Bu eser ST &quot;Duyu İşleme Hücresel Mekanizmaları&quot; İşbirlikçi Research Center 889 (Proje C04) aracılığıyla Deutsche Forschungsgemeinschaft hibe ile desteklenmiştir. Biz teknik yardım için, Alman primat Merkezi&#39;nde, Dr. Katharina Debowski ve Anna Magerhans ve Kök Hücre Ünitesi Sina Plümer, Leonore Burchardt, Dirk Prusse Klaus Heisig teknik ve hayvansal ilgili destek için Ralf Brockhausen ve işbirlikçileri teşekkür filtrasyon işlemi.

Hayvan bakımı ve tüm deneysel prosedürleri Alman yasaları düzenleyen hayvan bakımı çerçevesinde yapılan ve Braunschweig, Aşağı Saksonya, Almanya ilçe hükümet tarafından kabul edildi. Not: Deney, in vivo olarak gerçekleştirilir olarak, mümkün olan en yüksek hijyen standartlarına korumak için son derece önemlidir. Mümkün olduğunda, steril koşullar altında çalışma. 1. Enjeksiyon / Kayıt Sistemi Hazırlama <ol><li> şırınga ile mikropipet bağlayan tüp sterilize edin. enjeksiyon pompası ve elektrofizyolojik kayıt sistemi arasındaki deneysel set-up tüp mümkün olan en kısa uzunluğu kullanın. </li><li> temizlik telleri kullanarak kayıt sisteminin kılavuz tüpleri temizleyin. birkaç kez steril silikon yağı bunları batırın ve bireysel rehber tüpler aracılığıyla onları beslemek. </li><li> kayıt sisteminin bir kılavuz tüp içine kuvars cam mikropipet yerleştirin. Şekil 1A bakınız. </li><li> Mikropipet düzeltmeden sonrakayıt sistemi, mikropipet metal pimin steril tüp takmak. Kendine iyi bak; Mikropipet sisteminde sabit olmasına rağmen tüp takarken kolayca kırılabilir. pim ve tüp eşit basınç uygulamak için iki steril bir cımbız kullanın. </li><li> tüp ve mikropipet arasındaki kavşak mühür sıvı süper yapıştırıcı kullanın. tutkal sıvıyla mikropipet doldurmadan önce sertleşmesine için en az 3 saat bekleyin. </li><li> Önce veya mikropipet yerleştirildikten sonra kayıt sisteminin diğer pozisyonlara Mikroelektronlar (örneğin, kuvars cam yalıtımlı platin tungsten) yerleştirin. </li></ol> 2. Madde hazırlanması <ol><li> bir otoklav veya başka güvenilir bir prosedür kullanılarak enjeksiyon solüsyonları, daha sonra depolama için 1.5 ml mikrosantrifüj tüpleri sterilize edin. </li><li> 0.1 mol çözeltisi 5 ml hazırlamak için, ilgili maddenin skopolamin hidroklorür tartılır. steril tuzlu su (% 0.9 NaCI) içinde çözün. </li><li> Steril koşullar altında ina yeterince büyük gözenek çapına sahip bir şırınga filtresi kullanılarak çözelti, örneğin, 0.2 um&#39;lik bir filtreden, çeker ocak. </li><li> Davlumbaz altında, skopolamin için, örneğin tek bir deney için yeterli hacimleri, içine çözüm bölmeyin steril 1.5 ml mikrosantrifüj tüp içinde 500 ul. ışıktan maddeyi korumak için karanlık tüpleri kullanın; Seçenek olarak ise, alüminyum folyo ile tüpler sarın. skopolamin için, 4 ° C&#39;de 14 güne kadar çözüm saklayın. </li></ol> Enjeksiyon / Kayıt Sistemi 3. Günlük hazırlanması Not: kayıt sistemine monte edildiği zaman, elektrotlar ve mikropipet kayıtlar arasında bir enzim çözeltisi (Tergazyme deiyonize su ile% 1 çözelti) depolanır. Aşağıdaki adımlar, her kayıttan önce yapılmalıdır. <ol><li> maddenin bir tüp toplamak enjekte edilecek. buzdolabında eğer RT ulaşmanızı sağlar. </li><li> enzim çözeltisine enjeksiyon / kayıt sistemini kaldırmak ve elektrotları durulamave deiyonize su ile mikropipet enzim solüsyonu tamamen temizlenir. </li><li> görsel mikropipet ve tüp arasındaki mühür kontrol etmek için kayıt sisteminin ön kapağını çıkarın. </li><li> Pürüzsüz hareket için sistemin yağlamak için kılavuz tüp boşluğu (Şekil 1A) ve elektrotlar ve mikropipet uçları steril silikon yağı sürün. </li><li> Onlar sağlam olduğundan emin olmak için bir mikroskop kullanılarak elektrotların ve mikropipet ipuçları kontrol edin. aynı uzunlukta kılavuz tüpleri dışarı uzatmak, böylece mikroskop altında elektrotları ve mikropipet hizalayın. en kısa sürede artık görünür olarak durdurma, rehber tüpleri içine sürün. Bu elektrot pozisyon sıfır olarak tanımlanır. yazılımda 0 elektrotların derinlik ve mikropipet ayarlayın. </li><li> Steril tuzlu su ile steril bir şırınga doldurun ve tüpün duvarı delmek için özen tüpe iğneyi. visu için kılavuz tüpün dışarı mikropipet SürücüMadde akışı al kontrolü. </li><li> Resim hava sağlamak için boru ve mikropipet ile yıkayın, en azından 2 ml steril tuzlu su şırınga içinde veya borunun içinde kalır. şırınga pistonu çok fazla baskı uygulamayın. tüp ve mikropipet arasındaki kavşak emin olun kapatılır. kaçak görünür ise, kavşak (adım 1.5 bakınız) yeniden tutkal ve kayıt erteleme. </li><li> Çözeltisi ile yeni bir steril bir şırınga enjekte edilecek doldurun ve tuzlu su şırınga haznesi ile takas örneğin, bir tüp içinde salin doldurulmuş şırınganın iğne tutun. hava sistemine aktarılır emin olun. Bu en iyi tuz doldurulmuş varili çıkarıldıktan sonra tuzlu su ile iğne göbek dolgu ile elde edilir. </li><li> çözeltisi 250 ul tam tüpten tuzlu su çıkarmak için, enjekte edilecek olan sistem yıkayın. </li><li> motor kontrol yazılımı kullanarak, guidetubesto içine en az -500 mikron derinliğe elektrotlar ve mikropipet geri. </li><li&gt; kendi sabit göreli konumunu korumak için kılavuz tüpleri altına kılavuz tüp halkasını (Şekil 1A) indirin. </li><li> o maymunun kayıt odasına dokunacak özellikle etanol ile sistemin temelini, temizleyin. </li><li> Ön kapağı yerine ve vidaları sıkarak kayıt sistemini kapatın. </li></ol> Enjeksiyon Sistemi 4. Doğrulama Not: şirket sistemini kalibre rağmen, (tüpler, şırıngalar, vb) deneysel set-up kullanılan malzemeler ile atılır hacimleri doğrulamak için tavsiye edilir. <ol><li> kılavuz borular üzerinden uzatılmış elektrotları ve mikropipet tutarak, Aşama 3&#39;te tarif edildiği gibi bir sistem hazırlayın. 