Yazarlar verimli tartışmalar için Javier E. Garcia ve teknik yardım için Lene Grönkjaer ve Merete K. Raarup teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma Aarhus Üniversitesi Araştırma Vakfı tarafından finanse edildi ve Simon Vakfı Spies.

Deney protokolü gözden geçirilmeli ve Aarhus County Etik Komitesi (M-20100032) tarafından onaylanmıştır. Oranlı metrik Dye 1. Konfokal mikroskopik Kalibrasyon <ol><li> görüntü elde etmek için, bir kuluçka ile donatılmış bir ters konfokal mikroskop, bir 63X / 1.2 sayısal diyafram suya daldırma hedefi, bir 543 nm lazer hattı ve bir META dedektör kullanın. </li><li> HEPES stok çözeltileri (0.1 pH birimi adımlarla pH 4,5-8,5 ayarlanmış 50 mM) tamponu hazırlayın. Floresan mikroskopi için berrak tabanlı 96 oyuklu bir plaka gözlerine, her çözeltinin 100 ul pipet. </li><li> oranlı metrik boya C-SNARF-4 işlerken nitril eldiven giyin. dimetil sülfoksit içinde bir boya, 1 mM stok çözelti hazırlayın. de HEPES tamponu her stok çözeltisi 5 ul ekle. Mikroskop 96 oyuklu plaka koyun. </li><li> mikroskop açın. mikroskop yazılımını açın. Aşağıdaki paneller tıklayın: Lazer → Edinme; → M EdinmeICRO; → Config&#39;i Edinme; → Tarama Edinme; → Stage kazanır. 37 ° C inkübatör kadar ısıtın. </li><li> &quot;Lazer Kontrol&quot; penceresinde 543 nm lazer ve &quot;Açık&quot; düğmesini tıklayarak 543 nm lazer çizgisi açın. &quot;Mikroskop Kontrolü&quot; penceresinde 63X / 1.2 sayısal diyafram suya daldırma hedefi seçin. </li><li> Aynı anda 576- 608-nm (yeşil) ve 629- nm 661 (kırmızı) aralıklarla ( &quot;Yapılandırma Kontrolü&quot; → &quot;ChS&quot;) içinde floresan izlemek için META dedektörü ayarlayın. lazer gücü ( &quot;Yapılandırma Kontrolü&quot; → &quot;Uyarma&quot;) ayarlayın. ( &quot;İğne Deliği&quot; → &quot;Tarama Kontrolü&quot;) 1,6 mikron optik dilim kalınlığı elde etmek için iğne deliği ayarlayın. </li><li> 5 um 96-çukurlu plaka cam alt yukarıdaki her HEPES tampon çözeltisi, bir imgesi alınır. Not: odak düzlemi cam alt aşağıda yer almaktadır en kısa sürede, hiçbir floresan ışık görülebilirekranda. her üçüncü görüntüde sonra, sıfır ve arka plan çıkarma için bir görüntü almak için lazer gücünü ayarlayın. </li><li> üç nüsha olarak kalibrasyon deneyi (1,2-1,7) gerçekleştirin. </li><li> Tüm kırmızı ve yeşil görüntülerde ortalama floresan yoğunluğu ve standart sapması belirleyin. <ol><li> Denklemlere göre her resim için oran R ve ortalamanın standart hatası, S R hesaplayın (1) ve (2) (1) <img alt="Equation1" src="/files/ftp_upload/53622/53622equation1.jpg" /> (2) <img alt="Equation2" src="/files/ftp_upload/53622/53622equation2.jpg" /> g, r, s g ve s r ilgili yeşil ve kırmızı görüntülerde ortalamaları ve standart sapmaları b. g, b, r bg ve s br arka plan görüntüleri için karşılık gelen değerler n. edilmektedir s vardır <em&gt; 2 görüntülü piksel sayısıdır. </li><li> (Yazılım SigmaPlot 13 ​​kullanarak yani) bir şemada üç çoğaltmak kalibrasyon deneyleri her pH değeri için hesaplanan oranları arsa ve veri noktalarının bu dizi ile donatılmış bir eğri oluşturmak. PH değerleri 10 içine oranları dönüştürebilirsiniz donatılmış eğriden matematiksel bir fonksiyon yapın. </li></ol></li></ol> In Situ Grown Diş Biyofilm Örneklerinin 2. Koleksiyonu <ol><li> Çalışmanın hakkında içerme ve dışlama kriterleri yerine getiren gönüllüler seçin. üst ve alt diş arkın aljinat izlenimlerini olun. Bu gösterimlerinde döküm modelleri yapmak ve alt çenedeki akrilik ateli imalatı. Gönüllü, normal oklüzyon 12 ısırık sağlayan bir lingual ortodontik tel ile bağlı bukkal akrilik flanşlı atel tasarlayın. </li><li> Akrilik splint yanak flanş içinde Matkap çekilmeleri (Şekil 1 </strong&gt;) Diş akrilik frez yardımıyla biyofilm toplama için cam levhalar sokulmasını sağlamak için. durgunluk genişliği ve uzunluğu eklenir cam plaka sayısına bağlı olarak değişebilir; durgunluk derinliği, en az 1.5 mm olmalıdır. </li><li> Biyofilm toplama, doğal emaye 11 kolonizasyon desen taklit etmek için grit 1.200 bir yüzey sertliği ile ısmarlama floresan olmayan cam plaka (4 x 4 x 1 mm 3) kullanın. </li><li> Montaj öncesinde otoklav cam döşeme sterilize edin. Yanaklar 11 hareketi tarafından uygulanan kesme kuvvetlerinin biyofilm korumak için biraz akrilik yüzeyinin yüzeyine girintili her iki tarafında bukal flanş girintiler yapışkan balmumu cam plaka monte edin. Not: Bir durgunluk yerleştirilen cam plaka sayısı çalışmanın amacı bağlı olarak 3 ile 14 arasında değişebilir. </li><li> Gönüllünün ağzına cihazı takın. gönüllülü- talimatteer deney süresi boyunca intra-oral cihazı korumak için. ıslak kağıt doku parçası ile ortodontik tutucu kapta Cihazı saklamak için gönüllü talimat diş fırçalama ve yiyecek ve su dışında içecek alımı sırasında, oda sıcaklığında (nemli tutmak için). yerleştirme ve cihaz sökerken cam levhalarla bukkal akrilik flanşlar dokunmayın gönüllüyü söyleyin. Not: Deney süresi çalışma (birkaç hafta, bir gün) amaca bağlı olarak değişebilir. </li><li> Dikkatle deney süresi sonunda cihazdan cam