This work was supported by UWS and ThermoFisher Scientific. One of the authors (DK) acknowledges the receipt of an Australian Postgraduate Award.

Not: Bu protokol mültipleksli tespiti için birden fazla dedektörleri ile birleştiğinde bir HPLC sistemi üzerinde bir PSF sütununu nasıl kullanılacağı ile ilgili talimatları içerir. Protokol okuyucu varsayarak kromatografi ve çeşitli HPLC algılama yöntemleri temel bilgi ve deneyime sahiptir yazılmıştır. Dikkat: (metanol, yani MSDS) kullanmadan önce tüm malzeme ve reaktifler için malzeme güvenlik veri sayfaları (MSDS) bakınız. Çözücüler ve Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografi (HPLC) yıkayıcı işlerken tüm uygun güvenlik uygulamalarının kullanımını sağlamak. HPLC, analitik terazi ve dedektör enstrümantasyon mühendislik kontrolleri uygun kullanımını sağlamak ve kişisel koruyucu ekipman (koruyucu gözlük, eldiven, laboratuvar önlüğü, tam uzunlukta pantolon ve kapalı ayakkabı ayak) kullanımını sağlamaktadır. HPLC Enstrüman 1. Setup <ol><li> Lin için, aşırı saf su (örneğin,% 100 Milli-Q su) HPLC aleti hazırlayıne A ve mobil faz olarak B hattı için% 100 metanol ve üretici şartının olarak pompalar temizlemek. Kullanılan dedektörlerin biri MS ise burada olduğu gibi, hem mobil fazlar A ve B için% 0.1 formik asit eklemek </li><li> Dedektör ve sütun arasındaki ölü hacmi en aza indirmek amacıyla, Şekil 2&#39;de gösterildiği gibi HPLC enstrümantal parça ve dedektörler ayarlayın. Bu sütuna göre dedektörlerin uygun yerleştirilmesi gerekir. HPLC sistemi yapılandırmasında esneklik istenmektedir. </li></ol> UV-Vis ve MS Dedektörleri 2. Kurulum <ol><li> İlgili örnek (örneğin, 280 nm) bağlı istenen dalga boyuna UV-Vis detektörü ayarlayın. </li><li> Tam Tarama algılama yöntemi kullanılarak toplam İyon Sayısı (TIC) analizi için pozitif modda MS dedektörü ayarlayın. Ayrıca buna göre aşağıdaki MS parametrelerini ayarlamak: buharlaştırıcı sıcaklığı 500 60 birimlik bir oranda, yardımcı gaz akışı ayarlanır ° C, kılcal sıcaklığı 350 ° C, kılıf gaz40 ve 5 adet gaz akışı, ve sprey voltajı 3.5 kV süpürme. Bu ayarlar, numune analiz edilen bağımlı özel kullanıcı ihtiyaçlarına daha sonra ayarlanabilir. </li></ol> DPPH • Sistem Dedektörü 2,2-Difenil-1 picrylhydrazyl Radikal (DPPH) • Reaktif Kur&#39;un 3. Hazırlık <ol><li> DPPH • 25 mg tartılır ve volümetrik bir şişede 250 ml metanol içinde çözülür. </li><li> DPPH • reaktifine formik asit 250 ul ekle. Işığa maruz kalmasını önlemek için folyo balon örtün. </li><li> 10 dakika boyunca DPPH • reaktifi ihtiva eden bir şişeye sonikasyon. </li><li> Üreticinin şartının gibi hazırlanan DPPH • reaktif ile DPPH • Pompayı temizleyin. </li><li> T-parçasının girişine pompa hattı takarak Şekil 2&#39;ye göre DPPH • sistemi kurmak. </li><li> Inci bir 100 ul reaksiyon bobin takınT-parçasının e çıkış ve dedektör reaksiyon bobin diğer ucunu takın. </li><li> Ve bir sütun ısıtıcı reaksiyon bobini örten 60 ° C kolon ısıtıcı sıcaklığını ayarlamak. </li><li> 520 nm DPPH • UV-Vis detektörü ayarlayın. </li></ol> PSF Sütun 4. Kur <ol><li> HPLC cihazına PSF sütunun girişini bağlayınız. </li><li> 0,13 mm id bir boru uzunluğu 15 cm kullanarak MS dedektörü merkezi bağlantısı. </li><li> 0,13 mm id bir boru uzunluğu 15 cm kullanılarak UV-Vis dedektörü çevresel bir bağlantı noktası bağlayın. </li><li> 0,13 mm id bir boru uzunluğu 15 cm kullanarak DPPH • algılama sisteminin T-parçasına bir çevresel bağlantı noktası bağlayın. </li><li> Bir sütun tıpa kullanarak kullanılmayan periferik bağlantı noktasını engelleyin. </li><li> 1 ml dk HPLC pompası akış hızını getirmek -1% 100 hattı B -% 100 metanol (% 0.1 formik asit). </li><li> % 100 metanol mobil ph ile kolon dengeyeBir 4.6 mm id x 250 mm uzunlukta sütun için 20 dakika boyunca ase. Bu sefer kullanıcı istihdam diğer sütunların boyutlarına göre tartılır. </li></ol> 5. Multiplexed Algılama için PSF Sütun Tuning <ol><li> En az iki boş toplama gemiler bir analitik terazi kullanılarak (DPPH • dedektörü UV-Vis dedektör ve birine bağlı port için bir) kütlesi ölçün. </li><li> Iki ayrı, önceden tartılmış toplama kaplarının (5,1) içine, UV-Vis ve DPPH • bağlantı noktaları mobil fazı toplayın. Toplanması için süreyi kaydedin. Her bir kap içinde solventin en az 500 mg toplayın. </li><li> Toplama kabının tartın ve mobil faz kütlesini belirler. 0.791 g ml -1 metanol yoğunluğu göz önüne alındığında, her bir port toplanan mobil faz hacmi belirlemek. </li><li> Fark ile, yani anma pompa seti debisi eksi DPPH • aracılığıyla akış hızı ve UV-Vis Detector akış portu, MS dedektöre akış hızını belirler. Toplam akışın bir yüzdesi olarak, her bir akış oranını ifade eder. Not: İdeal olarak, akış oranları aşağıdaki gibidir: MS toplam akış hızının% 18 da, UV-Vis% 22, DPPH • detektörü 60% kadar. </li><li> Eğer değilse, UV-Vis detektörü arka basıncı değiştirerek akış yüzdelerini ayarlayın. UV-Vis akış çok yüksek ise, örneğin, UV-Vis detektörü çıkışına 0,13 mm id bir boru 15 cm bölüm eklemek ekleyerek oranını azaltır. Sonra 5.5 adımları 5.1 tekrarlayın. </li></ol> 6. Final Kurulum Koşullar <ol><li> DPPH • detektöre bağlanan çıkış ağzı terk eden, aynı akış hızına DPPH • reaktifi pompa akış hızını ayarlayın. Not: UV-Vis ile çoğullanır PSF sütun, DPPH • ve MS şimdi analiz için hazırdır. </li></ol>