7000, en az um&#39;lik bir derinliği nedeni mikropipet ve elektrotların dış yüzeyi boyunca yapışması ölçüm hacmi kaybını önlemek için önerilir. </li><li> Bu deney sırasında kullanılacak pozisyonda kayıt sistemini yerleştirin ve enjektörler koyunmikroenjeksiyon pompası içine ge. Lastik bant ve ayarlanabilir tutuş kullanılarak yerine şırınga Fix (Şekil 1A bakınız). o şırınga pistonu arkasında sıkıca kadar pompa hareketli bölümünü kaydırın. </li><li> Yazılım kontrollü motor ünitesini kullanarak, tam olarak ölçülmesi için yeterince büyük bir hacme çıkarmak gibi., 1000 nl. Mikropipet yüzeyi boyunca kapiller aksiyon etkisini önlemek amacıyla toplam hacmi çıkarmak için tek bir adım kullanılması tercih edilir. Çok düşük hızlar (1 NL / s) de doğrulama işlemi sırasında bu etkiye neden olabilir. </li><li> Mikropipet altına yerleştirilen bir kapta toplam hacmi toplayın, ya da dikkatlice mikropipet ucu doğrudan püskürtülen damla toplar. Bir pipet kullanarak püskürtülen hacmini tahmin ya da hassas ölçek ile tartarak. </li><li> prosedürünü ölçümleri onaylamak için birkaç kez tekrarlayın. </li></ol> 5. Akut Kayıtlar <ol><li> xy konumunu ayarlamakkayıt sisteminin. Bu kılavuz tüpleri kronik implante kayıt odasına içinde duramateri ulaşmak noktayı tanımlar. kılavuz tüpleri tamamen (kılavuz tüp z konumunu 0) geri emin olun. </li><li> konumuna kayıt sistemini getirmek ve mikroenjeksiyon pompa şırınga. Lastik bant ve ayarlanabilir tutuş kullanılarak yerine şırınga Fix (Şekil 1A bakınız). o şırınga pistonu arkasında sıkıca kadar pompa hareketli bölümünü kaydırın. maddenin bir damla kılavuz tüpleri ucunda görünür ise, dikkatlice steril pamuk kullanarak çıkartın. </li><li> Laboratuvarın prosedürüne göre (örneğin kılavuzlar için 18 bakınız) kayıt için hayvan hazırlayın. </li><li> Güvenli maymun kayıt odasının kayıt sistemi monte edin. </li><li> Yavaş yavaş elle dura ulaşılana kadar kayıt odasına kılavuz tüpleri düşürmek, daha sonra motorun co kullanarak elektrotları sürücüntrol yazılımı. </li><li> o, mikropipet empedansını ölçmek mümkün değildir ilk elektrotlar ile sürücü ve farklı derinliklerde düzenli olarak empedanslarından kontrol edin. dura bir penetrasyon başarıyla elektrotlar zarar vermeden gerçekleştirildikten sonra, mikropipet ilerlemek. </li><li> elektrotları ve ilgi beyin alanı bulunan beklenen hangi hedef elektrot derinliği mikropipet sürün. Kaydedilen sinyalde iyi bir sinyal-gürültü oranı ile kanıtlandığı gibi, tek bir birim aktivitesini kaydetmek için yeterince yakın olana kadar yavaş yavaş elektrodu ilerlemek. Önemlisi, elektrot ve mikropipet arasındaki minimum mesafeyi sağlamak için aynı derinlikte kayıt elektrodu ve mikropipet yerleştirin. <ol><li> Mümkünse, tüm kayıt için bu derinlikte elektrotlar ve mikropipet tutun. Kaydedilen hücrenin sinyal kalitesini korumak için tek yol elektrotlar hareket Ancak, eğer, o zaman elektrotları ve mikropipet sürücüAynı anda aralarındaki mesafeyi korumak için. </li></ol></li></ol> 6. Mekansal Dikkat Görev <ol><li> Ekranda bir deneme dizi, mevcut iki hareketli nokta desenleri, bir araya hayvan her deneme 19 boyunca foveate zorundadır merkezi sunulan tespit noktası ile, kaydedilen nöronun ve bunun diğer dışına açık alanda konumlandırılmış, 20. Not: maymun cued nokta desen bir yön değişikliğine yanıt vermek için eğitilmiştir (hedef olay) başka nokta desen herhangi bir yön değişikliği yok sayarak, ve bir deneme 19 her başarılı tamamlanması için sıvı bir damla ile ödüllendirilir ise, 20. Duyusal kontrol koşulu olarak, maymun hem hareketli nokta desenleri (görevin daha ayrıntılı bilgi için bakınız Şekil 2) göz ardı ederken tespit noktasının bir parlaklık değişimini bildirmek zorundadır. </li></ol> 7. Farmakolojik Manipülasyon Kayıt yaparken <p&gt; Not: maymun görevi gerçekleştirirken, bir blok odaklı bir şekilde maddeyi enjekte. Üç ardışık bloklar tanımlanır: bir temel olarak hareket kontrolü; Bir madde atılır sırasında enjeksiyon; ve kurtarma, sırasında hücreler bazal enjeksiyon dönüşü tarafından hedeflenen. <ol><li> Bir enjeksiyon bloğu boyunca, düzenli aralıklarla kimyasal maddenin önceden belirlenmiş bir miktarda enjekte örn., 2 NL 2 nl / s &#39;lik bir oranda her dakika. Bu örnek için, skopolamin hidroklorür kullanımı. Enjeksiyon işlemi çeşitli seçenekler sunar yazılımı kullanılarak kontrol edilir. Örneğin, enjeksiyon hacmi tanımlamak ve kayıt yazılımı saatine göre enjeksiyon düğmesine her dakika basın adım işlevini kullanın. Enjeksiyon bloğunun tam süresi bir maddedir ve bağımlı deney örneğin skopolamin kullanımı için 2 nl enjeksiyonları her dakika 10 dakika (toplam 20 nl) için Not:.. Elektrotlar ve mikropipet Duri ilerletmek için tercih edilirEnjeksiyon blok ng. </li><li> zaman ve madde enjekte edildiği boyunca deneme, elektrotlar ve mikropipet derinliği gibi püskürtülen madde miktarının dikkat edin. </li><li> Resim maddenin enjekte edildiği bir geri kazanım bloğu, enjeksiyon blok izleyin. Kurtarma bloğu süresi maddeye özeldir ve ön testler tarif edilmesi gerekmektedir. Monitör ve kurtarma bloğunun sonuna kadar seçilmiş tek birimlerin kayıt kalitesini korumak. </li><li> sürece maymun kayıt kalitesi ve motivasyon sağlayacak şekilde üç blok tekrarlayın. </li></ol> 8. Mesaj Kayıt İşlemleri <ol><li> veri Kayıttan sonra, kılavuz tüpleri içine elektrotlar ve mikropipet geri çekin ve daha sonra elle kılavuz tüpleri geri çekin. maymun kayıt odasından kayıt sistemini kaldırın. Enjeksiyon pompası şırınga bırakın ve temizlik için hazırlık alanına sistemi aktarın. </li><li> hayvan Kolu(kayıt odasının 18 temizlenmesi dahil) Laboratuvarın standart prosedürlere göre ve konut tesisine iade edin. </li><li> iyonu giderilmiş su ile, sonra hidrojen peroksit (% 3) ile kılavuz tüp dışında yıkayın. kılavuz tüpleri dışarı sürücü elektrotları ve mikropipet, hidrojen peroksit ve daha sonra deiyonize su ile durulayın. </li><li> tüp içinde iğne tutma steril tuzlu su ile dolu bir şırınga, bir tüp haznesi ile şırınganın değiştirin. tüp ve tuzlu 1-2 ml mikropipet yıkayın. Yıkama işleminden sonra, namluyu kaldırmak ve hava ile doldurun. iğne içine namluyu yeniden takın ve tüp hafifçe hava yoluyla iterek içeriden mikropipet kurutun. </li><li> kurumasını önlemek için hem de organik maddelerin parçalanmasını sağlamak için enzim solüsyonu daldırılmış kılavuz tüpleri, genişletilmiş elektrodları ve mikropipet saklayın. </li></ol>