döşeme kaldırın. Bir bıçakla plakalar etrafında yapışkan mum çıkarın ve mikroskopik analiz kadar, kapalı bir kap, yukarı bakacak biyofilm bir cımbız ile aktarabilirsiniz. ıslak kağıt dokusu ile nemli tutunuz. biyofilm toplandıktan sonra birkaç saat içinde pH görüntüleme gerçekleştirin. </li></ol> 3. Biyofilm pH Görüntüleme <ol><li> hazırlamakde Jong ve ark., 13 yöntemine göre toplanan tükürük ditiotreitol ekleyerek tükürük çözeltisi. pH 7.0 tükürük titre ve% 0.4 (ağırlık / hacim) bir konsantrasyonda glikoz ekleyin. biyofilm başına Pipet 100 ul mikroskopi için bir cam alt 96 oyuklu bir plakaya analiz edilmesi. oyuk başına rasyometrik boya 5 ul ekle. </li><li> mikroskop sahnede 96 oyuklu plaka koyun. mikroskop ve 543 nm lazer çizgisi açın. 37 ° C inkübatör kadar ısıtın. boya kalibrasyonu için aynı mikroskop ayarları kullanmak (adımları 1,5-1,6 bakınız). 96 oyuklu bir plaka çalışma sıcaklığına gelene kadar, 30 dakika boyunca bekleyin. </li><li> aşağıya bakacak biyofilmlerde ile, kuyu başına bir kütüğün cımbız ince seti ile bir veya daha fazla cam döşeme Pick up ve tükürük dolu kuyulara koyun. </li><li> Tek görüntüleri ( &quot;Tarama Kontrolü&quot; → &quot;Tek&quot;) ya da z-yığınları kazanmak ( &quot;Tarama Kontrolü&quot; → &quot;Başlat&quot;) spanniFarklı alanlarda biyofilm derinliği ng. z-yığınları dilim sayısı ( &quot;Tarama Kontrolü&quot; → &quot;Z Ayarlar&quot; → &quot;Num Dilimleri&quot;) yansıması tercih kazanmak ve ( &quot;Tarama Kontrol birinci ve mikroskop yazılımı son dilim z-pozisyon işaretlemek için &quot;→&quot; Z Ayarlar &quot;→&quot; Mark Önce &quot;;&quot; Mark Son &quot;). Not: Z-yığınları kadar 75 mikron hücre içi ve hücre alanlar arasında iyi kontrast elde edilebilir bir derinliğe sahip. </li><li> ( &quot;Scan Control&quot; → &quot;mikroskop yazılımı (&quot; Sahne ve Odak Kontrol &quot;→&quot; Mark Pos &quot;) olarak xy-pozisyonunu işaretleyin, zamanla bir görüş mikroskobik alanda pH değişimleri takip ve ardışık zaman noktalarında tekrarlanan görüntüleri çekmek için Tek&quot;). Düzenli arka plan çıkarma için sıfıra ayarlanmış lazer gücü ile görüntü alabilir. </li></ol> 4. Dijital Görüntü Analizi <ol><li> export TIF dosyaları olarak mikroskobik görüntüleri, mikroskop yazılımı ( &quot;Makro&quot; → &quot;Dosya Toplu İhracat&quot;) dosya toplu ihracat kullanın. ( &quot;Başlat Toplu İhracat&quot;) dosyaları ihraç edilecek işaretleyin ve TIF dosyaları gibi ayrı klasörlerde kırmızı ve yeşil kanal görüntüleri kaydetmek. Onlara ardışık sayılar vererek, her iki klasörlerdeki dosyaları yeniden adlandırın. </li><li> Böyle Daime (mikrobiyal ekoloji dijital görüntü analizi) 14 olarak yazılım içine kırmızı ve yeşil görüntü serilerini alın. Segment tek tek seçilen parlaklık eşikleri (Segment → Otomatik segmentasyon → Özel eşiği) ile yeşil kanal görüntüler. tüm bakteriler (ekstraselüler matriks daha parlak), ancak matris segmentasyonu sırasında nesneler olarak kabul edilecek, böylece bakım (tipik olarak 20 ile 80 arasında) ile parlaklık eşik seçin. nesneler olarak tanınan alanlar bakteriyel biyokütle iyi uygun görsel doğrulayın. </li><li> Parçalara g nesne katmanını aktarınİlgili kırmızı kanal görüntüleri reen kanal görüntüleri (Segment → Transferi nesne katmanı). kırmızı ve yeşil kanal görüntüleri tüm nesneleri reddetmek ve silmek için nesne editörü işlevini kullanın. Artık sadece hücre dışı matriks biyofilm görüntüleri bırakılır. TIF dosyalarını olarak işlenen görüntü serisi ihracat. </li><li> (; V.1.47 http://rsb.info.nih.gov/ij) ImageJ içine resim serisi alın. (Histogram → Analiz) lazer ile çekilen arka plan görüntüleri ortalama floresan yoğunluğu kapalı belirleyin. (Matematik → Çıkart → Süreci) uygun kırmızı ve yeşil görüntüleri arka plan çıkarın. </li><li> Yine ImageJ, kendisi (Süreç → Görüntü hesap) tarafından yeşil görüntü serisi (G1) bölün. Sonra yeşil görüntü serisi (G1) elde edilen görüntü serisi (G2) çarpın. Bu NaN Daime nesne olarak kabul edildi alanlara ait tüm pikseller atanan bir görüntü serisi (G3), verecektir. t DevamO kırmızı görüntü serisi ile aynı şekilde (R1 / R1 = R2 R2 x R1 = R3). Not: bakteriyel biyokütlenin adım 4.3 görüntülerden çıkarılır gibi floresan yoğunluğu bu alanlarda 0&#39;dır. Adım 4.5 adımda 4.6 oranı hesaplamasına olanak sağlar NaN, değeri 0 dönüştürmek için gereklidir. </li><li> Dedektör gürültü telafi etmek için:; &#39;Mean&#39; filtre (1 piksel yarıçapı Mean → Süreci → Filtreler) uygulayın. Kırmızı resim serisi (Süreç → Görüntü hesap) tarafından yeşil görüntü serisi bölün. Bu görüntülerin hücre dışı boşlukta kalan her piksel için kırmızı / yeşil oranı ile sonuçlanır. Görüntülerde oranları grafik gösterimi (Görüntü → Arama Tabloları) için sahte renklendirme kullanın. Her resim için ortalama oranını hesaplayın (Histogram → Analiz). </li><li> 1.9.2 altında takılan işleve) göre pH değerlerine yeşil / kırmızı oranları dönüştürün. Not: Kalibrasyon verileri ve Oturtulan eğrinin bir örnek Schlafer et görülebilirdiğerleri, 2015 11. </li></ol>