<ol>
	<li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Ladine, J. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+design+of+a+new+concept+chromatography+column.">The design of a new concept chromatography column.</a> Analyst. 136 (24), 5127-5130 (2011).</li><li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Ladine, J. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+separation+performance+using+a+new+column+technology:+Parallel+segmented+outlet+flow.">Enhanced separation performance using a new column technology: Parallel segmented outlet flow.</a> J. Chromatogr, A. 1232, 47-51 (2012).</li><li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Ladine, J. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Active+flow+management+in+preparative+chromatographic+separations:+A+preliminary+investigation+into+enhanced+separation+using+a+curtain+flow+inlet+fitting+and+segmented+flow+outlet.">Active flow management in preparative chromatographic separations: A preliminary investigation into enhanced separation using a curtain flow inlet fitting and segmented flow outlet.</a> 35 (3), 410-415 (2012).</li><li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gradient+elution+chromatography+with+segmented+parallel+flow+column+technology:+A+study+on+4.6mm+analytical+scale+columns.">Gradient elution chromatography with segmented parallel flow column technology: A study on 4.6mm analytical scale columns.</a> J. Chromatogr., A. 1270, 204-211 (2012).</li><li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+HPLC+separation+performance+using+parallel+segmented+flow+chromatography.">Improving HPLC separation performance using parallel segmented flow chromatography.</a> Microchem. J. 111, 3-7 (2013).</li><li>Shalliker, R. A., Ritchie, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Segmented+flow+and+curtain+flow+chromatography:+Overcoming+the+wall+effect+and+heterogeneous+bed+structures.">Segmented flow and curtain flow chromatography: Overcoming the wall effect and heterogeneous bed structures.</a> J. Chromatogr, A. 1335, 122-135 (2014).</li><li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluating+active+flow+technology+HPLC+columns+as+a+platform+for+multiplexed+detection.">Evaluating active flow technology HPLC columns as a platform for multiplexed detection.</a> Microchem. J. 110, 473-479 (2013).</li><li>Camenzuli, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parallel+segmented+outlet+flow+high+performance+liquid+chromatography+with+multiplexed+detection.">Parallel segmented outlet flow high performance liquid chromatography with multiplexed detection.</a> Anal. Chim. Acta. 803, 154-159 (2013).</li><li>Shalliker, R. A., Camenzuli, M., Pereira, L., Ritchie, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parallel+segmented+flow+chromatography+columns:+Conventional+analytical+scale+column+formats+presenting+as+a+'virtual'+narrow+bore+column.">Parallel segmented flow chromatography columns: Conventional analytical scale column formats presenting as a 'virtual' narrow bore column.</a> J. Chromatogr., A. 1262, 64-69 (2012).</li><li>Soliven, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+the+performance+of+narrow-bore+HPLC+columns+using+active+flow+technology.">Improving the performance of narrow-bore HPLC columns using active flow technology.</a> Microchem. J. 116, 230-234 (2014).</li><li>Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Dennis, G. R., Shalliker, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Parallel+segmented+flow+chromatography+columns+with+multiplexed+detection:+An+illustration+using+antioxidant+screening+of+natural+products.">Parallel segmented flow chromatography columns with multiplexed detection: An illustration using antioxidant screening of natural products.</a> Microchem. J. 110, 726-730 (2013).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Bu çalışma karakterizasyonu ve mültipleksli algılama paralel parçalı akış (PSF) sütunu istihdam ile HPLC kullanılarak kahve profilleme gerektirir. PSF sütunlarını kullanarak Multiplexed HPLC geleneksel multi-algılama süreçleri kullanarak alır zaman bir kısmını içinde molekül-özel bilgilerin daha yüksek derecede elde ederken örnek veri karmaşıklığını azaltarak önemli kimyasal kişilerin belirlenmesi ve tanımlanmasını sağlar. PSF sütun mültipleksli tespiti için bir platform sağlar,...