<ol>
	<li>Noudoost, B., Moore, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+neuromodulators+in+selective+attention.">The role of neuromodulators in selective attention.</a> Trends Cogn Sci. 15 (12), 585-591 (2011).</li><li>Jochems, A., Reboreda, A., Hasselmo, M., Yoshida, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholinergic+receptor+activation+supports+persistent+firing+in+layer+III+neurons+in+the+medial+entorhinal+cortex.">Cholinergic receptor activation supports persistent firing in layer III neurons in the medial entorhinal cortex.</a> Behav Brain Res. 254, 108-115 (2013).</li><li>Thiele, A., Herrero, J. L., Distler, C., Hoffmann, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+cholinergic+and+GABAergic+mechanisms+to+direction+tuning,+discriminability,+response+reliability,+and+neuronal+rate+correlations+in+macaque+middle+temporal+area.">Contribution of cholinergic and GABAergic mechanisms to direction tuning, discriminability, response reliability, and neuronal rate correlations in macaque middle temporal area.</a> J Neurosci. 32 (47), 16602-16615 (2012).</li><li>Thienel, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscarinic+antagonist+effects+on+executive+control+of+attention.">Muscarinic antagonist effects on executive control of attention.</a> Int J Neuropsychopharmacol. 12 (10), 1307-1317 (2009).</li><li>Anthony, B. L., Dennison, R. L., Aronstam, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+muscarinic+receptor-G+protein+coupling+is+a+general+property+of+liquid+volatile+anesthetics.">Disruption of muscarinic receptor-G protein coupling is a general property of liquid volatile anesthetics.</a> Neurosci Lett. 99 (1-2), 191-196 (1989).</li><li>Yamakura, T., Bertaccini, E., Trudell, J. R., Harris, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anesthetics+and+ion+channels:+molecular+models+and+sites+of+action.">Anesthetics and ion channels: molecular models and sites of action.</a> Annu Rev Pharmacol Toxicol. 41, 23-51 (2001).</li><li>Herr, N. R., Wightman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+techniques+for+examining+rapid+dopamine+signaling+with+iontophoresis.">Improved techniques for examining rapid dopamine signaling with iontophoresis.</a> Front Biosci. 5, 249-257 (2013).</li><li>Bevan, P., Bradshaw, C. M., Pun, R. Y., Slater, N. T., Szabadi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relative+contribution+of+iontophoresis+and+electro-osmosis+to+the+electrophoretic+release+of+noradrenaline+from+multi+barrelled+micropipettes+[proceedings].">The relative contribution of iontophoresis and electro-osmosis to the electrophoretic release of noradrenaline from multi barrelled micropipettes [proceedings].</a> Br J Pharmacol. 67 (3), 478-479 (1979).</li><li>Herr, N. R., Kile, B. M., Carelli, R. M., Wightman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroosmotic+flow+and+its+contribution+to+iontophoretic+delivery.">Electroosmotic flow and its contribution to iontophoretic delivery.</a> Anal Chem. 80, 8635-8641 (2008).</li><li>Thiele, A., Delicato, L. S., Roberts, M. J., Gieselmann, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+electrode-pipette+design+for+simultaneous+recording+of+extracellular+spikes+and+iontophoretic+drug+application+in+awake+behaving+monkeys.">A novel electrode-pipette design for simultaneous recording of extracellular spikes and iontophoretic drug application in awake behaving monkeys.</a> J Neurosci Meth. 158 (2-4), 207-211 (2006).</li><li>Lalley, P. M., Johansson, H., Windhorst, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Microiontophoresis and Pressure Ejection: Modern Techniques in Neuroscience. , 193-209 (1999).</li><li>Malpeli, J. G., Schiller, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+of+reversible+inactivation+of+small+regions+of+brain+tissue.">A method of reversible inactivation of small regions of brain tissue.</a> J Neurosci Meth. 1 (2), 145-159 (1979).</li><li>Malpeli, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+inactivation+of+subcortical+sites+by+drug+injection.">Reversible inactivation of subcortical sites by drug injection.</a> J Neurosci Meth. 86 (2), 119-128 (1999).</li><li>Dias, E. C., Segraves, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pressure+system+for+the+microinjection+of+substances+into+the+brain+of+awake+monkeys.">A pressure system for the microinjection of substances into the brain of awake monkeys.</a> J Neurosci Meth. 72 (1), 43-47 (1997).</li><li>Szente, M. B., Baranyi, A., Woody, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+protein+kinase+C+inhibitor+H-7on+membrane+properties+and+synaptic+responses+of+neocortical+neurons+of+awake+cats.">Effects of protein kinase C inhibitor H-7on membrane properties and synaptic responses of neocortical neurons of awake cats.</a> Brain Res. 506 (2), 281-286 (1990).</li><li>Woody, C. D., Bartfai, T., Gruen, E., Nairn, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=lntracellular+injection+of+cGMP-dependent+protein+kinase+results+in+increased+input+resistance+in+neurons+of+the+mammalian+motor+cortex.">lntracellular injection of cGMP-dependent protein kinase results in increased input resistance in neurons of the mammalian motor cortex.</a> Brain Res. 386 (1-2), 379-385 (1986).</li><li>Noudoost, B., Moore, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reliable+microinjectrode+system+for+use+in+behaving+monkeys.">A reliable microinjectrode system for use in behaving monkeys.</a> J Neurosci Meth. 194 (2), 218-223 (2011).</li><li>Association of Primate Veterinarians. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cranial Implant Care Guidelines for Nonhuman Primates in Biomedical Research. , (2015).</li><li>Treue, S., Martinez-Trujillo, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feature-based+attention+influences+motion+processing+gain+in+macaque+visual+cortex.">Feature-based attention influences motion processing gain in macaque visual cortex.</a> Nature. 399, 575-579 (1999).</li><li>Martinez-Trujillo, J. C., Treue, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feature-based+attention+increases+the+selectivity+of+population+responses+in+primate+visual+cortex.">Feature-based attention increases the selectivity of population responses in primate visual cortex.</a> Curr Biol. 14 (9), 744-751 (2004).