<ol>
	<li>Hunter, R. C., Beveridge, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+a+pH-sensitive+fluoroprobe+(C-SNARF-4)+for+pH+microenvironment+analysis+in+Pseudomonas+aeruginosa+biofilms.">Application of a pH-sensitive fluoroprobe (C-SNARF-4) for pH microenvironment analysis in Pseudomonas aeruginosa biofilms.</a> Appl. Environ. Microbiol. 71 (5), 2501-2510 (2005).</li><li>Takahashi, N., Nyvad, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caries+ecology+revisited:+microbial+dynamics+and+the+caries+process.">Caries ecology revisited: microbial dynamics and the caries process.</a> Caries Res. 42 (6), 409-418 (2008).</li><li>Schlafer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=pH+landscapes+in+a+novel+five-species+model+of+early+dental+biofilm.">pH landscapes in a novel five-species model of early dental biofilm.</a> PLoS. One. 6 (9), e25299 (2011).</li><li>von Ohle, O. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+microsensor+measurement+of+local+metabolic+activities+in+ex+vivo+dental+biofilms+exposed+to+sucrose+and+treated+with+chlorhexidine.">Real-time microsensor measurement of local metabolic activities in ex vivo dental biofilms exposed to sucrose and treated with chlorhexidine.</a> Appl. Environ. Microbiol. 76 (7), 2326-2334 (2010).</li><li>Revsbech, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+microbial+communities+with+electrochemical+microsensors+and+microscale+biosensors.">Analysis of microbial communities with electrochemical microsensors and microscale biosensors.</a> Methods Enzymol. 397, 147-166 (2005).</li><li>Vanhoudt, P., Lewandowski, Z., Little, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iridium+oxide+pH+microelectrode.">Iridium oxide pH microelectrode.</a> Biotechnol. Bioeng. 40 (5), 601-608 (1992).</li><li>Franks, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+strategy+for+three-dimensional+real-time+imaging+of+microbial+fuel+cell+communities:+monitoring+the+inhibitory+effects+of+proton+accumulation+within+the+anode+biofilm.">Novel strategy for three-dimensional real-time imaging of microbial fuel cell communities: monitoring the inhibitory effects of proton accumulation within the anode biofilm.</a> Energy &amp; Environmental Science. 2 (1), 113-119 (2009).</li><li>Hidalgo, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+tomographic+fluorescence+imaging+of+pH+microenvironments+in+microbial+biofilms+by+use+of+silica+nanoparticle+sensors.">Functional tomographic fluorescence imaging of pH microenvironments in microbial biofilms by use of silica nanoparticle sensors.</a> Appl. Environ. Microbiol. 75 (23), 7426-7435 (2009).</li><li>Vroom, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Depth+penetration+and+detection+of+pH+gradients+in+biofilms+by+two-photon+excitation+microscopy.">Depth penetration and detection of pH gradients in biofilms by two-photon excitation microscopy.</a> Appl. Environ. Microbiol. 65 (8), 3502-3511 (1999).</li><li>Bender, G. R., Sutton, S. V., Marquis, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acid+tolerance,+proton+permeabilities,+and+membrane+ATPases+of+oral+streptococci.">Acid tolerance, proton permeabilities, and membrane ATPases of oral streptococci.</a> Infect. Immun. 53 (2), 331-338 (1986).</li><li>Schlafer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ratiometric+imaging+of+extracellular+pH+in+bacterial+biofilms+using+C-SNARF-4.">Ratiometric imaging of extracellular pH in bacterial biofilms using C-SNARF-4.</a> Appl. Environ. Microbiol. 81 (4), 1267-1273 (2015).</li><li>Dige, I., Nilsson, H., Kilian, M., Nyvad, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+situ+identification+of+streptococci+and+other+bacteria+in+initial+dental+biofilm+by+confocal+laser+scanning+microscopy+and+fluorescence+in+situ+hybridization.">In situ identification of streptococci and other bacteria in initial dental biofilm by confocal laser scanning microscopy and fluorescence in situ hybridization.</a> Eur. J Oral Sci. 115 (6), 459-467 (2007).</li><li>de Jong, M. H., van der Hoeven, J. S., van OS, J. H., Olijve, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+of+oral+Streptococcus+species+and+Actinomyces+viscosus+in+human+saliva.">Growth of oral Streptococcus species and Actinomyces viscosus in human saliva.</a> Appl. Environ. Microbiol. 47 (5), 901-904 (1984).</li><li>Daims, H., Lucker, S., Wagner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=daime,+a+novel+image+analysis+program+for+microbial+ecology+and+biofilm+research.">daime, a novel image analysis program for microbial ecology and biofilm research.</a> Environ. Microbiol. 8 (2), 200-213 (2006).</li><li>Liu, Y. L., Nascimento, M., Burne, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+toward+understanding+the+contribution+of+alkali+generation+in+dental+biofilms+to+inhibition+of+dental+caries.">Progress toward understanding the contribution of alkali generation in dental biofilms to inhibition of dental caries.</a> Int. J Oral Sci. 4 (3), 135-140 (2012).</li></ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Elektrod veya mikroelektrot ölçümler 4-6 ile karşılaştırıldığında biyofilm pH mikroskopik gözlem, birçok avantaj sağlar. Mikroskopik teknikler yüksek uzaysal çözünürlüğü ile pH&#39;ı belirlemek ve mekanik biyofilm bozmadan Biyofilmlererde yatay hem de dikey pH gradyanları yakalama izin izin verir. Mikroskobik pH monitorizasyonu Önceki girişimler, ancak, biyofilm 1,7,9 hücre dışı ve hücre içi pH ayırt başarısız oldu. Bakteriyel homeostaza, hücre içi pH dışı p...