Aktif Akış Teknoloji Sütunlar Aktif akım teknolojisi (AFT) kromatografi kolonları son zamanlarda akış heterojenite 1-6 ile bağlantılı ayrımları verimsizliğe üstesinden gelmek için geliştirilmiş ve aynı zamanda mültipleksli algılamayı etkinleştirmek için. Bu özel iletişim ayrıntılarıyla paralel operasyonel süreç mültipleksli algılama ile akış (PSF) sütun bölümlenmiş. PSF kolonun temel fonksiyonel avantajlar şunlardır: (1) kolon yatak radyal merkezi bölgeden akışı, (2), bir tespit tarafından işlenen mobil faz hacim akışının çevre ya da duvar bölgesinden izole edilir Kaynak azalır, ve (3) algılama kaynakları her algılama süreci boyunca tespit gecikmeleri instilling veya sonradan yazılan sütun akışın 7,8 yarma gerektirmeden örnek bilgileri genişletmek için çoğaltılmış olabilir. A sağlayan PSF sütunun tasarımında anahtar özelliğibirden fazla mesaj saptama dvantage yeni çıkış bağlantı ve frit düzeneği olup. 1, geleneksel bir kolona kıyasla AFT kolonun bir fotoğrafıdır. Bu bölme işlemi sonrası kolon akış akış bölme aynı değildir paralel parçalı akış sütunlar kullanılarak elde anlamak için önemlidir. Bir post kolon akımdan (yani, eksenel), böylece her bir akış akışı verimliliği ve duyarlılık ile eşit derecede örneklenir kuyruk ekstremitelere lider kenarından tüm numune bandı bölünmüş; duyarlılık büyüklüğü dolayısıyla sayısı böler tarafından bölünmüş. PSF ise, bölme işlemi örnekleri bant radyal, eksenel değil. Bu nedenle, merkez liman örnekleri zirve apeks - tepe en konsantre bölgesi. Pik yaygın atık bölgeye göre seyreltilmiş değildir Böylece, burada hassasiyet yüksektir. Periferik bağlantı noktalarından elüsyon Örnek merkezindeki kadar etkili değildirbandı yerine eksenel olarak daha radyal olarak örneklenmiş olduğu için l bölgesi, ancak, tepe genişliği, örneğin, eksenel yönde bir Kolon sonrası bölünme tepe bölen bir numune alma işlemi için olacağından daha dardır. Bu nedenle, konsantrasyon bağımlı bir detektör ile hassasiyet azaltılmaz. PSF sütununda, çıkış bağlantı çok sayıda çıkış ağızlarından oluşan ve montaj bu amaçla iç kısmında halka şeklinde bir cam hamuru vardır yer almaktadır. Çıkış hamuru kanallarının dış radyal kısmı çevresel veya duvar kısmı çıkış akış portları yoluyla kolondan dışarı akarlar ise, bu halka şeklindeki frit kanallarının iç kısım, radyal merkezi çıkış portu üzerinden kolondan dışarı akarlar. Çıkış frit iç ve dış kısımlar, bu akım bölgeleri 2 arasındaki çapraz akışını önleyen bir geçirmez bir bariyer ile ayrılır. Bu tasarımın bir sonucu olarak, kolon yatağı üzerinden merkezi radyal akış akımı duvar kısmı akış bileşenler ayrılırsütun ide. Bu iki bölgeden akışının ilgili kısım bu tür bir ayırma verimliliği veya algılama hassasiyeti sütun teknolojinin çeşitli fonksiyonel yönleri, optimize etmek için, basınç yönetimi hemen hemen herhangi bir arzu edilen orana değiştirilebilir. Özünde, bu tasarım etkili bir dar iç çapa sahip, geniş formatlı sütununda bir &#39;sanal&#39; sütunu içinde kurar ve kolon yatak heterojenitesini ve duvar efektleri 9,10 üstesinden gerçek bir duvar daha az sütun olarak dolayısıyla kolon fonksiyonları. PSF sütunların önemli faydaları kolon verimliliği, algılama kaynağı (lar) ve mültipleksli algılama etkinleştirmek için çözücü işlem minimize gelişmeler vardır. Bununla birlikte, ek bir avantajı, herhangi bir bandın atık ve önü bölgeleri genel elüsyon çıkarılır, çünkü elüsyon veya saptama de çözünmüş madde profili olmasıdır, aksi takdirde, aynı s gözlemlenen edilenden daha yüksek bir konsantrasyonda mevcut olduğuKullanılan bölütleme oranına bağlı olarak, geleneksel bir sütun üzerinde enjeksiyon ve konsantrasyon yük olute. Bunun bir sonucu olarak genellikle PSF sütun 2 üzerinde yapılan ayırımlar için sinyal yoğunluğundaki bir kazanç olduğu gözlemlendi. Aslında, bölütleme oranı, dört çıkış ağızlarının her biri akış çıkış% 25, ​​mor ötesi (UV) algılama kullanılarak gözlenir sinyal yoğunluğu, geleneksel bir ile belirgin olarak aynı sinyal yoğunluğu pratik gösterir, öyle ki düzeltilmiş olup olmadığını Hareketli fazın tamamı (% 100) 7 incelendiğinde kolonu. Ayrıca, merkez ve çeper akış bölgeleri arasındaki çıkış oranı ince ayar kolon verimliliği optimize edilmesini sağlar. (1) debi, (2) segmentasyon oranı ve (3) çözünen tutma faktörü: Sütun verimliliği kazançlar bu verimlilik kazançları üç faktörün fonksiyonu olduğundan, tek bir değere ifade edilemez AFT sütunlarını kullanarak gözlenen . Bununla birlikte, verimlilik kazanımları conv göreentional sütunlar hemen hemen her zaman gözlenir ve bazen bu