</li></ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Burada bir &quot;off-the-raf&quot; basınçlı enjeksiyon sistemi ile güvenilir ve hassas enjeksiyon ve yüksek kaliteli tek hücreli kayıtları nasıl gerçekleştirileceği detaylı olarak tarif var. Ilaç verme yöntemi, daha önce (17 gözden) maymunlar davranıyor kullanılmış olsa da, burada sunulan sistem aşağıda gözden avantajları vardır. Şekil 4A&#39;da gösterildiği gibi, burada tarif edilen sistem ile ve kayda hemen yanında farmakolojik enjeksiyonlar olmadan tek bir nöron aktivitesi sabit ölçüm sağlar. Şekil 4B&#39;de gösterildiği gibi, bir kontrol maddesi, tuzlu su enjeksiyonu, ateşleme hızı bir değişikliğe yol açmadı. Bu kontrol, enjeksiyon işleminin kendisi kayıt nöronların ateşleme özellikleri üzerinde ölçülebilir bir etkiye sahip olduğunu göstermektedir. nöron, kayıt elektrot ve mikropipet mekansal yapılandırma önemli biridir<html> Bu deneylerde önemi. Kayıt sırasında dokuda göreceli konumlarının kesin bir ölçü mümkün olmasa da, biz düşünün ve varyans olası kaynakları kontrol edebilirsiniz. İlk olarak, hacim, enjeksiyon sırasında ilgi nöron kaydedilen sinyallerin dengesini etkilemeden, kayıt elektrot uzak değiştirilebilmeleri riski vardır. Bu nedenle daha önce ve sinyal kararlılığını doğrulamak için enjeksiyon bloğundan sonra atış hızına karşılaştırmak için isabetli olmuştur. İkinci olarak, kayıt sisteminin kılavuz borusu konfigürasyonu elektrotları ve mikropipet arasındaki mesafeyi tanımlar (örn., Bu deneyde kullanılan eş-3-kanallı sistemde 305 um). Sistem dokusunda elektrotlar ve mikropipet derinliği hassas pozisyon kontrolü sağlar gibi, aralarındaki mesafe dikkatlice (adım 3.5) Kayıttan önce nispi derinlik kalibre ve kayıtları sırasında ortak bir derinlikte tutarak minimize edilebilir. ent &quot;&gt; Potansiyel sınırlamalar üretici tarafından in-house kalite kontrolüne ek olarak, sistem tüplerin farklı marka olarak, laboratuvar koşullarında valide gerekiyor, vb şırıngalar kullanılabilir ve atılır hacimlerde farklılıklara yol açabilir. Sistem burada gösterilen deneyde olduğu gibi, çok küçük hacimlerde enjekte etmek için kullanılabilir olsa da, bu, normal bir laboratuvar ortamında uygulama ölüm sınırlarına bağlı olarak doğrulanabilir, minimum hacimde altında bulunmaktadır. Bununla birlikte, daha büyük bir enjeksiyon hacimleri yazılımla tanımlanmış miktar ve donanım tarafından püskürtülen hacmi arasındaki ilişkiyi belirlemek için de kullanılabilir. Şeffaf borular kullanıldığında, enjeksiyon işleminin ek bir görsel kontrol görsel işaretin yer değiştirme ölçümü mümkündür. Mikropipet çapı biraz daha büyüktür ve malzeme daha kırılgan olduğu gibi sisteme mikropipet yerleştirilmesi, elektrot yerleştirilmesi daha talep ediyor. Ek olarak,o mikropipet üst kısmını kırılma riski yüksek gerektirir olarak mikropipet pin tüp katılmadan zordur. Ancak, başarılı bir şekilde yüklendi mikropipet ömrü bile günlük kullanım ile, birkaç aydır. Uygulamada, henüz sistemin post-kayıt temizliği sırasında enjeksiyon sisteminde bir tıkanıklık karşılaşmadım. Bununla birlikte, hiçbir &quot;çevrimiçi&quot; onay mümkündür ve (örneğin, mikropipet ucunda doku gibi) fiziksel tıkanma madde enjeksiyonu engelleyebilecek bir riski vardır. Nedenle bu tür bir deney kontrolü ve enjeksiyon blokları arasında fiyat ateş önemli değişiklikler gösteren daha fazla analiz yalnızca bu hücreler de dahil olmak üzere gibi konservatif verileri analiz etmek için tavsiye edilebilir. kendi küçük çaplı olmasına rağmen, Mikroelektronlar ve pipetler beyin dokusu yerinden edecek ve bazı lokal doku hasarına neden olabilir. Bu el th ucu konumlandırmak minimize edilebilirsadece dura mater üzerinde e kılavuz tüpleri. elektrotlar daha sonra dura nüfuz ve intakt çevrimiçi olarak empedans ölçerek anlaşılmaktadır. Daha sonra, mikropipet eklenir. Bu yaklaşım kullanıldığında, dura üzerinde doku normal uzaklaştırılması, daha fazla elektrod veya pipet kırılma riskini azaltmak için tavsiye edilir. Alternatif yöntemlere karşılaştırması Burada kullanılan sistem, diğer basınçlı enjeksiyon sistemleri ile karşılaştırıldığında net avantajlar gösterir. Güçlü bir avantajı, diğer mevcut problar 17 yarısı kadardır mikropipet (yaklaşık 100 um), çapı ve dolayısıyla nevral doku hasarını en aza indirir. önceki tasarımlara aksine, mevcut sistem uzamsal kayıt elektrot ve mikropipet ayrılır çalışmaktadır. Diğer sistemler, elektrot ve pipet arasında küçük bir mesafe temin olsa da, burada açıklanan sistem elektrotlar ve pipet böylece PERMI bağımsız derinliği değişiklikleri sağlarBir kayıt oturumu içinde değişken izafi mesafeleri tting. Enjeksiyon sistemi, esaslı bir kayıt cihazının bir uzantısı olarak da önemlisi, kayıt kalitesi ile ilgili olarak herhangi bir uzlaşma yapılması gerekmektedir. Sadece bir Mikropipet ve böylece bir madde bu protokolde kullanılan iken, bir deneysel prosedür içinde birden fazla madde enjekte etmek mümkündür. Bunu başarmak için, birden fazla mikropipetler ayrı kılavuz tüp içine dişli ve bireysel püskürtme pompalarında monte iğneleri bağlanabilir. Sadece bir bilgisayar programı elektrotlar ve mikropipet ilerlemek için, ve deney sırasında basınç enjeksiyon gerçekleştirmek için gerekli Son olarak, kontrol sistemi, kolay. iyontoforez basınç enjeksiyon karşılaştırıldığında, göreli avantajları ve dezavantajları vardır. Örneğin, basınçlı enjeksiyon böylece nöronal deplasman riskini artıran, iyontoforez daha dokuya tanıtılan büyük hacimli gerektirir. geçerli protocol nL aralığında hacimleri kullanılan ve nadiren bir kayıtlı hücrenin sinyal kalitesinde gözle görülür değişiklikler yaşadı. Sistem aynı zamanda, davranışsal manipülasyonlar için potansiyel olarak yararlı olan, ancak nöronal kayıt stabilitesini etkileyebilecek olan daha büyük hacimler enjekte edilmesini sağlar. yüklü maddeleri kullanmak için hiçbir zorunluluk olmadığından dolayı iyontoforez üzerindeki basınç enjeksiyon net bir avantajı kullanılabilir maddelerin büyük çeşididir. Ancak, pH değerleri kontrol edilmeli ve deney ve kontrol maddeler arasında karşılaştırıldı (örn., Tuz). soru nöral aktiviteyi işlemek için böyle optogenetics olarak yerine yeni tekniklerin basınçlı enjeksiyon köklü yöntemi kullanmak neden ortaya çıkabilir. iyi kemirgenlerde kurulmuş olmasına rağmen, optogenetics henüz güvenilir bir rhesus maymunları kurulmuş değildir. Özel olarak, henüz bir nörotransmitter türü için seçici olan hücrelerin lokal manipülasyon izin vermez. uzun vadede, görüyoruzbilişsel işlevlerin nöral temelini durulaştırmada optogentic manipülasyonlar avantajları ile farmakolojik manipülasyonlar avantajları kombinasyonu için büyük bir potansiyel. Burada basınçlı enjeksiyon rhesus maymunlarının davranmak, farmakolojik uyanık beynindeki bir yerel sınırlı alanı işlemek için nasıl kullanılabileceğini göstermiştir. Biz bu yöntem nöronal aktivitenin dinamiklerine nöromodülatör katkıları araştırmak için diğer bilim adamları ilham umuyoruz.