Burada açıklanan yöntem rasyometrik boya (ve-6) karboksilik asit (Cı-SNARF-4) konfokal lazer tarama mikroskobu ile kombinasyon halinde kullanım ve seminaphthorhodafluor-4F 5-, 4.5 ve 7 arasında aralık diş biyofilm hücre dışı pH değerine sağlar dijital görüntü analizi. Kullanılan floresan boya pH-duyarlı ve protonasyon durumuna bağlı olarak floresan emisyonunda bir kayma gösterir. 580 nm&#39;de protonlanmış molekül zirveleri floresan emisyon ve 640 nm 1&#39;de deprotone molekülün emisyonu. iki emisyon değerlerinde soğurum pikleri içeren, iki algılama pencere floresan emisyonu yoğunluklarının oranı (576-608 nm ve 629-661 nm) bu şekilde bağımsız olarak, boya konsantrasyonu, sıvı fazda pH yansıtır. ~ 6.4 bir pKa ile boya orta asidik ortamlarda pH görselleştirmek için uygundur. Bakteriyel Biyofilmlererde PH tüm metabolik işlemler için merkezi öneme sahiptir.Diş biyofilm durumunda, hücre dışı matris içinde pH diş çürüğünün gelişimi için önemli bir virülans faktörü olduğu. Biyofilm-diş arayüzü kurşun düşük pH süreleri uzatıldı altta yatan emaye 2 deminerlizasyonunu yavaş. Nedeniyle organik asitler de dahil olmak üzere biyofilm, metabolitler, karmaşık üç boyutlu mimari, eşit biyofilm dağılmış değil. Son derece az acidogenic microenvironments yakın uzamsal yakınlık 3 bulunabilir. On yıllardır, biyofilm dikey pH geçişlerini Mikroelektronlar 4-6 yardımıyla kaydedildi. onlar nedeniyle küçük uç boyutu iyi uzaysal çözünürlüğü sunarken, yatay geçişlerini izlemek için çok uygun değildir. Ayrıca, elektrodun ekleme mekanik biyofilm rahatsız ediyor. Nicel floresan mikroskobik teknikler, mekanik müdahale olmaksızın bir biyofilm farklı alanlarda pH değişiklikleri görselleştirme avantajı sunuyoruznce. Farklı bakış mikroskobik alanları serbestçe seçilmiş ve uzun süre 1,7-9 üzerinde tekrar tekrar görüntülenebilir. mikroskopik biyofilm görüntüleri yorumlanırken Ancak, hücre dışı alana kaynaklanan Mikrobiyal biyokütle ve floresan kaynaklanan floresan ayırt etmek önemlidir. Bakteriler aktif adenosin trifosfat 10 pahasına hücre membranından proton taşınması gibi asidik koşullar altında, bakteri hücreleri içinde, pH, hücre dışı matris içinde pH farklıdır. Düşük dışı pH demineralizasyon neden ise diş çürüğü bağlamında, hücre içi bakteri pH altında yatan mine üzerinde doğrudan bir etkisi yoktur. bakteri serbest alanlar ve bakteriler hem ihtiva mikroskobik görüntüleri pH Ortalaması hatalı sonuçlara yol açar. bakteriyel biyokütle görselleştirmek ve ekstra ve hücre içi alanlar arasında ayrım yapmak amacıyla pH duyarlı boya ile birlikte diğer lekeleri kullanımı ab getiriyorekstraselüler alan floresan kirlenme ve yanlış ölçümlere 11 riski dışında. bu yazıda, bu nedenle, bir çift işlev rasyometrik boya kullanımını tarif eder; pH belirteci olarak ve evrensel bir bakteri leke olarak hem. boya bakteri hücrelerinde konsantre kadar olduğu gibi, konfokal mikroskopik görüntüleme kombinasyonu ve doğru bir dijital görüntü analizi prosedürü ince diş Biyofilmlererde 4.5 ila 7.0 aralığında dışı pH tayininde sağlar.

<table><tbody><tr><td>Zeiss LSM 510 META</td><td>Zeiss</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>C-Apochromat 63X water immersion objective</td><td>Zeiss</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>XL Incubator</td><td>PeCON</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>SNARF-4F 5-(and-6)-Carboxylic Acid</td><td>Life Technologies</td><td>S23920</td><td></td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxide</td><td>Life Technologies</td><td>D12345</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Life Technologies</td><td>11344-041</td><td></td></tr><tr><td>Costar 96-well black clear-bottom plate</td><td>Fisher Scientific</td><td>07-200-567</td><td></td></tr><tr><td>Custom-made glass slabs (4 x 4 x 1 mm&lt;sup&gt;3&lt;/sup&gt;; 1,200 grit)</td><td>Menzel</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Alginate impression material</td><td>GC Corporation</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Acrylic Adjusting Logic Sets/set of acrylic dental burs</td><td>Axis Dental</td><td>LS-906</td><td></td></tr><tr><td>Orthodontic retainer containers</td><td>Spark Medical Equipment Co., Ltd</td><td>SK-WDTC01</td><td></td></tr><tr><td>Sticky wax</td><td>Dentsply</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Chewing paraffin wax&amp;nbsp;</td><td>Ivoclar Vivadent AG</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Dithiothreitol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D0632</td><td>Used during preparation of salivary solution</td></tr><tr><td>0.45 &amp;micro;m and 0.2 &amp;micro;m syringe filters</td><td>Sigma Aldrich</td><td>CLS431220; CLS431219&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>daime</td><td>University of Vienna, Austria</td><td>http://dome.csb.univie.ac.at/daime</td><td></td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>NIH, Bethesda, Maryland, USA</td><td>http://imagej.nih.gov/ij/</td><td></td></tr></tbody></table>