kazanımlar teorik plaka 1,2 sayısında% 100&#39;den fazla bulunmaktadır. Ayarlamak için yeteneği segmentasyon oranı analisti etkin bir &#39;sanal&#39; sütununun çapı terzi sağlar ve bu algılama sürecine ilişkin önemli bir faktördür. Bölütleme nispeti dairesel merkez çıkış portundan elüsyon mobil faz% 21 olduğu zaman, örneğin, bir sanal 2.1 mm iç çapı (id) kolonu, fiziksel bir 4.6 mm id kolonundan kurulur. Bu koşullar altında, 2.1 mm id, sanal sütun, akış hızına bağlı olarak, geleneksel bir 2.1 mm id sütun daha fazla% 70 daha büyük olabilir verimlilik ve çözünen tutma faktörü 10 ile gerçekleştirir. Mültipleksli tespiti için kullanılan geçerli PSF kolon tasarımı 4-portlu uydurma çıkış içeriyor, ancak sütun takılabilir 2 port uç parçası da, ancak, bu algılama t sınırlarSadece iki dedektör o. Bu dört dedektörleri mültipleksli tespiti için kapsamının genişletilmesi 4-port çıkış PSF sütun aynı anda bağlanabilir dışında bu sütunlardan temel çalışma, ancak, aynıdır. Kenara öncesi ve sonrası kolon bağ borudan, sadece ek gereklilikleri PSF sütun periferal çıkış delikleri bağlanabilir boru ve her tüpe geçen mobil faz miktarı ölçülebilir hangi bir vasıta olup çalıştırmak için, tipik bir kitle ölçümü veya hacimsel ölçüm ya. Ayarlama kolaylığı açısından, bütün çıkış akış boru iç çapı ile aynı olmalıdır. Periferik ve santral radyal çıkış limanları arasında akış oranı daha sonra sadece uydurma periferal çıkışında, veya radyal merkezi çıkış noktası üzerinde tüp sonrası dedektör uzunluğu bulunan boru uzunluğunu değiştirerek, basınç yönetimi kullanımı yoluyla değiştirilir. Multiplexed Algılama PSF sütunlar kullanma </strong&gt; PSF gruplarından önemli bir avantajı, çıkış çıkış ağızlarının her biri, böylece birden fazla mesaj saptama sağlayan bir algılama kaynağına doğrudan bağlanabilir olmasıdır. Iyi tasarlanmış bir tespit sistemi olarak birden fazla mesaj göndermiş algılama ile tek bir analiz numunesi içindeki bileşenlerin doğası ile ilgili önemli bilgiler sağlayabilir. Önemlisi, yıkıcı ve tahribatsız testler algılama gecikmeden, tam olarak aynı anda yapılabilir. Bu bileşenler UV ve / veya kütle spektrometrisi (MS) tespit yanıtları 7,11 ile elüte gözlenmiştir ile DPPH • reaktifi kullanılarak, örnek, bir anti-oksidan için, mutlak atanmasına olanak verir. Bu nedenle, dört bağımsız detektörler, dört çıkış portu üzerinden her bir detektöre yönlendirilir akış uygun oranlarda eşzamanlı olarak çalıştırılabilir. Bu bağlantı noktaları üzerinden akışı kolayca dedektörleri herhangi ulaşan çözünen miktarı ayarlanabilir beri takım elbise ayarlanabilirAyrıca dedektörün kaynağının hassasiyeti. Bu en etkili çözünen geçiş radyal merkezi çıkış deliğinden görülmektedir ki, not edilmelidir. Periferik limanların her her port üzerinden% 25 olarak ayarlandığında, sadece biraz daha az verimli geleneksel sütunda daha eşdeğer ayırma verimliliği, sunuyoruz. Bunun gibi, nicel dedektör radyal merkezi çıkış ağzının numunenin analiz etmek için ayarlanmış olması önemlidir. Çoğullama tespiti amacıyla bir PSF sütun kurarken, verimli ve yüksek kalitede sonuçlar elde etmek için yapılması gereken hususlar bir dizi vardır; her port için tüp boyutları olduğunu, seçim dedektörü ve akış ayarlaması türü için hangi port. Her Limanı için Tüp Boyutları Kromatografide Kolon sonrası boru uzunluğu ayırma verimliliği ve performansında önemli bir rol oynar. Büyük deadetektöre kolon çıkışında, uzun ve geniş id boru sonucu d hacimli verimliliği, çözünürlük ve hassasiyet kaybına neden olur. Çoğullama faydalarını sağlarken etkili ayırma sağlayan maksimum potansiyel ulaşmak için PSF sütun kurarken Böylece, uygun boru ölçüleri kullanılmalıdır. Dedektör Port Şekil 2, birden fazla mesaj saptama (Ultraviyole-Görünür (U-Vis), kütle spektrometresi (MS) ve 2,2-difenil-1-picrylhydrazyl (DPPH) • tespiti) bir örnek kurulumun bir gösterimidir. Illüstrasyon, merkezi liman DPPH • oysa MS dedektör bağlı olduğu ve UV-Vis dedektörleri periferik limanlarına bağlı olduğunuzu gösterir. MS üç en hassas dedektör olduğundan, merkezi çıkış deliğinden yönettiği bu dedektöre akar. DPPH • algılama gibi presenc seçicidirantioksidanların e ve bu dedektöre akış, en az duyarlı ve bant genişlemesine en hoşgörülü bir çevresel limandan yönetilmiştir. UV-Vis ikincil &#39;genel&#39; dedektör olduğunu, bu yüzden ikinci bir çevresel limandan yönettiği bu dedektöre akar. Akış Ayarı Uygun boru dedektöre bir limandan bir kere yerleştirildikten sonra, dedektörden her biri çıkan akım gerekli miktara ayarlanabilir. Her dedektör çıkan akış