In cortical and subcortical areas, neuronal activity is affected by various neuromodulators, for example acetylcholine1. These modulatory effects on neuronal responses have been reported in in vitro studies2, as well as in electrophysiological recordings from anesthetized animals3 and systemic pharmacological manipulations in humans4. Nevertheless, the exact role of different neuromodulators and the involvement of various receptor subtypes are largely unknown. To measure the effects of specific neuromodulators on the activity of single neurons, it is desirable to induce a temporary neuromodulator change as close as possible to the recording electrode. Furthermore, it is important that those manipulations are done in awake animals, as cognitive functions are only present in the absence of anesthesia. Additionally, anesthesia interacts with cholinergic and GABAergic systems5,6 and can lead to changes in neural activity3.
Within the last decades, two main methods of local drug delivery have been developed and refined: iontophoresis and pressure injection. In both methods drugs are delivered through micropipettes made of either glass or steel. With iontophoresis, an electrical current regulates the release of the drug7. Additionally, there is a significant contribution of electro-osmosis to the total amount of ejected molecules8, correlating with the tip diameter9 of the micropipette as well as with the concentration8 of the substance used. Iontophoresis is a powerful tool to quickly and precisely manipulate small volumes of nervous tissue. For iontophoretic injections, multi-barrel micropipettes are usually used10, with one acting as a recording device while the other positions serve as delivery pipettes. A limitation of this method is that only charged molecules can be used, severely limiting the selection of drugs. 
Pressure injection uses either air compression or mechanical pressure to eject a substance from a micropipette. Using this method any soluble substance, charged or uncharged, can be used, including large molecules. The method of pressure injection was first described by Reyniers in 1933 and further refined in the 1950s (see Lalley11 for a review). In the 1980s the method was further refined to allow delivery of amounts in the nanoliter range (mainly lidocain12) to a defined brain area13 while simultaneously performing single-cell recording. The ejected volume was usually monitored by observing the movement of a marker, such as the meniscus in the upper part of the pipette13. Pressure injection was first used in the 1990s in awake animals, both extracellularly14 and intracellularly15,16. Based on the cumulative expertise gained in these studies it is now possible to reliably record from different brain structures in combination with pharmacological manipulation (see17 for a comparison of recent pressure injection systems). 
An enduring open issue for both drug delivery methods is the difficulty in determining the precise volume injected. This is an even bigger challenge for experiments with awake, behaving rhesus monkeys where the animal performs the experimental task in a separate room. This can be alleviated by the use of a software-controlled system instead of relying on a visual marker to continuously monitor an injection. 
The system described here is an extension of a well-established electrophysiological recording system (Mini Matrix System) and combines an injection pipette with multiple parallel-oriented recording electrodes at defined distances in a customizable arrangement. Pharmacological manipulation of the tissue near the recording electrode is possible using only a small amount of substance, ensuring a fast recovery and allowing multiple blocks of injection and control/recovery within the limited time window offered by the behavioral task of the animal.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="560">
	<tbody>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:141px;">(-)-Scopolamine hydrochloride</td>
			<td style="width:88px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:87px;">55-16-3</td>
			<td style="width:244px;">Mr 339.81 g/mol</td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:141px;">NaCl 0.9%&#160;</td>
			<td style="width:88px;">B. Braun Melsungen AG</td>
			<td style="width:87px;">3079870</td>
			<td style="width:244px;">5ml&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:141px;">Terg-a-zyme</td>
			<td style="width:88px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:87px;">Z273287</td>
			<td style="width:244px;">enzyme detergen</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:141px;">Hydrogen peroxide</td>
			<td style="width:88px;">Roth</td>
			<td style="width:87px;"></td>
			<td style="width:244px;">Used in 3% solution with deionized water</td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:141px;">Ethanol</td>
			<td style="width:88px;">Chemie-Vertieb Hannover</td>
			<td style="width:87px;">104642</td>
			<td style="width:244px;">70%</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:141px;">Deionized water</td>
			<td style="width:88px;"></td>
			<td style="width:87px;"></td>
			<td style="width:244px;"></td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:141px;">Injekt 40 Duo</td>
			<td style="width:88px;">B. Braun Melsungen AG</td>
			<td style="width:87px;">9166432V</td>
			<td style="width:244px;">Syringe and needle&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="98">
			<td height="120" rowspan="2" style="height:121px;width:141px;">Eppendorf Safe-Lock microcentrifuge tubes, amber</td>
			<td rowspan="2" style="width:88px;">Eppendorf</td>
			<td rowspan="2" style="width:87px;">0030 120.191</td>
			<td rowspan="2" style="width:244px;">1,5ml&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="22">
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:141px;">Quarzglass micropipette</td>
			<td style="width:88px;">Thomas Recording</td>
			<td style="width:87px;"></td>
			<td style="width:244px;"></td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:141px;">Recording electrode</td>
			<td style="width:88px;">Thomas Recording</td>
			<td style="width:87px;"></td>
			<td style="width:244px;">quartz/platinum-tungsten fiber electrode; impedance value 1-2 M&#937;&#160; and 0.3-0.5 M&#937;</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="81" rowspan="3" style="height:82px;width:141px;">PharmedBPT-Schlauch</td>
			<td rowspan="3" style="width:88px;">Saint-Gobain Performance Plastics&#160;</td>
			<td rowspan="3" style="width:87px;">3702003</td>
			<td rowspan="3" style="width:244px;">&#160;Size: 0,25 x 2,05 mm (Wd: 0,9mm)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
		</tr>
		<tr height="22">
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:141px;">Loctite 401</td>
			<td style="width:88px;">Henkel</td>
			<td style="width:87px;">233641</td>
			<td style="width:244px;">Superglue</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:141px;">Silicon oil</td>
			<td style="width:88px;">Thomas Recording</td>
			<td style="width:87px;">M-1000</td>
			<td style="width:244px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:141px;">Minisart RC15</td>
			<td style="width:88px;">Sartorius</td>
			<td style="width:87px;">17761----------R</td>
			<td style="width:244px;">Syringe filter</td>
		</tr>
		<tr height="121">
			<td height="121" style="height:121px;width:141px;">Multichannel Micro Injection System</td>
			<td style="width:88px;">Thomas Recording</td>
			<td style="width:87px;"></td>
			<td style="width:244px;">multichannel microelectrode manipulator &#8220;System Eckhorn&#8221; equipped with microelectrodes and micropipettes and a precision multichannel microinjection pump</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:141px;">McLab</td>
			<td style="width:88px;">custom</td>
			<td style="width:87px;"></td>
			<td style="width:244px;">internal lab software to control stimulus presentation</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a pressure injection system for investigating the neuropharmacology of information processing in awake behaving macaque monkey cortex