ratiometric imaging of extracellular ph in dental biofilms

dişler üzerinde bakteri Biyofilmlererde pH diş çürüğü, yüksek dünya çapında yaygınlık bir hastalık için merkezi öneme sahiptir. Besinler ve metabolitleri diş Biyofilmlererde eşit olarak dağıtılır değildir. biyofilm organik madde ile karşı emilim ve reaksiyon karmaşık bir etkileşim çözünenlerin difüzyon yolları azaltır ve biyofilm karşısında, organik asitler içeren reaktif moleküllerin dik rampaları oluşturur. Bu floresans ömrü görüntüleme ya da pH ratiometry olarak kantitatif flüoresan mikroskopi yöntemler, diş biyofilm farklı mikroçevrelerde pH görselleştirmek için kullanılabilmektedir. pH ratiometry pH&#39;a duyarlı boyalar, floresan emisyonunda bir pH değerine bağımlı bir değişim patlatır. iki farklı dalga boylarında emisyon oranı hesaplaması olmaksızın boya konsantrasyonu, mikroskobik görüntüleri lokal pH belirlenmesi sağlar. ile gerçek zamanlı olarak hem dikey hem de yatay pH geçişlerini takip veriyor tekniği Mikroelektronlar aksinedışarı mekanik biyofilm rahatsız. Ancak, bakım biyofilm ekstra ve hücre içi bölmeleri arasında doğru ayrım alınmalıdır. Burada, rasyometrik boya seminaphthorhodafluor-4F 5- (and-6) karboksilik asit (Cı-SNARF-4) bilinmiyor türleri, bileşimin in vivo büyümüş diş biyofilmlere ekstrasellüler pH izlemek için kullanılır. boya glukoz maruz kaldığında kadar konsantre Biyofilmlererde tüm bakteri hücrelerinin içinde olduğunu; Böylece, bir genel bakteriyel leke gibi ekstrasellüler pH bir göstergesi olarak kullanılır edilir. odaklı mikroskopik görüntü kazanılmasından sonra, bakteriyel biyokütle sadece ekstrasellüler pH değerini hesaplamak için izin dijital görüntü analiz yazılımı kullanarak tüm resimlerin kaldırılır. rasyometrik boya ile pH ratiometry 75&#39;e um kalınlıkta ince biyofilmler hücre dışı pH çalışması için çok uygundur, ama 4.5 ila 7.0 arasında bir pH aralığı ile sınırlıdır.

Bu çözümler izleme ekstrasellüler pH gerçek zamanlı olarak 4.5 ile 7 pH aralığı diş biyofilm farklı mikroçevrelerde damla sağlar. Yukarıda açıklandığı gibi deneysel koşullar seçilirse, pH kısa bir süre glukoza maruz kaldıktan sonra biyofilm tüm alanlarında düşmeye başlar. Bir biyofilm pH düştüğünde rasyometrik boya hücreleri (Şekil 2A) &#39;de upconcentrated olarak, bakteri ...

Watch this Scientific Journal Video about Ratiometric Imaging of Extracellular pH in Dental Biofilms at JoVE.com

Ratiometric Imaging of Extracellular pH in Dental Biofilms

Diş Biyofilmler ekstraselüler pH rasyometrik Görüntüleme

Bir pH-duyarlı rasyometrik boya gerçek zamanlı olarak diş biyofilmlere ekstrasellüler pH izleme konfokal lazer tarama mikroskobu ve dijital görüntü analizi ile kombinasyon halinde kullanılır.

The pH in bacterial biofilms on teeth is of central importance for dental caries, a disease with a high worldwide prevalence. Nutrients and metabolites ...

ratiometric-imaging-of-extracellular-ph-in-dental-biofilms

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

9.9K Görüntüleme.  Aarhus University.  Bir pH-duyarlı rasyometrik boya gerçek zamanlı olarak diş biyofilmlere ekstrasellüler pH izleme konfokal lazer tarama mikroskobu ve dijital görüntü analizi ile kombinasyon halinde kullanılır. 

Video: Ratiometric Imaging of Extracellular pH in Dental Biofilms

Synthesis, Cellular Delivery and In vivo Application of Dendrimer-based pH Sensors

The development of fluorescent indicators represented a revolution for life sciences. Genetically encoded and synthetic fluorophores with sensing abilities allowed the visualization of biologically relevant species with high spatial and temporal resolution. Synthetic dyes are of particular interest thanks to their high tunability and the wide range of measureable analytes. However, these molecules suffer several limitations related to small molecule behavior (poor solubility, difficulties in targeting, often no ratiometric imaging allowed). In this work we introduce the development of dendrimer-based sensors and present a procedure for pH measurement in vitro, in living cells and in vivo. We choose dendrimers as ideal platform for our sensors for their many desirable properties (monodispersity, tunable properties, multivalency) that made them a widely used scaffold for several biomedical devices. The conjugation of fluorescent pH indicators to the dendrimer scaffold led to an enhancement of their sensing performances. In particular dendrimers exhibit reduced cell leakage, improved intracellular targeting and allow ratiometric measurements. These novel sensors were successfully employed to measure pH in living HeLa cells and in vivo in mouse brain.

Synthesis, Cellular Delivery and In vivo Application of Dendrimer-based pH Sensors

Fluorescence sensors are powerful tools in life science. Here we describe a methodology to synthesize and use dendrimer-based fluorescent sensors to measure pH in living cells and in vivo. The dendritic scaffold enhances the properties of conjugated fluorescent dyes leading to improved sensing properties.

Sentez, Hücresel Teslimat ve<em&gt; In vivo</em&gt; Dendrimer tabanlı pH Sensörlerin Uygulamaları

The development of  fluorescent indicators represented a revolution for life sciences. Genetically  encoded and synthetic fluorophores with sensing ...