miktarını ölçmek için basit bir yolu zaman belirli bir süre boyunca her port üzerinden elutes mobil faz miktarını tartmak etmektir. Yüzde akışı böylece tespit edilebilir ve akış oranları kısaltılması veya buna uygun olarak tercih edilen detektör gereksinimlerine uygun detektör üzerindeki çıkış hattına bağlı boru uzatma biri tarafından ayarlanabilir. Farklı detektörler, örneğin, akış hücresi, akış farklı gereksinimleri vardırBir floresan dedektörü (FLD) oranı sınırlı akış değil, ama bakım akış hücresi aşırı basınçlandırma önlemek için alınmalıdır. Bu nedenle FLD boyunca akış kontrolü genellikle, diğer dedektör boyunca basınç düşüşünü ve akışın geri kalan daha sonra FLD geçer ayarlanmasıyla elde edilir. Teslim edilir akış miktarı duyarlı olan bir detektör, MS olup. Genellikle, mevcut yüksek uç kütle spektrometre kolayca yaklaşık 1 ila 1.5 ml / orta sulu mobil faz min işleyebilir. Bu akış hızının üzerinde, kaynağın sel MS çalışamaz hale getirebilir. Ancak, çoğu kitle spektrometrelerde algılama hassasiyeti düşük akış oranları kullanılarak yararlandı; dolayısıyla PSF akış bölme yetenekleri, MS algılama içeren uygulamalar için son derece faydalıdır. Yüksek kolon hacimsel debiler ancak MS dedektör taşınan düşük hacimli yükleri ile, kullanılabilir. MS detektöre akış ayarlama Bununla birlikte, önceki basınç düşüşü ayarlama yapılmalıdırMS dedektör yerine yazılan MS. Basınç kolayca uygunsuz ölü hacim eklemeden ayarlanabilir olarak Burada, dar delik boru (0.1 mm id) kullanımı çok yararlıdır. Dedektör tipine segmentasyon oranının ayarlanması bağlı öncesi ya da sonrası her iki dedektör yapılabilir. UV-Vis kullanıldığı gibi bir tahribatsız dedektör, akış yüzdesi ölçülür ve sonrası dedektörü ayarlanmış olsaydı. Tek bir yıkıcı dedektör kurmak multipleks kullanılması durumunda akış yüzdesi geri diğer liman akış yüzdeleri bakımından hesaplanarak belirlenir. Reaktif detektör gibi DPPH • olarak kullanılır ise, akış oranı reajanı eklenmesi olmaksızın direk detektörü ölçülür; İki veya daha fazla yıkıcı dedektörleri kullanılırsa, o zaman akış oranı öncesi dedektör ölçülür. Algılama ek enstrümantasyon gibi DPPH • gerektirebilir sistemleri, akış değiştirebilir ekstra sistem basıncını olacakyüzde kez algılama sistemine bağlı. Bu nedenle, dikkatli bir değerlendirme yıkıcı bir dedektörün sistem basıncı, debi oranını ayarlayarak ön dedektöre dikkat edilmelidir. Bakılmaksızın port herhangi aracılığıyla ayarlanır akış oranı, kantitatif bilgiler uygun standardizasyon yoluyla elde edilmelidir. Akış oranları ayarlandıktan sonra, ancak, bunlar sağlam ve hatta gradient çıkma koşulları 7 altında değişmeyen, Bu yazının eşlik ayrıntılı video protokolü algılama çoklanmış modda PSF sütun işleyişini kullanmak ve ayarlamak nasıl göstermek için tasarlanmıştır.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="686">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">HPLC instrument</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:185px;">Multiple detectors of choice for multiplexed detection. Detectors of choice may require additional instrumentation i.e. pump.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Parallel Segmented Flow HPLC column</td>
			<td style="width:167px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">Not Defined</td>
			<td>Soon to be commercialised</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Methanol</td>
			<td style="width:167px;">Any brand</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>HPLC Grade</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">PEEK tubing</td>
			<td style="width:167px;">Any brand</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Various lengths and i.d.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Column stoppers</td>
			<td style="width:167px;">Any brand</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>For blocking unused peripheral ports.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">PEEK tube cutter</td>
			<td style="width:167px;">Any brand</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Analytical Scale Balance</td>
			<td style="width:167px;">Any brand</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Stop watch</td>
			<td style="width:167px;">Any brand</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Eluent collection vessels</td>
			<td style="width:167px;">Any brand</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>1-2 mL Sample vials can be used as eluent collection vessels</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