The top-down modulation of feed-forward cortical information processing is functionally important for many cognitive processes, including the modulation of sensory information processing by attention. However, little is known about which neurotransmitter systems are involved in such modulations. A practical way to address this question is to combine single-cell recording with local and temporary neuropharmacological manipulation in a suitable animal model. Here we demonstrate a technique combining acute single-cell recordings with the injection of neuropharmacological agents in the direct vicinity of the recording electrode. The video shows the preparation of the pressure injection/recording system, including preparation of the substance to be injected. We show a rhesus monkey performing a visual attention task and the procedure of single-unit recording with block-wise pharmacological manipulations.

Şekil 2 enjeksiyon işlemi yapılmıştır ise maymun gerçekleştirilen uzaysal dikkat görev göstermektedir. maymun, (katılmak-in) kayıtlı nöronun alıcı alanında bulunan ya uyarana açık alanın dışında bulunan uyarıcı katılmak üzere eğitildi veya sabitleme noktası (-out katılmak) (devam-fix). Bu koşullar, farklı dikkat devletlerde nöronal aktivitenin bir karşılaştırma sağlar. Şekil 3 skopolamin, bir muskarinik kolinerjik antagonist kullanarak bir deneyde bir örnek nöron bir peri-uyaran zaman histogramı gösterir. arsa hücrenin tercih yönde hareket eden bir model nöronun alıcı alanı içinde sunulur ve hayvan katıldığı hiçbir enjeksiyon, karşı skopolamin enjeksiyon sırasında yanıt baskılanmasını gösterir. İlk iki zirveleri nöron temsil9; ın zamanda online tepki ve açık alan içinde görünen mekansal işaret, ofset. Bu 500 ms işaret başladıktan sonra ekranda görünür hareketli modeline yanıt izlemektedir. gri gölgeli alan her deneme için ortalama atış oranını hesaplamak için kullanılan analiz süresini göstermektedir. yeşil alan hücrenin ateşleme hızına skopolamin enjeksiyonu baskılayıcı etkisini vurgulamaktadır. Koyu yeşil bölge analiz dönemi içinde bastırma gösterir. Şekil 4A, üç dikkat koşullarının her örnek nöron ortalama ateşleme hızına skopolamin etkisini göstermektedir. nöronun ateşleme iki uzaysal dikkat koşulları oranı (kayıt nöronun alıcı alanının içinde veya dışında dikkat) yanı sıra (sabitleme noktasında dikkat) duyusal durum enjeksiyon bloğunun ilk enjeksiyon (gri gölgeli kısa bir süre sonra düştü vardıra) ve enjeksiyon öncesi aynı seviyede bir gecikmeden sonra artan kurtarma blok sırasında. Şekil 4B, tuzlu su (% 0.9 NaCI) skopolamin, enjeksiyon için aynı protokol kullanılarak, enjekte edilmiş bir ikinci örnek nöron kayıt bir denetim gösterir. Enjeksiyon sırasında nöronun ateşleme oranında bir değişiklik kontrol bloğuna göre gözlendi engeller. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/53724/53724fig1.jpg" /> Kayıt sırasında farmakolojik manipülasyon için kullanılan Şekil 1. Set-up. (A) mikroenjeksiyon pompası ve elektrotlar ve mikropipet ile donatılmış elektrofizyolojik kayıt sistemi yansıtır. silikon yağı elektrodları ve mikropipet yağlamak için sokulduğu guidetube boşluğu, büyütülmüş gösterilmiştir. (B) (yukarıda) bir örnek mikropipet görüntülerve kayıt elektrot (aşağıda). Boyut karşılaştırma için, bir euro cent (çap: 16 mm). Altına yerleştirilen <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53724/53724fig1large.jpg" target="_blank">bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/53724/53724fig2.jpg" /> Şekil 2. Görev tasarımı mekansal dikkat rehberlik. Maymunlar cued nokta desen bir hareket yönü değişikliği algılamak için eğitilmiştir. işaret ya da nöronun alıcı alanında yerleştirildi şekilde gösterildiği gibi, (-katılmak), ya da bunun dışında (katılmak-out). Bir duyusal kontrol olarak maymun tespit noktasının bir parlaklık değişimini algılamak için eğitilmiş (katılmak-fix). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53724/53724fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> &lt;<html> img alt = &quot;Şekil 3&quot; src = &quot;/ files / ftp_upload / 53724 / 53724fig3.jpg&quot; /&gt; Ateşleme hızı üzerinde antagonist skopolamin Şekil 3. Etkisi. Bir örnek nöron için peri-uyaran süresi histogram enjeksiyon bloğu sırasında ve denetim bloğu sırasında attend-in durumuna (kaydedilen nöronun alıcı alanı içinde dikkat) için gösterilir. x ekseni sivri ateşleme hızı / sn gösteren işaret başlangıcı ve y-ekseni sonra milisaniye zaman göstermektedir. gri alan deneme ortalama ateş oranını hesaplamak için kullanılan analiz dönemi (uyaranın başlangıcından sonra 300-800 ms) göstermektedir. yeşil gölgeli alan iki koşula karşısında ateşleme hızı olarak bastırılmasına gösterir. Koyu yeşil renk analiz dönemi içinde bastırma vurgulamaktadır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53724/53724fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> iles / ftp_upload / 53724 / 53724fig4.jpg &quot;/&gt; Ateşleme hızı üzerinde skopolamin ve tuz Şekil 4. Etkisi. (A) rakip skopolamin enjeksiyonu. Deney boyunca Şekil 3 örnek hücrenin deneme ortalama ateş oranı her üç dikkat koşullar için tercih edilen uyarıcı gösterilir. x ekseni dakika deneme başlangıç ​​zamanını göstermektedir ve y-ekseni saniyede sivri birimin ateşleme oranını gösterir. semboller ( <img alt="Artı" src="/files/ftp_upload/53724/53724plussign.jpg" /> katılmak-in, <img alt="Daire" src="/files/ftp_upload/53724/53724circle.jpg" /> -Katılmak düzeltmek, <img alt="Trianle" src="/files/ftp_upload/53724/53724triangle.jpg" /> ) Dışarı katılmak her başarıyla gerçekleştirilen denemede analiz dönemi içinde nöronun ateşleme hızı temsil ve yatay çizgiler (katı çizgi: katılmak-in, noktalı çizgi: katılmak-fix, kesikli çizgi: katılmak çıkış) için ortalama ateşleme hızı göstermek üç farklı deneysel BLocks (kontrol, enjeksiyon, kazanım). gri gölgeli alan ilk enjeksiyondan ile başlayan ve son enjeksiyondan sonra 1 dakika biten enjeksiyon bloğu gösterir. Enjeksiyon sırasında blok 2 nL 0.1 molar skopolamin 2 nl / sn bir enjeksiyon hızı ile her dakika enjekte edildi. (B) Salin enjeksiyonu. Kontrol deney boyunca bir numune hücresinin ateşleme hızı her üç dikkat koşulları için tercih edilen bir uyarıcı için gösterilmiştir. Gri gölgeli alan tuzlu enjeksiyon bloğu görüntüler. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53724/53724fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about A Pressure Injection System for Investigating the Neuropharmacology of Information Processing in Awake Behaving Macaque Monkey Cortex at JoVE.com

A Pressure Injection System for Investigating the Neuropharmacology of Information Processing in Awake Behaving Macaque Monkey Cortex

Here, we show the pressure injection of neuropharmacological substances during single-cell recording in an awake, behaving macaque monkey. This procedure allows pharmacological manipulation in the direct vicinity of a cortical recording site.

Uyanık Davranan Macaque Maymun Korteks Bilgi İşlem Neuropharmacology araştırılması için Bir Basınç Enjeksiyon Sistemi

The top-down modulation of feed-forward cortical information processing is functionally important for many cognitive processes, including the modulation ...

a-pressure-injection-system-for-investigating-neuropharmacology

Research

JoVE Journal

Behavior

8.3K Görüntüleme.  German Primate Center. Here, we show the pressure injection of neuropharmacological substances during single-cell recording in an awake, behaving macaque monkey. This procedure allows pharmacological manipulation in the direct vicinity of a cortical recording site. 

Video: A Pressure Injection System for Investigating the Neuropharmacology of Information Processing in Awake Behaving Macaque Monkey Cortex

Construction of Microdrive Arrays for Chronic Neural Recordings in Awake Behaving Mice

State-of-the-art electrophysiological recordings from the brains of freely behaving animals allow researchers to simultaneously examine local field potentials (LFPs) from populations of neurons and action potentials from individual cells, as the animal engages in experimentally relevant tasks. Chronically implanted microdrives allow for brain recordings to last over periods of several weeks. Miniaturized drives and lightweight components allow for these long-term recordings to occur in small mammals, such as mice. By using tetrodes, which consist of tightly braided bundles of four electrodes in which each wire has a diameter of 12.5 &mu;m, it is possible to isolate physiologically active neurons in superficial brain regions such as the cerebral cortex, dorsal hippocampus, and subiculum, as well as deeper regions such as the striatum and the amygdala. Moreover, this technique insures stable, high-fidelity neural recordings as the animal is challenged with a variety of behavioral tasks. This manuscript describes several techniques that have been optimized to record from the mouse brain. First, we show how to fabricate tetrodes, load them into driveable tubes, and gold-plate their tips in order to reduce their impedance from M&Omega; to K&Omega; range. Second, we show how to construct a custom microdrive assembly for carrying and moving the tetrodes vertically, with the use of inexpensive materials. Third, we show the steps for assembling a commercially available microdrive (Neuralynx VersaDrive) that is designed to carry independently movable tetrodes. Finally, we present representative results of local field potentials and single-unit signals obtained in the dorsal subiculum of mice. These techniques can be easily modified to accommodate different types of electrode arrays and recording schemes in the mouse brain.