Kimya

An Analytical Tool-box for Comprehensive Biochemical, Structural and Transcriptome Evaluation of Oral Biofilms Mediated by Mutans Streptococci

Biofilms are highly dynamic, organized and structured communities of microbial cells enmeshed in an extracellular matrix of variable density and composition 1, 2. In general, biofilms develop from initial microbial attachment on a surface followed by formation of cell clusters (or microcolonies) and further development and stabilization of the microcolonies, which occur in a complex extracellular matrix. The majority of biofilm matrices harbor exopolysaccharides (EPS), and dental biofilms are no exception; especially those associated with caries disease, which are mostly mediated by mutans streptococci 3. The EPS are synthesized by microorganisms (S. mutans, a key contributor) by means of extracellular enzymes, such as glucosyltransferases using sucrose primarily as substrate 3.
Studies of biofilms formed on tooth surfaces are particularly challenging owing to their constant exposure to environmental challenges associated with complex diet-host-microbial interactions occurring in the oral cavity. Better understanding of the dynamic changes of the structural organization and composition of the matrix, physiology and transcriptome/proteome profile of biofilm-cells in response to these complex interactions would further advance the current knowledge of how oral biofilms modulate pathogenicity. Therefore, we have developed an analytical tool-box to facilitate biofilm analysis at structural, biochemical and molecular levels by combining commonly available and novel techniques with custom-made software for data analysis. Standard analytical (colorimetric assays, RT-qPCR and microarrays) and novel fluorescence techniques (for simultaneous labeling of bacteria and EPS) were integrated with specific software for data analysis to address the complex nature of oral biofilm research.
The tool-box is comprised of 4 distinct but interconnected steps (Figure 1): 1) Bioassays, 2) Raw Data Input, 3) Data Processing, and 4) Data Analysis. We used our in vitro biofilm model and specific experimental conditions to demonstrate the usefulness and flexibility of the tool-box. The biofilm model is simple, reproducible and multiple replicates of a single experiment can be done simultaneously 4, 5. Moreover, it allows temporal evaluation, inclusion of various microbial species 5 and assessment of the effects of distinct experimental conditions (e.g. treatments 6; comparison of knockout mutants vs. parental strain 5; carbohydrates availability 7). Here, we describe two specific components of the tool-box, including (i) new software for microarray data mining/organization (MDV) and fluorescence imaging analysis (DUOSTAT), and (ii) in situ EPS-labeling. We also provide an experimental case showing how the tool-box can assist with biofilms analysis, data organization, integration and interpretation.

Biofilms formed on tooth surfaces are highly complex and exposed to constant innate and exogenous environmental challenges, which modulate their architecture, physiology and transcriptome. We developed a toolbox to examine the composition, structural organization and gene expression of oral biofilms, which can be adapted to other areas of biofilm research.

Analitik Oral Biyofilmler Kapsamlı biyokimyasal, yapısal ve Transcriptome Değerlendirme Aracı-box mutans Streptokok tarafından aracılığı ile

Biofilms are highly dynamic, organized and structured communities of microbial cells enmeshed in an extracellular matrix of variable density and ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Concurrent Quantification of Cellular and Extracellular Components of Biofilms

Confocal laser scanning microscopy (CLSM) is a powerful tool for investigation of biofilms. Very few investigations have successfully quantified concurrent distribution of more than two components within biofilms because: 1)&#160;selection of fluorescent dyes having minimal spectral overlap is complicated, and 2)&#160;quantification of multiple fluorochromes poses a multifactorial problem. Objectives: Report a methodology to quantify and compare concurrent 3-dimensional distributions of three cellular/extracellular components of biofilms grown on relevant substrates. Methods: The method consists of distinct, interconnected steps involving biofilm growth, staining, CLSM imaging, biofilm structural analysis and visualization, and statistical analysis of structural parameters. Biofilms of Streptococcus mutans (strain UA159) were grown for 48 hr on sterile specimens of Point 4 and TPH3 resin composites. Specimens were subsequently immersed for 60 sec in either Biot&#232;ne PBF (BIO) or Listerine Total Care (LTO) mouthwashes, or water (control group; n=5/group). Biofilms were stained with fluorochromes for extracellular polymeric substances, proteins and nucleic acids before imaging with CLSM. Biofilm structural parameters calculated using ISA3D image analysis software were biovolume and mean biofilm thickness. Mixed models statistical analyses compared structural parameters between mouthwash and control groups (SAS software; &#945;=0.05). Volocity software permitted visualization of 3D distributions of overlaid biofilm components (fluorochromes). Results: Mouthwash BIO produced biofilm structures that differed significantly from the control (p&#60;0.05) on both resin composites, whereas LTO did not produce differences (p&#62;0.05) on either product. Conclusions: This methodology efficiently and successfully quantified and compared concurrent 3D distributions of three major components within S. mutans biofilms on relevant substrates, thus overcoming two challenges to simultaneous assessment of biofilm components. This method can also be used to determine the efficacy of antibacterial/antifouling agents against multiple biofilm components, as shown using mouthwashes. Furthermore, this method has broad application because it facilitates comparison of 3D structures/architecture of biofilms in a variety of disciplines.

A protocol for the concurrent quantification and comparison of three cellular and extracellular components within biofilms is presented. The methodology involves the use of confocal laser scanning microscopy, biofilm structural analysis and visualization software, and statistical analysis software.

Hücresel ve Biyofilmler Ekstrasellüler Bileşenleri Eşzamanlı Kantitasyonu

Confocal laser scanning microscopy (CLSM) is a powerful tool for investigation of biofilms. Very few investigations have successfully quantified ...

In vitro Monitoring of Extracellular pH in Real-Time

Early accumulation of neutrophils (PMN) is a hallmark of acute intestinal inflammation. This acute inflammation is either resolved or progresses to chronic inflammation. Without efficient PMN clearance at sites of infiltration, PMN can accumulate and contribute to chronic inflammatory conditions, including the intestinal diseases ulcerative colitis (UC) and Crohn's Disease (CD). The pH in the distal colon in individuals with active UC can range between a pH of 5 and 6, whereas healthy individuals maintain colonic pH in the range of 6.8-7.4. Extracellular pH has been shown to influence both intestinal epithelial cells and the infiltrating immune cells. More specifically, extracellular acidosis significantly impacts PMN. At pH below 6.5, there are increases in the production of H2O2, inhibition of apoptosis, and increases in the functional lifespan of PMN. Given the significant presence of PMN and extracellular acidification at sites of inflammation, we developed a novel model that allows for the monitoring of extracellular pH during PMN transepithelial migration in real time. Here, we describe this model and how it can be utilized to measure both the apical and basal pH during PMN trafficking. This model can be utilized to monitor extracellular pH under a wide range of conditions; including, hypoxia, PMN transepithelial migration, and for extended periods of time.