tuning a parallel segmented flow column and enabling multiplexed detection

Active flow technology (AFT) is new form of column technology that was designed to overcome flow heterogeneity to increase separation performance in terms of efficiency and sensitivity and to enable multiplexed detection. This form of AFT uses a parallel segmented flow (PSF) column. A PSF column outlet end-fitting consists of 2 or 4 ports, which can be multiplexed to connect up to 4 detectors. The PSF column not only allows a platform for multiplexed detection but also the combination of both destructive and non-destructive detectors, without additional dead volume tubing, simultaneously. The amount of flow through each port can also be adjusted through pressure management to suit the requirements of a specific detector(s). To achieve multiplexed detection using a PSF column there are a number of parameters which can be controlled to ensure optimal separation performance and quality of results; that is tube dimensions for each port, choice of port for each type of detector and flow adjustment. This protocol is intended to show how to use and tune a PSF column functioning in a multiplexed mode of detection.

Bir multiplekslenmiş HPLC analizi PSF modunda (Şekil 1) bir AFT kolonu kullanılarak gerçekleştirilen ve Şekil 2 &#39;de gösterildiği gibi oluşturuldu. Kurulum Bu tür kahve numunesi toplam UV-Vis, DPPH • ve MS kullanılarak eş zamanlı olarak analiz edilmesine izin İyon Sayısı (TIC) modu. Şekil 3&#39;te görüldüğü gibi kromatogramları eş zamanlı olarak kaydedildi beri, tutma süresi uyum dayalı TIC tepkiler - DPPH • yanıt...

Watch this Scientific Journal Video about Tuning a Parallel Segmented Flow Column and Enabling Multiplexed Detection at JoVE.com

Tuning a Parallel Segmented Flow Column and Enabling Multiplexed Detection

Here, we present a protocol for the operation and tuning of parallel segmented flow chromatography columns to enable multiplexed detection.

Paralel Segment Akış Sütun Tuning ve Multipleks Algılama etkinleştirme

Active flow technology (AFT) is new form of column technology that was designed to overcome flow heterogeneity to increase separation performance in terms ...

tuning-parallel-segmented-flow-column-enabling-multiplexed

Research

JoVE Journal

Chemistry

7.3K Görüntüleme.  University of Western Sydney. Here, we present a protocol for the operation and tuning of parallel segmented flow chromatography columns to enable multiplexed detection. 

Video: Tuning a Parallel Segmented Flow Column and Enabling Multiplexed Detection

Multiplexed Fluorescent Microarray for Human Salivary Protein Analysis Using Polymer Microspheres and Fiber-optic Bundles

Herein, we describe a protocol for simultaneously measuring six proteins in saliva using a fiber-optic microsphere-based antibody array. The immuno-array technology employed combines the advantages of microsphere-based suspension array fabrication with the use of fluorescence microscopy. As described in the video protocol, commercially available 4.5 &#956;m polymer microspheres were encoded into seven different types, differentiated by the concentration of two fluorescent dyes physically trapped inside the microspheres. The encoded microspheres containing surface carboxyl groups were modified with monoclonal capture antibodies through EDC/NHS coupling chemistry. To assemble the protein microarray, the different types of encoded and functionalized microspheres were mixed and randomly deposited in 4.5 &#956;m microwells, which were chemically etched at the proximal end of a fiber-optic bundle. The fiber-optic bundle was used as both a carrier and for imaging the microspheres. Once assembled, the microarray was used to capture proteins in the saliva supernatant collected from the clinic. The detection was based on a sandwich immunoassay using a mixture of biotinylated detection antibodies for different analytes with a streptavidin-conjugated fluorescent probe, R-phycoerythrin. The microarray was imaged by fluorescence microscopy in three different channels, two for microsphere registration and one for the assay signal. The fluorescence micrographs were then decoded and analyzed using a homemade algorithm in MATLAB.

We describe a procedure for profiling salivary proteins using multiplexed microsphere-based antibody arrays. Monoclonal antibodies were covalently linked to fluorescent dye-encoded 4.5 &#x03BC;m polymer microspheres using carbodiimide chemistry. The modified microspheres were deposited in fiber-optic microwells to measure protein levels in saliva using fluorescence sandwich immunoassays.

Polimer Microspheres ve Fiber-optik Paketler kullanma İnsan Tükürük Protein Analiz için çoklu Floresan Microarray

Herein, we describe a protocol for simultaneously measuring six proteins in saliva using a fiber-optic microsphere-based antibody array. The immuno-array ...

Kimya

Exploring the Radical Nature of a Carbon Surface by Electron Paramagnetic Resonance and a Calibrated Gas Flow

While the first Electron Paramagnetic Resonance (EPR) studies regarding the effects of oxidation on the structure and stability of carbon radicals date back to the early 1980s the focus of these early papers primarily characterized the changes to the structures under extremely harsh conditions (pH or temperature)1-3. It is also known that paramagnetic molecular oxygen undergoes a Heisenberg spin exchange interaction with stable radicals that extremely broadens the EPR signal4-6. Recently, we reported interesting results where this interaction of molecular oxygen with a certain part of the existing stable radical structure can be reversibly affected simply by flowing a diamagnetic gas through the carbon samples at STP7. As flows of He, CO2, and N2 had a similar effect these interactions occur at the surface area of the macropore system.
This manuscript highlights the experimental techniques, work-up, and analysis towards affecting the existing stable radical nature in the carbon structures. It is hoped that it will help towards further development and understanding of these interactions in the community at large.

Stable radicals that are present in carbon substrates interact with paramagnetic oxygen through a Heisenberg spin exchange. This interaction can be significantly reduced under STP conditions by flowing a diamagnetic gas over the carbon system. This manuscript describes a simple method to characterize the nature of those radicals.

Seyitömer ve Kalibre Gaz Akışının Karbon Yüzey Radikal Doğa keşfetmek

While the first Electron Paramagnetic Resonance (EPR) studies regarding the effects of oxidation on the structure and stability of carbon radicals date ...

Transport of Surface-modified Carbon Nanotubes through a Soil Column

Carbon nanotubes (CNTs) are widely manufactured nanoparticles, which are being utilized in a number of consumer products, such as sporting goods, electronics and biomedical applications. Due to their accelerating production and use, CNTs constitute a potential environmental risk if they are released to soil and groundwater systems. It is therefore essential to improve the current understanding of environmental fate and transport of CNTs. The transport and retention of CNTs in both natural and artificial media have been reported in literature, but the findings widely vary and are thus not conclusive. There are a number of physical and chemical parameters responsible for variation in retention and transport. In this study, a complete procedure of selected multiwalled carbon nanotubes (MWCNTs) is presented starting from their surface modification to a complete set of laboratory column experiments at critical physical and chemical scenarios. Results indicate that the stability of the commercially available MWCNTs are critical with their attached surface functional group which can also influence the transport and retention of MWCNT through the surrounding medium.