The design and assembly of microdrives for in vivo electrophysiological recordings of brain signals from the mouse is described. By attaching microelectrode bundles to sturdy driveable carriers, these techniques allow for long-term and stable neural recordings. The lightweight design allows for unrestricted behavioral performance by the animal following drive implantation.

Uyanık davranmak Fare Kronik Sinir Kayıtlar için Microdrive Diziler İnşaatı

State-of-the-art electrophysiological recordings from the brains of freely behaving animals allow researchers to simultaneously examine local field ...

Davranış

Assessment of Murine Exercise Endurance Without the Use of a Shock Grid: An Alternative to Forced Exercise

Using laboratory mouse models, the molecular pathways responsible for the metabolic benefits of endurance exercise are beginning to be defined. The most common method for assessing exercise endurance in mice utilizes forced running on a motorized treadmill equipped with a shock grid. Animals who quit running are pushed by the moving treadmill belt onto a grid that delivers an electric foot shock; to escape the negative stimulus, the mice return to running on the belt. However, avoidance behavior and psychological stress due to use of a shock apparatus can interfere with quantitation of running endurance, as well as confound measurements of postexercise serum hormone and cytokine levels. Here, we demonstrate and validate a refined method to measure running endurance in na&#239;ve C57BL/6 laboratory mice on a motorized treadmill without utilizing a shock grid. When mice are preacclimated to the treadmill, they run voluntarily with gait speeds specific to each mouse. Use of the shock grid is replaced by gentle encouragement by a human operator using a tongue depressor, coupled with sensitivity to the voluntary willingness to run on the part of the mouse. Clear endpoints for quantifying running time-to-exhaustion for each mouse are defined and reflected in behavioral signs of exhaustion such as splayed posture and labored breathing. This method is a humane refinement which also decreases the confounding effects of stress on experimental parameters.

A method to assess exercise endurance in laboratory mice without the use of a shock grid is demonstrated. This method is a humane refinement that can decrease the confounding effects of stress on experimental parameters.

Bir Şok Grid Kullanımı olmadan Kemirgen Egzersiz Endurance Değerlendirilmesi: Zorla Egzersiz Alternatif Bir

Using laboratory mouse models, the molecular pathways responsible for the metabolic benefits of endurance exercise are beginning to be defined. The most ...

Infant Auditory Processing and Event-related Brain Oscillations

Rapid auditory processing and acoustic change detection abilities play a critical role in allowing human infants to efficiently process the fine spectral and temporal changes that are characteristic of human language. These abilities lay the foundation for effective language acquisition; allowing infants to hone in on the sounds of their native language. Invasive procedures in animals and scalp-recorded potentials from human adults suggest that simultaneous, rhythmic activity (oscillations) between and within brain regions are fundamental to sensory development; determining the resolution with which incoming stimuli are parsed. At this time, little is known about oscillatory dynamics in human infant development. However, animal neurophysiology and adult EEG data provide the basis for a strong hypothesis that rapid auditory processing in infants is mediated by oscillatory synchrony in discrete frequency bands. In order to investigate this, 128-channel, high-density EEG responses of 4-month old infants to frequency change in tone pairs, presented in two rate conditions (Rapid: 70 msec ISI and Control: 300 msec ISI) were examined. To determine the frequency band and magnitude of activity, auditory evoked response averages were first co-registered with age-appropriate brain templates. Next, the principal components of the response were identified and localized using a two-dipole model of brain activity. Single-trial analysis of oscillatory power showed a robust index of frequency change processing in bursts of Theta band (3 - 8 Hz) activity in both right and left auditory cortices, with left activation more prominent in the Rapid condition. These methods have produced data that are not only some of the first reported evoked oscillations analyses in infants, but are also, importantly, the product of a well-established method of recording and analyzing clean, meticulously collected, infant EEG and ERPs. In this article, we describe our method for infant EEG net application, recording, dynamic brain response analysis, and representative results.

High-density electroencephalography (dEEG) is being used increasingly to study brain development and plasticity in the early years of life. Here we present an application of sophisticated analysis techniques that builds on traditional EEG recording to understand the oscillatory dynamics of rapid auditory processing in the infant brain.

Bebek İşitsel İşleme ve Olaya ilişkin Beyin Salınımlılığı

Rapid auditory processing and acoustic change detection abilities play a critical role in allowing human infants to efficiently process the fine spectral ...

A Novel Experimental and Analytical Approach to the Multimodal Neural Decoding of Intent During Social Interaction in Freely-behaving Human Infants

Understanding typical and atypical development remains one of the fundamental questions in developmental human neuroscience. Traditionally, experimental paradigms and analysis tools have been limited to constrained laboratory tasks and contexts due to technical limitations imposed by the available set of measuring and analysis techniques and the age of the subjects. These limitations severely limit the study of developmental neural dynamics and associated neural networks engaged in cognition, perception and action in infants performing &#8220;in action and in context&#8221;. This protocol presents a novel approach to study infants and young children as they freely organize their own behavior, and its consequences in a complex, partly unpredictable and highly dynamic environment. The proposed methodology integrates synchronized high-density active scalp electroencephalography (EEG), inertial measurement units (IMUs), video recording and behavioral analysis to capture brain activity and movement non-invasively in freely-behaving infants. This setup allows for the study of neural network dynamics in the developing brain, in action and context, as these networks are recruited during goal-oriented, exploration and social interaction tasks.

This protocol presents a novel methodology for the neural decoding of intent from freely-behaving infants during unscripted social interaction with an actor. Neural activity is acquired using non-invasive high-density active scalp electroencephalography (EEG). Kinematic data is collected with inertial measurement units and supplemented with synchronized video recording.

İnsan Bebekler Serbestçe-davrandığını Sosyal Etkileşim sırasında Niyet Multimodal Sinir Coded Yeni Bir Deneysel ve Analitik Bir Yaklaşım

Understanding typical and atypical development remains one of the fundamental questions in developmental human neuroscience. Traditionally, experimental ...

A Method to Quantify Visual Information Processing in Children Using Eye Tracking

Visual problems that occur early in life can have major impact on a child's development. Without verbal communication and only based on observational methods, it is difficult to make a quantitative assessment of a child's visual problems. This limits accurate diagnostics in children under the age of 4 years and in children with intellectual disabilities. Here we describe a quantitative method that overcomes these problems. The method uses a remote eye tracker and a four choice preferential looking paradigm to measure eye movement responses to different visual stimuli. The child sits without head support in front of a monitor with integrated infrared cameras. In one of four monitor quadrants a visual stimulus is presented. Each stimulus has a specific visual modality with respect to the background, e.g., form, motion, contrast or color. From the reflexive eye movement responses to these specific visual modalities, output parameters such as reaction times, fixation accuracy and fixation duration are calculated to quantify a child's viewing behavior. With this approach, the quality of visual information processing can be assessed without the use of communication. By comparing results with reference values obtained in typically developing children from 0-12 years, the method provides a characterization of visual information processing in visually impaired children. The quantitative information provided by this method can be advantageous for the field of clinical visual assessment and rehabilitation in multiple ways. The parameter values provide a good basis to: (i) characterize early visual capacities and consequently to enable early interventions; (ii) compare risk groups and follow visual development over time; and (iii), construct an individual visual profile for each child.

A method is described to quantify the quality of visual information processing based on reflexive eye movements in response to specific visual modalities. Reaction times and fixation output parameters are used to characterize visual performance in children with and without visual impairments from 6 months of age.

Bir Yöntem Göz İzleme Kullanarak Çocuklarda Görsel Bilgi İşleme belirlememize

Visual problems that occur early in life can have major impact on a child's development. Without verbal communication and only based on observational ...

