışığa olarak fullerenin ile harmanlanmış polimer nanopartiküller yapma değerlendirilmesi bir yöntem sunduk. Nanopartiküllerin kendiliğinden agregasyon oluşturulmaktadıriletken polimerin MEH-PPV (poli [2-metoksi-5- (2-etilheksiloksi) -1,4-fenilenvinilen]) bu malzemelerin uyumlu içinde çözüldü fulleren PCBM (fenil-Cı-61 -bütirik asit metil ester) ile Çözücü hızlı olmayan bir uygun bir solvent (Şekil 1A) içine enjekte edilir. Ev sahibi polimer olarak MEH-PPV seçimi üçlü oluşumu yüksek oranda neden yüksek sönme katsayısı ile motive ve fulleren PCBM 7 verimli ve ultra hızlı şarj ve enerji transferi hem edilir. Bu özellikler tekli oksijen ve FDT süperoksit oluşumunun duyarlılık için idealdir. Fulleren aslında hem moleküler ve nanoparçacık formunda 8-13 yılında PDT uygulanmıştır. Ancak, şiddetli sitotoksisite daha da geliştirilmesi 12 engelliyordu. Burada MEH-PPV bir dizi matrisi içinde fulleren kapsülleme bir PDT hassaslaştırıcı malzemesi kompozit MEH-PPV / PCBM nanopartiküller sonuçlar bu gösteriyor ki iözünde sitotoksik değil nedeniyle yukarıda belirtilen Fotofiziksel özelliklerine kanser nanoparçacık büyüklüğüne ve yüzey yükü nedeniyle hücreler ve düşük ışık dozlarda verimleri oldukça etkili PDT tedavisi doğru özgüllük gösterir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Poly[2-methoxy-5-(2-ethylhexyloxy)-1,4-phenylenevinylene] (MEH-PPV)</td>
			<td>Sigma Aidrich</td>
			<td>536512-1G</td>
			<td>average Mn&#160;150,000-250,000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>[6,6]-Phenyl C61&#160;butyric acid methyl ester (PCBM)</td>
			<td>Sigma Aidrich</td>
			<td>684449-500MG</td>
			<td>&#62; 99.5%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetrahydrofuran (THF)</td>
			<td>EMD</td>
			<td>TX0284-6</td>
			<td>Drisolv</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 ml syringe</td>
			<td>National Scientific Company</td>
			<td>37510-1</td>
			<td>For filtration of MEH-PPV solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe filter</td>
			<td>VWR</td>
			<td>28145-495</td>
			<td>25 mm, 0.2 &#181;m, PTFE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 ml syringe</td>
			<td>Hamilton Company</td>
			<td>81320</td>
			<td>For injection of MEH-PPV solution into water to make nanoparticles</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modification of Eagle&#39;s Medium/Ham&#39;s F-12 50/50 Mix (DMEM)</td>
			<td>Corning (VWR)</td>
			<td>45000-350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hank&#39;s Balanced Salt Solution without phenol red (HBSS)</td>
			<td>Quality Biological (VWR)</td>
			<td>10128-740</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate-Buffered Saline, 1X without calcium and magnesium (DPBS)</td>
			<td>Corning (VWR)</td>
			<td>45000-436</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum, Regular (Heat Inactivated) (FBS)</td>
			<td>Corning (VWR)</td>
			<td>45000-736</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin EDTA 1X 0.25%</td>
			<td>Corning (VWR)</td>
			<td>45000-664</td>
			<td>Trypsin/2.21 mM EDTA in HBSS without sodium bicarbonate, calcium and magnesium Porcine Parvovirus Tested</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>16% Paraformaldehyde</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences&#160;</td>
			<td>15710</td>
			<td>16% paraformaldehyde is diluted to 4% by adding PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>&#160;Biotium VWR</td>
			<td>89139-054</td>
			<td>Nuclear stain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 ml pipettes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82050-478</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75 cm2 culture flask</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82050-856</td>
			<td>for culturing cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well plates</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82050-771</td>
			<td>for MTT assays</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture Dishes with Vents</td>
			<td>Greiner Bio-One (VWR)</td>
			<td>82050-538</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propidium iodide</td>
			<td>Molecular probes</td>
			<td>P3566</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Annexin V FITC</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A13199</td>
			<td>dye for apoptosis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Celltiter 96 non-R 1000 assays</td>
			<td>Promega (VWR)</td>
			<td><a href="https://www.vwrsp.com/catalog/product/index.cgi?catalog_number=PAG4000">PAG4000</a></td>
			<td>MTT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellROX Green Reagent, for oxidative stress detection</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>C10444</td>
			<td>For ROS detection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV-vis spectrometer</td>
			<td>Agilent 8453</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence spectrometer</td>
			<td>NanoLog HoribaJobin Yvon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dynamic light scattering</td>
			<td>PD2000DLS, Precision detector</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td>NuAir DH Autoflow</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Zeiss Axioskop2</td>
			<td></td>
			<td>63X oil immersion objective lens</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epiluminescence microscope</td>
			<td>Olympus IX71</td>
			<td></td>
			<td>60X water immersion objective lens, Andor Zyla sCMOS camera</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solar Simulator</td>
			<td>Newport 67005 Oriel Instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reference solar cell</td>
			<td>Oriel&#160;</td>
			<td></td>
			<td>VLSI Standards Incorporated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate reader</td>
			<td>BioTek Ex808</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemocytometer</td>
			<td>Hausser Scientific Partnership</td>
			<td>3200</td>
			<td>For counting cells</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