Surface properties of a nanoparticle are important for their interaction with the surrounding medium. Therefore the surface modification of carbon nanotubes can be critical for their transport and retention through porous media. Here, lab scale column experiments are used to understand the possible transport and retention of these nanoparticles.

Bir Toprak Kolonundaki Yüzey modifiye Karbon Nanotüpler taşınması

Carbon nanotubes (CNTs) are widely manufactured nanoparticles, which are being utilized in a number of consumer products, such as sporting goods, ...

Ethylene Polymerizations Using Parallel Pressure Reactors and a Kinetic Analysis of Chain Transfer Polymerization

We demonstrate a method for high-throughput catalyst screening using a parallel pressure reactor starting from the initial synthesis of a nickel &#945;-diimine ethylene polymerization catalyst. Initial polymerizations with the catalyst lead to optimized reaction conditions, including catalyst concentration, ethylene pressure and reaction time. Using gas-uptake data for these reactions, a procedure to calculate the initial rate of propagation (kp) is presented. Using the optimized conditions, the ability of the nickel &#945;-diimine polymerization catalyst to undergo chain transfer with diethylzinc (ZnEt2) during ethylene polymerization was investigated. A procedure to assess the ability of the catalyst to undergo chain transfer (from molecular weight and 13C NMR data), calculate the degree of chain transfer, and calculate chain transfer rates (ke) is presented.

A protocol for the high-throughput analysis of polymerization catalyst, chain transfer polymerizations, polyethylene characterization, and reaction kinetic analysis is presented.

Paralel Basınç Reaktörleri ve Zincir Transferi Polimerizasyon bir Kinetik Analizi Etilen Polimerizasyonlar

We demonstrate a method for high-throughput catalyst screening using a parallel pressure reactor starting from the initial synthesis of a nickel ...

Highly Stereoselective Synthesis of 1,6-Ketoesters Mediated by Ionic Liquids: A Three-component Reaction Enabling Rapid Access to a New Class of Low Molecular Weight Gelators

In organic chemistry ionic liquids (ILs) have emerged as safe and recyclable reaction solvents. In the presence of a base ILs can be deprotonated to form catalytically active N-Heterocyclic Carbenes (NHCs). Here we have used ILs as precatalysts in the addition of &#945;,&#946;-unsaturated aldehydes to chalcones to form 1,6-ketoesters, incorporating an anti-diphenyl moiety in a highly stereoselective fashion. The reaction has a broad substrate scope and several functional groups and heteroaromatics can be integrated into the ketoester backbone in generally good yields with maintained stereoselectivity. The reaction protocol is robust and scalable. The starting materials are inexpensive and the products can be obtained after simple filtration, avoiding solvent-demanding chromatography. Furthermore, the IL can be recycled up to 5 times without any loss of reactivity. Moreover, the 1,6-ketoester end product is a potent gelator in several hydrocarbon based solvents. The method enables rapid access to and evaluation of a new class of low molecular weight gelators (LMWGs) from recyclable and inexpensive starting materials.

Ionic liquids (ILs) mediate fast, simple and cheap access to 1,6-ketoesters in high diastereoselectivities and good yields. The reaction protocol is robust and the 1,6-ketoesters can be obtained in gram scale after a simple filtration protocol. Moreover, the 1,6-ketoesters are potent gelators in hydrocarbon solvents.

İyonik Sıvılar ARACILI 1,6-Ketoester son derece Stereoseçici Sentezi: Düşük Molekül Ağırlıklı Gelators Yeni Bir Sınıf Rapid Erişim etkinleştirilmesi A Üç bileşenli Tepki

In organic chemistry ionic liquids (ILs) have emerged as safe and recyclable reaction solvents. In the presence of a base ILs can be deprotonated to form ...

Post Column Derivatization Using Reaction Flow High Performance Liquid Chromatography Columns

A protocol for the use of reaction flow high performance liquid chromatography columns for methods employing post column derivatization (PCD) is presented. A major difficulty in adapting PCD to modern HPLC systems and columns is the need for large volume reaction coils that enable reagent mixing and then the derivatization reaction to take place. This large post column dead volume leads to band broadening, which results in a loss of observed separation efficiency and indeed detection in sensitivity. In reaction flow post column derivatization (RF-PCD) the derivatization reagent(s) are pumped against the flow of mobile phase into either one or two of the outer ports of the reaction flow column where it is mixed with column effluent inside a frit housed within the column end fitting. This technique allows for more efficient mixing of the column effluent and derivatization reagent(s) meaning that the volume of the reaction loops can be minimized or even eliminated altogether. It has been found that RF-PCD methods perform better than conventional PCD methods in terms of observed separation efficiency and signal to noise ratio. A further advantage of RF-PCD techniques is the ability to monitor effluent coming from the central port in its underivatized state. RF-PCD has currently been trialed on a relatively small range of post column reactions, however, there is currently no reason to suggest that RF-PCD could not be adapted to any existing one or two component (as long as both reagents are added at the same time) post column derivatization reaction.

A protocol for the use of reaction flow high performance liquid chromatography columns for methods employing post column derivatization (PCD) is presented.

Mesaj Sütun Türevlendirme Reaksiyon Akış Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografi sütunlar kullanma

A protocol for the use of reaction flow high performance liquid chromatography columns for methods employing post column derivatization (PCD) is ...