A Wireless, Bidirectional Interface for In Vivo Recording and Stimulation of Neural Activity in Freely Behaving Rats

In vivo electrophysiology is a powerful technique to investigate the relationship between brain activity and behavior at a millisecond and micrometer scale. However, current methods mostly rely on tethered cable recordings or only use unidirectional systems, allowing either recording or stimulation of neural activity, but not at the same time or same target. Here, a new wireless, bidirectional device for simultaneous multichannel recording and stimulation of neural activity in freely behaving rats is described. The system operates through a single portable head stage that both transmits recorded activity and can be targeted in real-time for brain stimulation using a telemetry-based multichannel software. The head stage is equipped with a preamplifier and a rechargeable battery, allowing stable long-term recordings or stimulation for up to 1 h. Importantly, the head stage is compact, weighs 12 g (including battery) and thus has minimal impact on the animal&#180;s behavioral repertoire, making the method applicable to a broad set of behavioral tasks. Moreover, the method has the major advantage that the effect of brain stimulation on neural activity and behavior can be measured simultaneously, providing a tool to assess the causal relationships between specific brain activation patterns and behavior. This feature makes the method particularly valuable for the field of deep brain stimulation, allowing precise assessment, monitoring, and adjustment of stimulation parameters during long-term behavioral experiments. The applicability of the system has been validated using the inferior colliculus as a model structure.

A Wireless, Bidirectional Interface for In Vivo Recording and Stimulation of Neural Activity in Freely Behaving Rats

A wireless, bidirectional system for multi-channel neural recordings and stimulation in freely behaving rats is introduced. The system is light and compact, thus having minimal impact on the animal&#180;s behavioral repertoire. Moreover, this bidirectional system provides a sophisticated tool to assess causal relationships between brain activation patterns and behavior.

Kablosuz, Vivo içinde kayıt ve fareler serbestçe davranışlar içinde sinirsel aktivite uyarılması için çift yönlü arayüzü

In vivo electrophysiology is a powerful technique to investigate the relationship between brain activity and behavior at a millisecond and micrometer ...

Stereotactically-guided Ablation of the Rat Auditory Cortex, and Localization of the Lesion in the Brain

The rat auditory cortex (AC) is becoming popular among auditory neuroscience investigators who are interested in experience-dependence plasticity, auditory perceptual processes, and cortical control of sound processing in the subcortical auditory nuclei. To address new challenges, a procedure to accurately locate and surgically expose the auditory cortex would expedite this research effort. Stereotactic neurosurgery is routinely used in pre-clinical research in animal models to engraft a needle or electrode at a pre-defined location within the auditory cortex. In the following protocol, we use stereotactic methods in a novel way. We identify four coordinate points over the surface of the temporal bone of the rat to define a window that, once opened, accurately exposes both the primary (A1) and secondary (Dorsal and Ventral) cortices of the AC. Using this method, we then perform a surgical ablation of the AC. After such a manipulation is performed, it is necessary to assess the localization, size, and extension of the lesions made in the cortex. Thus, we also describe a method to easily locate the AC ablation postmortem using a coordinate map constructed by transferring the cytoarchitectural limits of the AC to the surface of the brain.The combination of the stereotactically-guided location and ablation of the AC with the localization of the injured area in a coordinate map postmortem facilitates the validation of information obtained from the animal, and leads to a better analysis and comprehension of the data.

We describe a method for the stereotactically-guided location, exposure, and ablation of the auditory cortex in rats. The localization of the ablation is assessed using a coordinate map postmortem.

Stereotactically destekli ablasyon sıçan işitsel korteks ve beyin lezyon lokalizasyonu

The rat auditory cortex (AC) is becoming popular among auditory neuroscience investigators who are interested in experience-dependence plasticity, ...

A Method for Investigating Change Blindness in Pigeons (Columba Livia)

Change blindness is a phenomenon of visual attention, whereby changes to a visual display go unnoticed under certain specific circumstances. While many laboratory procedures have been developed that produce change blindness in humans, the flicker paradigm has emerged as a particularly effective method. In the flicker paradigm, two visual displays are presented in alternation with one another. If successive displays are separated by a short inter-stimulus interval (ISI), change detection is impaired. The simplicity of the procedure and the clear, performance-based operational definition of change blindness make the flicker paradigm well-suited to comparative research using nonhuman animals. Indeed, a variant has been developed that can be implemented in operant chambers to study change blindness in pigeons. Results indicate that pigeons, like humans, are worse at detecting the location of a change if two consecutive displays are separated in time by a blank ISI. Furthermore, pigeons&#39; change detection is consistent with an active, location-by-location search process that requires selective attention. The flicker task thus has the potential to contribute to investigations of the dynamics of pigeons&#39; selective spatial attention in comparison to humans. It also illustrates that the phenomenon of change blindness is not exclusive to humans&#39; visual perception, but may instead be a general consequence of selective attention. Finally, while the useful aspects of attention are widely appreciated and understood, it is also important to acknowledge that they may be accompanied by specific imperfections such as change blindness, and that these imperfections have consequences across a wide range of contexts.

A Method for Investigating Change Blindness in Pigeons Columba Livia

Change blindness is a phenomenon of visual attention, whereby changes to a visual display go unnoticed under certain specific circumstances. This protocol describes a variation on the flicker paradigm for investigating change blindness that is appropriate and effective for research with pigeons.

Güvercinler (Columba Livia) değişiklik körlüğü soruşturma için bir yöntem

Change blindness is a phenomenon of visual attention, whereby changes to a visual display go unnoticed under certain specific circumstances. While many ...

A Method to Study Adaptation to Left-Right Reversed Audition

An unusual sensory space is one of the effective tools to uncover the mechanism of adaptability of humans to a novel environment. Although most of the previous studies have used special spectacles with prisms to achieve unusual spaces in the visual domain, a methodology for studying the adaptation to unusual auditory spaces has yet to be fully established. This study proposes a new protocol to set-up, validate, and use a left-right reversed stereophonic system using only wearable devices, and to study the adaptation to left-right reversed audition with the help of neuroimaging. Although individual acoustic characteristics are not yet implemented, and slight spillover of unreversed sounds is relatively uncontrollable, the constructed apparatus shows high performance in a 360&#176; sound source localization coupled with hearing characteristics with little delay. Moreover, it looks like a mobile music player and enables a participant to focus on daily life without arousing curiosity or drawing attention of other individuals. Since the effects of adaptation were successfully detected at the perceptual, behavioral, and neural levels, it is concluded that this protocol provides a promising methodology for studying adaptation to left-right reversed audition, and is an effective tool for uncovering the adaptability of humans to a novel environments in the auditory domain.

The present study proposes a protocol to investigate the adaptation to left-right reversed audition achieved only by wearable devices, using neuroimaging, which can be an effective tool for uncovering the adaptability of humans to a novel environment in the auditory domain.

-Sol uyum eğitim için bir yöntem seçme ters

An unusual sensory space is one of the effective tools to uncover the mechanism of adaptability of humans to a novel environment. Although most of the ...

A Behavioral Assay for Investigating the Role of Spatial Memory During Instinctive Defense in Mice

Evolution has selected a repertoire of defensive behaviors that are essential for survival across all animal species. These behaviors are often stereotyped actions elicited in response to innately aversive sensory stimuli, but their success requires enough flexibility for adapting to different spatial environments, which can change rapidly. Here, we describe a behavioral assay to evaluate the influence of learned spatial knowledge on defensive behaviors in mice. We have adapted the widely used Barnes maze spatial memory assay to investigate how mice navigate to a shelter during escape responses to innately aversive sensory stimuli in a novel environment, and how they adapt to acute changes in the environment. This new assay is an ethological paradigm that does not require training and exploits the natural exploration patterns and navigation strategies in mice. We propose that the set of protocols described here are a powerful means of studying goal-directed behaviors and stimulus-triggered navigation, which should be of interest to both the fields of instinctive behaviors and spatial memory.

This protocol describes a behavioral assay, based on the Barnes maze test, to study how instinctive defensive actions are modified by the knowledge of spatial environment.