<meta charset="utf8"></head><body>Hücre Dışı pH'ın Gerçek Zamanlı İn vitro İzlenmesi

This article represents a useful in vitro assay to measure changes in extracellular pH during neutrophil (PMN) transepithelial migration (TEM)

Laboratuvar ortamında Hücre dışı pH'ın gerçek zamanlı olarak izlenmesi

Early accumulation of neutrophils (PMN) is a hallmark of acute intestinal inflammation. This acute inflammation is either resolved or progresses to ...

Biyokimya

High Spatial Resolution Chemical Imaging of Implant-Associated Infections with X-ray Excited Luminescence Chemical Imaging Through Tissue

Microbial infections associated with implantable medical devices are a major concern in fracture fixation failure. Early diagnosis of such infection will allow successful eradication with antibiotics without an extra cost for a second surgery. Herein, we describe XELCI as a technique with high X-ray resolution, implant specificity, and chemical sensitivity to noninvasively image chemical concentrations near the surface of implanted medical devices. The devices are coated with chemically reporting surfaces. This chemically responsive surface consists of two layers coated on an implantable medical device; a pH-sensitive layer (bromothymol blue or bromocresol green incorporated hydrogel) which is coated over a red-light emitting scintillator (Gd2O2S: Eu) layer for monitoring. A focused X-ray beam irradiates a spot on the implant, and the red light generated by the scintillator (with 620 nm and 700 nm peaks) is transmitted through the sensing layer which alters the spectral ratio depending on the pH. An image is generated by scanning the X-ray beam across the implant and measuring the spectral ratio of light passing through the tissue point-by-point. We used this imaging technique for monitoring implant-associated infections previously on the bone surface of the femur with a modified implantable plate sensor. Now we are studying pH changes that occur from tibial intramedullary rod infections. Two different types of intramedullary rod designs are used in pre-pilot rabbit studies, and we learned that the XELCI technique could be used to monitor any chemical changes that occur not only on the bone surface but also inside the bone. Thus, this enables noninvasive, high spatial resolution, low background local pH imaging to study implant-associated infection biochemistry.

Here, we present a protocol for high-resolution optical detection of chemical information around implanted medical devices with X-ray excited luminescence chemical imaging (XELCI). This novel imaging technique is developed in our lab which enables studying implant-associated infection biochemistry.

Yüksek Uzamsal Çözünürlüklü İmplantla İlişkili Enfeksiyonların X-ışını ile Kimyasal Görüntülenmesi Uyarılmış Lüminesans Doku Yoluyla Kimyasal Görüntüleme

Microbial infections associated with implantable medical devices are a major concern in fracture fixation failure. Early diagnosis of such infection will ...

A New Method for Qualitative Multi-scale Analysis of Bacterial Biofilms on Filamentous Fungal Colonies Using Confocal and Electron Microscopy

Bacterial biofilms frequently form on fungal surfaces and can be involved in numerous bacterial-fungal interaction processes, such as metabolic cooperation, competition, or predation. The study of biofilms is important in many biological fields, including environmental science, food production, and medicine. However, few studies have focused on such bacterial biofilms, partially due to the difficulty of investigating them. Most of the methods for qualitative and quantitative biofilm analyses described in the literature are only suitable for biofilms forming on abiotic surfaces or on homogeneous and thin biotic surfaces, such as a monolayer of epithelial cells.
While laser scanning confocal microscopy (LSCM) is often used to analyze in situ and in vivo biofilms, this technology becomes very challenging when applied to bacterial biofilms on fungal hyphae, due to the thickness and the three dimensions of the hyphal networks. To overcome this shortcoming, we developed a protocol combining microscopy with a method to limit the accumulation of hyphal layers in fungal colonies. Using this method, we were able to investigate the development of bacterial biofilms on fungal hyphae at multiple scales using both LSCM and scanning electron microscopy (SEM). This report describes the protocol, including microorganism cultures, bacterial biofilm formation conditions, biofilm staining, and LSCM and SEM visualizations.

This protocol describes a new method to grow and qualitatively analyze bacterial biofilms on fungal hyphae by confocal and electron microscopy.

Yeni Bir Yöntem Filamentli Mantar kolonileri ile ilgili Bakteriyel Biyofilmler Niteliksel Çok ölçekli Analizi için kullanılması Eşodaklı ve Elektron Mikroskobu

Bacterial biofilms frequently form on fungal surfaces and can be involved in numerous bacterial-fungal interaction processes, such as metabolic ...

Imaging the Neutrophil Phagosome and Cytoplasm Using a Ratiometric pH Indicator

Neutrophils are crucial to host innate defense and, consequently, constitute an important area of medical research. The phagosome, the intracellular compartment where the killing and digestion of engulfed particles take place, is the main arena for neutrophil pathogen killing that requires tight regulation. Phagosomal pH is one aspect that is carefully controlled, in turn regulating antimicrobial protease activity. Many fluorescent pH-sensitive dyes have been used to visualize the phagosomal environment. S-1 has several advantages over other pH-sensitive dyes, including its dual emission spectra, its resistance to photo-bleaching, and its high pKa. Using this method, we have demonstrated that the neutrophil phagosome is unusually alkaline in comparison to other phagocytes. By using different biochemical conjugations of the dye, the phagosome can be delineated from the cytoplasm so that changes in the size and shape of the phagosome can be assessed. This allows for further monitoring of ionic movement.

This manuscript describes a simple method to measure the phagosomal pH and area as well as the cytoplasmic pH of human and mouse neutrophils using the ratiometric indicator seminaphthorhodafluor (SNARF)-1, or S-1. This is achieved using live-cell confocal fluorescence microscopy and image analysis.