Curtain Flow Column: Optimization of Efficiency and Sensitivity

Active Flow Technology (AFT) is a form of column technology that increases the separation performance of a HPLC column through the use of a specially purpose built multiport end-fitting(s). Curtain Flow (CF) columns belong to the AFT suite of columns, specifically the CF column is designed so that the sample is injected into the radial central region of the bed and a curtain flow of mobile phase surrounding the injection of solute prevents the radial dispersion of the sample to the wall. The column functions as an 'infinite diameter' column. The purpose of the design is to overcome the radial heterogeneity of the column bed, and at the same time maximize the sample load into the radial central region of the column bed, which serves to increase detection sensitivity. The protocol described herein outlines the system and CF column set up and the tuning process for an optimized infinite diameter 'virtual' column.

Here, we present a protocol for the operation and optimization of Active Flow Technology (AFT) column in Curtain flow (CF) mode for enhanced separation performance.

Akış Sütun Perde: Verimliliği ve Duyarlılık Optimizasyonu

Active Flow Technology (AFT) is a form of column technology that increases the separation performance of a HPLC column through the use of a specially ...

A Protocol for Electrochemical Evaluations and State of Charge Diagnostics of a Symmetric Organic Redox Flow Battery

Redox flow batteries have been considered as one of the most promising stationary energy storage solutions for improving the reliability of the power grid and deployment of renewable energy technologies. Among the many flow battery chemistries, non-aqueous flow batteries have the potential to achieve high energy density because of the broad voltage windows of non-aqueous electrolytes. However, significant technical hurdles exist currently limiting non-aqueous flow batteries to demonstrate their full potential, such as low redox concentrations, low operating currents, under-explored battery status monitoring, etc. In an attempt to address these limitations, we recently reported a non-aqueous flow battery based on a highly soluble, redox-active organic nitronyl nitroxide radical compound, 2-phenyl-4,4,5,5-tetramethylimidazoline-1-oxyl-3-oxide (PTIO). This redox material exhibits an ambipolar electrochemical property, and therefore can serve as both anolyte and catholyte redox materials to form a symmetric flow battery chemistry. Moreover, we demonstrated that Fourier transform infrared (FTIR) spectroscopy could measure the PTIO concentrations during the PTIO flow battery cycling and offer reasonably accurate detection of the battery state of charge (SOC), as cross-validated by electron spin resonance (ESR) measurements. Herein we present a video protocol for the electrochemical evaluation and SOC diagnosis of the PTIO symmetric flow battery. With a detailed description, we experimentally demonstrated the route to achieve such purposes. This protocol aims to spark more interests and insights on the safety and reliability in the field of non-aqueous redox flow batteries.

We present the protocols for electrochemically evaluating a symmetric non-aqueous organic redox flow battery and for diagnosing its state of charge using FTIR.

Elektrokimyasal Değerlendirmeleri ve Simetrik Organik Redoks Akış Pil Şarj Diagnostics Devlet için Protokol

Redox flow batteries have been considered as one of the most promising stationary energy storage solutions for improving the reliability of the power grid ...

A Continuous-flow Photocatalytic Reactor for the Precisely Controlled Deposition of Metallic Nanoparticles

In this work, a novel photocatalytic reactor for the pulsed and controlled excitation of the photocatalyst and the precise deposition of metallic nanoparticles is developed. Guidelines for the replication of the reactor and its operation are provided in detail. Three different composite systems (Pt/graphene, Pt/TiO2, and Au/TiO2) with monodisperse and uniformly distributed particles are produced by this reactor, and the photodeposition mechanism, as well as the synthesis optimization strategy, are discussed. The synthesis methods and their technical aspects are described comprehensively. The role of the ultraviolet (UV) dose (in each excitation pulse) on the photodeposition process is investigated and the optimum values for each composite system are provided.

For a continuous and scalable synthesis of noble-metal-based nanocomposites, a novel photocatalytic reactor is developed and its structure, operation principles, and product quality optimization strategies are described.

Metalik nano tanecikleri tam kontrollü birikimi için sürekli akış Fotokatalitik reaktör

In this work, a novel photocatalytic reactor for the pulsed and controlled excitation of the photocatalyst and the precise deposition of metallic ...

Tuning the Acidity of Pt/ CNTs Catalysts for Hydrodeoxygenation of Diphenyl Ether

We herein present a method for the synthesis of HNbWO6, HNbMoO6, HTaWO6 solid acid nanosheet modified Pt/CNTs. By varying the weight of various solid acid nanosheets, a series of Pt/xHMNO6/CNTs with different solid acid compositions (x = 5, 20 wt%; M = Nb, Ta; N = Mo, W) have been prepared by carbon nanotube pretreatment, protonic exchange, solid acid exfoliation, aggregation and finally Pt particles impregnation. The Pt/xHMNO6/CNTs are characterized by X-ray diffraction, scanning electron microscopy, transmission electron microscopy and NH3-temperature programmed desorption. The study revealed that HNbWO6 nanosheets were attached on CNTs, with some edges of the nanosheets being bent in shape. The acid strength of the supported Pt catalysts increases in the following order: Pt/CNTs &#60; Pt/5HNbWO6/CNTs &#60; Pt/20HNbMoO6/CNTs &#60; Pt/20HNbWO6/CNTs &#60; Pt/20HTaWO6/CNTs. In addition, the catalytic hydroconversion of lignin-derived model compound: diphenyl ether using the synthesized Pt/20HNbWO6 catalyst has been investigated.

A protocol for the synthesis of HNbWO6, HNbMoO6, HTaWO6 solid acid nanosheet modified Pt/CNTs is presented.

Difenil Eterhidrodeoksijenasyonu için Pt/ CNTs Katalizörlerinin Asitliğini Değiştirme

We herein present a method for the synthesis of HNbWO6, HNbMoO6, HTaWO6 solid acid nanosheet modified Pt/CNTs. By varying the weight of various solid acid ...