photodynamic therapy with blended conducting polymer/fullerene nanoparticle photosensitizers

In this article a method for the fabrication and reproducible in-vitro evaluation of conducting polymer nanoparticles blended with fullerene as the next generation photosensitizers for Photodynamic Therapy (PDT) is reported. The nanoparticles are formed by hydrophobic interaction of the semiconducting polymer MEH-PPV (poly[2-methoxy-5-(2-ethylhexyloxy)-1,4-phenylenevinylene]) with the fullerene PCBM (phenyl-C61-butyric acid methyl ester) in the presence of a non-compatible solvent. MEH-PPV has a high extinction coefficient that leads to high rates of triplet formation, and efficient charge and energy transfer to the fullerene PCBM. The latter processes enhance the efficiency of the PDT system through fullerene assisted triplet and radical formation, and ultrafast deactivation of MEH-PPV excited stated. The results reported here show that this nanoparticle PDT sensitizing system is highly effective and shows unexpected specificity to cancer cell lines.

Alım ve nanopartiküllerin içsel sitotoksisite Ağırlıkça% 50 harmanlanmış MEH-PPV / PCBM nanopartiküller TE 71 ile inkübe edilmiştir, MDA-MB-231, A549 ve OVCAR3 hücre çizgileri. PCBM karıştırma seviyesi konjuge polimerler ve fullerenler 14 arasında ideal bir yük ve enerji transferi özellikleri temin ettiği gösterilmiştir ağırlıkça% 50 PCBM olarak seçildi. Nanoparçacık alımının Floresan görüntüleri Şekil 1B&#39;de</strong...

Watch this Scientific Journal Video about Photodynamic Therapy with Blended Conducting Polymer/Fullerene Nanoparticle Photosensitizers at JoVE.com

Photodynamic Therapy with Blended Conducting Polymer/Fullerene Nanoparticle Photosensitizers

This protocol describes a method for the fabrication of conducting polymer nanoparticles blended with fullerene. These nanoparticles were investigated for their potential use as a next generation photosensitizers for Photodynamic Therapy (PDT).

Karma Polimer / Fulleren Nanopartikül photosensitizers Şefliği ile Fotodinamik Tedavi

In this article a method for the fabrication and reproducible in-vitro evaluation of conducting polymer nanoparticles blended with fullerene as the next ...

photodynamic-therapy-with-blended-conducting-polymerfullerene

Research

JoVE Journal

Chemistry

8.4K Görüntüleme.  University of Central Florida. This protocol describes a method for the fabrication of conducting polymer nanoparticles blended with fullerene. These nanoparticles were investigated for their potential use as a next generation photosensitizers for Photodynamic Therapy (PDT). 