Nötrofil fagozomun Görüntüleme ve Sitoplazma bir oranlı metrik pH Göstergesi kullanma

Neutrophils are crucial to host innate defense and, consequently, constitute an important area of medical research. The phagosome, the intracellular ...

Monitoring Extracellular pH in Cross-Kingdom Biofilms using Confocal Microscopy

Cross-kingdom biofilms consisting of both fungal and bacterial cells are involved in a variety of oral diseases, such as endodontic infections, periodontitis, mucosal infections and, most notably, early childhood caries. In all of these conditions, the pH in the biofilm matrix impacts microbe-host interactions and thus the disease progression. The present protocol describes a confocal microscopy-based method to monitor pH dynamics inside cross-kingdom biofilms comprising Candida albicans and Streptococcus mutans. The pH-dependent dual-emission spectrum and the staining properties of the ratiometric probe C-SNARF-4 are exploited to determine drops in pH in extracellular areas of the biofilms. Use of pH ratiometry with the probe requires a meticulous choice of imaging parameters, a thorough calibration of the dye, and careful, threshold-based post-processing of the image data. When used correctly, the technique allows for the rapid assessment of extracellular pH in different areas of a biofilm and thus the monitoring of both horizontal and vertical pH gradients over time. While the use of confocal microscopy limits Z-profiling to thin biofilms of 75 &#181;m or less, the use of pH ratiometry is ideally suited for the noninvasive study of an important virulence factor in cross-kingdom biofilms.

The protocol describes the cultivation of cross-kingdom biofilms consisting of Candida albicans and Streptococcus mutans and presents a confocal microscopy-based method for the monitoring of extracellular pH inside these biofilms.

Konfokal Mikroskopi Ile Krallık Lararası Biyofilmlerde Hücre Dışı pH'ın izlenmesi

Cross-kingdom biofilms consisting of both fungal and bacterial cells are involved in a variety of oral diseases, such as endodontic infections, ...

Optical Quantification of Intracellular pH in Drosophila melanogaster Malpighian Tubule Epithelia with a Fluorescent Genetically-encoded pH Indicator

Epithelial ion transport is vital to systemic ion homeostasis as well as maintenance of essential cellular electrochemical gradients. Intracellular pH (pHi) is influenced by many ion transporters and thus monitoring pHi is a useful tool for assessing transporter activity. Modern Genetically Encoded pH-Indicators (GEpHIs) provide optical quantification of pHi in intact cells on a cellular and subcellular scale. This protocol describes real-time quantification of cellular pHi regulation in Malpighian Tubules (MTs) of Drosophila melanogaster through ex vivo live-imaging of pHerry, a pseudo-ratiometric GEpHI with a pKa well-suited to track pH changes in the cytosol. Extracted adult fly MTs are composed of morphologically and functionally distinct sections of single-cell layer epithelia, and can serve as an accessible and genetically tractable model for investigation of epithelial transport. GEpHIs offer several advantages over conventional pH-sensitive fluorescent dyes and ion-selective electrodes. GEpHIs can label distinct cell populations provided appropriate promoter elements are available. This labeling is particularly useful in ex vivo, in vivo, and in situ preparations, which are inherently heterogeneous. GEpHIs also permit quantification of pHi in intact tissues over time without need for repeated dye treatment or tissue externalization. The primary drawback of current GEpHIs is the tendency to aggregate in cytosolic inclusions in response to tissue damage and construct over-expression. These shortcomings, their solutions, and the inherent advantages of GEpHIs are demonstrated in this protocol through assessment of basolateral proton (H+) transport in functionally distinct principal and stellate cells of extracted fly MTs. The techniques and analysis described are readily adaptable to a wide variety of vertebrate and invertebrate preparations, and the sophistication of the assay can be scaled from teaching labs to intricate determination of ion flux via specific transporters.

Optical Quantification of Intracellular pH in Drosophila melanogaster Malpighian Tubule Epithelia with a Fluorescent Genetically-encoded pH Indicator

Cellular ion transport can often be assessed by monitoring intracellular pH (pHi). Genetically Encoded pH-Indicators (GEpHIs)&#160;provide optical quantification of intracellular pH in intact cells. This protocol details the quantification of intracellular pH through cellular ex vivo live-imaging of Malpighian tubules of Drosophila melanogaster with pHerry, a pseudo-ratiometric genetically encoded pH-indicator.

Drosophila melanogaster Malpighi tübül epiteli optik Quantification intrasellüler pH floresan genetik olarak kodlanmış pH göstergesi

Epithelial ion transport is vital to systemic ion homeostasis as well as maintenance of essential cellular electrochemical gradients. Intracellular pH ...

Diş Biyofilmler ekstraselüler pH rasyometrik Görüntüleme

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Sentez, Hücresel Teslimat ve

Analitik Oral Biyofilmler Kapsamlı biyokimyasal, yapısal ve Transcriptome Değerlendirme Aracı-box mutans Streptokok tarafından aracılığı ile

Hücresel ve Biyofilmler Ekstrasellüler Bileşenleri Eşzamanlı Kantitasyonu

Laboratuvar ortamında Hücre dışı pH'ın gerçek zamanlı olarak izlenmesi

Laboratuvar ortamında Hücre dışı pH'ın gerçek zamanlı olarak izlenmesi

Yüksek Uzamsal Çözünürlüklü İmplantla İlişkili Enfeksiyonların X-ışını ile Kimyasal Görüntülenmesi Uyarılmış Lüminesans Doku Yoluyla Kimyasal Görüntüleme

Yeni Bir Yöntem Filamentli Mantar kolonileri ile ilgili Bakteriyel Biyofilmler Niteliksel Çok ölçekli Analizi için kullanılması Eşodaklı ve Elektron Mikroskobu

Nötrofil fagozomun Görüntüleme ve Sitoplazma bir oranlı metrik pH Göstergesi kullanma

Konfokal Mikroskopi Ile Krallık Lararası Biyofilmlerde Hücre Dışı pH'ın izlenmesi

Drosophila melanogaster Malpighi tübül epiteli optik Quantification intrasellüler pH floresan genetik olarak kodlanmış pH göstergesi